Nomainiet šūnu skrāpēšanu ar UIP400MTP augstas caurlaidspējas Sonicator

Pielipušo šūnu līniju atdalīšana un ekstrakcija no vairāku urbumu plāksnēm multiomikas analīzei ir ikdienas uzdevums laboratorijās. Augstas caurlaidspējas šūnu atdalīšanās, izmantojot vairāku urbumu plāksnes ultraskaņu, UIP400MTP aizstāj manuālu šūnu skrāpēšanu, kas noved pie augstākas RNS, kopējo lipīdu un kopējo polāro metabolītu ražas. Jauna metode integrē Hielscher UIP400MTP sonikatoru ar Beckman Coulter i7 šķidruma apstrādes darbstaciju, nodrošinot augstas caurlaidspējas, reproducējamu un efektīvu šūnu apstrādi RNS, metabolīta un lipīdu ekstrakcijai. Piedāvātā metode izceļas ar tradicionālajām manuālajām šūnu skrāpēšanas metodēm, panākot izcilu reproducējamību un ražu dažādos šūnu tipos un eksperimenta apstākļos.

Racionalizējiet šūnu atdalīšanu ar mikroplates Sonicator UIP400MTP

Saistītajām šūnu kultūru sistēmām ir izšķiroša nozīme toksikoloģiskajos un biomedicīniskajos pētījumos. Šajā kontekstā Cruchley-Fuge et al. (2024) pievērsās būtiskai problēmai PrecisionTox projektā, kas bija vērsts uz omikas tehnoloģiju izmantošanu ķīmiskās bīstamības novērtēšanai. Projekta mērķis bija veikt augstas caurlaidspējas analīzi tūkstošiem paraugu, kas apstrādāti ar dažādām ķīmiskām vielām. Lai apmierinātu šo pieprasījumu, pētnieki izstrādāja automatizētu darbplūsmu, apvienojot UIP400MTP sonikatoru ar izveidotiem divfāzu ekstrakcijas protokoliem šķidruma hromatogrāfijas-masas spektrometrijas (LC-MS) analīzei. Viņu pētījums novērtē UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator efektivitāti pielipušo šūnu atdalīšanā, salīdzinot ar manuālo skrāpēšanu un citām tradicionālām metodēm.

Multi-Omics racionalizēšana: automatizēta pielipušo šūnu ekstrakcija ar UIP400MTP

Laura Cruchley-Fuge pētnieku komanda no Birmingemas universitātes izmantoja trīs cilvēka šūnu līnijas: HepG2 (aknu vēža šūnas), HepaRG (diferencētas hepatocītiem līdzīgas šūnas) un H295R (virsnieru vēža šūnas). Šīs šūnas tika kultivētas platēs ar 24 iedobēm un 96 iedobēm un pakļautas testējamo ķimikāliju, piemēram, aflatoksīna B1 un forskolīna, iedarbībai.

Eksperimentālais dizains:

• 1. fāze: UIP400MTP sonikatora jaudas iestatījumu optimizācija un salīdzinājums ar manuālo šūnu skrāpēšanu un skaņas ūdens vannām. HepG2 šūnas tika izmantotas, lai novērtētu RNS, metabolītu un lipīdu atjaunošanos.
• 2. fāze: UIP400MTP integrācija divfāzu ekstrakcijas darbplūsmā, izmantojot Beckman Coulter i7 sistēmu. Validācija tika veikta, izmantojot HepaRG un H295R šūnas.

Ekstrakcijas darbplūsma: Darbplūsma ietvēra ķīmisko vielu iedarbību vairāku iedobju platēs, šūnu atdalīšanu, izmantojot UIP400MTP, un divfāzu ekstrakciju, izmantojot Bligh & Krāsotājs (B&D) metode. LC-MS analīze tika veikta, izmantojot Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 lipofīliem un polāriem savienojumiem. The B&D metode, kas ir zelta standarts lipīdu kvantitatīvai noteikšanai, ietver divpakāpju ekstrakciju ar metanolu, hloroformu un ūdeni, kam seko lipīdu kvantitatīva noteikšana hloroforma fāzē.

UIP400MTP mikroplates sonikators atvieglo pielipušo šūnu līniju atdalīšanu no vairāku iedobju plāksnēm un Petri traukiem

Rezultātus:

• 1. fāze: Optimāli ultraskaņas apstākļi tika identificēti ar 60% jaudu.
  UIP400MTP deva visaugstāko RNS atgūšanu ar izcilu reproducējamību, salīdzinot ar manuālo skrāpēšanu un skaņas vannām.
  Polāro metabolītu atgūšana bija konsekventa visās metodēs, savukārt lipīdu atgūšana bija ievērojami pārāka par UIP400MTP.
• 2. fāze: HepaRG un H295R šūnu validācija uzrādīja augstu reproducējamību lipidomikas un metabolomikas datos, par ko liecina cieši sagrupētie PCA rādītāji.
  Aflatoksīna B1 un forskolīna terapija tika efektīvi nošķirta no kontroles, uzsverot metodes jutīgumu un ticamību.

“Hielscher UIP400MTP ultraskaņas ierīce nodrošina augstas kvalitātes un reproducējamu alternatīvu pieeju manuālās šūnu skrāpēšanas "zelta standartam", kā rezultātā palielinās RNS, kopējo lipīdu un kopējo polāro metabolītu raža.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. izceļ UIP400MTP sonikatora priekšrocības piekritēju šūnu apstrādei. Aizstājot manuālo skrāpēšanu, šī metode uzlabo reproducējamību, caurlaidspēju un ražu, padarot to par nenovērtējamu rīku liela mēroga pētījumiem, piemēram, PrecisionTox. UIP400MTP integrācija automatizētās darbplūsmās ne tikai samazina mainīgumu, bet arī racionalizē darbietilpīgus procesus, nodrošinot augstas kvalitātes multiomikas datu iegūšanu.

(2024) darbs atvieglo un racionalizē pielipušo šūnu kultūru apstrādi multiomikas analīzei. UIP400MTP sonikatora integrācija ar automatizētām darbplūsmām nodrošina konsekventu un efektīvu paraugu sagatavošanu, padarot to ideāli piemērotu augstas caurlaidspējas toksikoloģiskajiem pētījumiem.
 

Projektēšana, ražošana un konsultācijas – Kvalitāte ražots Vācijā

Hielscher ultrasonikatori ir labi pazīstami ar saviem augstākajiem kvalitātes un dizaina standartiem. Robustums un viegla darbība ļauj vienmērīgi integrēt mūsu ultrasonikatorus rūpnieciskajās iekārtās. Hielscher ultrasonikatori viegli apstrādā neapstrādātus apstākļus un prasīgu vidi.

Hielscher Ultrasonics ir ISO sertificēts uzņēmums un īpašu uzsvaru liek uz augstas veiktspējas ultraskaņas datoriem, kas piedāvā vismodernākās tehnoloģijas un lietotājdraudzīgumu. Protams, Hielscher ultrasonikatori atbilst CE prasībām un atbilst UL, CSA un RoHs prasībām.