Tampoane de liză pot fi pregătite eficient și rapid folosind omogenizatoare de țesut cu ultrasunete. Deoarece ultrasonicators sunt un instrument de vis pentru amestecarea, dizolvarea și dispersarea, ele permit o pregătire fiabilă și ușor de utilizat de tampoane de liză.

Pregătirea cu ultrasunete a tampoanelor de liză

Omogenizatoare de țesut cu ultrasunete sunt un instrument comun pentru întreruperea celulelor, liză și extracție, prin urmare, disponibile în cele mai multe laboratoare. O aplicație secundară pentru ultrasonicators de tip sondă este pregătirea tampoanelor de liză.

Tamponul de liză este o soluție utilizată pentru a sparge celulele deschise (lizate) și pentru a le elibera conținutul pentru analiza în aval. Compoziția specifică a tamponului de liză poate varia în funcție de tipul de celule lizate și de aplicarea în aval. Cu toate acestea, un tampon tipic de liză conține componente cum ar fi detergenți, săruri și inhibitori de protează. Sărurile de tamponare (de exemplu, Tris-HCl) și sărurile ionice (de exemplu, NaCl) sunt utilizate în mod obișnuit pentru a regla pH-ul și osmolaritatea lizatului.
Pentru a face un tampon de liză, componentele sunt amestecate împreună în concentrațiile și pH-ul corespunzător. Amestecul este de obicei agitat sau agitat până când componentele sunt dizolvate și soluția este omogenă.
Omogenizarea cu ultrasunete este o metodă care poate fi utilizată pentru a ajuta la a face un tampon de liză bun prin îmbunătățirea amestecării și dizolvării componentelor. În această metodă, undele cu ultrasunete – în mod normal, în intervalul de la 20 la 30 kHz – sunt aplicate pe amestec, ceea ce creează bule de cavitație care se prăbușesc și generează energie locală intensă, ceea ce duce la forfecare mecanică și amestecarea componentelor.
Procesul de omogenizare cu ultrasunete poate ajuta pentru a rupe în afară orice aglomerări sau agregate ale componentelor, și să se asigure că soluția este amestecat uniform. În consecință, un astfel de tampon de liză îmbunătățit poate duce la întreruperi mai eficiente ale celulelor și la randamente mai mari de material extras. În plus, omogenizarea cu ultrasunete poate reduce timpul necesar pentru a face un tampon de liză în comparație cu metodele tradiționale de agitare sau agitare.
În general, omogenizarea cu ultrasunete este un instrument puternic pentru îmbunătățirea calității și eficienței pregătirii tamponului de liză.

Protocolul pentru prepararea tamponului de liză cu ultrasunete

Acesta este un protocol general pentru a face un tampon de liză folosind un ultrasonicator de tip sondă:
 
Materiale:

• Detergent(i) la alegere (de exemplu, Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sare (săruri) la alegere (de exemplu, NaCl, KCl)
• Inhibitori de protează (de exemplu, PMSF, aprotinină, leupeptină)
• Ultrasonicator
• Agitator
• Apă deionizată
• pH-metru sau pH benzi

 
 
Instrucțiuni pas cu pas:

1. Determinați compoziția tamponului de liză pe baza celulelor sau a țesutului pe care îl veți liza și aplicațiile din aval pentru care veți utiliza lizatul. Se prepară soluțiile stoc de detergenți, săruri și inhibitori de protează la concentrațiile dorite.
2. Se adaugă soluțiile stoc de detergenți, săruri și inhibitori de protează într-un pahar sau într-un balon.
3. Adăugați apă deionizată pentru a aduce volumul până la cantitatea dorită de tampon.
4. Se amestecă componentele folosind un agitator pentru a obține o soluție de pre-mixare.
5. Se măsoară pH-ul tamponului folosind un pH-metru sau benzi de pH și se ajustează pH-ul după cum este necesar cu cantități mici de acid sau de bază.
6. Utilizați ultrasonicator de tip sondă pentru a omogeniza soluția de pre-amestec, astfel încât să se obțină o soluție foarte omogenă. Prin urmare, sonicați soluția timp de câteva secunde până când soluția este bine amestecată și orice aglomerări sau agregate sunt defalcate. Durata și puterea sonicare pot fi optimizate pe baza tamponului de liză specifice și ultrasonicator utilizate.
7. După sonicare, re-măsurați pH-ul tamponului și ajustați după cum este necesar.
8. Se filtrează tamponul printr-un filtru de 0,2 microni pentru a elimina orice resturi sau agregate care s-ar fi putut forma în timpul sonicării.
9. Tamponul de liză este acum gata de utilizare.

 
Notă: Compoziția exactă și pH-ul tamponului de liză pot varia în funcție de celulele sau țesuturile lizate și de aplicațiile din aval. Protocolul de mai sus este un ghid general și poate fi necesar să fie optimizat pentru aplicații specifice.
 
Omogenizatoare cu ultrasunete sunt frecvent utilizate pentru întreruperea celulelor și extracția moleculelor intracelulare. Prin urmare, multe aplicații de liză folosesc sonicare de tip sondă nu numai pentru prepararea tamponului de liză, ci și pentru întreruperea mecanică a celulelor și extracția.
Acest lucru face omogenizatoare de țesut cu ultrasunete un instrument versatil pentru laboratoare și explică utilizarea pe scară largă a ultrasonicators în microbiologie, biotehnologie și știința vieții.

omogenizatoare de laborator cu ultrasunete

Hielscher Ultrasonics produce și furnizează omogenizatoare cu ultrasunete și sonde (sonotrodes) la diferite ratinguri de putere și volume de probă. Acest lucru ne permite să vă oferim cel mai potrivit disruptor cu ultrasunete pentru pregătirea probei. Ne concentrăm pe cea mai înaltă calitate, confort remarcabil al utilizatorului și rezultate fiabile sonicare. Toate ultrasonicators digitale caracteristică software-ul inteligent, programarea și pre-setarea protocoalelor sonicare, controlul de la distanță browser-ului, controlul temperaturii, iluminarea probei, precum și înregistrarea automată a datelor pe un built-in SD-card.

Proiectare, Productie si Consultanta – Calitate fabricată în Germania

Ultrasonicators Hielscher sunt bine-cunoscute pentru cele mai înalte standarde de calitate și design. Robustețea și funcționarea ușoară permit integrarea fără probleme a ultrasonicators noastre în instalații industriale. Condiții dure și medii solicitante sunt ușor de manevrat de ultrasonicators Hielscher.

Hielscher Ultrasonics este o companie certificată ISO și a pus un accent special pe ultrasonicators de înaltă performanță featuring tehnologie de ultimă oră și ușurința în utilizare. Desigur, ultrasonicators Hielscher sunt conforme cu CE și îndeplinesc cerințele ul, CSA și RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: