Hielscher ultrasunete tehnologie

Prep probă cu ultrasunete pentru teste ELISA

Testele, ar fi ELISA, sunt utilizate pe scară largă pentru diagnosticarea in vitro, detectarea proteinelor legate de boală și controlul calității (de exemplu, monitorizarea alergenilor alimentari). Pregătirea probei cu ultrasunete este o tehnică rapidă, fiabilă și reproductibilă pentru a liza celulele și a izola proteinele intracelulare, ADN-ul, ARN-ul și organitele. Hielscher Ultrasonics oferă diverse soluții cu ultrasunete pentru pregătirea convenabilă a probelor unice, mai multe flacoane, precum și pentru plăci de microtitr și plăci de 96 de bine.

Elisa – Test imunosorbent legat de enzime

ELISA înseamnă testul imunosorbent legat de enzime și este o tehnică de analiză biochimică utilizată pe scară largă a categoriei de teste de legare a ligandului. În ELISA, se adaugă o probă lichidă pe o fază solidă staționară cu proprietăți speciale de legare. În mod normal, faza solidă staționară se aplică ca acoperire pe o placă de puț sau pe o placă ELISA. Apoi, diverși reactivi lichizi sunt adăugați secvențial, incubați și spălați, astfel încât în cele din urmă o schimbare optică (de exemplu, dezvoltarea culorii de către produsul unei reacții enzimatice) apare în lichidul final din fântână. Modificarea optică permite măsurarea cantității de analit printr-o așa-numită “lectură". Pentru citirea cantitativă, se utilizează un spectrofotometru, fluorometru sau luminometru pentru detectarea și măsurarea intensității luminii transmise. Sensibilitatea detectării este influențată de amplificarea semnalului în timpul reacțiilor analitice. Deoarece reacțiile enzimatice sunt bine investigate și procesele fiabile de amplificare, enzimele sunt utilizate pentru a crea semnalul. Enzimele sunt legate de reactivii de detectare în proporții fixe pentru a permite cuantificarea precisă, ceea ce explică, de asemenea, denumirea de test imunosorbent "legat de enzime".
Ca teste ELISA sunt efectuate în plăci de microtitri / plăci de 96-bine, este cunoscut sub numele de tehnica de testare pe bază de placă și este utilizat, de exemplu, în diagnostic clinic in vitro, cercetare, dezvoltarea de droguri, etc pentru detectarea și cuantificarea anticorpilor, peptide, proteine, și hormoni.
Tehnica ELISA este frecvent utilizată ca instrument de diagnosticare în medicină, biotehnologie, patologia plantelor și este, de asemenea, o importantă măsurare a controlului calității în mai multe industrii.

Configurarea VialTweeter complet: VialTweeter sonotrod la procesor cu ultrasunete UP200St

Unitatea de pregătire a probei cu ultrasunete VialTweeter se utilizează pentru liză celulară și extracția proteinelor înainte de testele ELISA

Cerere de informatie





Cu ultrasunete Eșantion Prep înainte de ELISA

Înainte de testul ELISA poate fi efectuat, probele necesită etape de pregătire, ar liză celulară și extracția proteinelor intracelulare, ADN, ARN etc. Avantajul lizei celulare cu ultrasunete și izolarea proteinelor este eficiența ridicată, fiabilitatea și reproductibilitatea. Toți acești factori sunt importanți pentru a obține diagnostice și rezultate de cercetare de înaltă calitate

Avantajele lizei cu ultrasunete înainte de ELISA

  • Tratarea omogenă a probelor
  • Liză completă
  • Extracția completă a proteinelor (de exemplu, anticorpi, ADN)
  • Adaptarea optimă la tipul de celulă
  • Pentru orice dimensiune a eșantionului
  • reproductibil
  • Temperatură controlată
  • Protocolarea automată a datelor pe cardul SD

Protocol pentru pre-ELISA cu ultrasunete cell lysis

Sonda de tip insonifier UP200St pentru liza

  • Pentru culturile celulare: Înainte de liză celulară cu ultrasunete, centrifugă celule timp de 5 minute la 270 x g într-o microcentrifuge. Se îndepărtează supernatantul prin aspirație și se resuspendă celulele în 30 – 100 μL de tampon RIPA. Apoi, se incubează pelete de celule pe gheață timp de 30 min.
  • Acum, proba de celule este gata pentru liză cu ultrasunete:
    Utilizați un ultrasonicator de tip sondă (de ex. Uf200 ः t cu sonda S26d2) sau un dispozitiv cu ultrasunete multi-eșantion (de exemplu, VialTweeter pentru sonicare simultană de până la 10 flacoane sau UIP400MPT pentru plăci de microtitru / plăci de 96-bine), în funcție de cantitatea de probe de care aveți nevoie pentru a pregăti.
    Pentru sonicarea de tip sondă a unui singur eșantion, se pun celulele în tuburi de microcentrifuge de 1,5 ml.
  • Pre-seta durata cu ultrasunete, energia totală de intrare, modul de ciclu și / sau limitele de temperatură în meniul digital al ultrasonicator. Acest lucru asigură sonicare extrem de fiabile și repetabilitate.
  • Inset sonotrode și porniți dispozitivul cu ultrasunete. Mutați ușor micro-vârful sondei cu ultrasunete prin probă pentru a sonica proba uniform.
    Pentru majoritatea celulelor, liza cu ultrasunete va fi finalizată după 2 -4 cicluri de sonicare 10 sec.
  • După sonicare, scoateți sonotrodul din probă. Eșantioanele trebuie incubate pe gheață timp de 5 minute. Apoi, centrifugă la 10.000 x g timp de 20 min pentru a pelete resturile. Se transferă supernatanții într-un nou tub de microcentrifuge. Etichetați analitii și depozitați-i la -20°C.
  • Sonotrodul cu ultrasunete poate fi curățat prin ștergerea corectă cu alcool sau sonicat într-un pahar umplut cu alcool, de exemplu 70% etanol. Toate sondele cu ultrasunete realizate din titan sunt autoclavabile.

Pentru omogenații de țesut:

  • Clătiți țesutul cu PBS rece ca gheața (0,01M, pH=7,4) pentru a îndepărta bine excesul de sânge de hemoliză.
  • Se cântărește țesutul (rinichi, inimă, plămân, splină etc.) și se macerează în bucăți mici, care sunt omogenizate în PBS. Volumul de PBS necesar este legat de greutatea țesutului. Ca o regulă de degetul mare, 1g de tesut necesită aproximativ 9mL PBS. Se recomandă adăugarea unui inhibitor de protează la PBS. (RIPA sau tampon de liză hipotonică care conține cocktail inhibitor de protează și fosfatază poate fi utilizat alternativ.)
  • În funcție de dimensiunea țesutului, un tratament vortex scurt (aprox. 1-2 min. în 15 sec. impulsuri) poate fi util pentru a pre-trata țesutul.
  • Montați un micro-vârf, de exemplu S26d2, la ultrasonicator. Se pune tubul de probă cu țesutul într-o baie de gheață.
  • Sonicate proba cu ultrasonicator dvs., de exemplu, UP200St (80% amplitudine) timp de 1 min. în modul puls (15sec pe, 15sec pauză). Păstrați proba în baia de gheață.
  • Omogenații sunt apoi centrifugați pentru a obține bazine specifice (citosolice, nucleare, mitocondriale sau lizozomale) pentru a îmbogăți proteina pentru analiză. Prin centrifugarea probei timp de 5 minute la 5000×g, se regăsește supernatantul.
Sonotrode MTP-24-8-96 are opt sonde cu ultrasunete pentru sonicare a puțurilor plăcilor de microtitră.

Sonotrode MTP-24-8-96 are opt sonde cu ultrasunete pentru sonicare a puțurilor plăcilor de microtitră.

Control fiabil al temperaturii în timpul sonicării

Temperatura este un factor crucial de influențare a proceselor, care este deosebit de important pentru tratamentul probelor biologice, de exemplu pentru a preveni degradarea termică a proteinelor. Ca toate tehnicile mecanice de preparare a probelor, sonicare creează căldură. Cu toate acestea, temperatura probelor poate fi bine controlată atunci când se utilizează dispozitivele Hielscher Ultrasonics. Vă prezentăm diferite opțiuni pentru a monitoriza și controla temperatura probelor în timp ce le pregătiți cu un ultrasonicator de tip sondă sau VialTweeter pre-analitic.

  1. Monitorizarea temperaturii eșantionului: Toate procesoarele cu ultrasunete digitale Hielscher sunt echipate cu un software inteligent și un senzor de temperatură pluggable. Conectați senzorul de temperatură la dispozitivul cu ultrasunete (de exemplu, Uf200 ः t. UP200St. VialTweeterUIP400MTP) și introduceți vârful senzorului de temperatură într-unul dintre tuburile de probă. Prin intermediul ecranului tactil digital colorat, puteți seta în meniul procesorului cu ultrasunete un interval de temperatură specific pentru sonicarea eșantionului. Ultrasonicator se va opri automat atunci când temperatura maximă este atinsă și pauză până când temperatura eșantionului este în jos la valoarea mai mică a temperaturii stabilite ∆. Apoi sonicare începe automat din nou. Această caracteristică inteligentă previne degradarea indusă de căldură.
  2. În ceea ce privește unitatea cu ultrasunete multi-eșantion VialTweeter, blocul de titan, care dețin tuburile de probă, poate fi pre-răcit. Pune blocul VialTweeter (numai sonotrodul fără traductor!) în frigider sau congelator pentru a pre-răci blocul de titan ajută la amânarea creșterii temperaturii în probă. Dacă este posibil, proba în sine poate fi pre-răcit prea.
  3. Utilizați o baie de gheață sau gheață uscată să se răcească în timpul sonicare. Puneți tubul (tuburile) de probă în timpul sonicării într-o baie de gheață. Pentru VialTweeter, utilizați o tavă de mică adâncime umplută cu gheață uscată și așezați VialTweeter pe gheața uscată, astfel încât căldura să se poată disipa rapid.

Clienții din întreaga lume utilizează sonda Hielscher-ultrasonicators, precum și unitățile de sonicare multi-eșantion VialTweeter și UIP400MTP pentru activitatea lor zilnică de pregătire a probei în laboratoarebiologice, biochimice, medicale și clinice. Software-ul inteligent și controlul temperaturii procesoarelor Hielscher, temperatura este controlată în mod fiabil și degradarea probelor induse de căldură evitată. Pregătirea probei cu ultrasunete cu soluții cu ultrasunete Hielscher oferă rezultate extrem de fiabile și reproductibile!

Contacteaza-ne! / Intreaba-ne!

Cere mai multe informații

Vă rugăm să folosiți formularul de mai jos pentru a solicita informații suplimentare despre procesoare cu ultrasunete, aplicații și preț. Vom fi bucuroși să discutăm procesul cu tine și să vă oferim un sistem cu ultrasunete care îndeplinește cerințele dumneavoastră!









Vă rugăm să rețineți Politica de confidentialitate.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics produce omogenizatoare cu ultrasunete de înaltă performanță pentru amestecarea aplicațiilor, dispersie, emulsificare și extracție pe scară de laborator, pilot și industrial.

Literatură / Referințe



Ce trebuie să știți

Tipuri de ELISA

Există mai multe tipuri de ELISA, care se disting prin principiul lor de funcționare. Ele sunt cunoscute sub numele de ELISA directă, ELISA indirectă, SANDWICH ELISA, ELISA competitivă și ELISA inversă. Mai jos, vă prezentăm o prezentare generală asupra diferitelor tipuri elisa și a principalelor lor caracteristici și diferențe.
ELISA poate fi administrată în format calitativ sau cantitativ. Rezultatele calitative oferă un rezultat simplu pozitiv sau negativ, în timp ce în elisa cantitativă densitatea optică (DO) a eșantionului este comparată cu o curbă standard, care este de obicei o diluție serială a unei soluții de concentrație cunoscută a moleculei țintă.

ELISA directă

Elisa directă este cea mai simplă formă de test a Elisa, unde se utilizează doar un anticorp primar etichetat cu enzime și nu sunt necesari anticorpi secundari. Anticorpii primari etichetați cu enzime se leagă direct de țintă, adică de antigen. Soluția de antigen tamponat se adaugă la fiecare fântână a unei plăci de microtitrat (de obicei plăci cu 96 de sonde, plăci ELISA), unde aderă la suprafața de plastic prin interacțiuni de încărcare. Atunci când enzima legată de anticorpii primari reacționează cu substratul său, produce un semnal vizibil care poate fi măsurat prin spectrofotometru, fluorometru sau luminometru.

ELISA indirectă

Pentru testul ELISA indirect, sunt necesare atât un anticorp primar, cât și un anticorp secundar. Cu toate acestea, contrar ELISA directă, nu anticorpii primari, ci anticorpii secundari sunt etichetați cu o enzimă. Antigenul este imobilizat pe placa de bine și legat de anticorpii primari. Ulterior, anticorpii secundari etichetați cu enzime se leagă de anticorpii primari. În cele din urmă, enzima legată de anticorpii secundari reacționează cu substratul său pentru a produce un semnal vizibil care poate fi detectat.

Sandwich ELISA

În timp ce în testele ELISA directe și indirecte, antigenul este imobilizat și acoperit pe suprafața plăcii de puț, în sandwich-ul ELISA anticorpii sunt imobilizați pe suprafața de plastic a plăcii ELISA. Anticorpii imobilizați în sandwich ELISA sunt cunoscuți sub numele de anticorpi de captare. În plus față de anticorpii de captare, în sandwich ELISA sunt necesari, de asemenea, așa-numiții anticorpi de detectare. Anticorpii de detectare includ un anticorp de detectare primară neetichetat și un anticorp secundar de detectare etichetat cu enzime.
În sens invers, antigenul de interes se leagă de anticorpii de captare imobilizați pe placă. Apoi, anticorpii de detectare primară se leagă de antigen. Ulterior, anticorpii secundari de detectare se leagă de anticorpii de detectare primară. În etapa finală de reacție, enzima reacționează cu substratul său pentru a produce un semnal vizibil care poate fi detectat optic.

ELISA competitivă

Elisa competitivă, cunoscută și sub numele de inhibare ELISA, este cel mai complex tip ELISA, deoarece implică utilizarea unui antigen inhibitor. Fiecare dintre cele trei formate, direct, indirect și sandwich ELISA, poate fi adaptat la formatul ELISA competitiv. În cadrul ELISA competitiv, antigenul inhibitor și antigenul de interes concurează pentru legarea de anticorpii primari.
Pentru ELISA competitiv, anticorpii neetichetați sunt incubați în prezența antigenului său, adică a probei. Aceste complexe de anticorpi/antigeni legați sunt apoi adăugate într-o fântână acoperită cu antigen.
Placa este spălată, astfel încât anticorpii nelegați să fie îndepărtați. Elisa competitivă își are numele datorită faptului că, cu cât mai mult antigen se află în probă, cu atât se formează mai multe complexe antigen-anticorpi. Aceasta înseamnă că există anticorpi mai puțin nelegați disponibili pentru a se lega de antigenul din fântână, iar antigenii trebuie să concureze pentru un anticorp disponibil. Se adaugă un anticorp secundar, care se potrivește cu anticorpii primari. Acest al doilea anticorp este legat de enzimă. Când se adaugă substratul, enzimele rămase produc un semnal cromogenic sau fluorescent.
În acest moment, reacția este oprită pentru a evita eventuala saturație a semnalului.
Unele kituri ELISA competitive includ un antigen legat de enzime în loc de un anticorp legat de enzime. Antigenul etichetat concurează pentru locurile primare de legare a anticorpilor cu antigenul eșantionului (neetichetat). Cu cât antigenul este mai puțin în probă, cu atât antigenul este mai etichetat în fântână și cu atât semnalul este mai puternic.

Elisa inversă

Elisa inversă nu utilizează plăci bine, dar lasă antigenii suspendați în lichidul de testare. Testul ELISA invers măsoară cantitatea de anticorpi legați prin antigen. Acesta a fost dezvoltat special pentru a detecta și investiga proteina din pachetul virusului West Nile și modul în care acesta este capabil să găsească anticorpi specifici virusului.

Marker enzimatic utilizat pentru ELISA

Lista de mai jos prezintă cele mai frecvente markeri enzimatici utilizați în testele ELISA, care permit evaluarea rezultatelor testului la finalizare.

  • OPD (o-fenilendiamină dihidroclorură) devine chihlimbar pentru a detecta HRP (Hrean Peroxidaza), care este adesea folosit pentru a ca o proteină conjugată.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetrametilbenzidină) devine albastră la detectarea HRP și devine galbenă după adăugarea acidului sulfuric sau fosforic.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-etilbenzotiazolină-6-sulfonic acid]-diamoniu sare) devine verde atunci când se detectează HRP.
  • PNPP (p-Nitrofenil Fosfat, Sare Disodică) devine galben atunci când detectează fosfataza alcalină.