Hielscher ultrasunete tehnologie

Liza celulară a celulelor BL21 prin ultrasonication

Celulele BL21 sunt o tulpină de E. coli care este utilizat pe scară largă în laboratoarele de cercetare, biotehnologie și producția industrială datorită capacității lor de a exprima proteine foarte eficient. Întreruperea celulelor cu ultrasunete, liză și extracția proteinelor este metoda comună pentru a izola și colecta proteinele vizate din interiorul celular al celulelor BL21. Sonicare perturbă celula complet și eliberează toate proteinele prinse, făcând 100% din proteine disponibile.

Celule BL21 pentru expresia proteinelor

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsCelula BL21 este o tulpină bacteriană E. coli competentă din punct de vedere chimic, adecvată pentru transformare și pentru exprimarea proteinelor la nivel înalt, utilizând un sistem de inducție ARN polimerazei-IPTG T7. Celulele BL21 permit expresia proteică de înaltă eficiență a oricărei gene care se află sub controlul unui promotor T7. Tulpina E. coli BL21(DE3) este o tulpină de producție de proteine pe bază de ARN T7, combinată cu vectori de expresie pe bază de promotor T7 și este aplicată pe scară largă în laboratoare și industrie pentru a produce proteine recombinante. În BL21(DE3), expresia genei care codifică proteina recombinantă este transcrisă de arn-ul T7 codificat cromozomial (T7 RNAP), care transcrie de opt ori mai repede decât RNAP-ul convențional E. coli. Acest lucru face tulpina BL21(DE3) extrem de eficient și se transformă într-unul dintre cele mai preferate sisteme de celule de expresie a proteinelor.

Protocol pentru liză cu ultrasunete și extracție de proteine din celulele BL21

Liza celulară a celulelor BL21 se efectuează în cea mai mare parte folosind ultrasonication în combinație cu lauroyl sarcosinat de sodiu (de asemenea, cunoscut sub numele de sarkosyl) ca tampon de liză. Avantajele întreruperii celulelor cu ultrasunete și extracția proteinelor constă în fiabilitatea, reproductibilitatea, precum și funcționarea simplă, sigură și rapidă a ultrasonicators. Protocolul de mai jos oferă o direcție pas cu pas pentru lysis celular cu ultrasunete BL21:

Sonda de tip insonifier UP200St pentru liza

Disruptor de celule cu ultrasunete UP200St cu micro-vârf S26d2 pentru liză și extracție de proteine

Cerere de informatie





  • Pentru a elimina proteinele de însoțitor, peletele bacteriene BL21 au fost resuspendate în 50 ml de tampon de sodiu tris-EDTA (STE) rece ca gheața (constând în 10 mM Tris-HCL, pH 8,0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl completat cu 100 mM PMSF).
  • Se adaugă 500 ul de lizozim (10 mg/ ml), iar celulele se incubează pe gheață timp de 15 minute.
  • Ulterior, se adaugă 500 ul de DTT și 7 ml de sarkosyl (10% (w/v) alcătuit în tampon STE).
  • Este esențial să se păstreze toate tampoanele de purificare reci ca gheața și să se mențină eșantioanele pe gheață tot timpul. Toate etapele de purificare ar trebui să fie efectuate în camera rece, dacă este posibil.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Pentru liză cu ultrasunete și extracție de proteine, probele sunt sonicate în VialTweeter MultiSample Ultrasonicator timp de 4 x 30 sec la amplitudine de 100%, cu un interval de 2 min între fiecare sonicare. Alternativ, un omogenizator cu ultrasunete de tip sondă cu micro-vârf, de exemplu, Uf200 ः t cu S26d2 (3 x 30 sec, 2 min. pauză între cicluri cu ultrasunete, amplitudine 80%) pot fi utilizate.
  • Pentru etapele suplimentare de purificare, eșantioanele trebuie păstrate pe gheață sau depozitate alternativ la -80°C până la prelucrarea ulterioară.

Liză cu ultrasunete sub Control temperatura Prescise

Controlul precis și fiabil al temperaturii este esențial atunci când se manipulează probe biologice. Temperaturile ridicate inițiază degradarea proteinelor induse termic în probe.
Ca toate tehnicile mecanice de preparare a probelor, sonicare creează căldură. Cu toate acestea, temperatura probelor poate fi bine controlată atunci când se utilizează VialTweeter. Vă prezentăm diferite opțiuni pentru a monitoriza și controla temperatura probelor în timp ce le pregătiți cu VialTweeter și VialPress pentru analiză.

  1. Monitorizarea temperaturii eșantionului: Procesorul cu ultrasunete UP200St, care conduce VialTweeter, este echipat cu un software inteligent și un senzor de temperatură pluggable. Conectați senzorul de temperatură la UP200St și introduceți vârful senzorului de temperatură într-unul dintre tuburile de probă. Prin intermediul afișajului tactil color digital, puteți seta în meniul up200St un interval de temperatură specific pentru sonicarea eșantionului. Ultrasonicator se va opri automat atunci când temperatura maximă este atinsă și pauză până când temperatura eșantionului este în jos la valoarea mai mică a temperaturii stabilite ∆. Apoi sonicare începe automat din nou. Această caracteristică inteligentă previne degradarea indusă de căldură.
  2. Blocul VialTweeter poate fi răcit în prealabil. Pune blocul VialTweeter (numai sonotrodul fără traductor!) în frigider sau congelator pentru a pre-răci blocul de titan ajută la amânarea creșterii temperaturii în probă. Dacă este posibil, proba în sine poate fi pre-răcit prea.
  3. Utilizați gheață uscată pentru a se răci în timpul sonicare. Utilizați o tavă de mică adâncime umplută cu gheață uscată și așezați VialTweeter pe gheață, astfel încât căldura să se poată disipa rapid.

Clienții din întreaga lume utilizează VialTweeter și VialPress pentru activitatea lor zilnică de pregătire a probelor în laboratoare biologice, biochimice, medicale și clinice. Software-ul inteligent și controlul temperaturii procesorului UP200St, temperatura este controlată în mod fiabil și degradarea probei induse de căldură evitată. Pregătirea probei cu ultrasunete cu VialTweeter și VialPress oferă rezultate extrem de fiabile și reproductibile!

Găsiți disruptorul optim cu ultrasunete pentru aplicația de liză

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics este producător cu experiență de lungă durată de disruptoare de celule cu ultrasunete de înaltă performanță și omogenizatoare pentru laboratoare, banc-top și sisteme de scară industrială. Dimensiunea culturii de celule bacteriene, scopul de cercetare sau de producție și volumul de celule pentru a procesa pe oră sau zi sunt factori esențiali pentru a găsi disruptor dreptul de celule cu ultrasunete pentru cererea dumneavoastră.
Hielscher Ultrasonics oferă diverse soluții pentru sonicarea simultană a mai multor eșantioane (până la 10 flacoane cu VialTweeter) și a probelor de masă (de exemplu, plăci de microtitr / plăci ELISA cu UIP400MTP), precum și ultrasonizator clasic de laborator de tip sondă cu diferite niveluri de putere de la 50 la 400 wați la procesoare cu ultrasunete complet industriale cu până la 16.000watți pe unitate pentru întreruperea celulelor comerciale și extracția proteinelor în producție mare. Toate ultrasonicators Hielscher sunt construite pentru funcționarea 24/7/365 sub sarcină completă. Robustețea și fiabilitatea sunt caracteristicile de bază ale dispozitivelor noastre cu ultrasunete.
Toate omogenizatoarele digitale cu ultrasunete sunt echipate cu software inteligent, afișaj tactil colorat și protocolare automată a datelor, care fac dispozitivul cu ultrasunete într-un instrument de lucru convenabil în laborator și facilități de producție.
Anunțați-ne, ce fel de celule, ce volum, cu ce frecvență și cu ce țintă aveți pentru a procesa probele biologice. Vă vom recomanda cel mai potrivit disruptor de celule cu ultrasunete pentru cerințele de proces.

Tabelul de mai jos vă oferă o indicație a capacității aproximative de procesare a sistemelor noastre cu ultrasunete de la omogenizatoare compacte de mână și Ultrasonicators MultiSample la procesoare cu ultrasunete industriale pentru aplicații comerciale:

volum lot Debit Aparate recomandate
Plăci de 96 de sonde / microtitre N / A. UIP400MTP
10 flacoane à 0.5 la 1.5mL N / A. VialTweeter la UP200St
0.01 până la 250mL 5 până la 100mL/min UP50H
00,01 până la 500mL 10 până la 200 ml / min UP100H
10 la 2000ml 20 până la 400ml / min Uf200 ः t. UP400St
0.1 la 20L 0.2 4L / min UIP2000hdT
10 100L 2 până la 10L / min UIP4000hdT
N / A. 10 la 100L / min UIP16000
N / A. mai mare grup de UIP16000

Contacteaza-ne! / Intreaba-ne!

Cere mai multe informații

Vă rugăm să folosiți formularul de mai jos pentru a solicita informații suplimentare despre procesoare cu ultrasunete, aplicații și preț. Vom fi bucuroși să discutăm procesul cu tine și să vă oferim un sistem cu ultrasunete care îndeplinește cerințele dumneavoastră!









Vă rugăm să rețineți Politica de confidentialitate.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

Ultrasonicator Uf200 ः t cu microtip de 2 mm S26d2 pentru sonicarea probelor mici

Literatură / Referințe



Ce trebuie să știți

Escherichia Coli Bacteria

Escherichia coli este un tip de bacterie, care este non-spori-formarea, Gram-negativ și se caracterizează prin forma sa de o tijă dreaptă. Bacteriile E.coli sunt prezente în mediul înconjurător, alimente, și intestine de oameni și animale. E. coli este, de obicei motile prin utilizarea flagella peritrichous, dar există tipuri de nonmotile, de asemenea. E.coli sunt așa-numitele organisme chemoorganotrope facultative anaerobe, ceea ce înseamnă că sunt capabile atât de metabolismul respirator, cât și de cel fermentativ. Majoritatea tipurilor de E.coli sunt benigne și îndeplinesc funcții utile în organism, de exemplu suprimarea creșterii speciilor bacteriene dăunătoare, sinteza vitaminelor etc.
Celulele bacteriilor Escherichia coli de tipul B sunt o categorie specială de tulpini de E.coli, care sunt utilizate pe scară largă în cercetare pentru a investiga mecanisme ar fi sensibilitatea bacteriofagului sau sistemele de modificare a restricțiilor. În plus, bacteriile E.coli sunt evaluate ca un cal de lucru de încredere pentru exprimarea proteinelor în biotehnologie și laboratoare de științe ale vieții. De exemplu, E.coli sunt folosite pentru a sintetiza compuși, ar fi proteine și oligozaharide la scară industrială. Datorită caracteristicilor specifice, ar fi deficitul de protează, producția scăzută de acetat la un nivel ridicat de glucoză și permeabilitatea sporită, celulele E. coli B sunt celulele gazdă utilizate cel mai frecvent pentru producția de proteine modificate genetic.

Proteină recombinantă

Proteinele recombinante (rProt) capătă o importanță semnificativă în diverse ramuri, inclusiv în producția chimică, farmaceutică, cosmetică, medicina umană și animală, agricultură, alimente, precum și în industriile de tratare a deșeurilor.
Producția de proteine recombinante necesită utilizarea unui sistem de expresie. Ca sisteme celulare de exprimare pentru producerea ADN-ului recombinant, se pot utiliza atât celule procariote, cât și celule eucariote. În timp ce celulele bacteriene sunt cele mai utilizate pe scară largă pentru exprimarea proteinelor din cauza unor factori, ar fi low cost, scalabilitate ușoară și condiții simple mass-media, mamifere, drojdie, alge, insecte și sisteme fără celule sunt stabilite alternative. Tipul de proteină, activitatea funcțională, precum și randamentul necesar al proteinei exprimate influențează selectarea sistemului celular utilizat pentru expresia proteinelor.
Pentru a exprima proteina recombinantă, o anumită celulă trebuie transfectată cu un vector ADN care conține șablonul de ADN recombinant. Celulele transfectate cu șablonul sunt apoi cultivate. Ca consecință a mecanismului celular, celulele transcrie și traduc proteina de interes, producând astfel proteina vizată.
Deoarece proteinele exprimate sunt prinse în matricea celulară, celula trebuie să fie lizat (perturbat și rupt) pentru a elibera proteinele. Într-o etapă ulterioară de purificare, proteina este separată și purificată.
Prima proteină recombinantă utilizată în tratament a fost insulina umană recombinantă în 1982. Astăzi, mai mult de 170 de tipuri de proteine recombinante sunt produse la nivel mondial pentru tratamente medicale. Proteinele recombinante utilizate în mod obișnuit utilizate în medicină sunt, de exemplu, hormoni recombinanti, interferoni, interleukine, factori de creștere, factori de necroză tumorală, factori de coagulare a sângelui, medicamente trombolitice și enzime pentru tratarea bolilor majore, ar fi diabetul, nanismul, infarctul miocardic, insuficiența cardiacă congestivă, apoplexie cerebrală, scleroza multiplă, neutropenia, trombocitopenia, anemia, hepatita, artrita reumatoidă, astmul, boala Crohn și terapiile împotriva cancerului. (vezi Phuc V. Pham, în Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrasonice de înaltă performanță! Gama de produse Hielscher acoperă întregul spectru de la ultrasonicator de laborator compact peste unități banc-top la sisteme ultrasonice full-industriale.