Lýzne pufre môžu byť efektívne a rýchlo pripravené pomocou ultrazvukových tkanivových homogenizátorov. Vzhľadom k tomu, ultrasonicators sú dream nástroj pre miešanie, rozpúšťanie a dispergovanie, umožňujú spoľahlivú a užívateľsky prívetivú prípravu lýzových pufrov.

Ultrazvuková príprava tlmivých roztokov lýzy

Ultrazvukové tkanivové homogenizátory sú bežným nástrojom pre narušenie buniek, lýza a extrakcia, preto sú k dispozícii vo väčšine laboratórií. Sekundárnou aplikáciou pre ultrasonicators typu sondy je príprava tlmivých roztokov lýzy.

Lýzový tlmivý roztok je roztok, ktorý sa používa na rozbitie otvorených (lyzových) buniek a uvoľnenie ich obsahu na následnú analýzu. Špecifické zloženie tlmivého roztoku na lýzu sa môže líšiť v závislosti od typu lyzovaných buniek a následnej aplikácie. Typický tlmivý roztok na lýzu však obsahuje zložky, ako sú detergenty, soli a inhibítory proteázy. Tlmivé soli (napr. Tris-HCl) a iónové soli (napr. NaCl) sa bežne používajú na reguláciu pH a osmolarity lyzátu.
Na vytvorenie tlmivého roztoku na lýzu sa zložky zmiešajú vo vhodných koncentráciách a pH. Zmes sa zvyčajne mieša alebo pretrepáva, až kým sa zložky nerozpustia a roztok nie je homogénny.
Ultrazvuková homogenizácia je metóda, ktorá môže byť použitá na pomoc pri vytváraní dobrého lýzneho tlmivého roztoku zlepšením miešania a rozpúšťania zložiek. Pri tejto metóde ultrazvukové vlny – normálne v rozsahu 20 až 30 kHz – sa aplikujú na zmes, ktorá vytvára kavitačné bubliny, ktoré sa zrútia a vytvárajú intenzívnu miestnu energiu, čo vedie k mechanickému šmyku a miešaniu zložiek.
Ultrazvukový homogenizačný proces môže pomôcť rozbiť akékoľvek zhluky alebo agregáty zložiek a zabezpečiť, aby bol roztok rovnomerne zmiešaný. V dôsledku toho môže takýto zlepšený tlmivý roztok na lýzu viesť k efektívnejšiemu narušeniu buniek a vyšším výťažkom extrahovaného materiálu. Okrem toho, ultrazvuková homogenizácia môže znížiť čas potrebný na vytvorenie lýzového tlmivého roztoku v porovnaní s tradičnými metódami miešania alebo trepania.
Celkovo je ultrazvuková homogenizácia silným nástrojom na zlepšenie kvality a účinnosti prípravy lýzového pufra.

Protokol pre prípravu ultrazvukového tlmivého roztoku lýzy

Toto je všeobecný protokol na vytvorenie lýzového tlmivého roztoku pomocou ultrazvukom typu sondy:
 
Materiály:

• Zvolený(é) čistiaci prostriedok (detergenty) (napr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Soľ(-ti) podľa výberu (napr. NaCl, KCl)
• inhibítory proteáz (napr. PMSF, aprotinín, leupeptín)
• Ultrasonicator
• Miešadlo
• Deionizovaná voda
• pH meter alebo pH prúžky

 
 
Pokyny krok za krokom:

1. Určite zloženie tlmivého roztoku na základe buniek alebo tkaniva, ktoré budete lyzátovať, a následných aplikácií, pre ktoré budete lyzát používať. Pripravte zásobné roztoky detergentov, solí a inhibítorov proteáz v požadovaných koncentráciách.
2. Pridajte zásobné roztoky detergentov, solí a inhibítorov proteáz do kadičky alebo banky.
3. Pridajte deionizovanú vodu, aby sa objem zvýšil na požadované množstvo tlmivého roztoku.
4. Zložky zmiešajte pomocou miešadla, aby ste získali roztok predmixu.
5. Zmerajte pH tlmivého roztoku pomocou pH metra alebo pH prúžkov a podľa potreby upravte pH malým množstvom kyseliny alebo zásady.
6. Použite ultrasonicator typu sondy na homogenizáciu roztoku premixu tak, aby sa získal vysoko homogénny roztok. Preto sonikujte roztok na niekoľko sekúnd, kým sa roztok dôkladne nepremieša a všetky zhluky alebo agregáty sa nerozpadnú. Trvanie a sila ultrazvukom môže byť optimalizovaná na základe špecifického lýzneho tlmivého roztoku a ultrasonicator.
7. Po ultrazvukom znovu zmerajte pH pufra a upravte podľa potreby.
8. Prefiltrujte pufor cez 0,2 mikrónový filter, aby ste odstránili všetky nečistoty alebo agregáty, ktoré sa mohli vytvoriť počas ultrazvukom.
9. Lýzový tlmivý roztok je teraz pripravený na použitie.

 
Poznámka: Presné zloženie a pH tlmivého roztoku na lýzu sa môže líšiť v závislosti od lyzovaných buniek alebo tkaniva a následných aplikácií. Vyššie uvedený protokol je všeobecným usmernením a môže byť potrebné ho optimalizovať pre konkrétne aplikácie.
 
Ultrazvukové homogenizátory sa bežne používajú na narušenie buniek a extrakciu intracelulárnych molekúl. Preto mnohé aplikácie lýzy používajú sondovú ultrazvukom nielen na prípravu tlmivého roztoku lýzy, ale aj na mechanické narušenie buniek a extrakciu.
To robí ultrazvukové tkanivové homogenizátory všestranným nástrojom pre laboratóriá a vysvetľuje široké použitie ultrasonicators v mikrobiológii, biotechnológii a biologických vedách.

ultrazvukové laboratórium homogenizers

Hielscher Ultrasonics vyrába a dodáva ultrazvukové homogenizátory a sondy (sonotródy) pri rôznych výkonoch a objemoch vzoriek. To nám umožňuje ponúknuť vám najvhodnejší ultrazvukový disruptor pre prípravu vzorky. Zameriavame sa na najvyššiu kvalitu, vynikajúci užívateľský komfort a spoľahlivé výsledky ultrazvukom. Všetky digitálne ultrasonicators obsahujú inteligentný softvér, programovanie a prednastavenie protokolov ultrazvukom, diaľkové ovládanie prehliadača, reguláciu teploty, osvetlenie vzoriek, ako aj automatické zaznamenávanie údajov na vstavanej SD karte.

Dizajn, výroba a poradenstvo – Kvalita vyrobená v Nemecku

Hielscher ultrasonicators sú známe svojimi najvyššími štandardmi kvality a dizajnu. Robustnosť a jednoduchá obsluha umožňujú hladkú integráciu našich ultrazvukových prístrojov do priemyselných zariadení. Drsné podmienky a náročné prostredia ľahko zvládajú ultrazvukové prístroje Hielscher.

Hielscher Ultrasonics je spoločnosť certifikovaná podľa ISO a kladie osobitný dôraz na vysoko výkonné ultrazvukové prístroje s najmodernejšou technológiou a užívateľskou prívetivosťou. Samozrejme, Hielscher ultrasonicators sú v súlade s CE a spĺňajú požiadavky UL, CSA a RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: