Ultrazvočne aplikacije v MonkeyPox Virus

Ultrasonication je pomembna metoda obdelave za izolacijo opičjega virusa (MPXV) iz analitičnih vzorcev, za razdrobljenost DNK virusa kot tudi pri izdelavi cepiva proti opicam. Za pripravo vzorca pred diagnostiko in analizo (PCR, ELISA itd.) ultrasonication se uporablja za liziranje celic, da se sprosti opičji virus iz celične notranjosti in / ali za fragmentiranje DNK. Pri proizvodnji cepiva se aplikacije gibajo od priprave virusnih delcev / DNK, enkapsulacije v nosilcih zdravil in oblikovanja inokule.
V nadaljevanju najdete podrobne informacije o ultrazvočni pripravi vzorca virusa opičje koze, kot tudi ultrazvočno podprti izdelavi cepiva MPXV.

 

Kaj boste našli na tej strani:

Prošnja za informacije




Upoštevajte naše Politika zasebnosti.


Ultrasonicatorji visoke zmogljivosti so kritično orodje za obdelavo pri izdelavi številnih cepiv.

Ta sistem 2x 1kW ultrasonicatorjev za neprekinjeno delovanje je nameščen v proizvodnem obratu cepiva.

Ultrazvočna razdrobljenost in razdrobljenost DNK pred verižno reakcijo polimeraze (PCR)

Okužbo z virusom opičje koze zaznamo s preskušanji ojačevanja jedrski kislini (NAAT), pri uporabi verižne reakcije polimeraze v realnem času ali običajnih polimerazah (PCR), za odkrivanje edinstvenih zaporedj virusne DNK. Vzorec (npr. iz nazofaringealne swap ali biopsija kože) vsebuje virus v celicah.
Za analizo je treba virus sprostiti iz celic, virusni DNK pa je treba razdrobljeno za PCR.

Ultrazvočna lysis:

Ultrasonicator UP200Ht z mikrotipom S26d2 za ultrazvočno lizo bioloških vzorcevUltrazvočna motnja celic / liza je zanesljiva in učinkovita metoda za izolacijo virusov iz celičnih vzorcev in s tem prednostna tehnika pred kemičnimi agenti, kot so lizozim, proteinaza K in različni detergenti, ki se alternativno uporabljajo za doseganje celične lize in sproščanje DNK.
Vendar uporaba takšnih kemičnih reagentov zahteva zamudno pripravo vzorca v več korakih pred analizo PCR, da se prepreči zaviranje reakcije PCR. Ker zaviralci PCR vplivajo na učinkovitost ojačevanja, lahko majhne spremembe količine zaviralcev, ki niso odstranjeni, privedejo do velikih sprememb pri ojačevanju PCR produkta (Diaco, 1995).
Prednost ultrasonication za lysis je, da popolna motnja celičnih struktur in sproščanje DNK brez potrebe po lysing reagenti in zamudno pripravo vzorca so zaželeni. (prim. Fykse et al., 2003)

Ultrazvočna DNA fragmentacija:

Ultrazvočna DNA fragmentacija je preprosta in zanesljiva, kot je proizvaja DNA fragmenti tunable v dolžino (basepairs, bp). Z ultrazvoka lahko DNK učinkovito razdrobljena na ciljno dolžino DNK. Natančen nadzor nad ultrazvočnimi parametri in sofisticirane možnosti hlajenje preprečujejo degradacijo DNK.
Preberite več o ultrazvočni razdrobljenosti DNK!

 

Video prikazuje ultrazvočni sistem za pripravo vzorcev UIP400MTP, ki omogoča zanesljivo pripravo vzorca vseh standardnih večglasnih plošč z uporabo ultrazvoka visoke intenzivnosti. Tipične aplikacije UIP400MTP vključujejo celično lizo, DNK, RNK in kromatin omejevanje, kot tudi ekstrakcijo beljakovin.

Ultrasonicator UIP400MTP za multi-dobro sonication plošče

Prošnja za informacije




Upoštevajte naše Politika zasebnosti.


Ultrazvočne aplikacije v Cepivo proti virusu opic

Ultrasonication se uporablja za proizvodnjo cepiv, kot so opičja koza cepiva. Cepiva proti virusu opičje koze so trenutno živa cepiva proti virusu. Na novo razvita cepiva lahko uporabljajo druge platforme, kot so DNK temelji Trenutno vsebuje spremenjeno cepivo Ankara viurs, attenuated, ne-replicirajoči ortopoxvirus. Vsebuje tudi tris (tris-aminometana) in natrijev klorid. Cepivo lahko vsebuje tudi majhne količine DNK in beljakovin iz celic piščančjega zarodka Fibroblast, ki se uporabljajo za rast virusa cepiva, benzonaze in antibiotikov, kot sta gentamicin in ciprofloksacin.

Ultrazvočna homogenizacija se uporablja pri proizvodnji živih attenviranih virusnih cepiv, DNA cepiv, večvalentnih DNA koktajlov, mRNA cepiv, rekombinantnih cepiv proti beljakovinam, virusu podobnih delcev, itd.

Uporaba ultrazvočnih zdravil v proizvodnji cepiva sega od

  • disperzijo delcev in učinkovišč virusa
  • emulgiranje
  • inaktivacija virusov
  • formulacija nosilca drog (NLC, SLN)
  • Ovijanje
  • raztapljanje zdravil
  • priprava adjuvantov
  • Odplinjevanje / De-Aeration

 

Več poglobljenih informacij o ultrazvočnih aplikacijah za izboljšano proizvodnjo cepiv!

Protokol za ultrazvočno izolacijo virusa opičje koze

Raziskovalna ekipa Stittelaar (2005) je uporabila ultrazvočno lizo za sproščanje opičjega virusa iz kulture celic gostitelja rasti, pa tudi iz celic, pridobljenih prek zavihkov grla okuženih primatov.

Priprava cepiva proti opicam:

Opičji virusi so se gojili na specifičnih celicah piščančjega embrio fibroblasta brez patogena. Po inkubaciji 1 do 2 dni je bila suspenzija virusnih celic pobrana z enim krogom odmrzovanja in nato s centrifugacijo koncentrirana. Pelet je bil ponovno posodobljen in podvržen več krogom ultrazvočne homogenizacije.

Opicepox Virus Izolacija iz cepljenih makakov:

Vzorci so bili trikrat zamrznjeni in sonicani v ultrazvočnem CupHornu. Dve razredčitvi (1:10 in 1:100) v transportnem mediju, ki je bil dopolnjen z 1% fetalnega govejega seruma, so bili uporabljeni za cijepljanje Monolarij celic Vero v šest-dobro plošč. Po 1 h inkubacijo pri 37 °C so inokulo odstranili in nadomestili s kulturnim medijem, ki je bil dopolnjen z 1 % fetalnega govejega seruma. Monoleje so bile kulturizirane 5 dni pri 37 °C in pobarvane s kristalno vijolièno raztopino.
(prim. Stittelaar et al., 2005)

V tem videu vam pokažemo 2 kilovata ultrazvočni sistem za inline delovanje v prečiščenem kabinetu. Hielscher dobavlja ultrazvočno opremo skoraj vsem panogam, kot so kemična industrija, farmacevtska industrija, kozmetika, petrokemični procesi kot tudi za postopke ekstrakcije na osnovi topil. Ta prečiščena omarica iz nerjavečega jekla je namenjena delovanju na nevarnih območjih. V ta namen lahko zaprto omaro kupec prečisti z dušikom ali svežim zrakom, da ne bi vnetljivi plini ali hlapi vstopili v omaro.

2x 1000 Watts Ultrasonicators v prečiščenem kabinetu za namestitev v nevarnih območjih

Ultrasonicatorji za analizo virusov in proizvodnjo cepiva

Hielscher Ultrasonics širok portfelj izdelkov ponuja idealen ultrasonicator za raziskave in analitične laboratorije, kot tudi za industrijsko proizvodnjo cepiva.
Hielscher Ultrasonics je specializiran za oblikovanje, proizvodnjo in distribucijo visoko zmogljivo ultrasonicatorjev in sono-bioreaktorjev za uporabo v raziskovalnih in analitičnih laboratorijih kot tudi za izvajanje v industrijski proizvodnji cepiv (npr. cepiva, Api).
Natančen nadzor nad ultrazvočne parametre procesa, ki jih Hielscher Ultrazvočna' Inteligentna programska opremaSonication se lahko uporablja za odprte posode, zaprte neprekinjeno mešane reaktorje in neprekinjeno pretočne reaktorje. Vsi deli ultrazvočnih sistemov, ki pridejo v stik s tekočim medijom, so izdelani iz nerjavečega jekla, titana ali stekla. Samodejni deli in sanitarna okovja zagotavljajo proizvodnjo pod farmacevtskih pogojih.
Samodejno snemanje podatkov: Inteligentna programska oprema beleži parametre procesa ultrazvoka samodejno na integrirano pomnilniško kartico SD. Natančen nadzor vseh procesnih parametrov zagotavlja ponovljivost, Standardizacija proizvodnjein olajša izpolnjevanje varnostnih standardov za farmacevtske izdelke.
Hielscher Ultrazvočna’ ultrazvočni procesorji so zelo zanesljivi in jih je mogoče natančno nadzorovati. Vsi industrijski ultrasonicatorji se lahko prilagodijo za dostavo celotne palete od nižjih do zelo visokih amplitud. Robustnost Hielscherjevih ultrazvočnih sistemov omogoča delovanje 24/7 pod težkimi dolžnostmi in v zahtevnih okoljih.

V spodnji tabeli vam daje podatek o približni zmogljivosti obdelave naših ultrasonicators:

serija Volume Pretok Priporočena naprave
multi-well / mikrotiter plošče N/a UIP400MTP
1 do 500ml 10 do 200 ml / min UP100H
10 do 2000 ml 20 do 400ml / min UP200Ht, UP400St
00,1 do 20L 00,2 do 4L / min UIP2000hdT
10 do 100L 2 do 10L / min UIP4000hdT
N/a 10 do 100L / min UIP16000
N/a večja gruča UIP16000

Kontaktiraj nas! / Vprašajte nas!

Vprašajte za več informacij

Prosimo, uporabite spodnji obrazec, da zahteva dodatne informacije o ultrazvočni procesorji, aplikacije in ceno. Mi bo z veseljem razpravljali vaš proces z vami in vam ponudimo ultrazvočni sistem, ki izpolnjuje vaše zahteve!









Prosimo, upoštevajte naše Politika zasebnosti.


Ultrazvočni homogenizatorji so zanesljivi za omejevanje DNK

Ultrazvočni DNK Rezalni
Prilagojeno iz Jkwchui pod CC-BY-SA.03



Literatura/reference

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Dejstva je treba vedeti

Opičji virus

Opičje koze (MPV, MPXV ali hMPXV) so vrsta dvojnega DNA virusa, ki povzroča virusno zoonotično bolezen. Ta bolezen je znana kot okužba z opicami in se lahko pojavi pri ljudeh in živalih. Spada v rod Orthopoxvirus v družini Poxviridae. Monkeypox virus je eden od človeških ortopoxvirus skupaj z variola (VARV), kravje koze (CPX) in cepiva (VACV) virusi. Za ortopoksviruze so značilni veliki delci virusa v obliki opeke, ki vsebujejo dvojni DNK genom približno 200.000 bp.

ELISA Assay

ELISA je encimsko povezana imunosorbent assay in je označena imunoaseja, ki velja za zlati standard imunoasejev. ELISA je imunološki test, cenjen po visoki diagnostični občutljivosti, se uporablja za odkrivanje in količinsko ugotavljanje molekul, vključno s protitelesi, antigeni, beljakovine, glikoproteini in hormoni. Načelo ELISA temelji na interakciji protiteles proti antigenom. S tem antigensko-protitelesnim delovanjem se specifična protitelesa vežejo za njegov ciljni antigen. Samo ko pride do interakcije, se substrat lahko zaveže na encim in opazimo lahko tudi posledične pretvorbe substrata, kar pomeni, da se doseže pozitiven rezultat.


Ultrazvočne visoke zmogljivosti! Hielscherjeva paleta izdelkov zajema celoten spekter od kompaktnega laboratorijskega ultrazvočnikatorja nad enotami na vrhu klopi do polnoindustrijskih ultrazvočnih sistemov.

Hielscher Ultrasonics proizvaja visoko zmogljivost ultrazvočnih homogenizatorjev iz laboratorij do industrijske velikosti.