Pufrové roztoky pripravené ultrazvukom

Lyzačné pufre možno účinne a rýchlo pripraviť pomocou ultrazvukových homogenizátorov tkanív. Keďže ultrazvukové prístroje sú ideálnym nástrojom na miešanie, rozpúšťanie a dispergovanie, umožňujú spoľahlivú a používateľsky prívetivú prípravu lyzačných pufrov.

Ultrazvuková príprava lyzačných pufrov

Ultrazvukové homogenizátory tkanív sú bežným nástrojom na rozrušovanie buniek, lýzu a extrakciu, a preto sú dostupné vo väčšine laboratórií. Ďalším využitím sondových ultrazvukových prístrojov je príprava lyzačných pufrov.

Lyzačný pufer je roztok používaný na rozrušenie (lýzu) buniek a uvoľnenie ich obsahu na následnú analýzu. Konkrétne zloženie lyzačného pufra sa môže líšiť v závislosti od typu lyzovaných buniek a následnej aplikácie. Typický lyzačný pufer však obsahuje zložky, ako sú detergenty, soli a inhibítory proteáz. Pufračné soli (napr. Tris-HCl) a iónové soli (napr. NaCl) sa bežne používajú na reguláciu pH a osmolarity lyzátu.
Pri príprave lyzačného pufra sa zložky zmiešajú vo vhodných koncentráciách a pri vhodnom pH. Zmes sa zvyčajne mieša alebo pretrepáva, kým sa zložky nerozpustia a roztok nie je homogénny.
Ultrazvuková homogenizácia je metóda, ktorá môže pomôcť pri príprave kvalitného lyzačného pufra tým, že zlepšuje premiešanie a rozpúšťanie zložiek. Pri tejto metóde sa na zmes pôsobí ultrazvukovými vlnami – zvyčajne v rozsahu 20 až 30 kHz – čím sa vytvárajú kavitačné bubliny, ktoré kolabujú a vytvárajú intenzívnu lokálnu energiu, čo vedie k mechanickému šmyku a miešaniu zložiek.
Proces ultrazvukovej homogenizácie môže pomôcť rozrušiť akékoľvek zhluky alebo agregáty zložiek a zabezpečiť rovnomerné premiešanie roztoku. Takto zlepšený lyzačný pufer preto môže viesť k účinnejšiemu rozrušeniu buniek a vyšším výťažkom extrahovaného materiálu. Ultrazvuková homogenizácia môže navyše skrátiť čas potrebný na prípravu lyzačného pufra v porovnaní s tradičnými metódami miešania alebo pretrepávania.
Celkovo je ultrazvuková homogenizácia účinným nástrojom na zlepšenie kvality a efektívnosti prípravy lyzačných pufrov.

Protokol ultrazvukovej prípravy lyzačného pufra

Toto je všeobecný protokol prípravy lyzačného pufra pomocou sondového ultrazvukového prístroja:
 
Materiály:

• Detergent alebo detergenty podľa výberu (napr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Soľ alebo soli podľa výberu (napr. NaCl, KCl)
• Inhibítory proteáz (napr. PMSF, aprotinín, leupeptín)
• Ultrazvukový prístroj
• Miešadlo
• Deionizovaná voda
• pH meter alebo pH prúžky

 
 
Pokyny krok za krokom:

1. Určte zloženie lyzačného pufra podľa buniek alebo tkaniva, ktoré budete lyzovať, a následných aplikácií, na ktoré budete lyzát používať. Pripravte zásobné roztoky detergentov, solí a inhibítorov proteáz v požadovaných koncentráciách.
2. Pridajte zásobné roztoky detergentov, solí a inhibítorov proteáz do kadičky alebo banky.
3. Pridajte deionizovanú vodu, aby ste doplnili objem na požadované množstvo pufra.
4. Zmiešajte zložky pomocou miešadla, aby ste získali predbežne premiešaný roztok.
5. Zmerajte pH pufra pomocou pH metra alebo pH prúžkov a podľa potreby upravte pH malými množstvami kyseliny alebo zásady.
6. Pomocou sondového ultrazvukového prístroja homogenizujte predbežne premiešaný roztok tak, aby ste získali vysoko homogénny roztok. Na tento účel sonikujte roztok niekoľko sekúnd, kým sa dôkladne nepremieša a nerozrušia sa všetky zhluky alebo agregáty. Trvanie a výkon sonikácie možno optimalizovať podľa konkrétneho lyzačného pufra a použitého ultrazvukového prístroja.
7. Po pôsobení ultrazvuku opätovne zmerajte pH pufra a podľa potreby ho upravte.
8. Prefiltrujte pufer cez filter s veľkosťou pórov 0,2 mikrometra, aby ste odstránili akékoľvek zvyšky alebo agregáty, ktoré sa mohli vytvoriť počas sonikácie.
9. Lyzačný pufer je teraz pripravený na použitie.

 
Poznámka: Presné zloženie a pH lyzačného pufra sa môžu líšiť v závislosti od lyzovaných buniek alebo tkaniva a následných aplikácií. Uvedený protokol predstavuje všeobecné usmernenie a pre konkrétne aplikácie môže byť potrebné ho optimalizovať.
 
Ultrazvukové homogenizátory sa bežne používajú na rozrušovanie buniek a extrakciu vnútrobunkových molekúl. Preto sa pri mnohých aplikáciách lýzy využíva sondová sonikácia nielen na prípravu lyzačného pufra, ale aj na mechanické rozrušovanie buniek a extrakciu.
Vďaka tomu sú ultrazvukové homogenizátory tkanív všestranným nástrojom pre laboratóriá, čo vysvetľuje široké využitie ultrazvukových prístrojov v mikrobiológii, biotechnológii a biologických vedách.

Ultrazvukové laboratórne homogenizátory

Hielscher Ultrasonics vyrába a dodáva ultrazvukové homogenizátory a sondy (sonotródy) s rôznymi menovitými výkonmi a pre rôzne objemy vzoriek. To nám umožňuje ponúknuť vám najvhodnejší ultrazvukový dezintegrátor na prípravu vašich vzoriek. Zameriavame sa na najvyššiu kvalitu, mimoriadny používateľský komfort a spoľahlivé výsledky sonikácie. Všetky digitálne ultrazvukové prístroje sú vybavené inteligentným softvérom, funkciami programovania a prednastavenia sonikačných protokolov, diaľkovým ovládaním cez prehliadač, reguláciou teploty, osvetlením vzorky, ako aj automatickým zaznamenávaním údajov na zabudovanú SD kartu.

Návrh, výroba a poradenstvo – kvalita vyrobená v Nemecku

Ultrazvukové prístroje Hielscher sú známe svojou najvyššou kvalitou a najvyššími štandardmi konštrukcie. Robustnosť a jednoduchá obsluha umožňujú bezproblémovú integráciu našich ultrazvukových prístrojov do priemyselných prevádzok. Ultrazvukové prístroje Hielscher ľahko zvládajú drsné podmienky a náročné prostredia.

Hielscher Ultrasonics je spoločnosť certifikovaná podľa ISO a kladie osobitný dôraz na vysokovýkonné ultrazvukové prístroje s najmodernejšou technológiou a používateľsky prívetivou obsluhou. Ultrazvukové prístroje Hielscher sú samozrejme v zhode s CE a spĺňajú požiadavky UL, CSA a RoHs.

Nasledujúca tabuľka poskytuje prehľad našich rôznych laboratórnych ultrazvukových prístrojov: