Substitua a raspagem de células pelo Sonicador de alto rendimento UIP400MTP

O descolamento e a extração de linhas celulares aderentes de placas com vários poços para análise multiómica é uma tarefa diária nos laboratórios. O descolamento de células de alto rendimento utilizando o sonicador de placas multipoços UIP400MTP substitui a raspagem manual de células, levando a maiores rendimentos de ARN, lípidos totais e metabolitos polares totais. Um novo método integra o sonicador Hielscher UIP400MTP com a estação de trabalho de manuseamento de líquidos Beckman Coulter i7, permitindo um processamento de alto rendimento, reprodutível e eficiente de células para extração de ARN, metabolitos e lípidos. O método apresentado supera os métodos tradicionais de raspagem manual de células, alcançando uma reprodutibilidade e rendimento superiores em vários tipos de células e condições experimentais.

Simplifique a separação de células com o Sonicador de Microplacas UIP400MTP

Os sistemas de cultura de células aderentes desempenham um papel fundamental na investigação toxicológica e biomédica. Neste contexto, Cruchley-Fuge et al. (2024) abordaram um desafio significativo no projeto PrecisionTox, centrado no aproveitamento das tecnologias ómicas para a avaliação dos perigos químicos. O projeto visava uma análise de alto rendimento de milhares de amostras tratadas com diversos produtos químicos. Para satisfazer esta procura, os investigadores desenvolveram um fluxo de trabalho automatizado que combina o sonicador UIP400MTP com protocolos de extração bifásica estabelecidos para análise por cromatografia líquida-espetrometria de massa (LC-MS). O seu estudo avalia a eficácia do Sonicador de Placas Multipoços UIP400MTP na separação de células aderentes em comparação com a raspagem manual e outros métodos tradicionais.

Simplificando a Multi-Ómica: Extração automatizada de células aderentes com o UIP400MTP

A equipa de investigação de Laura Cruchley-Fuge, da Universidade de Birmingham, utilizou três linhas de células humanas: HepG2 (células de cancro do fígado), HepaRG (células diferenciadas do tipo hepatócito) e H295R (células de cancro da suprarrenal). Estas células foram cultivadas em placas de 24 e 96 poços e expostas a substâncias químicas de ensaio, como a aflatoxina B1 e a forskolina.

Conceção experimental:

• Fase 1: Otimização das definições de potência do sonicador UIP400MTP e comparação com a raspagem manual das células e os banhos de água sónicos. As células HepG2 foram utilizadas para avaliar a recuperação de ARN, metabolitos e lípidos.
• Fase 2: Integração do UIP400MTP num fluxo de trabalho de extração bifásica utilizando o sistema i7 da Beckman Coulter. A validação foi efectuada com células HepaRG e H295R.

Fluxo de trabalho de extração: O fluxo de trabalho incluiu exposições químicas em placas com vários poços, descolamento de células utilizando o UIP400MTP e extração bifásica através do Bligh & Dyer (B&D) método. A análise LC-MS foi efectuada utilizando um Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 para compostos lipofílicos e polares. O método B&O método D, um padrão de ouro para a quantificação de lípidos, envolve uma extração em duas fases com metanol, clorofórmio e água, seguida da quantificação de lípidos na fase clorofórmica.

O sonicador de microplacas UIP400MTP facilita o desprendimento de linhas celulares aderentes de placas multipoços e placas de Petri

Resultados:

• Fase 1: As condições óptimas de sonicação foram identificadas a 60% de potência.
  O UIP400MTP produziu a recuperação de ARN mais elevada com uma reprodutibilidade excecional em comparação com a raspagem manual e os banhos sónicos.
  A recuperação de metabolitos polares foi consistente em todos os métodos, enquanto a recuperação de lípidos foi notavelmente superior com o UIP400MTP.
• Fase 2: A validação em células HepaRG e H295R demonstrou uma elevada reprodutibilidade nos dados lipidómicos e metabolómicos, conforme indicado por pontuações de PCA fortemente agrupadas.
  Os tratamentos com aflatoxina B1 e forskolina foram eficazmente distinguidos dos controlos, o que sublinha a sensibilidade e a fiabilidade do método.

“O dispositivo de sonicação UIP400MTP da Hielscher proporciona uma abordagem alternativa de alta qualidade e reprodutível ao "padrão de ouro" da raspagem manual de células, conduzindo a rendimentos mais elevados de ARN, lípidos totais e metabolitos polares totais.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. destacam as vantagens do sonicador UIP400MTP para o processamento de células aderentes. Ao substituir a raspagem manual, este método melhora a reprodutibilidade, a produtividade e o rendimento, tornando-o numa ferramenta inestimável para estudos em grande escala como o PrecisionTox. A integração do UIP400MTP em fluxos de trabalho automatizados não só reduz a variabilidade como também simplifica os processos de trabalho intensivo, permitindo a aquisição de dados multiómicos de alta qualidade.

O trabalho de Cruchley-Fuge et al. (2024) facilita e agiliza o processamento de culturas de células aderentes para análise multiómica. A integração do sonicador UIP400MTP com fluxos de trabalho automatizados garante uma preparação de amostras consistente e eficiente, tornando-o ideal para a investigação toxicológica de elevado rendimento.
 

Conceção, fabrico e consultoria – Qualidade fabricada na Alemanha

Os ultrassons Hielscher são conhecidos pelos seus elevados padrões de qualidade e design. A robustez e a facilidade de operação permitem a integração harmoniosa dos nossos ultrassons nas instalações industriais. As condições difíceis e os ambientes exigentes são facilmente controlados pelos ultrassons Hielscher.

A Hielscher Ultrasonics é uma empresa certificada pela ISO e coloca especial ênfase em sonicadores de alto desempenho com tecnologia de ponta e facilidade de utilização. Naturalmente, os ultrassons da Hielscher estão em conformidade com a CE e cumprem os requisitos da UL, CSA e RoHs.