Ultrazvočne aplikacije v virusu opičjih koz

Ultrazvočna obdelava je pomembna metoda obdelave za izolacijo virusa opičjih koz (MPXV) iz analitičnih vzorcev, za fragmentacijo virusne DNK in pri proizvodnji cepiva proti opičjim kozam. Za pripravo vzorca pred diagnostiko in analizo (PCR, ELISA itd.) se ultrazvok uporablja za lizo celic, da se virus opičjih koz sprosti iz notranjosti celice in / ali fragmentira DNK. Pri proizvodnji cepiv aplikacije segajo od priprave virusnih delcev / DNA, inkapsulacije v nosilce zdravil in oblikovanja inokule.
Spodaj lahko najdete podrobne informacije o ultrazvočni pripravi vzorcev virusa opičjih koz in ultrazvočno podprti proizvodnji cepiva MPXV.

Kaj boste našli na tej strani:

• Ultrazvočna liza za ekstrakcijo virusa opičjih koz
• Ultrazvočna fragmentacija DNK virusa opičjih koz
• Ultrazvočne aplikacije v proizvodnji cepiv MPXV

Ultrazvočna liza in fragmentacija DNA pred verižno reakcijo s polimerazo (PCR)

Okužba z virusom opičjih koz se odkrije s testiranjem amplifikacije nukleinske kisline (NAAT) z uporabo verižne reakcije s polimerazo v realnem času ali konvencionalne verižne reakcije s polimerazo (PCR) za odkrivanje edinstvenih zaporedij virusne DNK. Vzorec (npr. iz zamenjave nazofaringeala ali biopsije kože) vsebuje virus v celicah.
Za analizo je treba virus sprostiti iz celic in virusno DNK je treba fragmentirati za PCR.

Ultrazvočna liza:

Ultrazvočna motnja / liza celic je zanesljiva in učinkovita metoda za izolacijo virusov iz vzorcev celic in s tem boljša tehnika pred kemičnimi sredstvi, kot so lizocim, proteinaza K in različni detergenti, ki se alternativno uporabljajo za doseganje lize celic in sproščanja DNK.
Vendar pa uporaba takšnih kemičnih reagentov zahteva dolgotrajno pripravo vzorca v več korakih pred analizo PCR, da se prepreči zaviranje reakcije PCR. Ker zaviralci PCR vplivajo na učinkovitost amplifikacije, lahko majhne spremembe v količini inhibitorjev, ki niso odstranjene, povzročijo velike razlike v amplifikaciji produkta PCR (Diaco, 1995).
Prednost ultrazvočne obdelave za lizo je, da je zaželena popolna motnja celičnih struktur in sproščanje DNK brez potrebe po lizi reagentov in dolgotrajni pripravi vzorca. (prim. Fykse et al., 2003)

Ultrazvočna fragmentacija DNK:

Ultrazvočna fragmentacija DNK je preprosta in zanesljiva, saj proizvaja fragmente DNK, ki jih je mogoče dolžino dolžino (bazni pari, bp). Z uporabo ultrazvoka lahko DNK učinkovito razdelimo na ciljno dolžino DNK. Natančen nadzor nad ultrazvočnimi parametri in prefinjene možnosti hlajenja preprečujejo razgradnjo DNK.
Preberite več o ultrazvočni fragmentaciji DNK!

Ultrazvočne aplikacije v cepivu proti virusu opičjih koz

Cepiva, ki se uporabljajo proti virusu opičjih koz, so trenutno živa virusna cepiva. Na novo razvita cepiva bi lahko uporabljala druge platforme, kot je na osnovi DNK Trenutno vsebuje modificirano Vaccinia Ankara viurs, oslabljen, nereplicirajoč se ortopoksvirus. Vsebuje tudi Tris (tris-aminometan) in natrijev klorid. Cepivo lahko vsebuje tudi majhne količine DNK in beljakovin iz fibroblastnih celic piščančjih zarodkov, ki se uporabljajo za gojenje virusa cepiva, benzonaze in antibiotičnih spojin, kot sta gentamicin in ciprofloksacin.

Ultrazvočna homogenizacija se uporablja pri proizvodnji živih oslabljenih virusnih cepiv, cepiv DNA, večvalentnih koktajlov DNA, cepiv mRNA, rekombinantnih beljakovinskih cepiv, cepiv z delci, podobnih virusom itd.

Najdete lahko podrobnejše informacije o ultrazvočnih aplikacijah za izboljšano proizvodnjo cepiv!

Protokol za ultrazvočno izolacijo virusa opičjih koz

Raziskovalna skupina Stittelaar (2005) je uporabila ultrazvočno lizo za sproščanje virusa opičjih koz iz kulture gostiteljskih celic in iz celic, pridobljenih z zamenjavo grla od okuženih primatov.

Priprava cepiva proti opičjim kozam:

Virusi opičjih koz so bili gojeni na fibroblastnih celicah piščančjih zarodkov brez specifičnih patogenov. Po inkubaciji za 1 do 2 dni je bila suspenzija virusnih celic pobrana z enim krogom zamrzovanja in odmrzovanja in nato koncentrirana s centrifugiranjem. Pelet je bil ponovno suspendiran in podvržen več krogom ultrazvočne homogenizacije.

Izolacija virusa opičjih koz iz cepljenih makakov:

Vzorci so bili trikrat zamrznjeni in odmrznjeni in sonikirani v ultrazvočnem CupHornu. Dve razredčitvi (1:10 in 1:100) v transportnem mediju, dopolnjenem z 1% fetalnim govejim serumom, sta bili uporabljeni za inokulacijo monoplasti Vero celic v ploščah s šestimi jamicami. Po 1 uri inkubacije pri 37 °C so bile inokule odstranjene in nadomeščene z gojiščem za kulturo, dopolnjeno z 1% fetalnim govejim serumom. Enoplasti so bili kultivirani 5 dni pri 37 ° C in obarvani s kristalno vijolično raztopino.
(prim. Stittelaar et al., 2005)

Ultrazvočni aparati za analizo virusov in proizvodnjo cepiv

Širok portfelj izdelkov Hielscher Ultrasonics ponuja idealen ultrazvočni aparat za raziskovalne in analitične laboratorije ter za industrijsko proizvodnjo cepiv.
Hielscher Ultrasonics je specializiran za načrtovanje, proizvodnjo in distribucijo visoko zmogljivih ultrazvočnih aparatov in sono-bioreaktorjev za uporabo v raziskovalnih in analitičnih laboratorijih ter za uporabo v industrijski proizvodnji cepiv (npr. Cepiva, Api).
Ultrazvočno razbijanje se lahko uporablja za odprte posode, zaprte reaktorje z neprekinjenim mešanjem in reaktorje z neprekinjenim pretočnim. Vsi deli ultrazvočnih sistemov, ki pridejo v stik s tekočim medijem, so izdelani iz nerjavečega jekla, titana ali stekla. Autoklavni deli in sanitarna oprema zagotavljajo proizvodnjo pod farmacevtski pogoji.
Samodejno beleženje podatkov: Inteligentna programska oprema samodejno beleži parametre postopka ultrazvočnega razbijanja na vgrajeno pomnilniško kartico SD. Natančen nadzor vseh procesnih parametrov zagotavlja Obnovljivost, Standardizacija proizvodnjein olajšuje izpolnjevanje standardov varnosti farmacevtskih izdelkov.
Hielscher Ultrasonics’ Ultrazvočni procesorji so zelo zanesljivi in jih je mogoče natančno nadzorovati. Vsi industrijski ultrazvočni aparati se lahko prilagodijo tako, da zagotavljajo celoten razpon od nižjih do zelo visokih amplitud. Robustnost Hielscherjevih ultrazvočnih sistemov omogoča 24/7 delovanje pri težkih obremenitvah in v zahtevnih okoljih.

Spodnja tabela vam prikazuje približno zmogljivost obdelave naših ultrazvočnih aparatov: