Pufrovacie roztoky pripravené ultrazvukom
Lýzne pufre je možné efektívne a rýchlo pripraviť pomocou ultrazvukových homogenizátorov tkanív. Keďže ultrazvukové prístroje sú vysnívaným nástrojom na miešanie, rozpúšťanie a dispergáciu, umožňujú spoľahlivú a užívateľsky prívetivú prípravu lýznych pufrov.
Ultrazvuková príprava lýznych pufrov
Ultrazvukové homogenizátory tkanív sú bežným nástrojom na narušenie buniek, lýzu a extrakciu, preto sú dostupné vo väčšine laboratórií. Sekundárnou aplikáciou pre ultrazvukové prístroje typu sondy je príprava lýznych pufrov.
Lyzačný pufr je roztok používaný na rozbitie (lýzu) buniek a uvoľnenie ich obsahu na následnú analýzu. Špecifické zloženie lýzneho pufra sa môže líšiť v závislosti od typu lyzovaných buniek a následnej aplikácie. Typický lyzačný pufr však obsahuje zložky, ako sú detergenty, soli a inhibítory proteázy. Pufrovacie soli (napr. Tris-HCl) a iónové soli (napr. NaCl) sa bežne používajú na reguláciu pH a osmolarity lyzátu.
Na výrobu lýzneho tlmivého roztoku sa zložky zmiešajú vo vhodných koncentráciách a pH. Zmes sa zvyčajne mieša alebo pretrepáva, kým sa zložky nerozpustia a roztok nie je homogénny.
Ultrazvuková homogenizácia je metóda, ktorú možno použiť na vytvorenie dobrého lýzneho tlmivého roztoku zlepšením miešania a rozpúšťania zložiek. Pri tejto metóde ultrazvukové vlny – normálne v rozsahu 20 až 30 kHz – Na zmes sa aplikujú kavitačné bubliny, ktoré sa zrútia a vytvoria intenzívnu miestnu energiu, čo vedie k mechanickému strihu a zmiešaniu zložiek.
Proces ultrazvukovej homogenizácie môže pomôcť rozložiť všetky zhluky alebo agregáty zložiek a zabezpečiť, aby bol roztok rovnomerne premiešaný. V dôsledku toho môže takýto vylepšený lyzačný pufr viesť k efektívnejšiemu narušeniu buniek a vyšším výťažkom extrahovaného materiálu. Okrem toho môže ultrazvuková homogenizácia skrátiť čas potrebný na výrobu lýzneho pufra v porovnaní s tradičnými metódami miešania alebo trepania.
Celkovo je ultrazvuková homogenizácia silným nástrojom na zlepšenie kvality a účinnosti prípravy lýzneho pufra.

Ultrazvukový laboratórny homogenizátor UP200Ht je populárny vo výskumných laboratóriách na prípravu vzoriek, lýzu, extrakciu, fragmentáciu a rozpúšťanie DNA.
Protokol o príprave ultrazvukového lýzneho pufra
Toto je všeobecný protokol na výrobu lýzneho pufra pomocou ultrazvukového zariadenia typu sondy:
Materiály:
- Čistiace prostriedky podľa výberu (napr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Soľ (soli) podľa výberu (napr. NaCl, KCl)
- Inhibítory proteázy (napr. PMSF, aprotinín, leupeptín)
- ultrazvuk
- Miešadlo
- Deionizovaná voda
- pH meter alebo pH prúžky
Pokyny krok za krokom:
- Určte zloženie lýzneho pufra na základe buniek alebo tkaniva, ktoré budete lyzovať, a následných aplikácií, na ktoré budete lyzát používať. Pripravte zásobné roztoky detergentov, solí a inhibítorov proteázy v požadovaných koncentráciách.
- Pridajte zásobné roztoky detergentov, solí a inhibítorov proteázy do kadičky alebo banky.
- Pridajte deionizovanú vodu, aby sa objem zvýšil na požadované množstvo pufra.
- Zmiešajte zložky pomocou miešadla, aby ste získali roztok predbežnej zmesi.
- Zmerajte pH pufra pomocou pH metra alebo pH prúžkov a podľa potreby upravte pH malým množstvom kyseliny alebo zásady.
- Pomocou ultrazvuku typu sondy homogenizujte roztok predmiešania tak, aby sa získal vysoko homogénny roztok. Preto roztok niekoľko sekúnd sonikujte, kým sa roztok dôkladne nepremieša a nerozložia sa všetky zhluky alebo kamenivo. Trvanie a silu sonikácie je možné optimalizovať na základe špecifického použitého lyzačného pufra a ultrazvuku.
- Po ultrazvuku znova zmerajte pH pufra a podľa potreby upravte.
- Prefiltrujte pufr cez 0.2 mikrónový filter, aby ste odstránili všetky nečistoty alebo kamenivo, ktoré sa mohlo vytvoriť počas sonikácie.
- Lyzačný pufr je teraz pripravený na použitie.
Poznámka: Presné zloženie a pH lýzneho pufra sa môže líšiť v závislosti od lyzovaných buniek alebo tkanív a následných aplikácií. Vyššie uvedený protokol je všeobecným usmernením a môže byť potrebné ho optimalizovať pre konkrétne aplikácie.
Ultrazvukové homogenizátory sa bežne používajú na narušenie buniek a extrakciu intracelulárnych molekúl. Preto mnohé aplikácie lýzy používajú sondovú sonikaciu nielen na prípravu lýzneho pufra, ale aj na mechanické narušenie buniek a extrakciu.
Vďaka tomu sú ultrazvukové tkanivové homogenizátory všestranným nástrojom pre laboratóriá a vysvetľuje široké využitie ultrazvukových prístrojov v mikrobiológii, biotechnológii a prírodných vedách.
Ultrazvukové laboratórne homogenizátory
Spoločnosť Hielscher Ultrasonics vyrába a dodáva ultrazvukové homogenizátory a sondy (sonotrody) s rôznymi výkonmi a objemami vzoriek. To nám umožňuje ponúknuť vám najvhodnejší ultrazvukový disruptor na prípravu vzoriek. Zameriavame sa na najvyššiu kvalitu, vynikajúce užívateľské pohodlie a spoľahlivé výsledky sonikácie. Všetky digitálne ultrazvuky sú vybavené inteligentným softvérom, programovaním a prednastavením ultrazvukových protokolov, diaľkovým ovládaním prehliadača, reguláciou teploty, osvetlením vzorky, ako aj automatickým záznamom údajov na vstavanú SD kartu.
Dizajn, výroba a poradenstvo – Kvalita vyrobená v Nemecku
Ultrazvukové prístroje Hielscher sú známe svojou najvyššou kvalitou a dizajnovými štandardmi. Robustnosť a jednoduchá obsluha umožňujú bezproblémovú integráciu našich ultrazvukových prístrojov do priemyselných zariadení. Drsné podmienky a náročné prostredie ľahko zvládnu ultrazvukové prístroje Hielscher.
Hielscher Ultrasonics je spoločnosť s certifikáciou ISO a kladie osobitný dôraz na vysokovýkonné ultrazvukové prístroje s najmodernejšou technológiou a užívateľskou prívetivosťou. Ultrazvukové prístroje Hielscher sú samozrejme v súlade s CE a spĺňajú požiadavky UL, CSA a RoHs.
Nasledujúca tabuľka poskytuje prehľad našich rôznych laboratórnych ultrazvukov:
VialTweeter na UP200St | 200 W | 26 kHz | ultrazvuk malých injekčných liekoviek, napr. Eppendorf 1,5 ml |
UP50H | 50 W | 30 kHz | ručný alebo stojanový laboratórny homogenizátor |
UP100H | 100 W | 30 kHz | ručný alebo stojanový laboratórny homogenizátor |
UP200Ht | 200 W | 26 kHz | ručný alebo stojanový laboratórny homogenizátor |
UP200St | 200 W | 26 kHz | Stojanový laboratórny homogenizátor |
UP400St | 400 W | 24 kHz | Stojanový laboratórny homogenizátor |
SonoStep | 200 W | 26 kHz | Kombinovanie laboratórnych reaktorov, ultrazvuk, čerpadlo, miešadlo a nádoba |
GDmini2 | 200 W | 26 kHz | prietoková bunka bez kontaminácie |
Cuphorn | 200 W | 26 kHz | intenzívny ultrazvukový kúpeľ na fľaštičky a kadičky |
UIP400MTP | 400 W | 24 kHz | ultrazvukový systém pre viacjamkové platničky? mikrotitračné platničky |

Ultrazvukový CupHorn na intenzívnu sonikaciu uzavretých skúmaviek a injekčných liekoviek na sterilnú homogenizáciu vzoriek.
Kontaktujte nás!? Opýtajte sa nás!

Ultrazvukový laboratórny homogenizátor UP400St sa bežne používa na prípravu lýzneho pufra a následné narušenie buniek.
Literatúra? Referencie
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.

Spoločnosť Hielscher Ultrasonics vyrába vysokovýkonné ultrazvukové homogenizátory od laboratórium do priemyselná veľkosť.