Hielscher ultrasunete tehnologie

Protocol pentru inactivarea coronavirusului SARS-CoV-2 cu Sonicare

Hielscher VialTweeter este o unitate unică de preparare multi-eșantion cu ultrasunete, care este utilizat pentru a inactiva coronavirusul SARS-COV-2. VialTweeter permite pregătirea simultană a până la 10 flacoane de probă și este astfel unitatea ideală pentru procesarea probelor în masă.

Inactivarea coronavirusului SARS-CoV-2 cu VialTweeter

După îndepărtarea fixativ, monolayers au fost spălate de trei ori cu fosfat-tamponate salină (PBS) înainte de răzuire celule în 1mL MEM/5% FBS și sonicated (3 × 10 secunde pe, 10 secunde off la 100% putere și amplitudine) folosind procesor cu ultrasunete Hielscher UP200St cu VialTweeter Ataşament. Supernatanții au fost clarificați prin centrifugare la 3000 × g timp de 10 minute. 

Citiți protocolul complet aici pentru inactivarea coronavirusului SARS-CoV-2 de către Welch et al. (2020) de mai jos:

Celule și virus

Celule Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) au fost cultivate în mediu esențial minim al Eagle modificat (MEM) completat cu 10% (v/v) ser de vițel fetal (FCS). Virusul utilizat a fost tulpina SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020, izolată de PHE din primul grup de pacienți din Marea Britanie la 29.01.2020. Acest virus a fost obținut la pasajul 1 și utilizat pentru studii de inactivare la pasajul 2 sau 3.
Pentru reactivii și substanțele chimice utilizate pentru inactivarea SARS-CoV-2, precum și eliminarea citotoxicității reactivilor, vă rugăm să consultați raportul științific al Welch et al. (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Inactivarea virusului de către detergenți – Sars-CoV-2 Protocolul de inactivare a coronavirusului de welch et al. 2020

Reactivarea SARS-CoV-2

Pentru produsele comerciale, preparatele virale (lichid de cultură tisulară, titruri cuprinse între 1 × 106 până la 1 × 108 PFU/ml) au fost tratate în trei exemplare cu reactivi la concentrații și pentru timpii de contact recomandați în instrucțiunile de utilizare ale producătorilor, acolo unde sunt disponibile, sau pentru concentrații și ore solicitate în mod specific de laboratoarele de testare. În cazul în care producătorul a indicat o gamă de concentrații, a fost testat cel mai mic raport dintre produs și eșantion (adică cea mai mică concentrație recomandată de produs testat). Reactivii tubului de transport al specimenelor au fost testați utilizând un raport între un volum de lichid de cultură tisulară și zece volume de reactiv, cu excepția cazului în care producătorul specifică un raport de volum între lichidul eșantion și reactivul. Detergenții, fixatorii și solvenții au fost testați la concentrațiile indicate pentru orele indicate. Toate etapele de inactivare au fost efectuate la temperatura ambiantă a camerei (18 – 25°C). Pentru testarea tipurilor alternative de probe, virusul a fost introdus în matricea de probă indicată la un raport de 1:9, apoi tratat cu reactivi de testare ca mai sus. Toate experimentele au inclus probe tratate simulat de control triplu cu un volum echivalent de PBS în locul reactivului de testare. Imediat după timpul de contact necesar, 1 ml de probă tratată a fost prelucrată utilizând matricea de filtrare selectată corespunzător. Îndepărtarea reactivului pentru testarea inactivării a fost efectuată într-un format mai mare coloană de spin folosind Pierce 4mL Detergent Îndepărtarea Spin Coloane (Thermo Fisher), sau prin umplerea gol Pierce 10mL capacitate centrifugă coloane (Thermo Fisher) cu SM2 Bio-Margele, Sephacryl S-400HR sau Sephadex LH-20 pentru a da 4mL ambalate margele / rășină. Pentru purificarea cu ajutorul filtrelor Amicon, 2 probe de × 500μl au fost purificate folosind două filtre centrifuge prin metoda descrisă anterior, apoi grupate împreună. Pentru formaldehidă și formaldehidă cu îndepărtarea glutaraldehidei, un filtru a fost utilizat cu 1× volum de probă de 500μl, resuspendat după prelucrare în 500μl PBS și adăugat la 400ul MEM/5% FBS. Pentru inactivarea persoanelor infectate VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STmonostraturi, 12,5 cm2 flacoane de celule Vero E6 (2,5 × 106 celule/balon în 2,5 ml MEM/5% FBS) au fost infectate la MOI 0,001 și incubate la 37°C/5% CO2 timp de 24 de ore. Supernatant a fost eliminat, iar celulele fixate folosind 5mL de formaldehidă, sau formaldehidă și glutaraldehidă la temperatura camerei timp de 15 sau 60 de minute. Fixativul a fost îndepărtat, iar monostraturile au fost spălate de trei ori cu PBS înainte de a răzui celulele în 1mL MEM/5% FBS și sonicate (3 × 10 secunde, 10 secunde oprite la 100% putere și amplitudine) folosind un UP200St cu atașament VialTweeter (Hielscher Ultrasound Technology). Supernatanții au fost clarificați prin centrifugare la 3000 × g timp de 10 minute.

VialTweeter pentru Sonicare intensă de flacoane închise

VialTweeter pentru sonicare intensă a flacoanelor închise

Cerere de informatie





Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Detalii privind reactivul utilizat pentru inactivarea coronavirusului SARS-CoV-2 cu vialtweeterul cu ultrasunete în conformitate cu protocolul de welch et al. 2020

Protocolul complet, inclusiv utilizarea Hielscher VialTweeter pot fi găsite aici:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter pentru inactivarea virusului cu ultrasunete

Avantajele VialTweeter dintr-o ochire

  • Sonicare a până la 10 flacoane simultan
  • Fără contaminare încrucișată
  • Nicio pierdere de probă
  • Înregistrarea automată a datelor
  • Ușor și sigur de operat
VialTweeter este, de asemenea, utilizat pentru

  • Liza celulelor
  • Întreruperea particulelor virale
  • Extracția acidului nucleic: izolarea ADN/ARN
  • Fragmentarea ADN/ARN
  • Solubilizare lysat
  • Dismembrators sofisticate cu ultrasunete și disruptoare de celule

    Multi-eșantion ultrasonicator VialTweeter este doar una dintre multe soluții cu ultrasunete pentru pregătirea probelor în laboratoarebiologice, biochimice și clinice. Hielscher Ultrasonics oferă dismembrator cu ultrasunete ideal pentru aplicarea dumneavoastră, de exemplu, liză celulară, extracție celulară, omogenizare țesut, solubilizare lizat, dizolvare, degazare a probelor etc.
    Anunțați-ne cât de multe probe trebuie să proceseze pe oră și zi, dacă preferați sonicare directă sau indirectă și ceea ce obiectivul de tratament cu ultrasunete eșantion este. Vă vom recomanda cea mai potrivită unitate cu ultrasunete pentru rutina de lucru de zi cu zi!
    Hielscher Ultrasonics "procesoare cu ultrasunete digitale sunt echipate cu software-ul inteligent, înregistrarea automată a datelor, ușor de pre-setare opțiuni pentru controlul temperaturii, durata sonicare, ciclu / modul puls, precum și iluminarea eșantion și browser-ul de control de la distanță. Ne străduim să facem dispozitivele noastre cu ultrasunete cât mai inteligente posibil, astfel încât cercetarea și rutina de lucru să devină cât mai convenabilă și de succes posibil.
    Click aici, pentru a găsi mai multe aplicații, inclusiv protocoale de pregătire a probei cu ultrasunete cu VialTweeter!

    Contacteaza-ne! / Intreaba-ne!

    Cere mai multe informații

    Vă rugăm să folosiți formularul de mai jos pentru a solicita informații suplimentare despre procesoare cu ultrasunete, aplicații și preț. Vom fi bucuroși să discutăm procesul cu tine și să vă oferim un sistem cu ultrasunete care îndeplinește cerințele dumneavoastră!









    Vă rugăm să rețineți Politica de confidentialitate.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics produce omogenizatoare cu ultrasunete de înaltă performanță pentru amestecarea aplicațiilor, dispersie, emulsificare și extracție pe scară de laborator, pilot și industrial.

    Literatură / Referințe



    Ce trebuie să știți

    Ce sunt Celulele Vero?

    Vero E6, cunoscut și sub numele de Vero C1008 (ATCC nr. CRL-1586) este linia celulară clonată din Vero 76 și este utilizată în cercetarea coronavirusurilor SARS-CoV și SARS-CoV-2. Celulele Vero sunt o linie de celule utilizate în culturile celulare. "Vero’ descendența a fost izolată din celulele epiteliale renale extrase dintr-o maimuță verde africană (Chlorocebus sp.).
    Celulele Vero E6 prezintă o anumită inhibare a contactului, deci sunt potrivite pentru propagarea virusurilor care se reproduc lent. Vero E6 linii celulare sunt frecvent utilizate pentru a investiga citopatologia coronavirusuriLOR SARS-CoV și SARS-CoV-2 ca celulele Vero (celulele renale africane maimuță verde) prezintă o expresie abundentă a angiotensin-conversie enzima 2 (ACE2) receptori. Receptorii ACE2 sunt un loc major de andocare pentru coronavirusul SARS-CoV-2.
    De exemplu, Ogando et al. (2020) a constatat că SARS-CoV-2 – în comparație cu SARS-CoV – a generat niveluri mai ridicate de ARN viral intracelular, dar izbitor de aproximativ 50 de ori mai puțin descendență virală infecțioasă a fost recuperată din mediul de cultură. În plus, ei au stabilit că sensibilitatea celor doi virusuri la trei inhibitori stabiliți ai replicăi coronavirusului (Remdesivir, Alisporivir și clorochină) este foarte asemănătoare, dar că infecția cu SARS-CoV-2 a fost substanțial mai sensibilă la pretratarea celulelor cu interferon alfa pegilat. O diferență importantă între cei doi viruși este faptul că – la trecerea în celulele Vero E6 – SARS-CoV-2 aparent este sub presiune puternică de selecție pentru a dobândi mutații adaptive în gena sa de proteine spike. Aceste mutații modifică sau șterg un "site de clivaj asemănător cu furia" în regiunea care leagă domeniile S1 și S2 și au ca rezultat o schimbare fenotipică foarte proeminentă în testele plăcii.