ASTM E2799-22 protokols pretmikrobu efektivitātes novērtēšanai

Hielscher UIP400MTP ir jaudīga un efektīva ultraskaņas ierīce daudziedobju platēm, kas paredzēta apstrādes ar ultraskaņu posma racionalizēšanai ASTM E2799-22 protokolā. Vienmērīgi pievadot ultraskaņas enerģiju visai mikrotitrēšanas platei, UIP400MTP nodrošina konsekventu un uzticamu bioplēvju atdalīšanu no vākiem ar tapām, nebojājot šūnas un neapdraudot paraugu integritāti. Tās spēja apstrādāt lielu paraugu skaitu un lietotājam draudzīgā darbība ievērojami samazina apstrādes laiku, vienlaikus uzlabojot rezultātu reproducējamību, tādēļ tā ir ideāls risinājums laboratorijām, kas veic bioplēvju dzīvotspējas analīzes un pretmikrobu efektivitātes pārbaudes.

ASTM E2799

ASTM E2799 ir standartizēta testēšanas metode, kas paredzēta pretmikrobu līdzekļu efektivitātes novērtēšanai pret bioplēvēm, īpašu uzmanību pievēršot Pseudomonas aeruginosa. Bioplēves ir sarežģītas mikroorganismu kopienas, kas pieķeras virsmām un izrāda paaugstinātu izturību pret pretmikrobu apstrādi, tādēļ tās rada būtiskas problēmas veselības aprūpē, rūpniecībā un vides jomā. Šajā metodē izmanto minimālās bioplēves izskaušanas koncentrācijas (MBEC) testu, lai nodrošinātu uzticamu un reproducējamu pieeju dezinfekcijas līdzekļu pārbaudei reālistiskos bioplēves apstākļos.

Kāda ir apstrādes ar ultraskaņu loma ASTM E2799?

Apstrādei ar ultraskaņu ir izšķiroša loma ASTM E2799 protokolā, jo tā atvieglo bioplēvju atdalīšanu no testa virsmām, nodrošinot precīzu mikroorganismu dzīvotspējas novērtējumu pēc apstrādes. Izmantojot kontrolētu ultraskaņas enerģiju, protokols nodrošina efektīvu un konsekventu bioplēves struktūras izjaukšanu, nebojājot šūnas un ļaujot iegūt precīzus un reproducējamus rezultātus. Tas padara ASTM E2799 par būtisku instrumentu bioplēvju pētniecības attīstīšanai un efektīvu pretmikrobu stratēģiju izstrādei.

Kā veikt MBEC testu saskaņā ar ASTM E2799-22

ASTM E2799-22 protokolā ir izklāstīti pretmikrobu līdzekļu efektivitātes novērtēšanas posmi pret bioplēvēm. Izmantojot Hielscher ultraskaņas ierīci mikrotitrēšanas platēm UIP400MTP, protokolu var pielāgot, lai bioplēvju atdalīšanai iekļautu šo moderno apstrādes ar ultraskaņu metodi. Tālāk ir aprakstīti posmi, kas pielāgoti ultraskaņas ierīces mikroplatēm UIP400MTP izmantošanai:

1. Bioplēvju sagatavošana
   Sagatavojiet sterilu 96 iedobju mikrotitrēšanas plati ar noņemamiem vākiem ar tapām.
   Inokulējiet iedobes ar standartizētu baktēriju suspensiju piemērotā augšanas barotnē.
   Uzlieciet platei vāku ar tapām, nodrošinot, ka tapas ir pilnībā iegremdētas baktēriju suspensijā.
   Inkubējiet plati kontrolētos apstākļos (piemēram, ievērojot noteiktu temperatūru un laiku), lai uz tapām varētu veidoties bioplēve.
2. Apstrāde ar pretmikrobu līdzekļiem
   Pēc bioplēves izveidošanās nomainiet barotni pret svaigu barotni, kas satur pārbaudāmos pretmikrobu līdzekļus dažādās koncentrācijās.
   Uzlieciet atpakaļ vāku ar tapām un inkubējiet testa plānā norādītajos apstākļos.
3. Sagatavošanās bioplēves atdalīšanai
   Pēc apstrādes noskalojiet vāku ar tapām, iegremdējot to sterilā skalošanas šķīdumā, lai noņemtu pretmikrobu līdzekļu atliekas un vāji pieķērušās planktoniskās šūnas.
4. Bioplēves atdalīšana, izmantojot ultraskaņas ierīci UIP400MTP
   Sagatavojiet jaunu 96 iedobju mikrotitrēšanas plati ar atjaunošanās barotni (piemēram, neitralizējošu buljonu).
   Atdaliet bioplēves, ievietojot vāku ar tapām atjaunošanās barotnes plates iedobēs.
   Ievietojiet plati ultraskaņas ierīcē UIP400MTP, nodrošinot, ka vāks un plate ir pareizi savietoti.
   Iestatiet ultraskaņas ierīces amplitūdu uz 70%–80% un apstrādājiet ar ultraskaņu 3–4 minūtes cikliskā režīmā, lai nodrošinātu konsekventu bioplēves atdalīšanu bez šūnu līzes.
5. Bioplēves dzīvotspējas novērtēšana
   Pēc apstrādes ar ultraskaņu apstrādājiet atjaunošanās barotni, kas satur atdalītās bioplēves šūnas, izmantojot standarta mikrobioloģiskās vai analītiskās metodes, piemēram:
   • Kolonijas veidojošo vienību (CFU) skaita noteikšana: veiciet sērijveida atšķaidīšanu un uzsējiet uz agara, lai noteiktu dzīvotspējīgo šūnu skaitu.
   • Optiskā blīvuma (OD) mērījumi: izmantojiet spektrofotometrisko analīzi, lai novērtētu šūnu blīvumu.
   • Uz fluorescenci balstīti dzīvotspējas testi: nosakiet dzīvo un mirušo šūnu skaitu, izmantojot fluorescējošas krāsvielas.
6. Datu analīze
   Salīdziniet apstrādāto un neapstrādāto bioplēvju dzīvotspējas datus, lai noteiktu pretmikrobu līdzekļu efektivitāti.
   Aprēķiniet minimālo bioplēves izskaušanas koncentrāciju (MBEC), pamatojoties uz koncentrāciju, kas nepieciešama dzīvotspējīgo bioplēves šūnu iznīcināšanai.
7. Kvalitātes kontrole
   Nodrošiniet nemainīgus apstrādes ar ultraskaņu apstākļus, regulāri kalibrējot UIP400MTP un pārbaudot, vai bioplēves atdalīšanas process neizraisa būtisku šūnu līzi vai iznīcināšanu.
   Lai validētu rezultātus, iekļaujiet atbilstošus kontroles paraugus, piemēram, neapstrādātas bioplēves un tukšos paraugus, kas satur tikai barotni.

Uz tapām izveidojušās bioplēves šūnas tika atdalītas, 5 min apstrādājot ar ultraskaņu (Hielscher Ultrasound Technology, Teltova, Vācija, UIP250MTP) 96 iedobju platēs, kas saturēja svaigu kultivēšanas barotni šūnu atjaunošanai.
(Attēls un pētījums: ©de Oliveira et al., 2016)

Integrējot UIP400MTP ASTM E2799-22 darbplūsmā, bioplēves atdalīšanas process tiek optimizēts konsekvences, efektivitātes un liela paraugu skaita apstrādes vajadzībām.