Ультразвуковая подготовка сыворотки, обогащенной тромбоцитами
- Обогащенная тромбоцитами плазма (PRP) — это обогащенная тромбоцитами плазма крови, которая используется для медикаментозного и эстетического лечения.
- Ультразвуковой лизис и кондиционирование является очень эффективным методом получения обогащенной тромбоцитами плазмы.
- Hielscher Ultrasonics предлагает различные ультразвуковые системы, соответствующие требованиям обработки крови (например, для внутренней и наружной подготовки чистого помещения).
Сыворотка, богатая тромбоцитами
Ультразвуковая обработка является надежным и простым методом лизирования тромбоцитов в аутологичной сыворотке крови с целью высвобождения факторов роста. Фракции, полученные из тромбоцитов – также известна как аутологичная кондиционированная сыворотка (ACS) – используются для восстановления тканей или эстетических процедур. Для получения оптимальных результатов PRP обогащается перед инъекцией.
Для получения обогащенной плазмы с факторами роста клеток, ультразвук является очень эффективным и действенным методом лизирования клеточных мембран и высвобождения почти полных факторов роста клеток из тромбоцитов. С помощью ультразвукового лизиса и кондиционирования можно использовать даже антисвертывающуюся кровь.
Кондиционирование PRP с помощью ультразвука является удобным и экономически эффективным способом получения концентрированных факторов роста.
Эффекты ультразвукового лизиса
Ультразвуковая обработка сыворотки крови приводит к гомогенному лизису тромбоцитов с целью высвобождения захваченных факторов роста (фактор роста AB (PDGF-AB), фактор роста AA (PDGF-AA), фактор роста BB (PDGF-BB), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), трансформирующий фактор роста β (TGF-β), эпидермальный фактор роста (EGF), инсулиноподобный фактор роста (IGF), фактор роста эпителиальных клеток ECGF и фибробластический фактор роста (FGF)). Тромбоциты и их альфа-гранулы разрушаются с помощью ультразвука, используя явление акустическая кавитация. Использование ультразвуковой кавитации для лизиса тромбоцитов снижает возможное негативное влияние на активность фактора роста метода повторного замораживания-размораживания.
Протокол ультразвуковой подготовки ОТР
Около 16 мл свежесобранного образца аутологичной крови аккуратно переворачивают 8-10 раз в пробирке, чтобы кровь и антикоагулянты хорошо перемешались. После этого образец центрифугируют при 1800 g в течение 20 мин при комнатной температуре. После центрифугирования тромбоциты и мононуклеарные клетки образуют беловатый слой в нижней части плазменного слоя, который известен как обогащенная тромбоцитами плазма (PRP). Верхний слой известен как бедная тромбоцитами плазма (PPP). Мононуклеарные элементы могут быть удалены или остаться в образце. Часто мононуклеарные элементы остаются в образце PRP, чтобы избежать дополнительных этапов, которые несут риск заражения.
Примечание: Ультразвуковое лечение аутологичной PRP должно проводиться в стерильных условиях.
ОТР и ППС разделяются и собираются. К PPP добавляют 1,5 мл 10% раствора хлорида кальция, а к PRP 0,5 мл 5% этанола. Обе суспензии осторожно взбалтываются и выдерживаются в течение 5 минут при комнатной температуре. Наконец, 1 мл PPP добавляют в суспензию PRP и дают постоять до образования фибринового сгустка.
Ультразвуковая обработка: Поскольку образовавшийся тромбоцитарный гель действует как резервуар для высвобождаемых факторов роста, фибриновый гель должен быть разрушен, чтобы высвободить имеющиеся факторы роста. Параметры ультразвукового лизиса и высвобождения фактора роста следующие: Ультразвук с УП200Хт или УП200Ст (200 Вт, 26 кГц) с сонотродом S26d2 образец в трубке. Чтобы избежать перегрева образца крови, ультразвуковую обработку можно проводить в пульсирующих циклах (например, 10 секунд включено, 30 секунд выключено). Образец следует поместить на лед для охлаждения так, чтобы температура оптимально поддерживалась в пределах 2 – 5°С. После ультразвуковой обработки образец центрифугируют при 16000 g в течение 5 мин. при комнатной температуре. Надосадочная жидкость собирается и может храниться при температуре -70°C.
Концентрация тромбоцитов во фракции PRP была обогащена в 1,7 – В 4,5 раза при ультразвуковом методе по сравнению с литературным средним количеством тромбоцитов в цельной крови.
PRP сочетается с терапией стволовыми клетками, полученными из жировой ткани (Ультразвуковое высвобождение аутологичных стволовых клеток из жировой ткани, смешанный с PRP, и вводимый обратно в ткани пациента для восстановления).
Ультразвуковое оборудование
Hielscher Ultrasonics является экспертом в области сложных и надежных ультразвуковых технологий. Наши ультразвуковые аппараты используются во всем мире для лизиса, экстракции и пробоподготовки – на прямое и косвенное. Автоклавируемый а также одноразовый Аксессуары обеспечивают без загрязнений обработка аутологичных образцов крови. Большинство наших систем могут быть использованы для ультразвукового лизиса стволовые клетки и PRP, что делает наши ультразвуковые аппараты еще более экономически эффективными.
В данной таблице ниже перечислены наши ультразвуковые аппараты, которые подходят для получения обогащенной тромбоцитами плазмы, и их рекомендуемый объем образца соответственно. Также доступны более крупные ультразвуковые аппараты и специализированные системы.
Устройство | Мощность [Вт] | Частота [кГц] | Тип | Объем [мл] | ||
---|---|---|---|---|---|---|
VialTweeter | 200 | 26 | автономный | 0.5 | – | 1.5 |
UP50H | 50 | 30 | Портативный или стационарный | 0.01 | – | 250 |
УП100Ч | 100 | 30 | Портативный или стационарный | 0.01 | – | 500 |
УП200Хт | 200 | 26 | Портативный или стационарный | 0.1 | – | 1000 |
УП200Ст | 200 | 26 | Стоячий монтаж | 0.1 | – | 1000 |
УП400Ст | 400 | 24 | Стоячий монтаж | 5.0 | – | 2000 |
UP200St-SonoStep | 200 | 26 | автономный | 30 | – | 500 |
ГДмини2 | 200 | 26 | Проточная ячейка без загрязнения |
Пожалуйста, свяжитесь с нами сегодня! Мы будем рады помочь Вам в поиске оптимального ультразвукового аппарата!
Свяжитесь с нами! / Спросите нас!
Литература/Литература
- Фортунато, Т. М.; Белтрами, Ч.; Эмануэли, К.; De Bank, P.A.; Пула, Г. (2016): Гель лизата тромбоцитов и предшественники эндотелия стимулируют образование микрососудистой сети in vitro: последствия тканевой инженерии. Sci. Rep. 6, 2016.
- Хамид, M.S.A.; Юсоф, Ашрил; Али, Мохамед Разиф Мохамед (2014): Обогащенная тромбоцитами плазма (PRP) при острой мышечной травме: систематический обзор. PLOS ONE Том 9, Выпуск 2, 2014.
Факты, которые стоит знать
Обогащенная тромбоцитами плазма
Обогащенная тромбоцитами плазма содержит фактор роста AB (PDGF-AB), тромбоцитарный фактор роста AA (PDGF-AA), тромбоцитарный фактор роста BB (PDGF-BB), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), трансформирующий фактор роста β (TGF-β), эпидермальный фактор роста (EGF), инсулиноподобный фактор роста (IGF), фактор роста эпителиальных клеток ECGF и фибробластический фактор роста (FGF), которые являются важными стимуляторами роста и обновления клеток.
Аутологичная кондиционированная сыворотка (ACS)
Аутологичная кондиционированная плазма (АКП) — это обогащенная тромбоцитами плазма, которая извлекается из аутологичной крови и используется для поддержки регенерации при различных ортопедических заболеваниях и хирургических процедурах. Кондиционированная сыворотка готовится путем отделения плазмы от других компонентов крови (таких как эритроциты) и ее концентрирования. ACP представляет собой обогащенную тромбоцитами плазму (PRP). PRP — это общий термин для типа плазмы, которая содержит значительно более высокую концентрацию тромбоцитов по сравнению с цельной кровью. Его извлекают из цельной крови. К основным компонентам АСР относятся тромбоциты (тромбоциты), а также несколько факторов роста, которые играют важную роль в процессе заживления. В отличие от других обогащенных тромбоцитами плазменных составов, ACP отличается низкой концентрацией белых кровяных телец, таких как нейтрофильные гранулоциты, которые могут быть вредны для процесса заживления при присутствии в высоких концентрациях.
Инъекции обогащенной тромбоцитами плазмы
Обогащенная тромбоцитами плазма используется в качестве инъекций в регенеративной медицине, а также в косметологических процедурах. Применение PRP обещает значительное ускорение заживления и восстановления мышц. Кроме того, он успешно используется для лечения воспалений, артрита, боли, ран, медленно заживающих открытых ран и серьезных ожогов кожи. PRP содержит высокий уровень факторов роста, которые стимулируют и защищают заживляющие клетки до тех пор, пока поврежденная ткань не восстанавливается.
Для косметических процедур PRP показал свою эффективность для стимуляции роста волос, обновления кожи (также известного как лечение вампиров).
Тромбоцитарные факторы роста (PDGF)
Термин тромбоцитарный фактор роста (PDGF) относится к факторам PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C и PDGF-D. Это сигнальная сеть, состоящая из четырех лигандов (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C и PDGF-D) и двух рецепторов, PDGFR-альфа и PDGFR-бета.
Факторы роста, или белки, регулируют рост и деление клеток. Будучи основным митогеном, обнаруженным в сыворотке крови млекопитающих, которая выделяется из тромбоцитов во время образования тромбов, он играет важную роль в формировании кровеносных сосудов (ангиогенезе), росте кровеносных сосудов из уже существующей ткани кровеносных сосудов.