MBEC pārbaudes protokols, izmantojot 96 urbumu Plate Sonicator UIP400MTP

MBEC testu izmanto, lai noteiktu pretmikrobu līdzekļu koncentrāciju, kas nepieciešama, lai likvidētu bioplēves, kas veidojas uz tapu vākiem. Lai novērtētu bioplēves dzīvotspēju, bioplēves vispirms ir jāatvieno no 96 iedobju plāksnes tapu vākiem. Ultraskaņas apstrāde ir visdrošākā un efektīvākā metode šai atdalīšanai. Vairāku urbumu plākšņu ultraskaņas UIP400MTP ir īpaši izstrādāts, lai apstrādātu testa plāksnes ar maksimālu efektivitāti un ērtumu, racionalizējot un paātrinot augstas caurlaidspējas MBEC testus.

Ultraskaņas apstrāde bioplēves atdalīšanai

Ultraskaņas apstrāde ir izšķirošs solis minimālās bioplēves izskaušanas koncentrācijas (MBEC) testos, kas ļauj efektīvi atdalīt bioplēves šūnas no to virsmas piestiprināšanas. Bioplēves pēc būtības ir strukturētas mikroorganismu kopienas, kas ietvertas ekstracelulārajā matricā, kas padara tās ievērojami izturīgākas pret pretmikrobu līdzekļiem, salīdzinot ar planktona šūnām. MBEC testu laikā ultraskaņas apstrāde izmanto ultraskaņas viļņus, lai radītu kontrolētu kavitāciju, izjaucot bioplēves matricu un atbrīvojot iegultās šūnas suspensijā. Šis solis nodrošina, ka bioplēves šūnas ir vienmērīgi izkliedētas reģenerācijas vidē, veicinot precīzu dzīvotspējas novērtēšanu ar uzsējuma, atšķaidīšanas vai spektrofotometriskām metodēm. Bez pienācīgas bioplēves atslāņošanās atlikušās matricas sastāvdaļas varētu aizsargāt šūnas, izraisot antimikrobiālās efektivitātes nepietiekamu novērtēšanu. Tāpēc ultraskaņas apstrāde ir nepieciešama, lai iegūtu ticamas un reproducējamas MBEC vērtības, kas atspoguļo pārbaudīto līdzekļu patieso izskaušanas potenciālu. Vairāku urbumu plates sonikators UIP400MTP ļauj sagatavot augstas caurlaidspējas paraugu testa plāksnēs.

Minimālās bioplēves izskaušanas koncentrācijas (MBEC) pārbaudes protokols

1. solis: bioplēves veidošanās

1. Sagatavojiet baktēriju suspensiju:
   Audzējiet baktērijas piemērotā vidē, lai iegūtu log-fāzes augšanu.
   Baktēriju kultūru atšķaida līdz noteiktam optiskajam blīvumam (piemēram, OD600 ~ 0,1).
2. Inokulēt 96 iedobju plati:
   Pievieno baktēriju suspensiju (piemēram, 150–200 μL) katrā iedobē standarta 96 iedobju mikrotitrēšanas platē.
3. Pievienojiet tapas vāku:
   Uzliek tapas vāku uz uzsētās plates, lai uz tapas virsmām varētu veidoties bioplēve.
4. Inkubē plati:
   Inkubējiet iekārtu piemērotā temperatūrā (piemēram, 37 °C) 24–48 stundas bez kratīšanas, lai veicinātu bioplēves augšanu.

2. solis: Ārstēšana ar pretmikrobu līdzekļiem

• Sagatavojiet pretmikrobu šķīdumus:
  Sagatavojiet antimikrobiālo koncentrāciju diapazonu svaigā vidē.
  Pakļaujiet biofilmas pretmikrobu līdzekļu iedarbībai:
  Noņemiet tapas vāku no baktēriju kultūras un izskalojiet to sterilā sāls šķīdumā vai PBS, lai noņemtu planktona šūnas.
  Ievietojiet tapas vāku jaunā 96 iedobju platē, kurā ir pretmikrobu šķīdumi.
• Inkubē plati:
  Inkubē noteiktu laiku (piemēram, 24 stundas), lai nodrošinātu pretmikrobu iedarbību.

3. solis: ultraskaņas apstrāde ar 96 urbumu plāksnes Sonicator UIP400MTP

Ultraskaņas apstrādes solis ir kritisks, lai atdalītu bioplēves no tapu vākiem, lai novērtētu dzīvotspēju. Izpildiet šīs darbības, lai iegūtu UIP400MTP sonikatoru:

1. Sagatavojiet iestatījumus:
   Katrā iedobē iepildiet svaigu 96 iedobju plati ar reģenerācijas vidi (piemēram, neitralizējošu buljonu vai svaigu augšanas vidi).
2. Pārsūtiet tapas vāku:
   Noņemiet tapas vāciņu no pretmikrobu apstrādes plāksnes.
   Izskalojiet tapas vāciņu sterilā fizioloģiskajā šķīdumā vai PBS, lai noņemtu pretmikrobu līdzekļu atlikumus.
3. Novietojiet plāksni un ultraskaņu:
   Pievienojiet tapas vāku reģenerācijas vides platei.
   Novietojiet reģenerācijas vides plāksni uz UIP400MTP sonikatora platformas, nodrošinot, ka plāksne ir centrēta un stabila.
4. Pielāgojiet ultraskaņas apstrādes parametrus:
   Iestatiet ultraskaņas apstrādes parametrus UIP400MTP (iestatījumus var pielāgot biofilmai):
   Amplitūda: 70–100%.
   Ultraskaņas apstrādes laiks: 1–3 minūtes (pielāgojiet, pamatojoties uz bioplēves izturību) cikla režīmā.
5. Sonicate:
   Sāciet ultraskaņas procesu. Ultraskaņas vibrācija novirzīs bioplēves no tapas virsmām reģenerācijas vidē.
6. Pārraugiet procesu:
   Izmantojiet pievienojamu temperatūras sensoru, lai uzraudzītu parauga temperatūru iedobēs. UIP400MTP var savienot ar laboratorijas dzesētāju dzesēšanai.
7. Apstrāde pēc ultraskaņas apstrādes:
   Nekavējoties pārnes reģenerācijas vidi (kas tagad satur atdalītas bioplēves) svaigā, sterilā platē analīzei lejup pa straumi.

A) Plate, kas satur TSB ar 2% glikozi un ko izmanto bioplēves veidošanai, šūnu reģenerācijai un
MIC un MBCB noteikšana; B) Vāks ar tapām stafilokoku biofilmu veidošanai. MIC un MBCB noteikšana; B) Vāks ar tapām stafilokoku biofilmu veidošanai.
Bioplēves šūnas, kas veidojas uz tapām, tika atdalītas ar ultraskaņu (Hielscher Ultraskaņas tehnoloģija) 5 min 96 iedobju plāksnēs, kas satur svaigu kultūras barotni šūnu atgūšanai.
(Attēls un pētījums: ©de Oliveira et al., 2016)

4. darbība: dzīvotspējas novērtējums

Plātņu un kultūru atdalītas bioplēves:

1. Veic reģenerācijas vides un plates sērijveida atšķaidīšanu uz agara, lai uzskaitītu koloniju veidojošās vienības (KVV).
   Kā alternatīvu izmanto kolorimetrisko vai uz fluorescenci balstīto dzīvotspējas testu.
2. Ieraksta rezultāti:
   Noteikt MBEC kā zemāko antimikrobiālo līdzekļu koncentrāciju, kas iznīcināja nosakāmo bioplēves dzīvotspēju.

Projektēšana, ražošana un konsultācijas – Kvalitāte ražots Vācijā

Hielscher ultrasonikatori ir labi pazīstami ar saviem augstākajiem kvalitātes un dizaina standartiem. Robustums un viegla darbība ļauj vienmērīgi integrēt mūsu ultrasonikatorus rūpnieciskajās iekārtās. Hielscher ultraskaņas apstrādātāji viegli apstrādā neapstrādātus apstākļus un prasīgu vidi.

Hielscher Ultrasonics ir ISO sertificēts uzņēmums un īpašu uzsvaru liek uz augstas veiktspējas ultrasonikatoriem, kas piedāvā vismodernākās tehnoloģijas un lietotājdraudzīgumu. Protams, Hielscher ultrasonikatori atbilst CE prasībām un atbilst UL, CSA un RoHs prasībām.

Lasiet šeit, kā UIP400MTP tiek izmantots bioplēves atdalīšanai kā parauga sagatavošanas posms ASTM E2799 protokola laikā, lai pārbaudītu dezinfekcijas līdzekļa efektivitāti pret Pseudomonas aeruginosa bioplēvi, izmantojot MBEC testu.