Ar trombocītiem bagāta seruma sagatavošana ar ultraskaņu
- Ar trombocītiem bagāta plazma (PRP) ir asins plazma, kas bagātināta ar trombocītiem un ko izmanto medicīniskām un estētiskām procedūrām.
- Ultraskaņas līze un kondicionēšana ir ļoti efektīva metode ar trombocītiem bagātas plazmas sagatavošanai.
- Hielscher Ultrasonics piedāvā dažādas ultraskaņas sistēmas, kas atbilst asins apstrādes prasībām (piemēram, sagatavošanai tīrtelpā un ārpus tās).
Ar trombocītiem bagāts serums
Apstrāde ar ultraskaņu ir uzticama un vienkārša metode trombocītu līzei autologā asins serumā, lai atbrīvotu augšanas faktorus. No trombocītiem iegūtās frakcijas – pazīstamas arī kā autologs kondicionēts serums (ACS) – izmanto audu atjaunošanai vai estētiskām procedūrām. Lai iegūtu optimālus rezultātus, PRP pirms injekcijas bagātina.
Lai sagatavotu ar šūnu augšanas faktoriem bagātinātu plazmu, apstrāde ar ultraskaņu ir ļoti efektīva un lietderīga metode šūnu membrānu līzei un gandrīz visu šūnu augšanas faktoru atbrīvošanai no trombocītiem. Veicot ultraskaņas līzi un kondicionēšanu, var izmantot pat ar antikoagulantiem apstrādātas asinis.
PRP kondicionēšana ar ultraskaņu ir ērts un izmaksu ziņā efektīvs veids, kā iegūt koncentrētus augšanas faktorus.
Ar trombocītiem bagātas plazmas (PRP) ultraskaņas līze
Ultraskaņas līzes iedarbība
Asins seruma apstrāde ar ultraskaņu nodrošina vienmērīgu trombocītu līzi, lai atbrīvotu tajos ietvertos augšanas faktorus (augšanas faktoru AB (PDGF-AB), augšanas faktoru AA (PDGF-AA), augšanas faktoru BB (PDGF-BB), asinsvadu endotēlija augšanas faktoru (VEGF), transformējošo augšanas faktoru β (TGF-β), epidermas augšanas faktoru (EGF), insulīnam līdzīgo augšanas faktoru (IGF), epitēlija šūnu augšanas faktoru ECGF un fibroblastu augšanas faktoru (FGF)). Trombocīti un to alfa granulas tiek sagrautas, apstrādājot ar ultraskaņu un izmantojot šādu parādību: akustisko kavitāciju. Ultraskaņas kavitācijas izmantošana trombocītu līzei mazina atkārtotas sasaldēšanas un atkausēšanas metodes iespējamo negatīvo ietekmi uz augšanas faktoru aktivitāti.
PRP sagatavošanas protokols, izmantojot ultraskaņu
Aptuveni 16mL svaigi paņemta autologo asiņu parauga mēģenē saudzīgi apgriež 8–10 reizes, lai asinis un antikoagulanti labi sajauktos. Pēc tam paraugu centrifugē ar 1800 g 20 min istabas temperatūrā. Pēc centrifugēšanas trombocīti un mononukleārās šūnas plazmas slāņa apakšdaļā veido bālganu slāni, ko sauc par ar trombocītiem bagātu plazmu (PRP). Augšējo slāni sauc par ar trombocītiem nabadzīgu plazmu (PPP). Mononukleārās šūnas var atdalīt vai atstāt paraugā. Bieži mononukleārās šūnas atstāj PRP paraugā, lai izvairītos no papildu darbībām, kas rada piesārņojuma risku.
Piezīme: autologā PRP apstrāde ar ultraskaņu jāveic sterilos apstākļos.
PRP un PPP atdala un savāc. PPP pievieno 1,5mL 10% kalcija hlorīda šķīduma, savukārt PRP pievieno 0,5mL 5% etanola. Abas suspensijas saudzīgi samaisa un atstāj uz 5 min istabas temperatūrā. Visbeidzot PRP suspensijai pievieno 1mL PPP un atstāj, līdz izveidojas fibrīna receklis.
Apstrāde ar ultraskaņu: Tā kā izveidotais trombocītu gels kalpo kā atbrīvoto augšanas faktoru rezervuārs, fibrīna gels ir jāsagrauj, lai atbrīvotu pieejamos augšanas faktorus. Ultraskaņas līzes un augšanas faktoru atbrīvošanas parametri ir šādi: apstrādājiet mēģenē esošo paraugu ar ultraskaņu, izmantojot UP200Ht vai UP200St (200W, 26kHz) ar sonotrodi S26d2. Lai izvairītos no asins parauga pārkaršanas, apstrādi ar ultraskaņu var veikt impulsu ciklos (piemēram, 10 sek. ieslēgts, 30 sek. izslēgts). Dzesēšanai paraugs jānovieto uz ledus, lai optimāli uzturētu temperatūru 2–5°C robežās. Pēc apstrādes ar ultraskaņu paraugu centrifugē ar 16 000 g 5 min. istabas temperatūrā. Supernatantu savāc, un to var uzglabāt -70°C temperatūrā.
Izmantojot apstrādes ar ultraskaņu metodi, trombocītu koncentrācija PRP frakcijā palielinājās 1,7–4,5 reizes salīdzinājumā ar literatūrā norādīto vidējo trombocītu skaitu pilnasinīs.
PRP ir kombinēts ar no taukaudiem iegūtu cilmes šūnu terapiju (ar ultraskaņu no taukaudiem atbrīvotas autologās cilmes šūnas, sajauktas ar PRP un injicētas atpakaļ pacienta audos to atjaunošanai).
Ultraskaņas aprīkojums
Hielscher Ultrasonics ir sarežģītu un uzticamu ultraskaņas tehnoloģiju eksperts. Mūsu ultraskaņas ierīces visā pasaulē izmanto līzei, ekstrakcijai un paraugu sagatavošanai – gan tiešā, gan netiešā veidā. Autoklavējami, kā arī vienreizlietojami piederumi nodrošina no piesārņojuma brīvu autologo asins paraugu apstrādi. Lielāko daļu mūsu sistēmu var izmantot cilmes šūnu un PRP ultraskaņas līzei, tādējādi padarot mūsu ultraskaņas ierīces vēl ekonomiski efektīvākas.
Zemāk redzamajā tabulā ir uzskaitītas mūsu ultraskaņas ierīces, kas piemērotas ar trombocītiem bagātas plazmas sagatavošanai, un katrai ierīcei ieteicamais parauga tilpums. Ir pieejamas arī lielākas ultraskaņas ierīces un individuāli pielāgotas sistēmas.
| Ierīce | Jauda [W] | Frekv. [kHz] | Tips | Tilpums [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | patstāvīga ierīce | 0,5 | – | 1,5 |
| UP50H | 50 | 30 | turama rokā vai nostiprināma statīvā | 0,01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | turama rokā vai nostiprināma statīvā | 0,01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | turama rokā vai nostiprināma statīvā | 0,1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | nostiprināma statīvā | 0,1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | nostiprināma statīvā | 5,0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | patstāvīga ierīce | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | no piesārņojuma brīva plūsmas šūna | |||
Sazinieties ar mums jau šodien! Mēs labprāt palīdzēsim jums atrast optimālo ultraskaņas ierīci!
Sazinieties ar mums! / Jautājiet mums!
GDmini2 pie UP200St-TD pārveidotāja (200 vati)
Literatūra un atsauces
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Trombocītu lizāta gels un endotēlija priekštečšūnas stimulē mikrovaskulārā tīkla veidošanos in vitro: nozīme audu inženierijā. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Ar trombocītiem bagāta plazma (PRP) akūtas muskuļu traumas ārstēšanai: sistemātisks pārskats. PLOS ONE 9. sējums, 2. numurs, 2014.
Noderīgi fakti
Ar trombocītiem bagāta plazma
Ar trombocītiem bagāta plazma satur augšanas faktoru AB (PDGF-AB), trombocītu izcelsmes augšanas faktoru AA (PDGF-AA), trombocītu izcelsmes augšanas faktoru BB (PDGF-BB), asinsvadu endotēlija augšanas faktoru (VEGF), transformējošo augšanas faktoru β (TGF-β), epidermas augšanas faktoru (EGF), insulīnam līdzīgo augšanas faktoru (IGF), epitēlija šūnu augšanas faktoru ECGF un fibroblastu augšanas faktoru (FGF), kas ir nozīmīgi šūnu augšanas un atjaunošanās stimulatori.
Autologs kondicionēts serums (ACS)
Autologa kondicionēta plazma (ACP) ir ar trombocītiem bagāta plazma, ko iegūst no autologām asinīm un ko izmanto reģenerācijas veicināšanai dažādu ortopēdisku slimību gadījumā un ķirurģisku procedūru laikā. Kondicionētu serumu sagatavo, atdalot plazmu no citiem asins komponentiem (piemēram, eritrocītiem) un to koncentrējot. ACP ir ar trombocītiem bagāta plazma (PRP). PRP ir vispārīgs apzīmējums plazmas veidam, kurā trombocītu koncentrācija ir ievērojami augstāka nekā pilnasinīs. To iegūst no pilnasinīm. Galvenie ACP komponenti ir trombocīti (asins plātnītes) un vairāki augšanas faktori, kas ir būtiski dzīšanas procesos. Atšķirībā no citiem ar trombocītiem bagātas plazmas preparātiem ACP izceļas ar zemu balto asins šūnu, piemēram, neitrofilo granulocītu, koncentrāciju; šīs šūnas augstā koncentrācijā var kaitēt dzīšanas procesam.
Ar trombocītiem bagātas plazmas injekcijas
Ar trombocītiem bagātu plazmu izmanto injekcijām reģeneratīvajā medicīnā, kā arī kosmētiskās procedūrās. PRP lietošana sola ievērojami paātrināt muskuļu dzīšanu un atjaunošanos. Turklāt to veiksmīgi izmanto iekaisuma, artrīta, sāpju, brūču, lēni dzīstošu atvērtu brūču un smagu ādas apdegumu ārstēšanai. PRP satur lielu daudzumu augšanas faktoru, kas stimulē un aizsargā dzīšanā iesaistītās šūnas, tādējādi veicinot bojāto audu atjaunošanos.
Kosmētiskajās procedūrās ir pierādīta PRP efektivitāte matu augšanas un ādas atjaunošanās stimulēšanā (pazīstama arī kā vampīra procedūra).
Trombocītu izcelsmes augšanas faktori (PDGF)
Termins “trombocītu izcelsmes augšanas faktors” (PDGF) attiecas uz faktoriem PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C un PDGF-D. Tas ir signālu pārraides tīkls, ko veido četri ligandi (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C un PDGF-D) un divi receptori – PDGFR-alpha un PDGFR-beta.
Augšanas faktori jeb olbaltumvielas regulē šūnu augšanu un dalīšanos. Kā galvenais zīdītāju serumā sastopamais mitogēns, kas recekļa veidošanās laikā atbrīvojas no trombocītiem, tas būtiski piedalās asinsvadu veidošanā (angioģenēzē) – asinsvadu augšanā no jau esošiem asinsvadu audiem.