Hielscher VialTweeter este o unitate unică de preparare multi-eșantion cu ultrasunete, care este utilizat pentru a inactiva coronavirusul SARS-COV-2. VialTweeter permite pregătirea simultană a până la 10 flacoane de probă și este astfel unitatea ideală pentru procesarea probelor în masă.

Inactivarea coronavirusului SARS-CoV-2 cu VialTweeter

După îndepărtarea fixativ, monolayers au fost spălate de trei ori cu fosfat-tamponate salină (PBS) înainte de răzuire celule în 1mL MEM/5% FBS și sonicated (3 × 10 secunde pe, 10 secunde off la 100% putere și amplitudine) folosind procesor cu ultrasunete Hielscher UP200St cu VialTweeter Ataşament. Supernatanții au fost clarificați prin centrifugare la 3000 × g timp de 10 minute. 

Citiți protocolul complet aici pentru inactivarea coronavirusului SARS-CoV-2 de către Welch et al. (2020) de mai jos:

Celule și virus

Celule Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) au fost cultivate în mediu esențial minim al Eagle modificat (MEM) completat cu 10% (v/v) ser de vițel fetal (FCS). Virusul utilizat a fost tulpina SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020, izolată de PHE din primul grup de pacienți din Marea Britanie la 29.01.2020. Acest virus a fost obținut la pasajul 1 și utilizat pentru studii de inactivare la pasajul 2 sau 3.
Pentru reactivii și substanțele chimice utilizate pentru inactivarea SARS-CoV-2, precum și eliminarea citotoxicității reactivilor, vă rugăm să consultați raportul științific al Welch et al. (2020).

Inactivarea virusului de către detergenți – Sars-CoV-2 Protocolul de inactivare a coronavirusului de welch et al. 2020

Reactivarea SARS-CoV-2

Pentru produsele comerciale, preparatele virale (lichid de cultură tisulară, titruri cuprinse între 1 × 10⁶ până la 1 × 10⁸ PFU/ml) au fost tratate în trei exemplare cu reactivi la concentrații și pentru timpii de contact recomandați în instrucțiunile de utilizare ale producătorilor, acolo unde sunt disponibile, sau pentru concentrații și ore solicitate în mod specific de laboratoarele de testare. În cazul în care producătorul a indicat o gamă de concentrații, a fost testat cel mai mic raport dintre produs și eșantion (adică cea mai mică concentrație recomandată de produs testat). Reactivii tubului de transport al specimenelor au fost testați utilizând un raport între un volum de lichid de cultură tisulară și zece volume de reactiv, cu excepția cazului în care producătorul specifică un raport de volum între lichidul eșantion și reactivul. Detergenții, fixatorii și solvenții au fost testați la concentrațiile indicate pentru orele indicate. Toate etapele de inactivare au fost efectuate la temperatura ambiantă a camerei (18 – 25°C). Pentru testarea tipurilor alternative de probe, virusul a fost introdus în matricea de probă indicată la un raport de 1:9, apoi tratat cu reactivi de testare ca mai sus. Toate experimentele au inclus probe tratate simulat de control triplu cu un volum echivalent de PBS în locul reactivului de testare. Imediat după timpul de contact necesar, 1 ml de probă tratată a fost prelucrată utilizând matricea de filtrare selectată corespunzător. Îndepărtarea reactivului pentru testarea inactivării a fost efectuată într-un format mai mare coloană de spin folosind Pierce 4mL Detergent Îndepărtarea Spin Coloane (Thermo Fisher), sau prin umplerea gol Pierce 10mL capacitate centrifugă coloane (Thermo Fisher) cu SM2 Bio-Margele, Sephacryl S-400HR sau Sephadex LH-20 pentru a da 4mL ambalate margele / rășină. Pentru purificarea cu ajutorul filtrelor Amicon, 2 probe de × 500μl au fost purificate folosind două filtre centrifuge prin metoda descrisă anterior, apoi grupate împreună. Pentru formaldehidă și formaldehidă cu îndepărtarea glutaraldehidei, un filtru a fost utilizat cu 1× volum de probă de 500μl, resuspendat după prelucrare în 500μl PBS și adăugat la 400ul MEM/5% FBS. Pentru inactivarea persoanelor infectate monostraturi, 12,5 cm² flacoane de celule Vero E6 (2,5 × 10⁶ celule/balon în 2,5 ml MEM/5% FBS) au fost infectate la MOI 0,001 și incubate la 37°C/5% CO₂ timp de 24 de ore. Supernatant a fost eliminat, iar celulele fixate folosind 5mL de formaldehidă, sau formaldehidă și glutaraldehidă la temperatura camerei timp de 15 sau 60 de minute. Fixativul a fost îndepărtat, iar monostraturile au fost spălate de trei ori cu PBS înainte de a răzui celulele în 1mL MEM/5% FBS și sonicate (3 × 10 secunde, 10 secunde oprite la 100% putere și amplitudine) folosind un UP200St cu atașament VialTweeter (Hielscher Ultrasound Technology). Supernatanții au fost clarificați prin centrifugare la 3000 × g timp de 10 minute.

Detalii privind reactivul utilizat pentru inactivarea coronavirusului SARS-CoV-2 cu vialtweeterul cu ultrasunete în conformitate cu protocolul de welch et al. 2020

Protocolul complet, inclusiv utilizarea Hielscher VialTweeter pot fi găsite aici:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Dismembrators sofisticate cu ultrasunete și disruptoare de celule

Multi-eșantion ultrasonicator VialTweeter este doar una dintre multe soluții cu ultrasunete pentru pregătirea probelor în laboratoarebiologice, biochimice și clinice. Hielscher Ultrasonics oferă dismembrator cu ultrasunete ideal pentru aplicarea dumneavoastră, de exemplu, liză celulară, extracție celulară, omogenizare țesut, solubilizare lizat, dizolvare, degazare a probelor etc.
Anunțați-ne cât de multe probe trebuie să proceseze pe oră și zi, dacă preferați sonicare directă sau indirectă și ceea ce obiectivul de tratament cu ultrasunete eșantion este. Vă vom recomanda cea mai potrivită unitate cu ultrasunete pentru rutina de lucru de zi cu zi!
Hielscher Ultrasonics "procesoare cu ultrasunete digitale sunt echipate cu software-ul inteligent, înregistrarea automată a datelor, ușor de pre-setare opțiuni pentru controlul temperaturii, durata sonicare, ciclu / modul puls, precum și iluminarea eșantion și browser-ul de control de la distanță. Ne străduim să facem dispozitivele noastre cu ultrasunete cât mai inteligente posibil, astfel încât cercetarea și rutina de lucru să devină cât mai convenabilă și de succes posibil.
Click aici, pentru a găsi mai multe aplicații, inclusiv protocoale de pregătire a probei cu ultrasunete cu VialTweeter!