Pregătirea probelor cu sonorul VialTweeter

Pregătirea probelor înainte de analiză poate necesita diverse procese preanalitice, cum ar fi omogenizarea țesuturilor, liza, extracția proteinelor, ADN, ARN, organite și alte substanțe intracelulare, dizolvarea și degazarea. VialTweeter este un sonicator unic care pregătește simultan mai multe tuburi de probă exact în aceleași condiții. Datorită sonicării indirecte a tuburilor de testare închise, se evită contaminarea încrucișată și pierderea de probe.

Pregătirea probei cu ultrasunete

Ultrasonication este o tehnică comună de tratare a probei pentru a obține proba pregătită pentru analize, ar fi reacția în lanț a polimerilor (PCR), Western Blots, teste, secvențiere moleculară, cromatografie etc. Ultrasonication este o tehnică utilizată pe scară largă în laboratoare pentru a trata probele pre-analitic. Un avantaj major al sonicare este că principiul de lucru al ultrasunetelor se bazează pe forțe pur mecanice. Liza cu ultrasunete și întreruperea celulelor se realizează prin forțe de forfecare sonomechanical, ceea ce conferă ultrasonication avantajul că solvenții utilizați pentru extracția proteinelor pot fi utilizați și în timpul lizei. Perturbatorii de celule cu ultrasunete, ar fi VialTweeter sparge pereții celulari / membranele și promovează transferul de masă între interiorul celulei și solvent. Astfel, analitul (de exemplu, ADN, ARN, proteine, organite etc.) este transferat eficient din matricea celulară în solvent. Aceasta înseamnă că etapele de stingere și extracție se suprapun cu procesul de întrerupere a celulelor cu ultrasunete, ceea ce face liza cu ultrasunete foarte eficientă. În plus, pregătirea probei cu ultrasunete nu necesită detergenți și alți reactivi de liză, care ar putea modifica și distruge structura lizatului și este cunoscut pentru problemele ulterioare cu purificarea. O altă metodă de liză, perturbarea enzimatică necesită timpi lungi de incubație și oferă adesea rezultate nereproductibile. Pregătirea probei cu ultrasunete depășește problemele comune în pregătirea probei, ar fi omogenizarea țesuturilor, întreruperea celulelor, liza, extracția proteinelor și solubilizarea latului. Deoarece intensitatea tratamentului cu ultrasunete poate fi controlată exact și ajustată la proba biologică, se evită degradarea și pierderea probei. Temperatura probei monitorizată și controlată automat, modul puls și durata sonicării asigură rezultate optime.
 

VialTweeter este deosebit de convenabil pentru lucrările de laborator care necesită pregătirea simultană a mai multor probe în aceleași condiții. VialTweeter este un sonotrod cu bloc cu ultrasunete care poate conține până la 10 flacoane (de exemplu, Eppendorf, centrifugă, tuburi NUNC, crio-flacoane) și le sonicează intens în condiții controlate cu precizie. Deoarece energia ultrasonică este cuplată prin pereții flacoanelor în mediul de probă, flacoanele rămân închise în timpul tratamentului. Astfel, pierderea probelor și contaminarea încrucișată sunt complet evitate.

Flacoane și tuburi care se potrivesc cu VialTweeter

VialTweeter este potrivit pentru a conține 10 tuburi conice sau cu fund rotund comune, cum ar fi Eppendorf, centrifugă, crio-flacoane și diferite tipuri de flacoane NUNC, dar găurile pot fi personalizate la alte dimensiuni de flacoane și tuburi la cerere. Vă rugăm să ne spuneți ce fel de eprubete doriți să utilizați, astfel încât să vă putem modifica VialTweeter în consecință. Pentru eprubetele mai mari, cum ar fi tuburile Falcon și alte recipiente de testare, pahare și vase, VialPress este o soluție convenabilă.
Citiți mai multe despre modelul VialTweeter VT26dxx personalizat pentru dimensiunea specifică a eprubetei dvs., de exemplu, tuburi Falcon!

VialTweeter cu VialPress

În timp ce VialTweeter în sine cu găurile sale 10 tuburi este deja un dispozitiv cu ultrasunete unic și extrem de funcțional, add-on-ul VialPress face VialTweeter chiar mai versatil și flexibil pentru funcționare. VialPress este un accesoriu pentru VialTweeter constând într-o bară de prindere care permite fixarea tuburilor de probă mai mari, cum ar fi tuburile Falcon sau alte pahare de testare mici și mijlocii pe partea frontală a VialTweeter. Imaginea din stânga arată VialTweeter ținând 10 flacoane Eppendorf în bloc, în timp ce VialPress fixează o eprubetă mai mare în față pentru sonicare. VialPress este capabil să dețină până la 5 eprubete mai mari pentru sonicare intensă.

Protocoale de pregătire a probelor VialTweeter

VialTweeter este utilizat pe scară largă pentru sonicarea probelor biologice. Înainte de analiză, probele trebuie pregătite pentru analize și teste biochimice sau biofizice, de exemplu prin liză, omogenizare tisulară, extracție de proteine, forfecare ADN/ARN, degazare etc. VialTweeter îndeplinește aceste procese cu ultrasunete în mod fiabil și oferă rezultate reproductibile. O aplicație obișnuită a VialTweeter este liza/distrugerea celulară a țesuturilor mamiferelor (umane și animale), precum și a celulelor bacteriene și a particulelor virale. Probele biologice tratate cu succes de VialTweeter includ celule epiteliale pulmonare umane, celule stem hematopoietice, celule leucemice mieloide, Escherichia coli, Bacilul subtilis, Bacilul antracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, micobacterii, complexul Mycobacterium tuberculosis (MTBC) și multe alte celule bacteriene, botanice și microbiene.
Mai jos, puteți găsi câteva protocoale selectate cu VialTweeter.

Liza E.Coli cu VialTweeter pentru determinarea glutationului in vivo

Bacteriile Escherichia coli din tulpina MG1655 au fost cultivate în mediu minim MOPS într-un volum total de 200 ml până când s-a atins un A600 de 0,5. Cultura a fost împărțită în culturi de 50 ml pentru tratamentul stresului. După 15 minute de incubare cu 0,79 mM alicină, 1 mM diamidă sau dimetilsulfoxid (control), celulele au fost recoltate la 4.000 g la 4 ° C timp de 10 minute. Celulele au fost spălate de două ori cu tampon KPE înainte de resuspensia peleților în 700μl de tampon KPE. Pentru deproteinare, 300μl de 10% (w / v) acid sulfosalicilic au fost adăugate înainte de întreruperea celulelor prin ultrasonication (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Supernatanții au fost colectați după centrifugare (30 min, 13.000g, 4°C). Concentrațiile de acid sulfosalicilic au scăzut la 1% prin adăugarea a 3 volume de tampon KPE. Măsurătorile glutationului total și GSSG au fost efectuate conform descrierii de mai sus. Concentrațiile celulare de glutation au fost calculate pe baza unui volum de celule E. coli de 6,7×10-15 litri și a unei densități celulare de A600 0,5 (echivalent cu 1×108 celule ml-1 cultură). Concentrațiile de GSH au fost calculate prin scăderea a 2[GSSG] din glutationul total. (Müller și colab. 2016)

Fragmentarea fibrilei alfa-synuclein cu VialTweeter

Sonicatorul VialTweeter este utilizat pe scară largă pentru fragmentarea fiabilă și eficientă a fibrilelor și panglicilor alfa-synuclein. Faceți clic aici pentru a găsi descrieri detaliate, protocoale și referințe pentru fragmentarea alfa-sinucleinei cu VialTweeter!

Liza celulară cu VialTweeter înainte de spectrometria de absorbție atomică a cuptorului cu grafit

Bacillus subtilis 168 (trpC2) au fost expuse la 15 min de stres antibiotic, apoi celulele au fost recoltate la 3,320 x g, spălate de cinci ori cu 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7.5, resuspendate în 10 mM Tris, pH 7.5 și perturbate de ultrasonication într-un instrument Hielscher VialTweeter. (Wenzel și colab. 2014)

Pregătirea probei VialTweeter înainte de spectrometria de masă

Peleții celulari liofilizați ai celulelor stem hematopoietice / progenitoare umane CD34 au fost resuspendate în 10μkitten��l (200μl pentru preparatul HEK293 în vrac pentru seria de diluție peptidică) de uree 8 M în 100 mM hidrogenocarbonat de amoniu și lizate ajutate de sonicare cu Hielscher VialTweeter la o amplitudine de 60%, un ciclu de 60% și o durată de 20s de trei ori cu răcire intermediară pe gheață. (Amon și colab. 2019)

Protocoale de preparare a probelor utilizând VialPress

Salata proaspătă (Lactuca sativa) a fost omogenizată în tampon HEPES 0,5 M (pH 8, ajustat KOH) la un raport de 1 g plantă (greutate proaspătă) la 200, 100, 50 sau 20 ml soluție tampon. Raportul dintre masa vegetală și volumul soluției tampon a fost variat pentru a menține volumul total omogenizat între 3,5 și 12 ml. Raportul dintre masa vegetală și volumul soluției tampon a fost variat pentru a menține volumul total de omogenizare între 3,5 și 12 ml, permițând omogenizarea cu sonda. Omogenatele au suferit apoi ultrasonication indirecte folosind un UP200St cu VialTweeter echipat cu 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Germania) pentru 3 min (80% puls și 100% putere). Utilizarea acestui dispozitiv a evitat contaminarea. (Laughton și colab. 2019)

Control fiabil al temperaturii în timpul sonicare cu VialTweeter

Temperatura este un factor crucial de influențare a procesului, care este deosebit de important pentru tratarea probelor biologice. Ca toate tehnicile mecanice de pregătire a probelor, sonicare creează căldură. Cu toate acestea, temperatura probelor poate fi bine controlată atunci când se utilizează VialTweeter. Vă prezentăm diferite opțiuni pentru a monitoriza și controla temperatura probelor în timp ce le pregătiți cu VialTweeter și VialPress pentru analiză.

1. Monitorizarea temperaturii probei: Procesorul cu ultrasunete UP200St, care conduce VialTweeter, este echipat cu un software inteligent și un senzor de temperatură conectabil. Conectați senzorul de temperatură la UP200St și introduceți vârful senzorului de temperatură într-una din eprubete. Prin intermediul digitale colorate touch-display, puteți seta în meniul UP200St un interval de temperatură specific pentru sonicare eșantion. Ultrasonicator se va opri automat atunci când temperatura maximă este atinsă și pauză până când temperatura probei este redusă la valoarea mai mică a temperaturii setate ∆. Apoi sonicare începe automat din nou. Această caracteristică inteligentă previne degradarea indusă de căldură.
2. Blocul VialTweeter poate fi răcit în prealabil. Puneți blocul VialTweeter (numai sonotrode fără traductor!) în frigider sau congelator pentru a pre-răci blocul de titan ajută la amânarea creșterii temperaturii în probă. Dacă este posibil, eșantionul în sine poate fi și pre-răcit.
3. Utilizați gheață carbonică pentru a se răci în timpul sonicare. Utilizați o tavă de mică adâncime umplută cu gheață carbonică și așezați VialTweeter pe gheața carbonică, astfel încât căldura să se disipeze rapid.

Clienții din întreaga lume folosesc VialTweeter și VialPress pentru activitatea zilnică de pregătire a probelor în laboratoarele biologice, biochimice, medicale și clinice. Software-ul inteligent și controlul temperaturii procesorului UP200St, temperatura este controlată în mod fiabil și degradarea probei indusă de căldură este evitată. Pregătirea probei cu ultrasunete cu VialTweeter și VialPress oferă rezultate extrem de fiabile și reproductibile!

Detalii tehnice ale VialTweeter

VialTweeter este un bloc sonotrode realizat din titan, care poate ține până la 10 flacoane în găurile din bloc. În plus, până la 5 eprubete mai mari pot fi fixate pe partea frontală a VialTweeter folosind VialPress. VialTweeter este astfel conceput încât energia ultrasonication este distribuită uniform în fiecare flacon introdus pentru a asigura rezultate fiabile și uniforme sonicare. Un pivot mic ajustează sonotroda VialTweeter la sol neuniform și aliniați eprubetele vertical.

Avantajele VialTweeter dintr-o privire

• Sonicare intensă de până la 10 flacoane simultan
• Sonicare indirectă la intensitate ultrasonică ridicată prin peretele vasului în probă
• sonicare indirectă evită contaminarea încrucișată și pierderea probei
• Rezultate reproductibile datorită amplitudinii sonicare reglabile și controlabile
• VialPress vă permite să sonicate tuburi mai mari
• Amplitudine reglabilă de la 20 la 100%
• Mod impuls reglabil de la 0 la 100%
• Autoclavabil

VialTweeter este alimentat de UP200St, un procesor ultrasonic puternic de 200 wați. UP200St este echipat cu un software inteligent care permite controlul precis asupra tuturor parametrilor importanți ai procesului cu ultrasunete, ar fi amplitudinea, timpul de sonicare, pulsația și temperatura. Acest lucru face ca VialTweeter să fie un instrument fiabil pentru rezultate de proces reproductibile de succes în laboratoarele biologice și biochimice.
Amplitudinea poate fi reglată între 20 și 100% și permite astfel adaptarea intensității ultrasunetelor la proba dumneavoastră. De exemplu, forfecarea și fragmentarea ADN și ARN necesită o amplitudine mai blândă pentru a preveni producerea de fragmente de ADN prea mici, omogenizarea țesutului creierului de șoarece necesită o sonicare de intensitate ridicată. Alegeți amplitudinea ideală, intensitatea sonicării și durata prin intermediul meniului inteligent și intuitiv de la procesorul UP200St. Meniul și setările pot fi ușor accesate și operate prin intermediul ecranului tactil colorat. În setări puteți prestabili parametrii de sonicare, cum ar fi amplitudinea, pulsația, modul de ciclu, durata sonicării, aportul total de energie și limitele de temperatură. În cercetare și producție, repetabilitatea încercărilor și a rezultatelor testelor este esențială. Aceasta înseamnă că înregistrarea precisă a condițiilor de proces și a protocoalelor de sonicare sunt extrem de importante. Protocolarea automată a datelor scrie toate datele de sonicare într-un fișier CSV pe un card SD integrat, astfel încât să puteți verifica și compara cu ușurință diferite runde de sonicare. Toate datele procesului ultrasonic pot fi ușor accesate și partajate ca fișier CSV.
Hielscher Ultrasonics se străduiește să vă ofere tehnologie avansată pentru a facilita și îmbunătăți activitatea de cercetare!