ASTM E2799-22 antimikrobiālo līdzekļu novērtēšanas protokols

Hielscher UIP400MTP ir spēcīgs un efektīvs vairāku urbumu plākšņu sonikators, kas paredzēts, lai racionalizētu ultraskaņas soli ASTM E2799-22 protokolā. Nodrošinot vienmērīgu ultraskaņas enerģiju visā mikrotitra plāksnē, UIP400MTP nodrošina konsekventu un uzticamu bioplēvju atdalīšanu no tapu vākiem, nesabojājot šūnas vai neapdraudot parauga integritāti. Tā augstā caurlaidspējas spēja un lietotājam draudzīgā darbība ievērojami samazina apstrādes laiku, vienlaikus uzlabojot reproducējamību, padarot to par ideālu risinājumu laboratorijām, kas veic bioplēves dzīvotspējas testus un antimikrobiālās efektivitātes testus.

ASTM E2799

ASTM E2799 ir standartizēta testa metode, kas izstrādāta, lai novērtētu antimikrobiālo līdzekļu efektivitāti pret bioplēvēm, īpaši koncentrējoties uz Pseudomonas aeruginosa. Bioplēves ir sarežģītas mikrobu kopienas, kas pielīp virsmām un uzrāda paaugstinātu rezistenci pret antimikrobiālo ārstēšanu, padarot tās par būtisku izaicinājumu veselības aprūpes, rūpniecības un vides kontekstā. Šajā metodē izmanto minimālās bioplēves izskaušanas koncentrācijas (MBEC) testu, lai nodrošinātu uzticamu un reproducējamu sistēmu dezinfekcijas līdzekļu testēšanai reālos bioplēves apstākļos.

Kā ultraskaņas apstrāde veicina ASTM E2799?

Ultraskaņas apstrādei ir izšķiroša loma ASTM E2799 protokolā, veicinot biofilmu atdalīšanu no testa virsmām, nodrošinot precīzu mikrobu dzīvotspējas novērtējumu pēc apstrādes. Izmantojot kontrolētu ultraskaņas enerģiju, protokols panāk efektīvus un konsekventus bioplēves traucējumus, nesabojājot šūnas, nodrošinot precīzus un reproducējamus rezultātus. Tas padara ASTM E2799 par būtisku instrumentu, lai veicinātu bioplēves pētniecību un izstrādātu efektīvas antimikrobiālās stratēģijas.

Kā palaist MBEC testu saskaņā ar ASTM E2799-22

ASTM E2799-22 protokolā ir izklāstīti pasākumi, lai novērtētu antimikrobiālo līdzekļu efektivitāti pret bioplēvēm. Izmantojot Hielscher UIP400MTP mikrotitrēšanas plāksnes ultraskaņu, protokolu var pielāgot, lai iekļautu šo uzlaboto ultraskaņas metodi bioplēves atdalīšanai. Zemāk ir aprakstītas darbības, kas pielāgotas, lai izmantotu mikroplates sonikatoru UIP400MTP:

1. Bioplēvju sagatavošana
   Sagatavo sterilu 96 iedobju mikrotitrēšanas plāksni ar noņemamiem tapu vākiem.
   Iedobes inokulēt ar standartizētu baktēriju suspensiju piemērotā augšanas vidē.
   Novietojiet tapas vāku uz plāksnes, nodrošinot, ka tapas ir pilnībā iegremdētas baktēriju suspensijā.
   Inkubē plati kontrolētos apstākļos (piemēram, temperatūrā un laikā), lai uz tapām veidotos bioplēve.
2. Ārstēšana ar pretmikrobu līdzekļiem
   Pēc bioplēves veidošanās barotni aizstāj ar svaigu barotni, kas satur dažādās koncentrācijās testējamos pretmikrobu līdzekļus.
   No jauna piestiprina tapas vāku un inkubē apstākļos, kas norādīti testa plānā.
3. Sagatavošanās bioplēves atdalīšanai
   Pēc apstrādes izskalojiet tapas vāku, iegremdējot to sterilā skalošanas šķīdumā, lai noņemtu pretmikrobu līdzekļu atlikumus un brīvi pielipušās planktona šūnas.
4. Bioplēves atdalīšanās, izmantojot UIP400MTP Sonicator
   Sagatavo svaigu 96 iedobju mikrotitrēšanas plati, kurā ir reģenerācijas vide (piemēram, neitralizējošs buljons).
   Atvienojiet bioplēves, ievietojot tapas vāku reģenerācijas vides plates akās.
   Ievietojiet plāksni UIP400MTP sonikatorā, nodrošinot, ka vāks un plāksne ir pareizi izlīdzināti.
   Iestatiet sonikatoru uz 70%-80% amplitūdu un apstrādājiet ar ultraskaņu 3-4 minūtes cikla režīmā, lai nodrošinātu konsekventu bioplēves atdalīšanos bez šūnu līzes.
5. Bioplēves dzīvotspējas novērtējums
   Pēc ultraskaņas apstrādes apstrādājiet reģenerācijas vidi, kas satur atdalītas bioplēves šūnas, izmantojot standarta mikrobioloģiskās vai analītiskās metodes, piemēram:
   • Koloniju veidojošo vienību (KVV) skaits: veic sērijveida atšķaidījumus un plati uz agara, lai iegūtu dzīvotspējīgu šūnu uzskaitījumu.
   • Optiskā blīvuma (OB) mērījumi:Izmantojiet spektrofotometrisko analīzi, lai novērtētu šūnu blīvumu.
   • Uz fluorescenci balstīti dzīvotspējas testi:Kvantificējiet dzīvas un mirušas šūnas, izmantojot fluorescējošas krāsvielas.
6. Datu analīze
   Salīdziniet apstrādāto un neapstrādāto bioplēvju dzīvotspējas datus, lai noteiktu antimikrobiālo līdzekļu efektivitāti.
   Aprēķina minimālo bioplēves izskaušanas koncentrāciju (MBEC), pamatojoties uz koncentrāciju, kas vajadzīga, lai likvidētu dzīvotspējīgas bioplēves šūnas.
7. Kvalitātes kontrole
   Nodrošiniet konsekventus ultraskaņas apstākļus, regulāri kalibrējot UIP400MTP un pārbaudot, vai bioplēves atdalīšanās process neizraisa ievērojamu šūnu līzi vai iznīcināšanu.
   Iekļauj attiecīgas kontroles, piemēram, neapstrādātas bioplēves un vidēji stabilus tukšus paraugus, lai apstiprinātu rezultātus.

Bioplēves šūnas, kas veidojas uz tapām, tika apstrādātas ar ultraskaņu (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Vācija, UIP250MTP) 5 minūtes 96 iedobju platēs, kas satur svaigu kultūras barotni šūnu atgūšanai.
(Attēls un pētījums: ©de Oliveira et al., 2016)

Integrējot UIP400MTP ASTM E2799-22 darbplūsmā, bioplēves atdalīšanās process tiek optimizēts konsekvencei, efektivitātei un augstas caurlaidspējas lietojumiem.