Ուլտրաձայնային լիզիս. բջիջների քայքայման կատարելագործման քայլ առ քայլ ուղեցույց
Ցանկանո՞ւմ եք տիրապետել բջիջների լիզիսի գիտությանը։ Այլևս փնտրելու կարիք չկա։ Այս քայլ առ քայլ ուղեցույցում մենք ձեզ կուղեկցենք բջիջների ուլտրաձայնային քայքայման գործընթացում և կապահովենք, որ բջիջների լիզիսի ձեր մեթոդը տա օպտիմալ արդյունքներ։ Անկախ նրանից՝ փորձառու հետազոտող եք, թե սկսնակ գիտնական, այս ուղեցույցը ձեզ կտա գիտելիքներ և հմտություններ՝ զոնդային տիպի սոնիկատոր օգտագործելու և բջիջների հաջող քայքայում ու լիզիս իրականացնելու համար։
Ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորները բջիջների քայքայման հզոր սարքեր են
Սոնիկացիան՝ զոնդային տիպի սոնիկատորով ուլտրաձայնային մշակման մեթոդը, լայնորեն կիրառվում է բջիջները բացելու համար, ինչը նմուշների պատրաստման կարևոր փուլ է բազմաթիվ կենսաբանական, կենսաքիմիական և վերլուծական փորձերում ու հետազոտություններում։ Սոնիկացիայի արդյունավետությունը կախված է տարբեր գործոններից, այդ թվում՝ ամպլիտուդից, հզորությունից, սոնիկացիայի տևողությունից և նմուշի պատրաստումից։
Հասկանալով սոնիկացիայի աշխատանքի սկզբունքները և կիրառելով ճիշտ մեթոդներ՝ կարող եք առավելագույնի հասցնել բջիջների քայքայումը՝ միաժամանակ նվազագույնի հասցնելով զգայուն մոլեկուլների վնասումը։
Այս ուղեցույցի ամբողջ ընթացքում մենք կտրամադրենք մանրամասն հրահանգներ և գործնական խորհուրդներ՝ օգնելու ձեզ հեշտությամբ իրականացնել սոնիկացիայի գործընթացը։ Սա ներառում է համապատասխան սոնիկատորի և ուլտրաձայնային պարամետրերի ընտրությունը՝ բջիջների որոշակի տեսակների համար պայմաններն օպտիմալացնելու նպատակով։
UP200St սոնիկատոր՝ բջիջների լիզիսի և ներբջջային մոլեկուլների արդյունահանման համար։
Բջիջների լիզիսի նշանակությունը գիտական հետազոտություններում
Բջիջների քայքայումը կամ լիզիսը հիմնական մեթոդներից մեկն է, որն օգտագործվում է գիտական հետազոտությունների տարբեր ոլորտներում, այդ թվում՝ մոլեկուլային կենսաբանության, բջջային կենսաբանության, կենսաքիմիայի և կենսագիտության մեջ։ Բջիջների քայքայման գործընթացը ներառում է բջջաթաղանթի կամ բջջապատի պատռումը՝ ներբջջային մոլեկուլներն ազատելու համար։ Լիզիսի թիրախային մոլեկուլները կարող են լինել սպիտակուցներ, նուկլեինաթթուներ և բջջային այլ բաղադրիչներ։ Սա նշանակում է, որ լիզիսը գիտնականներին հնարավորություն է տալիս բջիջներից արդյունահանել ներքին բաղադրիչներն ու կենսամոլեկուլները՝ վերլուծության համար։
Բջիջների լիզիսի սկզբունքների ըմբռնումը կարևոր է ճշգրիտ և վերարտադրելի արդյունքներ ստանալու համար։ Արդյունավետորեն բացելով բջիջները՝ հետազոտողները կարող են հասանելիություն ստանալ այն ներբջջային մոլեկուլներին, որոնք անհրաժեշտ է ուսումնասիրել, օրինակ՝ ֆերմենտներին, DNA, RNA մոլեկուլներին և սպիտակուցներին։ Բջիջների տարբեր տեսակներ պահանջում են լիզիսի տարբեր մեթոդներ, իսկ սոնիկացիան դարձել է տարածված մեթոդ՝ իր բազմակողմանիության և արդյունավետության շնորհիվ։
Սոնիկացիան ֆիզիկական մեթոդ է, որն օգտագործում է բարձր հաճախականության ձայնային ալիքներ՝ բջջաթաղանթները քայքայելու համար։ Քանի որ սոնիկացիայի գործընթացի ինտենսիվությունը կարելի է ճշգրիտ կարգավորել, սոնիկատորները օգտակար են փափուկ և ամուր բջջապատերը պատռելու և ներբջջային բաղադրիչներն արդյունահանելու համար։ Օպտիմալացնելով սոնիկացիայի պայմանները՝ հետազոտողները կարող են հասնել բջիջների արդյունավետ լիզիսի՝ միաժամանակ պահպանելով արդյունահանված մոլեկուլների ամբողջականությունը։
Սոնիկացիայի սկզբունքների ըմբռնումը
Նախքան սոնիկացիայի գործընթացն սկսելը՝ խիստ կարևոր է պատշաճ կերպով պատրաստել բջջային լիզատը։ Ահա քայլ առ քայլ ուղեցույց, որը կօգնի ձեզ սկսել.
- Բջջային կուլտուրայի պատրաստում. Սկսեք ձեզ հետաքրքրող բջիջների աճեցումից՝ համապատասխան սննդային միջավայրերում և պայմաններում։ Շարունակելուց առաջ համոզվեք, որ բջիջներն առողջ են և գտնվում են աճի ցանկալի փուլում։
- Բջիջների հավաքում. Երբ բջիջները հասնեն աճեցման մակերեսի ծածկման ցանկալի աստիճանին կամ աճի ցանկալի փուլին, հավաքեք դրանք համապատասխան մեթոդով, օրինակ՝ տրիպսինացմամբ կամ քերելով։ Բջիջները տեղափոխեք ստերիլ ցենտրիֆուգային փորձանոթի մեջ և ցենտրիֆուգմամբ նստեցրեք դրանք։
- Բջիջների լվացում. Հեռացրեք սննդային միջավայրը և լվացեք բջջային նստվածքը համապատասխան բուֆերային լուծույթով, օրինակ՝ ֆոսֆատային բուֆերային աղային լուծույթով (PBS)։ Այս քայլն օգնում է հեռացնել սննդային միջավայրի մնացորդներն ու աղտոտիչները։
- Բջիջների վերասուսպենզավորում. Բջջային նստվածքը վերասուսպենզավորեք ձեր փորձին համապատասխան լիզիսի բուֆերում։ Լիզիսի բուֆերը պետք է պարունակի դետերգենտներ կամ ֆերմենտներ՝ բջջաթաղանթը քայքայելու և ներբջջային պարունակությունն ազատելու համար։
- Բջիջների լիզիս. Բջջային սուսպենզիան հոմոգենացրեք զոնդային տիպի սոնիկատորով՝ ամբողջական լիզիս ապահովելու համար։ Կախված բջիջների տեսակից և փորձի պահանջներից՝ լիզիսն ուժեղացնելու համար կարող է անհրաժեշտ լինել բջջային լիզատն ինկուբացնել որոշակի ջերմաստիճաններում կամ ավելացնել լրացուցիչ ռեագենտներ։
- Բջջային բեկորների հեռացում. Բջջային լիզատը ցենտրիֆուգեք բարձր արագությամբ՝ բջջային բեկորները, օրգանելները և այլ չլուծվող նյութերը նստեցնելու համար։ Ցանկալի ներբջջային բաղադրիչները պարունակող վերնստվածքային հեղուկը տեղափոխեք նոր փորձանոթի մեջ։
- Սպիտակուցի քանակական որոշում. Չափեք բջջային լիզատում սպիտակուցի կոնցենտրացիան համապատասխան մեթոդով, օրինակ՝ Bradford կամ BCA թեստով։ Այս քայլն օգնում է որոշել հետագա կիրառությունների համար համապատասխան նոսրացումները։
- Նմուշի բաժանում ալիքվոտների. Կախված ձեր փորձի պլանից՝ բջջային լիզատը բաժանեք համապատասխան ծավալներով ալիքվոտների և դրանք պահեք համապատասխան ջերմաստիճանում՝ հետագա օգտագործման համար։
Հետևելով այս քայլերին՝ դուք ճիշտ եք պատրաստում բջջային լիզատը և այն պատրաստ դարձնում ուլտրաձայնային մշակման համար՝ օպտիմալ արդյունքների հասնելու նպատակով։
Բջջային լիզատի պատրաստման քայլ առ քայլ ուղեցույց
Այժմ, երբ ծանոթացել եք բջջային լիզատի պատրաստման ամբողջ գործընթացին, ցանկանում ենք կենտրոնանալ ուլտրաձայնային մշակման փուլի վրա։ Ուլտրաձայնային մշակման պայմանները կարևոր են արդյունավետ բջջային լիզիս ապահովելու համար։ Ուլտրաձայնային մշակումը օպտիմալացնելիս հաշվի առնվող հիմնական պարամետրերն են տևողությունը, հզորությունը և նմուշի պատրաստումը։ Ահա մի քանի ցուցում, որոնք կօգնեն ձեզ օպտիմալացնել այս պարամետրերը.
- Տևողություն. Ուլտրաձայնային մշակման տևողությունը կախված է բջիջների տեսակից և բջիջների քայքայման ցանկալի աստիճանից։ Սկսեք ավելի կարճ տևողություններից և անհրաժեշտության դեպքում աստիճանաբար ավելացրեք դրանք։ Խուսափեք չափազանց երկարատև ուլտրաձայնային մշակումից, քանի որ այն կարող է հանգեցնել ավելորդ ջերմագոյացման և զգայուն մոլեկուլների դենատուրացման։
- Հզորություն. Ուլտրաձայնային մշակման սարքի հզորության կարգավորումը պետք է օպտիմալացնել՝ ելնելով բջիջների տեսակից և բջիջների քայքայման ցանկալի աստիճանից։ Հզորության ավելի բարձր կարգավորումները կարող են ապահովել ավելի արդյունավետ բջջային լիզիս, սակայն կարող են նաև առաջացնել ավելորդ ջերմագոյացում։ Անհրաժեշտ է հավասարակշռել բջիջների քայքայումը և նմուշի ամբողջականության պահպանումը։
- Նմուշի պատրաստում. Նմուշի պատշաճ պատրաստումը վճռորոշ է արդյունավետ ուլտրաձայնային մշակման համար։ Համոզվեք, որ բջջային լիզատը չի պարունակում բեկորներ և չլուծվող նյութեր, որոնք կարող են նվազեցնել ուլտրաձայնային մշակման արդյունավետությունը։ Անհրաժեշտության դեպքում լիզատը ցենտրիֆուգեք նախքան ուլտրաձայնային մշակումը։
- Ջերմաստիճանի վերահսկում. Ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում ջերմություն է առաջանում, որը կարող է վնասել զգայուն մոլեկուլները։ Ջերմային վնասը նվազագույնի հասցնելու համար դիտարկեք ջերմաստիճանի վերահսկման հնարավորությամբ ուլտրաձայնային մշակման սարքի օգտագործումը կամ մշակումն իրականացրեք սառը սենյակում կամ սառույցի վրա։
- Սոնիկատորի զոնդի դիրքավորում. Սոնիկատորի զոնդի ճիշտ դիրքավորումը վճռորոշ է արդյունավետ ուլտրաձայնային մշակման համար։ Զոնդը պետք է ընկղմված լինի բջջային լիզատի մեջ, սակայն չդիպչի տարայի պատերին՝ ավելորդ տատանումներից և նմուշի տարայի հնարավոր վնասումից խուսափելու համար։
Այս պարամետրերը մանրակրկիտ հաշվի առնելով և ուլտրաձայնային մշակման պայմաններն օպտիմալացնելով՝ դուք ապահովում եք արդյունավետ բջջային լիզիս՝ պահպանելով արդյունահանված մոլեկուլների ամբողջականությունը։
Ուլտրաձայնային հոմոգենիզատոր UP400ST կիրառվում է բջիջների լուծելիացման, լիզիսի և սպիտակուցների արդյունահանման համար
Ուլտրաձայնային մշակման պայմանների օպտիմալացում՝ արդյունավետ բջջային լիզիսի համար
Չնայած առաջարկվող ցուցումներին հետևելուն՝ հետազոտողները կարող են դժվարությունների հանդիպել բջջային լիզիսի և ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում։ Այս դժվարությունները հասկանալը և խնդիրների վերացման ռազմավարություններ կիրառելը կարող են օգնել հաղթահարել դրանք։ Ահա մի քանի տարածված դժվարություն և դրանց լուծման համապատասխան խորհուրդներ.
- Անբավարար բջջային լիզիս. Եթե բջջային լիզատում չի ապահովվում բջիջների քայքայման ցանկալի աստիճանը, դիտարկեք ուլտրաձայնային մշակման տևողությունը կամ հզորությունը մեծացնելու հնարավորությունը։ Բացի այդ, համոզվեք, որ բջջային լիզատը պատշաճ կերպով պատրաստված է և չի պարունակում բեկորներ կամ չլուծվող նյութեր, որոնք կարող են նվազեցնել ուլտրաձայնային մշակման արդյունավետությունը։
- Ավելորդ փրփրագոյացում. Ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում ավելորդ փրփուրը կարող է խոչընդոտել արդյունավետ բջջային լիզիսին։ Փրփրագոյացումը նվազագույնի հասցնելու համար օգտագործեք դետերգենտի համապատասխան կոնցենտրացիայով լիզիսի բուֆեր և ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում խուսափեք չափազանց ինտենսիվ խառնումից կամ թափահարումից։
- Նմուշի տաքացում. Ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում ջերմության չափազանց մեծ արտազատումը կարող է դենատուրացնել զգայուն մոլեկուլները և խախտել բջջային լիզատի ամբողջականությունը։ Նմուշի տաքացումը նվազագույնի հասցնելու համար դիտարկեք ջերմաստիճանի կարգավորման հնարավորությամբ սոնիկատորի օգտագործումը կամ ուլտրաձայնային մշակումն իրականացրեք սառը սենյակում կամ սառույցի վրա։
- Նմուշի աղտոտում. Բջջային լիզիսի և ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում կարող է առաջանալ աղտոտում՝ հանգեցնելով ոչ ճշգրիտ արդյունքների։ Աղտոտումը նվազագույնի հասցնելու համար համոզվեք, որ օգտագործվող բոլոր սարքավորումներն ու ռեագենտները ստերիլ են և զերծ են աղտոտիչներից։ Նմուշների պատրաստման և դրանց հետ աշխատանքի ընթացքում կիրառեք պատշաճ ասեպտիկ մեթոդներ։
Տեղյակ լինելով այս դժվարություններին և կիրառելով խնդիրների լուծման համապատասխան ռազմավարություններ՝ կարող եք հաղթահարել խոչընդոտները և զոնդային սոնիկատորի միջոցով հաջողությամբ իրականացնել բջջային լիզիսը։
Բջջային լիզիսի տարածված դժվարությունները և խնդիրների լուծման խորհուրդներ
Բջջային լիզատը հաջողությամբ ուլտրաձայնով մշակելուց հետո անհրաժեշտ է պատշաճ կերպով աշխատել մշակված նմուշների հետ՝ արդյունահանված մոլեկուլների ամբողջականությունը պահպանելու համար։ Ստորև ներկայացված են ուլտրաձայնով մշակված նմուշների հետ աշխատելու լավագույն գործելակերպերից մի քանիսը.
- Խուսափեք սառեցման և հալեցման կրկնվող ցիկլերից. Սառեցման և հալեցման ցիկլերը կարող են հանգեցնել զգայուն մոլեկուլների քայքայման։ Լավագույնն է ուլտրաձայնով մշակված նմուշները բաժանել համապատասխան ծավալներով չափաբաժինների և պահել համապատասխան ջերմաստիճանում՝ սառեցման և հալեցման կրկնվող ցիկլերից խուսափելու համար։
- Պատշաճ պահպանում. Ուլտրաձայնով մշակված նմուշները պահեք համապատասխան ջերմաստիճանում և անհրաժեշտության դեպքում պաշտպանեք լույսից։ Հետևեք տվյալ մոլեկուլների կամ նախատեսված հետագա կիրառությունների համար առաջարկվող պահպանման պայմաններին։
- Պիտակավորում և փաստաթղթավորում. Ուլտրաձայնով մշակված նմուշները պատշաճ կերպով պիտակավորեք՝ նշելով համապատասխան տեղեկությունները, այդ թվում՝ ամսաթիվը, նմուշի անվանումը և ուլտրաձայնային մշակման պայմանները։ Մանրամասն փաստաթղթավորեք ուլտրաձայնային մշակման ընթացքը, ինչպես նաև կատարված բոլոր փոփոխություններն ու խնդիրների լուծման քայլերը։ Եթե օգտագործում եք Hielscher թվային սոնիկատոր, ուլտրաձայնային մշակման տվյալները, օրինակ՝ ամսաթիվը, ժամը, ամպլիտուդը, հզորությունը և ցիկլերը, կարող եք գտնել ներկառուցված SD քարտի վրա։ Ուլտրաձայնային մշակման տվյալները ձեր նմուշի հետ համադրելու համար անպայման նմուշի պիտակի վրա նշեք ամսաթիվը և ժամը։
- Խուսափեք խաչաձև աղտոտումից. Նմուշների միջև խաչաձև աղտոտումը կանխելու համար ուլտրաձայնով մշակված նմուշների հետ աշխատելիս օգտագործեք առանձին փորձանոթներ, ծայրակալներ և այլ լաբորատոր պարագաներ։ Ուլտրաձայնային զոնդը պատշաճ կերպով մաքրեք սպիրտով։ Անհրաժեշտության դեպքում կարող եք ուլտրաձայնային զոնդը ստերիլացնել ավտոկլավում։ Մաքրեք և ստերիլացրեք նմուշների հետ շփվող բոլոր սարքավորումները՝ աղտոտման վտանգը նվազագույնի հասցնելու համար։
Հետևելով լավագույն գործելակերպի այս խորհուրդներին՝ ապահովում եք ուլտրաձայնով մշակված նմուշների ամբողջականությունն ու հետագա կիրառությունների համար պիտանիությունը։
Ինչպե՞ս է ուլտրաձայնային մշակումը համեմատվում լիզիսի այլ մեթոդների հետ
Ուլտրաձայնային մշակումը՝ բջջաթաղանթները քայքայելու համար բարձր հաճախականության ձայնային ալիքներ օգտագործող մեթոդը, մի շարք առավելություններ ունի բջջային լիզիսի այլ մեթոդների համեմատ։ Այն հատկապես արդյունավետ է ամուր բջջապատերը քայքայելու և ներբջջային բաղադրիչներն արդյունահանելու համար։ Օպտիմալացնելով ուլտրաձայնային մշակման պայմանները՝ հետազոտողները հասնում են արդյունավետ բջջային լիզիսի և ստանում թիրախային մոլեկուլների բարձր ելքեր։ Միաժամանակ պահպանվում է արդյունահանված մոլեկուլների ամբողջականությունը՝ ապահովելով նմուշի գերազանց որակ հետագա վերլուծության համար։ Ի տարբերություն դրա՝ այլ մեթոդներ, օրինակ՝ մեխանիկական քայքայումը կամ քիմիական լիզիսը, կարող են այդքան մեղմ չլինել և հանգեցնել թիրախային մոլեկուլների քայքայման։
Ուլտրաձայնային մշակումը նաև ապահովում է քայքայման ինտենսիվության և տևողության նկատմամբ վերահսկման բարձր աստիճան՝ այն դարձնելով բազմակողմանի և արդյունավետ մեթոդ տարբեր տեսակի բջիջների և մոլեկուլների համար։ Ուստի գիտական հետազոտություններում ուլտրաձայնային մշակումն ավելի ու ավելի է նախընտրվում իր արդյունավետության և արդյունահանված բաղադրիչների որակը պահպանելու ունակության շնորհիվ։
UIP400MTP թիթեղային սոնիկատոր 96 հորիկով թիթեղներում բջիջների քայքայման համար՝ նմուշների մշակման բարձր արտադրողականությամբ
Բարձր արդյունավետությամբ սոնիկատորներ լիզիսի և բջիջների քայքայման համար
Hielscher Ultrasonics ընկերությունն առաջատար դիրք է զբաղեցնում նորագույն զոնդային սոնիկատորների նախագծման, արտադրության և մատակարարման ոլորտում։ Այս սարքերը հարմարեցված են բազմազան կիրառությունների, ինչպիսիք են նմուշների պատրաստումը, բջիջների լիզիսը, DNA մոլեկուլների ֆրագմենտացումը և բջիջների լուծելիացումը։ Ընդգրկուն տեսականին ներառում է զոնդային սոնիկատորներ, 96 հորիկով թիթեղների և միկրոթիթեղների համար նախատեսված՝ նմուշների մշակման բարձր արտադրողականությամբ սոնիկատորներ, ինչպես նաև cuphorns տեսակի ուլտրաձայնային սարքեր։ Աչքի ընկնելով ուլտրաձայնային մշակման պարամետրերի ճշգրիտ կառավարմամբ՝ Hielscher սոնիկատորներն ապահովում են անզուգական հարմարվողականություն տարբեր բջիջների, հյուսվածքների և մոլեկուլների առանձնահատուկ պահանջներին։ Մշակման հուսալիությունն ապահովում է փորձերի կայուն վերարտադրելիությունը՝ նպաստելով յուրաքանչյուր կրկնության ժամանակ բարձրորակ արդյունքների ստացմանը։
- բարձր արդյունավետություն
- նորագույն տեխնոլոգիա
- հուսալիություն և ամրություն
- գործընթացի կարգավորելի, ճշգրիտ կառավարում
- պարբերական և հոսքային մշակում
- ցանկացած ծավալի համար
- խելացի ծրագրային ապահովում
- խելացի գործառույթներ (օրինակ՝ ծրագրավորման հնարավորություն, տվյալների գրանցում, հեռավար կառավարում)
- հեշտ և անվտանգ շահագործում
- տեխնիկական սպասարկման փոքր պահանջ
- CIP (մաքրում տեղում)
Նախագծում, արտադրություն և խորհրդատվություն – Գերմանիայում ստեղծված որակ
Hielscher ուլտրաձայնային մշակման սարքերը հայտնի են իրենց որակի և նախագծման ամենաբարձր չափանիշներով։ Ամրությունն ու շահագործման դյուրինությունը թույլ են տալիս մեր ուլտրաձայնային մշակման սարքերը սահուն ինտեգրել արդյունաբերական օբյեկտներում։ Hielscher ուլտրաձայնային մշակման սարքերը հեշտությամբ դիմակայում են խիստ պայմաններին և պահանջկոտ միջավայրերին։
Hielscher Ultrasonics ընկերությունն ունի ISO հավաստագրում և հատուկ ուշադրություն է դարձնում նորագույն տեխնոլոգիայով ու օգտագործման դյուրինությամբ առանձնացող՝ բարձր արտադրողականությամբ ուլտրաձայնային մշակման սարքերին։ Իհարկե, Hielscher ուլտրաձայնային մշակման սարքերը համապատասխանում են CE նորմերին և բավարարում են UL, CSA և RoHs պահանջները։
Ստորև բերված աղյուսակը պատկերացում է տալիս մեր լաբորատոր չափերի ուլտրաձայնային մշակման սարքերի մոտավոր մշակման կարողության մասին.
| Առաջարկվող սարքեր | Մեկ խմբաքանակի ծավալը | Հոսքի ծավալային արագությունը |
|---|---|---|
| UIP400MTP ուլտրաձայնային մշակման սարք՝ 96 հորիկով թիթեղների համար | բազմահորիկ / միկրոտիտրային թիթեղներ | n.a. |
| Ուլտրաձայնային CupHorn | CupHorn՝ սրվակների կամ լաբորատոր բաժակի համար | n.a. |
| GDmini2 | ուլտրաձայնային միկրոհոսքային ռեակտոր | n.a. |
| VialTweeter | 0,5–1,5mL | n.a. |
| UP100H | 1–500mL | 10–200mL/min |
| UP200Ht, UP200St | 10–1000mL | 20–200mL/min |
| UP400St | 10–2000mL | 20–400mL/min |
| UIP500hdT | 100–5000mL | 0,1–4L/min |
| Ուլտրաձայնային մաղաթափահարիչ | n.a. | n.a. |
Կապվե՛ք մեզ հետ։ / Հարցրե՛ք մեզ։
Բջիջների լիզիսի և ուլտրաձայնային մշակման կիրառությունները տարբեր ոլորտներում
Բջիջների հաջող լիզիսին հասնելու համար անհրաժեշտ է ունենալ ճիշտ գործիքներ և սարքավորումներ։ Ահա բջիջների լիզիսի և ուլտրաձայնային մշակման ժամանակ սովորաբար օգտագործվող հիմնական գործիքներից մի քանիսը.
- Ընտրե՛ք ուլտրաձայնային մշակման ճիշտ սարքը. Ուլտրաձայնային մշակման սարքերը կամ ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորները ուլտրաձայնային մշակման միջոցով բջիջների լիզիսի համար օգտագործվող հիմնական գործիքներն են։ Համոզվեք, որ օգտագործում եք ճշգրիտ կառավարվող զոնդային ուլտրաձայնային մշակման սարք, քանի որ արդյունքները կարող են հուսալիորեն վերարտադրվել։ Խուսափեք ուլտրաձայնային լոգարաններ օգտագործելուց լիզիսի, էքստրակցիայի և DNA-ի ֆրագմենտացման համար։ Ուլտրաձայնային լոգարանները հիմնականում նախատեսված են մաքրման համար։ Դրանք չեն ապահովում վերարտադրելի արդյունքներ։ Հաշվի առնելով այս հանգամանքները՝ ընտրեք սարք, որն ապահովում է ձեր կոնկրետ փորձի համար համապատասխան հզորության կարգավորումներ, զոնդերի չափերը փոխելու հնարավորություն և ջերմաստիճանի կառավարման հնարավորություններ։ Նմուշի լուսավորության և տվյալների ավտոմատ գրանցման նման գործառույթները հեշտացնում են ձեր աշխատանքը։
- Ցենտրիֆուգներ. Ցենտրիֆուգներն օգտագործվում են բջիջները նստեցնելու, բջջային մնացորդները հեռացնելու և բջջային բաղադրիչները բջիջների լիզիսի ընթացքում առանձնացնելու համար։ Ընտրեք համապատասխան տեսակի ռոտորներով և պտտման արագություններով ցենտրիֆուգներ՝ ձեր փորձի պահանջները բավարարելու համար։
- Պիպետներ և պիպետների ծայրակալներ. Ճիշտ և ճշգրիտ պիպետավորումը վճռորոշ նշանակություն ունի բջիջների լիզիսի և նմուշների հետ աշխատանքի ընթացքում։ Համոզվեք, որ ունեք ձեր փորձում օգտագործվող ծավալներին համապատասխան պիպետների և ծայրակալների տեսականի։
- Լիզիսի բուֆերներ. Ընտրեք ձեր կոնկրետ բջջատեսակների և փորձարարական կիրառությունների համար օպտիմալացված լիզիսի բուֆերներ։ Դիտարկեք դետերգենտներ կամ ֆերմենտներ պարունակող բուֆերների օգտագործումը՝ բջջաթաղանթներն արդյունավետորեն քայքայելու համար։
- Նմուշների տարաներ. Ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում բջջային լիզատը պահելու համար օգտագործեք նմուշների համապատասխան տարաներ, օրինակ՝ միկրոցենտրիֆուգային փորձանոթներ կամ սրվակներ։ Համոզվեք, որ տարաները համատեղելի են ուլտրաձայնային մշակման հետ և չեն խոչընդոտում ուլտրաձայնային ալիքներին։
- Ջերմաստիճանի կառավարման սարքավորումներ. Եթե աշխատում եք ջերմաստիճանի նկատմամբ զգայուն նմուշների հետ, նմուշների ամբողջականությունը պահպանելու համար դիտարկեք ջերմաստիճանի վերահսկման ներկառուցված հնարավորություններով ուլտրաձայնային մշակման սարքի օգտագործումը կամ ներդրում կատարեք ջերմաստիճանի կարգավորմամբ ջրային բաղնիքների կամ սառեցնող սարքերի ձեռքբերման մեջ։
Ձեր տրամադրության տակ ունենալով համապատասխան գործիքներն ու սարքավորումները՝ կարող եք ապահովել բջիջների հաջող լիզիս և ձեր փորձերում հասնել օպտիմալ արդյունքների։
Ուլտրաձայնային լիզիսը և էքստրակցիան կարող են իրականացվել նաև որպես հոսքային գործընթաց՝ օգտագործելով ուլտրաձայնային հոսքային խցիկ։
Գրականություն / Հղումներ
- Giricz Z., Varga Z.V., Koncsos G., Nagy C.T., Görbe A., Mentzer R.M. Jr, Gottlieb R.A., Ferdinandy P. (2017): Autophagosome formation is required for cardioprotection by chloramphenicol. Life Science Oct 2017. 11-16.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics ընկերությունն արտադրում է բարձր արդյունավետությամբ ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ՝ լաբորատոր չափերից մինչև արդյունաբերական չափեր։