Soluții tampon preparate cu ultrasonication

Tampoanele de liză pot fi preparate eficient și rapid folosind omogenizatoare de țesut cu ultrasunete. Deoarece ultrasonicators sunt un instrument de vis pentru amestecare, dizolvare și dispersare, ele permit o pregătire fiabilă și ușor de utilizat a tampoanelor de liză.

Pregătirea cu ultrasunete a tampoanelor de liză

Omogenizatoare de țesut cu ultrasunete sunt un instrument comun pentru întreruperea celulelor, liza și extracția, prin urmare, disponibile în majoritatea laboratoarelor. O aplicație secundară pentru ultrasonicators tip sondă este pregătirea tampoanelor de liză.

Tamponul de liză este o soluție utilizată pentru a sparge celulele deschise (liza) și a elibera conținutul lor pentru analiza în aval. Compoziția specifică a tamponului de liză poate varia în funcție de tipul de celule lizate și de aplicația din aval. Cu toate acestea, un tampon tipic de liză conține componente precum detergenți, săruri și inhibitori de protează. Sărurile tampon (de exemplu, Tris-HCl) și sărurile ionice (de exemplu, NaCl) sunt utilizate în mod obișnuit pentru a regla pH-ul și osmolaritatea lizatului.
Pentru a obține un tampon de liză, componentele sunt amestecate împreună în concentrațiile și pH-ul corespunzătoare. Amestecul este de obicei agitat sau agitat până când componentele sunt dizolvate și soluția este omogenă.
Omogenizarea cu ultrasunete este o metodă care poate fi utilizată pentru a ajuta la realizarea unui tampon bun de liză prin îmbunătățirea amestecării și dizolvării componentelor. În această metodă, undele cu ultrasunete – în mod normal, în intervalul 20-30 kHz – sunt aplicate amestecului, care creează bule de cavitație care se prăbușesc și generează energie locală intensă, ducând la forfecare mecanică și amestecarea componentelor.
Procesul de omogenizare cu ultrasunete poate ajuta la ruperea oricăror aglomerări sau agregate ale componentelor și se asigură că soluția este amestecată uniform. În consecință, un astfel de tampon de liză îmbunătățit poate duce la o întrerupere mai eficientă a celulelor și la randamente mai mari de material extras. În plus, omogenizarea cu ultrasunete poate reduce timpul necesar pentru a face un tampon de liză în comparație cu metodele tradiționale de agitare sau agitare.
În general, omogenizarea cu ultrasunete este un instrument puternic pentru îmbunătățirea calității și eficienței pregătirii tamponului de liză.

Protocol pentru pregătirea tamponului de liză cu ultrasunete

Acesta este un protocol general pentru realizarea unui tampon de liză folosind un ultrasonicator de tip sondă:
 
Materiale:

• Detergenți(i) la alegere (de exemplu, Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sare (sări) la alegere (de exemplu, NaCl, KCl)
• Inhibitori de protează (de exemplu PMSF, aprotinină, leupeptină)
• ultrasonicator
• Agitator
• Apă deionizată
• pH-metru sau benzi de pH

 
 
Instrucțiuni pas cu pas:

1. Determinați compoziția tamponului de liză pe baza celulelor sau țesuturilor pe care le veți liza și a aplicațiilor din aval pentru care veți utiliza lizatul. Se prepară soluțiile stoc de detergenți, săruri și inhibitori de protează la concentrațiile dorite.
2. Se adaugă soluțiile mamă de detergenți, săruri și inhibitori de protează într-un pahar sau balon.
3. Adăugați apă deionizată pentru a aduce volumul până la cantitatea dorită de tampon.
4. Se amestecă componentele folosind un agitator pentru a obține o soluție pre-amestec.
5. Se măsoară pH-ul soluției tampon folosind un pH-metru sau benzi de pH și se ajustează pH-ul după cum este necesar cu cantități mici de acid sau bază.
6. Utilizați ultrasonicator de tip sondă pentru a omogeniza soluția pre-amestec, astfel încât să se obțină o soluție foarte omogenă. Prin urmare, sonicate soluția pentru câteva secunde până când soluția este bine amestecată și orice aglomerări sau agregate sunt defalcate. Durata și puterea sonicare pot fi optimizate pe baza tamponului specific de liză și ultrasonicator utilizate.
7. După ultrasonication, re-măsurați pH-ul tamponului și ajustați după cum este necesar.
8. Filtrați tamponul printr-un filtru de 0,2 microni pentru a îndepărta orice resturi sau agregate care s-ar fi putut forma în timpul sonicare.
9. Tamponul de liză este acum gata de utilizare.

 
Notă: Compoziția exactă și pH-ul tamponului de liză pot varia în funcție de celulele sau țesuturile lizate și de aplicațiile din aval. Protocolul de mai sus este o orientare generală și poate fi necesar să fie optimizat pentru aplicații specifice.
 
Omogenizatoare cu ultrasunete sunt frecvent utilizate pentru întreruperea celulelor și extracția moleculelor intracelulare. Prin urmare, multe aplicații de liză utilizează sonicare de tip sondă nu numai pentru prepararea tamponului de liză, ci și pentru întreruperea mecanică a celulelor și extracția.
Acest lucru face omogenizatoare de țesut cu ultrasunete un instrument versatil pentru laboratoare și explică utilizarea pe scară largă a ultrasonicators în microbiologie, biotehnologie și știința vieții.

Omogenizatoare de laborator cu ultrasunete

Hielscher Ultrasonics produce și furnizează omogenizatoare cu ultrasunete și sonde (sonotrodes) la diferite ratinguri de putere și volume de probe. Acest lucru ne permite să vă oferim cel mai potrivit disruptor cu ultrasunete pentru pregătirea probei. Ne concentrăm pe cea mai înaltă calitate, confort remarcabil al utilizatorului și rezultate fiabile sonicare. Toate ultrasonicators digitale dispun de software inteligent, programare și pre-setarea protocoalelor sonicare, telecomanda browserului, controlul temperaturii, iluminarea probei, precum și înregistrarea automată a datelor pe un card SD încorporat.

Proiectare, fabricație și consultanță – Calitate Made in Germany

Hielscher ultrasonicators sunt bine-cunoscute pentru cele mai înalte standarde de calitate și design. Robustețea și funcționarea ușoară permit integrarea fără probleme a ultrasonicators noastre în instalații industriale. Condiții dure și medii solicitante sunt ușor de manipulat de ultrasonicators Hielscher.

Hielscher Ultrasonics este o companie certificată ISO și pune un accent deosebit pe ultrasonicators de înaltă performanță cu tehnologie de ultimă oră și ușurință în utilizare. Desigur, ultrasonicators Hielscher sunt conforme CE și îndeplinesc cerințele UL, CSA și RoHs.

Tabelul de mai jos vă oferă o imagine de ansamblu asupra diferitelor noastre ultrasonicators de laborator: