Замените стругање ћелија са УИП400МТП високопропусним соникатором

Одвајање и екстракција адхерентних ћелијских линија из плоча са више јажица за мулти-омичну анализу је свакодневни задатак у лабораторијама. Високо пропусно одвајање ћелија помоћу ултразвучног апарата за плоче са више бунара УИП400МТП замењује ручно стругање ћелија што доводи до већег приноса РНК, укупних липида и укупних поларних метаболита. Нова метода интегрише соникатор Хиелсцхер УИП400МТП са радном станицом за руковање течностима Бецкман Цоултер и7, омогућавајући високу пропусност, поновљиву и ефикасну обраду ћелија за екстракцију РНК, метаболита и липида. Представљена метода надмашује традиционалне методе ручног стругања ћелија постижући супериорну поновљивост и принос у различитим типовима ћелија и експерименталним условима.

Поједноставите одвајање ћелија помоћу Мицроплате Соницатор УИП400МТП

Системи везаних култура ћелија играју кључну улогу у токсиколошким и биомедицинским истраживањима. У овом контексту, Цруцхлеи-Фуге ет ал. (2024) бавили су се значајним изазовом у пројекту ПрецисионТок који се фокусирао на коришћење омичних технологија за процену хемијске опасности. Пројекат је имао за циљ анализу високог протока хиљада узорака третираних различитим хемикалијама. Да би испунили ову потражњу, истраживачи су развили аутоматизовани радни ток комбинујући соникатор УИП400МТП са успостављеним протоколима за двофазну екстракцију за анализу течном хроматографијом-масеном спектрометријом (ЛЦ-МС). Њихова студија процењује ефикасност УИП400МТП Мулти-велл Плате Соницатор у одвајању адхерентних ћелија у поређењу са ручним стругањем и другим традиционалним методама.

Поједностављени мулти-Омицс: аутоматизована екстракција адхерентних ћелија са УИП400МТП

Истраживачки тим Лауре Цруцхлеи-Фуге са Универзитета у Бирмингему користио је три људске ћелијске линије: ХепГ2 (ћелије рака јетре), ХепаРГ (диференциране ћелије сличне хепатоцитима) и Х295Р (ћелије рака надбубрежне жлијезде). Ове ћелије су култивисане у плочама са 24 и 96 јажица и изложене испитиваним хемикалијама као што су афлатоксин Б1 и форсколин.

Експериментални дизајн:

• 1. фаза: Оптимизација подешавања снаге соникатора УИП400МТП и поређење са ручним стругањем ћелија и звучним воденим купатилима. ХепГ2 ћелије су коришћене за процену опоравка РНК, метаболита и липида.
• 2. фаза: Интеграција УИП400МТП у двофазни ток рада екстракције користећи Бецкман Цоултер и7 систем. Валидација је спроведена коришћењем ХепаРГ и Х295Р ћелија.

Ток рада екстракције: Ток посла је обухватао излагање хемикалијама у плочама са више бунара, одвајање ћелија помоћу УИП400МТП и двофазну екстракцију преко Блигх & Дајер (Б&Г) метода. ЛЦ-МС анализа је изведена коришћењем Тхермо Сциентифиц Орбитрап Екплорис 120 за липофилна и поларна једињења. Тхе Б&Д метода, златни стандард за квантификацију липида, укључује екстракцију у два корака са метанолом, хлороформом и водом, након чега следи квантификација липида у фази хлороформа.

УИП400МТП соникатор за микроплоче олакшава одвајање везаних ћелијских линија са плоча са више јажица и Петријевих посуда

Резултати:

• 1. фаза: Оптимални услови соникације су идентификовани при 60% снаге.
  УИП400МТП је дао највећи опоравак РНК са изузетном репродуктивношћу у поређењу са ручним стругањем и звучним купатилима.
  Опоравак поларног метаболита био је конзистентан у свим методама, док је опоравак липида био значајно бољи са УИП400МТП.
• 2. фаза: Валидација на ХепаРГ и Х295Р ћелијама показала је високу репродуктивност у липидомичким и метаболомским подацима, на шта указују чврсто груписани ПЦА резултати.
  Третмани афлатоксином Б1 и форсколином су се ефикасно разликовали од контрола, наглашавајући осетљивост и поузданост методе.

“Хиелсцхер УИП400МТП уређај за соникацију пружа висококвалитетан и поновљив алтернативни приступ „златном стандарду“ ручног стругања ћелија, што доводи до већег приноса РНК, укупних липида и укупних поларних метаболита.” (Цруцхлеи-Фуге ет ал., 2024)

Цруцхлеи-Фуге ет ал. истаћи предности УИП400МТП соникатора за адхерентну обраду ћелија. Заменом ручног стругања, овај метод побољшава поновљивост, пропусност и принос, што га чини непроцењивим алатом за истраживања великих размера као што је ПрецисионТок. Интеграција УИП400МТП у аутоматизоване радне токове не само да смањује варијабилност, већ и поједностављује радно интензивне процесе, омогућавајући висококвалитетно прикупљање мулти-омицс података.

Рад Цруцхлеи-Фуге ет ал. (2024) олакшава и поједностављује обраду адхерентних ћелијских култура за мулти-омичку анализу. Интеграција УИП400МТП соникатора са аутоматизованим радним токовима обезбеђује доследну и ефикасну припрему узорака, што га чини идеалним за токсиколошка истраживања високог протока.
 

Дизајн, производња и консалтинг – Квалитет Маде ин Германи

Хиелсцхер ултрасоникатори су познати по свом највишем квалитету и стандардима дизајна. Робусност и једноставан рад омогућавају несметану интеграцију наших ултразвучних апарата у индустријске објекте. Хиелсцхер ултрасоникатори се лако носе са тешким условима и захтевним окружењима.

Хиелсцхер Ултрасоницс је ИСО сертификована компанија и ставља посебан нагласак на соникаторе високих перформанси са најсавременијом технологијом и једноставношћу за коришћење. Наравно, Хиелсцхер ултрасоникатори су усаглашени са ЦЕ и испуњавају захтеве УЛ, ЦСА и РоХ.