АСТМ Е2799-22 Протокол за антимикробну евалуацију
Хиелсцхер УИП400МТП је моћан и ефикасан соникатор плоча са више бунара дизајниран да поједностави корак соникације у АСТМ Е2799-22 протоколу. Испоручујући уједначену ултразвучну енергију преко целе микротитарске плоче, УИП400МТП обезбеђује доследно и поуздано одвајање биофилма од поклопца клинова без оштећења ћелија или угрожавања интегритета узорка. Његова способност високе пропусности и рад прилагођен кориснику значајно скраћују време обраде уз повећање репродуктивности, што га чини идеалним решењем за лабораторије које спроводе тестове одрживости биофилма и тестирање антимикробне ефикасности.
АСТМ Е2799
АСТМ Е2799 је стандардизована метода тестирања дизајнирана да процени ефикасност антимикробних агенаса против биофилма, са посебним фокусом на Псеудомонас аеругиноса. Биофилми су сложене микробне заједнице које се пријањају на површине и показују повећану отпорност на антимикробне третмане, што их чини значајним изазовом у здравственом, индустријском и еколошком контексту. Овај метод користи тест минималне концентрације биофилма (МБЕЦ) да би се обезбедио поуздан и поновљив оквир за тестирање дезинфекционих средстава у реалним условима биофилма.
Соникатор плоча са 96 јажица УИП400МТП за скрининг високе пропусности
Како соникација доприноси АСТМ Е2799?
Соникација игра кључну улогу у АСТМ Е2799 протоколу тако што олакшава одвајање биофилма од тестних површина, обезбеђујући тачну процену виталности микроба након третмана. Коришћењем контролисане ултразвучне енергије, протокол постиже ефикасно и доследно нарушавање биофилма без оштећења ћелија, омогућавајући прецизне и поновљиве резултате. Ово чини АСТМ Е2799 основним алатом за унапређење истраживања биофилма и развој ефикасних антимикробних стратегија.
Како покренути МБЕЦ тест у складу са АСТМ Е2799-22
АСТМ Е2799-22 протокол описује кораке за процену ефикасности антимикробних агенаса против биофилма. Када се користи соникатор микротитарске плоче Хиелсцхер УИП400МТП, протокол се може прилагодити да укључи овај напредни метод соникације за одвајање биофилма. Испод је опис корака прилагођених коришћењу соникатора за микроплоче УИП400МТП:
- Припрема биофилма
Припремите стерилну микротитарску плочу са 96 јажица са одвојивим поклопцима.
Инокулирајте јажице стандардизованом бактеријском суспензијом у одговарајућем медијуму за раст.
Поставите поклопац клина на плочу, осигуравајући да су клинови потпуно уроњени у бактеријску суспензију.
Инкубирајте плочу под контролисаним условима (нпр. температура и време) да бисте омогућили формирање биофилма на клиновима. - Третман антимикробним агенсима
Након формирања биофилма, замените медијум свежим медијумом који садржи тестирана антимикробна средства у различитим концентрацијама.
Поново причврстите поклопац и инкубирајте под условима наведеним у дизајну теста. - Припрема за одвајање биофилма
Након третмана, исперите поклопац за клин тако што ћете га уронити у стерилни раствор за испирање да бисте уклонили заостале антимикробне агенсе и лабаво прилепљене планктонске ћелије. - Одвајање биофилма помоћу УИП400МТП Соницатор-а
Припремите свежу микротитарску плочу са 96 јажица која садржи медијум за опоравак (нпр. неутрализујући бујон).
Одвојите биофилмове стављањем поклопца у отворе плоче са медијумом за опоравак.
Уметните плочу у соникатор УИП400МТП, уверите се да су поклопац и плоча правилно поравнати.
Подесите соникатор на 70%-80% амплитуде и соникирајте 3-4 минута у режиму циклуса, да бисте обезбедили доследно одвајање биофилма без лизе ћелија. - Процена одрживости биофилма
Након соникације, обрадите медијум за опоравак који садржи одвојене ћелије биофилма користећи стандардне микробиолошке или аналитичке технике, као што су:- Број јединица које формирају колоније (ЦФУ): Урадите серијска разблажења и плочу на агару за пребројавање одрживих ћелија.
- Мерење оптичке густине (ОД): Користите спектрофотометријску анализу да процените густину ћелија.
- Тестови одрживости засновани на флуоресценцији: Квантификујте живе и мртве ћелије користећи флуоресцентне боје.
- Анализа података
Упоредите податке о одрживости третираних и нетретираних биофилма да бисте утврдили ефикасност антимикробних агенаса.
Израчунајте минималну концентрацију ерадикације биофилма (МБЕЦ) на основу концентрације потребне за елиминацију одрживих ћелија биофилма. - контрола квалитета
Обезбедите доследне услове соникације редовним калибрацијом УИП400МТП и провером да процес одвајања биофилма не резултира значајном лизом или уништењем ћелија.
Укључите одговарајуће контроле, као што су необрађени биофилмови и празнине само за медиј, да бисте потврдили резултате.
Ћелије биофилма формиране на иглицама су уклоњене ултразвучном обрадом (Хиелсцхер Ултрасоунд Тецхнологи, Телтов, Немачка, УИП250МТП) током 5 минута у плочама са 96 јажица које садрже свеж медијум за културу за опоравак ћелија.
(Слика и студија: ©де Оливеира ет ал., 2016)
Интеграцијом УИП400МТП у АСТМ Е2799-22 радни ток, процес одвајања биофилма је оптимизован за доследност, ефикасност и апликације велике пропусности.
Литература / Референце
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Често постављана питања
Шта је АСТМ Е2799?
АСТМ Е2799 је стандардна метода испитивања коју је успоставио АСТМ Интернатионал за тестирање ефикасности дезинфекционог средства против биофилма Псеудомонас аеругиноса користећи МБЕЦ тест. Метода се широко користи за процену формирања биофилма, антимикробне ефикасности и интеракција на површини материјала, омогућавајући стандардизована поређења у истраживањима у вези са биофилмом.
Која је разлика између АСТМ Е2799-22 и АСТМ Е2799-11, АСТМ Е2799-12 и АСТМ Е2799-17?
АСТМ Е2799 је стандардизована метода испитивања која процењује ефикасност дезинфекционих средстава против биофилма Псеудомонас аеругиноса коришћењем МБЕЦ (минималне концентрације ерадикације биофилма) теста. Овај метод је прошао кроз неколико ревизија како би се побољшала његова тачност и применљивост.
- АСТМ Е2799-11: Ово је било почетно издање стандарда, успостављање основних процедура за процену ефикасности дезинфекционог средства против биофилма П. аеругиноса коришћењем МБЕЦ теста.
- АСТМ Е2799-12: Ова ревизија је укључила мања техничка ажурирања ради побољшања јасноће и решавања нејасноћа идентификованих у верзији из 2011. године.
- АСТМ Е2799-17: У овом ажурирању, значајније модификације су направљене у протоколу, укључујући прилагођавања процеса култивације биофилма, примене третмана и процедура неутрализације, са циљем да се побољша репродуктивност и усклађеност са напретком у истраживању биофилма.
- АСТМ Е2799-22: Најновија ревизија одражава најновије научно разумевање и технолошка достигнућа у студијама биофилма. Укључује префињене методологије за раст, третман и анализу биофилма, обезбеђујући да метод испитивања остане релевантан и ефикасан за тренутне процене ефикасности дезинфекционих средстава.
Свака ревизија АСТМ Е2799 је направљена како би се побољшала поузданост, поновљивост и релевантност методе, осигуравајући да остане у току са научним и технолошким напретком у области истраживања биофилма.
Која је разлика између МБЕЦ и МБИЦ тестова?
Кључна разлика између МБЕЦ (минималне концентрације ерадикације биофилма) и МБИЦ (минималне концентрације инхибиције биофилма) тестова лежи у њиховом фокусу:
МБЕЦ Ассаис мери најнижу концентрацију антимикробног агенса потребну за потпуно искорењивање претходно формираних биофилма, процењујући способност супстанце да убије микроорганизме уграђене у биофилм.
МБИЦ Ассаис одредити најнижу концентрацију антимикробног агенса који спречава почетно формирање биофилма, процењујући његову способност да инхибира развој биофилма.
Оба теста су кључна за разумевање ефикасности антимикробних средстава против биофилма, али циљају различите фазе животног циклуса биофилма.
Научите како се соникатор микроплоче УИП400МТП користи за уклањање биофилма у МБИЦ тестовима!
Хиелсцхер Ултрасоницс производи ултразвучне хомогенизаторе високих перформанси од лаб до индустријска величина.