Pregătirea probei cu vialtweeter cu ultrasunete

Prepararea probelor cu ultrasunete

Ultrasonication is a common technique of sample treatment in order to get the sample ready for analyses such as polymers chain reaction (PCR), Western Blots, assays, molecular sequencing, chromatography etc. Ultrasonication is a technique widely used in laboratories to treat samples pre-analytically. A major advantage of sonication is that the working principle of ultrasound is based on purely mechanical forces. Ultrasonic lysis and cell disruption is achieved by sonomechanical shear forces, which gives ultrasonication the advantage that the solvents used for protein extraction can be used also during lysis. Ultrasonic cell disruptors such as the VialTweeter break the cell walls / membranes and promote mass transfer between cell interior and solvent. Thereby, the analyte (e.g. DNA, RNA, proteins, organelles etc.) are efficiently transferred from the cell matrix into the solvent. This means the steps of quenching and extraction overlap with the ultrasonic cell disruption process, which makes ultrasonic lysis very effective. Furthermore, ultrasonic sample preparation does not require detergents and other lysis reagents, which might alter and destruct the structure of the lysate and is known for the subsequent troubles with purification. Another lysis method, the enzymatic disruption requires long incubation times and delivers often non-reproducible results. Ultrasonic sample preparation overcomes common problems in sample preparation such as tissue homogenization, cell disruption, lysis, protein extraction and lysate solubilization. Since the intensity of the ultrasonic treatment can be exactly controlled and adjusted to the biological sample, degradation and sample loss are avoided. Automatically monitored and controlled sample temperature, pulse mode and sonication duration ensure optimum outcomes.

VialTweeter este deosebit de convenabil pentru munca de laborator care necesită pregătirea simultană a mai multor probe în aceleași condiții. VialTweeter este un sonotrod cu ultrasunete bloc care poate deține până la 10 flacoane (de exemplu, Eppendorf, centriguge, tuburi NUNC, crio-flacoane) și sonicates-le intens în condiții controlate cu precizie. Deoarece energia ultrasonică este cuplată prin pereții flacoanelor în mediul de probă, flacoanele se mențin închise în timpul tratamentului. Astfel, pierderea probei și contaminarea încrucișată sunt complet evitate.

Flacoane și tuburi care montează VialTweeter

VialTweeter este potrivit pentru a deține 10 tuburi conice sau cu fund rotund comune, ar fi Eppendorf, centrifugă, crio-flacoane și diferite tipuri de flacoane NUNC, dar găurile pot fi personalizate la alte dimensiuni flacon și tub la cerere. Vă rugăm să ne anunțați ce fel de eprubete doriți să utilizați, astfel încât să putem modifica VialTweeter dumneavoastră în consecință. Pentru tuburi de testare mai mari, ar fi tuburi Falcon și alte recipiente de testare, pahare de laborator și vase, VialPress este o soluție convenabilă.

VialTweeter cu VialPress

În timp ce VialTweeter în sine cu găurile sale 10 tuburi este deja un dispozitiv unic și foarte funcțional cu ultrasunete, VialPress add-on face VialTweeter chiar mai versatil și flexibil pentru funcționare. VialPress este un accesoriu pentru VialTweeter constând într-o bară de prindere-on, care permite de a fixa tuburi de probă mai mari, ar fi tuburi Falcon sau alte mici la medii de testare beakers la fata VialTweeter. Imaginea din stânga arată VialTweeter care deține 10 flacoane Eppendorf în bloc, în timp ce VialPress fixează un tub de testare mai mare în față pentru sonicare. VialPress este capabil să dețină până la 5 tuburi de testare mai mari pentru sonicare intensă.

Protocoale de preparare a probelor VialTweeter

VialTweeter este utilizat pe scară largă pentru a sonicate probe biologice. Înainte de analiză, probele trebuie să fie pregătite pentru analize și teste biochimice sau biofizice, de exemplu prin liză, omogenizare tisulară, extracție de proteine, forfecare ADN/ARN, degazare etc. VialTweeter îndeplinește aceste procese cu ultrasunete în mod fiabil și oferă rezultate reproductibile. O aplicare comună a VialTweeter este eliminarea lizei/celulelor țesuturilor mamiferelor (umane și animale), precum și a celulelor bacteriilor și a particulelor virale. Probele biologice tratate cu succes de VialTweeter includ celule epiteliale pulmonare umane, celule stem hematopoietice, celule leucemice mieloide, Escherichia coli. Bacillus subtilis. Bacillus anthracis. Francisella tularensis. Yersinia pestis. Streptococcus pyogenes. Caulobacter crescucus. Mycoplasma pneumoniae, micobacterii / Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) și multe alte celule bacteriene, botanice, și microbiene.
Mai jos, puteți găsi câteva protocoale selectate featuring VialTweeter.

E.Coli Liză cu VialTweeter pentru determinarea glutationului in-vivo

Bacteriile Escherichia coli din tulpina MG1655 au fost cultivate în mediu minim MOPS într-un volum total de 200ml până când s-a atins un A600 de 0,5. Cultura a fost împărțită în culturi de 50 ml pentru tratamentul stresului. După 15 minute de incubație cu alicină de 0,79 mM, diamidă de 1 mM sau dimetil sulfoxid (control), celulele au fost recoltate la 4000g la 4°C timp de 10 min. Celulele au fost spălate de două ori cu tampon KPE înainte de resuspensia de pelete în 700μl de tampon KPE. Pentru deproteinizare, 300μl de 10% (w/v) acid sulfosalicilic au fost adăugate înainte de perturbarea celulelor prin ultrasonilare (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Supernatanții au fost colectați după centrifugare (30 min, 13.000g, 4°C). Concentrațiile de acid sulfosalicilic au fost reduse la 1% prin adăugarea a 3 volume de tampon KPE. Măsurătorile glutationului total și GSSG au fost efectuate conform descrierii de mai sus. Concentrațiile celulare de glutation au fost calculate pe baza unui volum de celule E. coli de 6,7×10-15 litri și a unei densități celulare de A600 0,5 (echivalentă cu 1×108 celule ml-1 cultură). Concentrațiile de GSH au fost calculate prin scăderea a 2[GSSG] din glutationul total. (Müller et al. 2016)

Liza celulară cu VialTweeter înainte de spectrometria de absorbție atomică a cuptorului cu grafit

Bacillus subtilis 168 (trpC2) au fost expuși la 15 min de stres antibiotic, apoi celulele au fost recoltate la 3.320 x g, spălate de cinci ori cu 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, resuspendate în 10 mM Tris, pH 7.5 și perturbate de ultrasonication într-un instrument Hielscher VialTweeter. (Wenzel et al. 2014)

Pregătirea probei VialTweeter înainte de spectrometria de masă

Peletele celulare liofilizate ale celulelor umane CD34􏰀 stem/progenitor au fost resuspendate în 10μ􏰇l (200μl pentru pregătirea hek293 în vrac pentru seria de diluții peptidic) de 8 M uree în carbonat de hidrogen de amoniu de 100 mM și lizat ajutat prin sonicare cu Hielscher VialTweeter la o amplitudine de 60%, un ciclu de 60% și o durată de 20 de ani de trei ori cu răcire intermediară pe gheață. (Amon et al. 2019)

Protocoale de pregătire a probelor utilizând VialPress

Salata verde proaspătă (Lactuca sativa) a fost omogenizată în tampon HEPES de 0,5 M (pH 8, ajustat KOH) la un raport de 1 g plantă (greutate proaspătă) la 200, 100, 50 sau 20 mL soluție tampon. Raportul dintre masa plantelor și volumul soluției tampon a fost variat pentru a menține volumul total de omogenat între 3,5 și 12 ml. Raportul dintre masa plantei și volumul soluției tampon a fost variat pentru a menține volumul total de omogenat între 3,5 și 12 ml, permițând omogenizarea cu sonda. Omogenates apoi a suferit ultrasonication indirecte folosind un UP200St cu VialTweeter echipat cu 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Germania) pentru 3 min (80% puls și 100% putere). Utilizarea acestui dispozitiv a evitat contaminarea. (Laughton et al. 2019)

Control fiabil al temperaturii în timpul sonicare cu VialTweeter

Temperatura este un factor crucial de influențare a procesului, care este deosebit de important pentru tratamentul probelor biologice. Ca toate tehnicile mecanice de preparare a probelor, sonicare creează căldură. Cu toate acestea, temperatura probelor poate fi bine controlată atunci când se utilizează VialTweeter. Vă prezentăm diferite opțiuni pentru a monitoriza și controla temperatura probelor în timp ce le pregătiți cu VialTweeter și VialPress pentru analiză.

1. Monitorizarea temperaturii eșantionului: Procesorul cu ultrasunete UP200St, care conduce VialTweeter, este echipat cu un software inteligent și un senzor de temperatură pluggable. Conectați senzorul de temperatură la UP200St și introduceți vârful senzorului de temperatură într-unul dintre tuburile de probă. Prin intermediul afișajului tactil color digital, puteți seta în meniul up200St un interval de temperatură specific pentru sonicarea eșantionului. Ultrasonicator se va opri automat atunci când temperatura maximă este atinsă și pauză până când temperatura eșantionului este în jos la valoarea mai mică a temperaturii stabilite ∆. Apoi sonicare începe automat din nou. Această caracteristică inteligentă previne degradarea indusă de căldură.
2. Blocul VialTweeter poate fi răcit în prealabil. Pune blocul VialTweeter (numai sonotrodul fără traductor!) în frigider sau congelator pentru a pre-răci blocul de titan ajută la amânarea creșterii temperaturii în probă. Dacă este posibil, proba în sine poate fi pre-răcit prea.
3. Utilizați gheață uscată pentru a se răci în timpul sonicare. Utilizați o tavă de mică adâncime umplută cu gheață uscată și așezați VialTweeter pe gheața uscată, astfel încât căldura să se poată disipa rapid.

Clienții din întreaga lume utilizează VialTweeter și VialPress pentru activitatea lor zilnică de pregătire a probelor în laboratoare biologice, biochimice, medicale și clinice. Software-ul inteligent și controlul temperaturii procesorului UP200St, temperatura este controlată în mod fiabil și degradarea probei induse de căldură evitată. Pregătirea probei cu ultrasunete cu VialTweeter și VialPress oferă rezultate extrem de fiabile și reproductibile!

Detalii tehnice ale VialTweeter

VialTweeter este un sonotrode bloc din titan, care poate deține până la 10 flacoane în găurile din interiorul blocului. În plus, până la 5 tuburi de testare mai mari pot fi fixate pe frontul VialTweeter folosind VialPress. VialTweeter este proiectat astfel încât energia de sonicare este distribuit uniform în fiecare flacon inserat pentru a asigura rezultate fiabile și uniforme sonicare. Un pivot mic reglează sonotrodul VialTweeter la sol inegal și aliniază tuburile de testare pe verticală.

Avantajele VialTweeter dintr-o ochire

• sonicarea intensă de până la 10 flacoane simultan
• Sonicare indirectă la intensitate mare cu ultrasunete prin peretele navei în eșantion
• sonicare indirectă evită contaminarea încrucișată și pierderea probei
• Rezultate reproductibile datorită amplitudinii ajustabile și controlabile Sonicare
• VialPress vă permite să sonicate tuburi mai mari
• Amplitudine reglabilă de la 20 la 100%
• Modul puls reglabil de la 0 la 100%
• autoclavabile

VialTweeter este alimentat de UP200St, un procesor cu ultrasunete de 200 de wați puternic. UP200St este echipat cu un software inteligent care permite controlul precis asupra tuturor parametrilor de proces cu ultrasunete importante, ar fi amplitudinea, timpul de sonicare, pulsație, și temperatura. Acest lucru face ca VialTweeter să fie un instrument fiabil pentru rezultate de succes ale proceselor reproductibile în laboratoarele biologice și biochimice.
Amplitudinea poate fi ajustată între 20 și 100% și permite astfel să se adapteze intensitatea ultrasonice la proba dumneavoastră. De exemplu, forfecarea și fragmentarea ADN-ului și ARN-ului necesită o amplitudine mai ușoară pentru a preveni producerea de fragmente de ADN prea mici, omogenizarea țesutului creierului mouse-ului are nevoie de sonicare de mare intensitate. Alegeți amplitudinea ideală, intensitatea sonicare și durata prin meniul inteligent și intuitiv de la procesorul UP200St. Meniul și setările pot fi accesate și operate cu ușurință prin intermediul afișajului tactil colorat. În setările puteți pre-seta parametrii sonicare, ar fi amplitudinea, pulsație / modul ciclu, durata sonicare, intrare totală de energie, și limitele de temperatură. În cercetare și producție, repetabilitatea studiilor și a rezultatelor testelor este esențială. Aceasta înseamnă că înregistrarea precisă a condițiilor de proces și a protocoalelor de sonicare sunt extrem de importante. Protocolarea automată a datelor scrie toate datele sonicare într-un fișier CSV pe un card SD integrat, astfel încât să puteți verifica și compara cu ușurință diferite rulează sonicare. Toate datele de proces cu ultrasunete pot fi accesate cu ușurință și partajate ca fișier CSV.
Hielscher Ultrasonics se străduiește să vă ofere tehnologie avansată pentru a facilita și îmbunătăți munca de cercetare!