Substitua a raspagem celular pelo sonicador UIP400MTP de elevada capacidade de processamento

O desprendimento e a extração de linhas celulares aderentes de placas multipoços para análise multiómica são tarefas diárias nos laboratórios. O desprendimento celular com elevada capacidade de processamento utilizando o sonicador de placas multipoços UIP400MTP substitui a raspagem celular manual, proporcionando rendimentos superiores de RNA, lípidos totais e metabolitos polares totais. Um novo método integra o sonicador Hielscher UIP400MTP com a estação de trabalho de manuseamento de líquidos Beckman Coulter i7, permitindo o processamento reprodutível e eficiente de células, com elevada capacidade de processamento, para a extração de RNA, metabolitos e lípidos. O método apresentado supera os métodos tradicionais de raspagem celular manual ao alcançar uma reprodutibilidade e um rendimento superiores em vários tipos de células e condições experimentais.

Simplifique o desprendimento celular com o sonicador de microplacas UIP400MTP

Os sistemas de cultura de células aderentes desempenham um papel fundamental na investigação toxicológica e biomédica. Neste contexto, Cruchley-Fuge et al. (2024) abordaram um desafio significativo no projeto PrecisionTox, centrado na utilização de tecnologias ómicas para a avaliação dos perigos de substâncias químicas. O projeto visava a análise de milhares de amostras tratadas com diversas substâncias químicas, com elevada capacidade de processamento. Para responder a esta necessidade, os investigadores desenvolveram um fluxo de trabalho automatizado que combina o sonicador UIP400MTP com protocolos estabelecidos de extração bifásica para análise por cromatografia líquida–espectrometria de massa (LC-MS). O seu estudo avalia a eficácia do sonicador de placas multipoços UIP400MTP no desprendimento de células aderentes, em comparação com a raspagem manual e outros métodos tradicionais.

Simplificação da multiómica: extração automatizada de células aderentes com o UIP400MTP

A equipa de investigação de Laura Cruchley-Fuge, da University of Birmingham, utilizou três linhas celulares humanas: HepG2 (células de cancro do fígado), HepaRG (células diferenciadas semelhantes a hepatócitos) e H295R (células de cancro da glândula suprarrenal). Estas células foram cultivadas em placas de 24 e 96 poços e expostas a substâncias químicas de teste, como a aflatoxina B1 e a forscolina.

Desenho experimental:

• Fase 1: Otimização das definições de potência do sonicador UIP400MTP e comparação com a raspagem celular manual e os banhos de água ultrassónicos. Foram utilizadas células HepG2 para avaliar a recuperação de RNA, metabolitos e lípidos.
• Fase 2: Integração do UIP400MTP num fluxo de trabalho de extração bifásica utilizando o sistema Beckman Coulter i7. A validação foi realizada utilizando células HepaRG e H295R.

Fluxo de trabalho de extração: O fluxo de trabalho incluiu a exposição a substâncias químicas em placas multipoços, o desprendimento celular utilizando o UIP400MTP e a extração bifásica pelo método Bligh & Dyer (B&D). A análise por LC-MS foi realizada utilizando um Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 para compostos lipofílicos e polares. O método B&D, um método de referência para a quantificação de lípidos, envolve uma extração em duas etapas com metanol, clorofórmio e água, seguida da quantificação dos lípidos na fase de clorofórmio.

O sonicador de microplacas UIP400MTP facilita o desprendimento de linhas celulares aderentes de placas multipoços e caixas de Petri

Resultados:

• Fase 1: As condições ótimas de sonicação foram identificadas a 60% de potência.
  O UIP400MTP proporcionou a maior recuperação de RNA, com uma reprodutibilidade excecional, em comparação com a raspagem manual e os banhos ultrassónicos.
  A recuperação de metabolitos polares foi consistente entre os métodos, enquanto a recuperação de lípidos foi significativamente superior com o UIP400MTP.
• Fase 2: A validação em células HepaRG e H295R demonstrou uma elevada reprodutibilidade dos dados de lipidómica e metabolómica, conforme indicado pelos valores de PCA agrupados de forma compacta.
  Os tratamentos com aflatoxina B1 e forscolina foram eficazmente diferenciados dos controlos, evidenciando a sensibilidade e a fiabilidade do método.

“O dispositivo de sonicação Hielscher UIP400MTP proporciona uma abordagem alternativa de elevada qualidade e reprodutível ao “método de referência” da raspagem celular manual, proporcionando rendimentos superiores de RNA, lípidos totais e metabolitos polares totais.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. destacam as vantagens do sonicador UIP400MTP para o processamento de células aderentes. Ao substituir a raspagem manual, este método melhora a reprodutibilidade, a capacidade de processamento e o rendimento, tornando-o uma ferramenta de valor inestimável para estudos de grande escala como o PrecisionTox. A integração do UIP400MTP em fluxos de trabalho automatizados não só reduz a variabilidade, como também simplifica processos que exigem muita mão de obra, permitindo a aquisição de dados multiómicos de elevada qualidade.

O trabalho de Cruchley-Fuge et al. (2024) facilita e simplifica o processamento de culturas de células aderentes para análise multiómica. A integração do sonicador UIP400MTP em fluxos de trabalho automatizados assegura uma preparação consistente e eficiente das amostras, tornando-o ideal para a investigação toxicológica com elevada capacidade de processamento.
 

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