Pufrovacie roztoky pripravené ultrazvukom

Lýzne pufre je možné efektívne a rýchlo pripraviť pomocou ultrazvukových homogenizátorov tkanív. Keďže ultrazvukové prístroje sú vysnívaným nástrojom na miešanie, rozpúšťanie a dispergáciu, umožňujú spoľahlivú a užívateľsky prívetivú prípravu lýznych pufrov.

Ultrazvuková príprava lýznych pufrov

Ultrazvukové homogenizátory tkanív sú bežným nástrojom na narušenie buniek, lýzu a extrakciu, preto sú dostupné vo väčšine laboratórií. Sekundárnou aplikáciou pre ultrazvukové prístroje typu sondy je príprava lýznych pufrov.

Lyzačný pufr je roztok používaný na rozbitie (lýzu) buniek a uvoľnenie ich obsahu na následnú analýzu. Špecifické zloženie lýzneho pufra sa môže líšiť v závislosti od typu lyzovaných buniek a následnej aplikácie. Typický lyzačný pufr však obsahuje zložky, ako sú detergenty, soli a inhibítory proteázy. Pufrovacie soli (napr. Tris-HCl) a iónové soli (napr. NaCl) sa bežne používajú na reguláciu pH a osmolarity lyzátu.
Na výrobu lýzneho tlmivého roztoku sa zložky zmiešajú vo vhodných koncentráciách a pH. Zmes sa zvyčajne mieša alebo pretrepáva, kým sa zložky nerozpustia a roztok nie je homogénny.
Ultrazvuková homogenizácia je metóda, ktorú možno použiť na vytvorenie dobrého lýzneho tlmivého roztoku zlepšením miešania a rozpúšťania zložiek. Pri tejto metóde ultrazvukové vlny – normálne v rozsahu 20 až 30 kHz – Na zmes sa aplikujú kavitačné bubliny, ktoré sa zrútia a vytvoria intenzívnu miestnu energiu, čo vedie k mechanickému strihu a zmiešaniu zložiek.
Proces ultrazvukovej homogenizácie môže pomôcť rozložiť všetky zhluky alebo agregáty zložiek a zabezpečiť, aby bol roztok rovnomerne premiešaný. V dôsledku toho môže takýto vylepšený lyzačný pufr viesť k efektívnejšiemu narušeniu buniek a vyšším výťažkom extrahovaného materiálu. Okrem toho môže ultrazvuková homogenizácia skrátiť čas potrebný na výrobu lýzneho pufra v porovnaní s tradičnými metódami miešania alebo trepania.
Celkovo je ultrazvuková homogenizácia silným nástrojom na zlepšenie kvality a účinnosti prípravy lýzneho pufra.

Protokol o príprave ultrazvukového lýzneho pufra

Toto je všeobecný protokol na výrobu lýzneho pufra pomocou ultrazvukového zariadenia typu sondy:
 
Materiály:

• Čistiace prostriedky podľa výberu (napr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Soľ (soli) podľa výberu (napr. NaCl, KCl)
• Inhibítory proteázy (napr. PMSF, aprotinín, leupeptín)
• ultrazvuk
• Miešadlo
• Deionizovaná voda
• pH meter alebo pH prúžky

 
 
Pokyny krok za krokom:

1. Určte zloženie lýzneho pufra na základe buniek alebo tkaniva, ktoré budete lyzovať, a následných aplikácií, na ktoré budete lyzát používať. Pripravte zásobné roztoky detergentov, solí a inhibítorov proteázy v požadovaných koncentráciách.
2. Pridajte zásobné roztoky detergentov, solí a inhibítorov proteázy do kadičky alebo banky.
3. Pridajte deionizovanú vodu, aby sa objem zvýšil na požadované množstvo pufra.
4. Zmiešajte zložky pomocou miešadla, aby ste získali roztok predbežnej zmesi.
5. Zmerajte pH pufra pomocou pH metra alebo pH prúžkov a podľa potreby upravte pH malým množstvom kyseliny alebo zásady.
6. Pomocou ultrazvuku typu sondy homogenizujte roztok predmiešania tak, aby sa získal vysoko homogénny roztok. Preto roztok niekoľko sekúnd sonikujte, kým sa roztok dôkladne nepremieša a nerozložia sa všetky zhluky alebo kamenivo. Trvanie a silu sonikácie je možné optimalizovať na základe špecifického použitého lyzačného pufra a ultrazvuku.
7. Po ultrazvuku znova zmerajte pH pufra a podľa potreby upravte.
8. Prefiltrujte pufr cez 0.2 mikrónový filter, aby ste odstránili všetky nečistoty alebo kamenivo, ktoré sa mohlo vytvoriť počas sonikácie.
9. Lyzačný pufr je teraz pripravený na použitie.

 
Poznámka: Presné zloženie a pH lýzneho pufra sa môže líšiť v závislosti od lyzovaných buniek alebo tkanív a následných aplikácií. Vyššie uvedený protokol je všeobecným usmernením a môže byť potrebné ho optimalizovať pre konkrétne aplikácie.
 
Ultrazvukové homogenizátory sa bežne používajú na narušenie buniek a extrakciu intracelulárnych molekúl. Preto mnohé aplikácie lýzy používajú sondovú sonikaciu nielen na prípravu lýzneho pufra, ale aj na mechanické narušenie buniek a extrakciu.
Vďaka tomu sú ultrazvukové tkanivové homogenizátory všestranným nástrojom pre laboratóriá a vysvetľuje široké využitie ultrazvukových prístrojov v mikrobiológii, biotechnológii a prírodných vedách.

Ultrazvukové laboratórne homogenizátory

Spoločnosť Hielscher Ultrasonics vyrába a dodáva ultrazvukové homogenizátory a sondy (sonotrody) s rôznymi výkonmi a objemami vzoriek. To nám umožňuje ponúknuť vám najvhodnejší ultrazvukový disruptor na prípravu vzoriek. Zameriavame sa na najvyššiu kvalitu, vynikajúce užívateľské pohodlie a spoľahlivé výsledky sonikácie. Všetky digitálne ultrazvuky sú vybavené inteligentným softvérom, programovaním a prednastavením ultrazvukových protokolov, diaľkovým ovládaním prehliadača, reguláciou teploty, osvetlením vzorky, ako aj automatickým záznamom údajov na vstavanú SD kartu.

Dizajn, výroba a poradenstvo – Kvalita vyrobená v Nemecku

Ultrazvukové prístroje Hielscher sú známe svojou najvyššou kvalitou a dizajnovými štandardmi. Robustnosť a jednoduchá obsluha umožňujú bezproblémovú integráciu našich ultrazvukových prístrojov do priemyselných zariadení. Drsné podmienky a náročné prostredie ľahko zvládnu ultrazvukové prístroje Hielscher.

Hielscher Ultrasonics je spoločnosť s certifikáciou ISO a kladie osobitný dôraz na vysokovýkonné ultrazvukové prístroje s najmodernejšou technológiou a užívateľskou prívetivosťou. Ultrazvukové prístroje Hielscher sú samozrejme v súlade s CE a spĺňajú požiadavky UL, CSA a RoHs.

Nasledujúca tabuľka poskytuje prehľad našich rôznych laboratórnych ultrazvukov: