Замените стругање ћелија соникатором UIP400MTP за обраду великог броја узорака

Одвајање и екстракција адхерентних ћелијских линија из плоча са више бунарчића за мултиомичку анализу свакодневни су задаци у лабораторијама. Одвајање ћелија уз велики капацитет обраде помоћу соникатора UIP400MTP за плоче са више бунарчића замењује ручно стругање ћелија и доводи до већих приноса РНК, укупних липида и укупних поларних метаболита. Нова метода интегрише соникатор Hielscher UIP400MTP са радном станицом за руковање течностима Beckman Coulter i7, омогућавајући репродуктивну и ефикасну обраду великог броја ћелијских узорака за екстракцију РНК, метаболита и липида. Представљена метода надмашује традиционалне методе ручног стругања ћелија постизањем боље репродуктивности и већег приноса код различитих типова ћелија и у различитим експерименталним условима.

Поједноставите одвајање ћелија соникатором UIP400MTP за микроплоче

Системи за култивацију адхерентних ћелија имају кључну улогу у токсиколошким и биомедицинским истраживањима. У том контексту, Cruchley-Fuge и сар. (2024) бавили су се значајним изазовом у пројекту PrecisionTox, усмереном на примену омичких технологија за процену опасности од хемикалија. Циљ пројекта била је анализа хиљада узорака третираних различитим хемикалијама уз велики капацитет обраде. Да би испунили овај захтев, истраживачи су развили аутоматизован радни ток који комбинује соникатор UIP400MTP са устаљеним протоколима двофазне екстракције за анализу течном хроматографијом спрегнутом са масеном спектрометријом (LC-MS). Њихова студија процењује ефикасност соникатора UIP400MTP за плоче са више бунарчића у одвајању адхерентних ћелија у поређењу са ручним стругањем и другим традиционалним методама.

Поједностављивање мултиомике: аутоматизована екстракција адхерентних ћелија помоћу UIP400MTP

Истраживачки тим који предводи Laura Cruchley-Fuge са Универзитета у Бирмингему користио је три хумане ћелијске линије: HepG2 (ћелије карцинома јетре), HepaRG (диференциране ћелије сличне хепатоцитима) и H295R (ћелије карцинома надбубрежне жлезде). Ове ћелије су култивисане у плочама са 24 и 96 бунарчића и излагане испитиваним хемикалијама, као што су афлатоксин B1 и форсколин.

План експеримента:

• Фаза 1: Оптимизација подешавања снаге соникатора UIP400MTP и поређење са ручним стругањем ћелија и ултразвучним воденим купатилима. Ћелије HepG2 коришћене су за процену приноса РНК, метаболита и липида.
• Фаза 2: Интеграција UIP400MTP у радни ток двофазне екстракције помоћу система Beckman Coulter i7. Валидација је спроведена коришћењем ћелија HepaRG и H295R.

Радни ток екстракције: Радни ток обухватао је излагање хемикалијама у плочама са више бунарчића, одвајање ћелија помоћу UIP400MTP и двофазну екстракцију методом Bligh & Dyer (B&D). LC-MS анализа липофилних и поларних једињења изведена је помоћу уређаја Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120. Метода B&D, златни стандард за квантификацију липида, обухвата екстракцију у два корака метанолом, хлороформом и водом, након чега следи квантификација липида у хлороформској фази.

Соникатор UIP400MTP за микроплоче олакшава одвајање адхерентних ћелијских линија из плоча са више бунарчића и Петријевих шоља

Резултати:

• Фаза 1: Оптимални услови соникације утврђени су при 60% снаге.
  UIP400MTP је дао највећи принос РНК уз изузетну репродуктивност у поређењу са ручним стругањем и ултразвучним купатилима.
  Принос поларних метаболита био је уједначен код свих метода, док је принос липида био приметно већи уз UIP400MTP.
• Фаза 2: Валидација на ћелијама HepaRG и H295R показала је високу репродуктивност липидомичких и метаболомичких података, на шта су указивале тесно груписане PCA вредности.
  Третмани афлатоксином B1 и форсколином јасно су се разликовали од контрола, што истиче осетљивост и поузданост методе.

„Уређај за соникацију Hielscher UIP400MTP пружа висококвалитетан и репродуктиван алтернативни приступ „златном стандарду” ручног стругања ћелија, што доводи до већих приноса РНК, укупних липида и укупних поларних метаболита.“ (Cruchley-Fuge и сар., 2024)

Cruchley-Fuge и сар. истичу предности соникатора UIP400MTP за обраду адхерентних ћелија. Заменом ручног стругања ова метода побољшава репродуктивност, капацитет обраде и принос, што је чини непроцењивим алатом за обимне студије као што је PrecisionTox. Интеграција UIP400MTP у аутоматизоване радне токове не само да смањује варијабилност већ и поједностављује радно интензивне процесе, омогућавајући прикупљање висококвалитетних мултиомичких података.

Рад Cruchley-Fuge и сар. (2024) олакшава и поједностављује обраду адхерентних ћелијских култура за мултиомичку анализу. Интеграција соникатора UIP400MTP у аутоматизоване радне токове обезбеђује уједначену и ефикасну припрему узорака, што га чини идеално погодним за токсиколошка истраживања са великим капацитетом обраде.
 

Пројектовање, производња и саветовање – квалитет произведен у Немачкој

Ултразвучни уређаји Hielscher добро су познати по највишим стандардима квалитета и дизајна. Робусност и једноставно руковање омогућавају несметану интеграцију наших ултразвучних уређаја у индустријска постројења. Ултразвучни уређаји Hielscher лако подносе тешке услове и захтевна окружења.

Hielscher Ultrasonics је компанија са ISO сертификатом и посебан нагласак ставља на соникаторе високих перформанси који се одликују најсавременијом технологијом и једноставношћу коришћења. Наравно, ултразвучни уређаји Hielscher усклађени су са CE захтевима и испуњавају захтеве UL, CSA и RoHs.