Soluții tampon preparate prin ultrasonicare

Tampoanele de liză pot fi preparate eficient și rapid cu ajutorul omogenizatoarelor de țesut cu ultrasunete. Deoarece ultrasonicatoarele sunt un instrument de vis pentru amestecare, dizolvare și dispersare, acestea permit o preparare fiabilă și ușor de realizat a tampoanelor de liză.

Prepararea cu ultrasunete a tampoanelor de liză

Omogenizatoarele de țesut cu ultrasunete sunt un instrument obișnuit pentru dezintegrarea celulelor, liză și extracție, fiind, prin urmare, disponibile în majoritatea laboratoarelor. O aplicație secundară a ultrasonicatoarelor cu sondă este prepararea tampoanelor de liză.

Tamponul de liză este o soluție utilizată pentru a deschide (liza) celulele și a elibera conținutul acestora în vederea analizelor ulterioare. Compoziția specifică a tamponului de liză poate varia în funcție de tipul de celule lizate și de aplicația ulterioară. Totuși, un tampon de liză tipic conține componente precum detergenți, săruri și inhibitori de protează. Sărurile tampon (de ex. Tris-HCl) și sărurile ionice (de ex. NaCl) sunt utilizate în mod obișnuit pentru a regla pH-ul și osmolaritatea lizatului.
Pentru a prepara un tampon de liză, componentele sunt amestecate la concentrațiile și pH-ul corespunzătoare. De regulă, amestecul este agitat sau scuturat până când componentele se dizolvă și soluția devine omogenă.
Omogenizarea cu ultrasunete este o metodă care poate fi utilizată pentru a contribui la obținerea unui tampon de liză de bună calitate, prin îmbunătățirea amestecării și dizolvării componentelor. În această metodă, undele ultrasonice – în mod normal în intervalul de 20 până la 30 kHz – sunt aplicate amestecului, ceea ce creează bule de cavitație care implodează și generează o energie locală intensă, conducând la forfecare mecanică și la amestecarea componentelor.
Procesul de omogenizare cu ultrasunete poate contribui la dezintegrarea oricăror aglomerări sau agregate ale componentelor și asigură amestecarea uniformă a soluției. În consecință, un astfel de tampon de liză îmbunătățit poate conduce la o dezintegrare mai eficientă a celulelor și la randamente mai mari de material extras. În plus, omogenizarea cu ultrasunete poate reduce timpul necesar pentru prepararea unui tampon de liză, comparativ cu metodele tradiționale de agitare sau scuturare.
Per ansamblu, omogenizarea cu ultrasunete este un instrument puternic pentru îmbunătățirea calității și eficienței preparării tamponului de liză.

Protocol pentru prepararea cu ultrasunete a tamponului de liză

Acesta este un protocol general pentru prepararea unui tampon de liză folosind un ultrasonicator cu sondă:

Materiale:

• Detergent(ți) la alegere (de ex. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sare (săruri) la alegere (de ex. NaCl, KCl)
• Inhibitori de protează (de ex. PMSF, aprotinină, leupeptină)
• Ultrasonicator
• Agitator
• Apă deionizată
• pH-metru sau benzi indicatoare de pH

 
 
Instrucțiuni pas cu pas:

1. Stabiliți compoziția tamponului de liză în funcție de celulele sau țesutul pe care le veți liza și de aplicațiile ulterioare pentru care veți utiliza lizatul. Pregătiți soluțiile stoc de detergenți, săruri și inhibitori de protează la concentrațiile dorite.
2. Adăugați soluțiile stoc de detergenți, săruri și inhibitori de protează într-un pahar Berzelius sau într-un balon.
3. Adăugați apă deionizată pentru a aduce volumul la cantitatea dorită de tampon.
4. Amestecați componentele folosind un agitator pentru a obține o soluție preamestecată.
5. Măsurați pH-ul tamponului folosind un pH-metru sau benzi indicatoare de pH și ajustați pH-ul după caz, cu cantități mici de acid sau bază.
6. Utilizați ultrasonicatorul cu sondă pentru a omogeniza soluția preamestecată, astfel încât să se obțină o soluție foarte omogenă. În acest scop, sonicați soluția timp de câteva secunde, până când soluția este amestecată complet și orice aglomerări sau agregate sunt dezintegrate. Durata și puterea sonicării pot fi optimizate în funcție de tamponul de liză specific și de ultrasonicatorul utilizat.
7. După ultrasonicare, măsurați din nou pH-ul tamponului și ajustați-l după caz.
8. Filtrați tamponul printr-un filtru de 0,2 microni pentru a îndepărta orice resturi sau agregate care s-ar fi putut forma în timpul sonicării.
9. Tamponul de liză este acum gata de utilizare.

Notă: Compoziția exactă și pH-ul tamponului de liză pot varia în funcție de celulele sau țesutul lizat și de aplicațiile ulterioare. Protocolul de mai sus reprezintă o orientare generală și poate necesita optimizare pentru aplicații specifice.

Omogenizatoarele cu ultrasunete sunt utilizate în mod obișnuit pentru dezintegrarea celulelor și extracția moleculelor intracelulare. Prin urmare, multe aplicații de liză folosesc sonicarea cu sondă nu doar pentru prepararea tamponului de liză, ci și pentru dezintegrarea mecanică a celulelor și extracție.
Acest lucru face din omogenizatoarele de țesut cu ultrasunete un instrument versatil pentru laboratoare și explică utilizarea largă a ultrasonicatoarelor în microbiologie, biotehnologie și științele vieții.

Omogenizatoare de laborator cu ultrasunete

Hielscher Ultrasonics fabrică și furnizează omogenizatoare cu ultrasunete și sonde (sonotrode) la diverse puteri nominale și pentru diverse volume de probă. Acest lucru ne permite să vă oferim cel mai potrivit dezintegrator cu ultrasunete pentru pregătirea probelor dumneavoastră. Ne concentrăm pe cea mai înaltă calitate, un confort remarcabil pentru utilizator și rezultate fiabile ale sonicării. Toate ultrasonicatoarele digitale dispun de software inteligent, programarea și presetarea protocoalelor de sonicare, control de la distanță prin browser, controlul temperaturii, iluminarea probei, precum și înregistrarea automată a datelor pe un card SD încorporat.

Proiectare, fabricație și consultanță – Calitate Made in Germany

Ultrasonicatoarele Hielscher sunt bine cunoscute pentru cele mai înalte standarde de calitate și design. Robustețea și operarea ușoară permit integrarea fără probleme a ultrasonicatoarelor noastre în instalațiile industriale. Condițiile dificile și mediile solicitante sunt gestionate cu ușurință de ultrasonicatoarele Hielscher.

Hielscher Ultrasonics este o companie certificată ISO și pune un accent deosebit pe ultrasonicatoare de înaltă performanță, dotate cu tehnologie de ultimă generație și ușor de utilizat. Desigur, ultrasonicatoarele Hielscher sunt conforme CE și îndeplinesc cerințele UL, CSA și RoHs.

Tabelul de mai jos vă oferă o prezentare generală a diverselor noastre ultrasonicatoare de laborator: