Liza stanica kvasca u mikropločama sonikacijom visokog intenziteta
Mikrobiolozi i istraživači u području znanosti o životu koji rade s kvascima Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris / Komagataella phaffii, kao i s drugim sustavima kvasaca, poznaju taj izazov: stanice kvasca otporne su, reproducibilnu lizu može biti teško postići, a ručno razaranje uzoraka brzo postaje usko grlo kada je potrebno provesti probir velikog broja sojeva, klonova, uvjeta uzgoja ili ekspresijskih konstrukata.
Liza kvasca uz velik kapacitet obrade uzoraka za mikrobiologiju, molekularnu biologiju i analitiku proteina
Hielscher sonikatori za mikroploče, poput UIP400MTP (400 W) i UIP550MTP (550 W), pružaju rješenje velikog kapaciteta obrade uzoraka za mehaničku lizu stanica kvasca izravno u mikropločama. Umjesto pojedinačne obrade uzoraka sondom, cijele mikroploče mogu se sonicirati u ujednačenim uvjetima. Time ultrazvučna liza kvasca postaje brža, reproducibilnija i jednostavnija za uključivanje u suvremene radne postupke u mikrobiologiji, ekspresiji proteina, probiru enzima i omici.
Bilo da trebate osloboditi rekombinantne proteine iz P. pastoris, pripremiti lizate kvasca za enzimske testove, razoriti stanice S. cerevisiae za analizu proteina ili paralelno provesti probir desetaka klonova kvasca, Hielscher sonikatori za mikroploče omogućuju snažno razaranje stanica temeljeno na kavitaciji uz preciznu kontrolu procesa.
Trebate reproducibilnu lizu stanica kvasaca S. cerevisiae, P. pastoris, ili drugih sojeva kvasca u mikropločama? Recite nam koji format ploče, volumen uzorka, gustoću stanica i ciljni analit upotrebljavate. Pomoći ćemo vam odrediti prikladne parametre sonikacije za vaš radni postupak s UIP400MTP ili UIP550MTP.
Zašto stanice kvasca zahtijevaju učinkovitu mehaničku lizu
Stanice kvasca teže je lizirati nego mnoge bakterijske stanice ili stanice sisavaca jer ih štiti kruta stanična stijenka sastavljena uglavnom od polisaharida, glukana, manoproteina i hitina. Ta stanična stijenka pruža mehaničku stabilnost, ali ujedno ograničava oslobađanje unutarstaničnih proteina, nukleinskih kiselina, metabolita i enzima.
Uobičajene metode lize kvasca uključuju mehaničko razaranje kuglicama, enzimsku razgradnju, cikluse zamrzavanja i odmrzavanja, kemijsku lizu i sonikaciju sondom. Te metode mogu biti učinkovite, ali imaju i ograničenja. Mehaničko razaranje kuglicama može unijeti ostatke i uzrokovati zagrijavanje, enzimska razgradnja može povećati troškove i varijabilnost, a sonikacija pojedinačnih uzoraka sondom zahtijeva mnogo vremena kada treba obraditi velik broj uzoraka.
Fokusirana ultrazvučna kavitacija visokog intenziteta prevladava ta ograničenja djelovanjem snažnih mehaničkih smičnih sila, fluktuacija tlaka i mikrostrujanja na suspenziju kvasca. Rezultat je brzo razaranje staničnih stijenki i membrana, poboljšano oslobađanje unutarstaničnog sadržaja i izrazito reproducibilna priprema uzoraka u pločama.
Sonikacija mikroploča za paralelnu pripremu uzoraka kvasca
Hielscher UIP400MTP i UIP550MTP osmišljeni su za ujednačenu sonikaciju mikroploča, ploča s više jažica, PCR ploča i prikladnih stalaka za uzorke. Za razliku od sonikacije sondom, uzorke nije potrebno obrađivati pojedinačno. Cijela ploča izlaže se kontroliranoj ultrazvučnoj energiji, zbog čega je taj radni postupak izrazito prikladan za paralelnu obradu uzoraka.
To je osobito korisno za:
- Probir mutanata vrste S. cerevisiae ili ekspresijskih sojeva
- Lizu klonova P. pastoris / K. phaffii nakon ekspresije rekombinantnih proteina
- Priprema lizata kvasca za enzimske testove
- Ekstrakcija proteina za SDS-PAGE, Western blot, ELISA, LC-MS/MS ili ispitivanje aktivnosti
- Oslobađanje unutarstaničnih metabolita za metabolomiku
- Priprema uzoraka DNA i RNA nakon prikladnog naknadnog pročišćavanja
- Optimizacija pufera za lizu, dodataka i uvjeta ekstrakcije uz velik kapacitet obrade uzoraka
Kako ultrazvučna kavitacija razara stanice kvasca
Tijekom sonikacije fokusirani ultrazvuk velike snage stvara izmjenične cikluse kompresije i razrjeđivanja u tekućem uzorku. Pri dovoljnom intenzitetu te fluktuacije tlaka stvaraju akustičnu kavitaciju. Kavitacijski mjehurići nastaju, osciliraju i urušavaju se, stvarajući lokalizirane smične sile, mikromlazove, turbulenciju i snažne gradijente tlaka.
U suspenzijama kvasca ti mehanički učinci oslabljuju i razaraju staničnu stijenku i staničnu membranu. Unutarstanični proteini, enzimi, nukleinske kiseline i metaboliti oslobađaju se u pufer za lizu. Budući da je postupak mehanički, može se primjenjivati s mnogim različitim puferskim sustavima te kombinirati s inhibitorima proteaza, reducirajućim sredstvima, deterdžentima, solima ili blagom enzimskom predobradom.
Opći protokol: liza stanica kvasca u mikropločama
Sljedeći protokol pruža praktično polazište za lizu kvasca pomoću sonikatora za mikroploče Hielscher UIP400MTP ili UIP550MTP. Parametre treba optimizirati prema soju kvasca, gustoći stanica, ciljnoj molekuli, sastavu pufera, vrsti ploče i naknadnom testu.
1. Prikupite i isperite stanice kvasca
Uzgajajte Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Debaryomyces ili neki drugi soj kvasca u željenim uvjetima uzgoja. Prikupite stanice centrifugiranjem i uklonite hranjivu podlogu. Isperite talog hladnom destiliranom vodom, PBS-om ili odabranim puferom za lizu kako biste uklonili preostale sastojke podloge koji mogu ometati naknadnu analizu.
Za ekstrakciju proteina održavajte uzorke hladnima i radite brzo. Ako proteaze predstavljaju problem, prethodno ohladite sve pufere i potrošni materijal.
2. Resuspendirajte stanični talog
Resuspendirajte talog kvasca u prikladnom hladnom puferu za lizu. Za učinkovito oslobađanje proteina velika gustoća stanica često je prednost. Kao polazište upotrijebite približno 10–20% w/v mokrog staničnog taloga ili gustu suspenziju koja odgovara OD600 > 10, ovisno o testu.
Tipičan pufer za lizu kvasca radi izdvajanja proteina može sadržavati:
- puferski sustav kao što su Tris-HCl, fosfatni pufer ili HEPES
- sol kao što su NaCl ili KCl
- smjesu inhibitora proteaza
- neobavezno reducirajuće sredstvo kao što su DTT ili β-merkaptoetanol
- neobavezni deterdžent kao što su Triton X-100, NP-40, SDS ili CHAPS, ovisno o kompatibilnosti s naknadnim postupcima
- neobavezne inhibitore fosfataza za istraživanja fosforilacije
Za sojeve kvasca koji se teško liziraju ili za vrlo blagu ekstrakciju proteina prije sonikacije može se primijeniti kratka predobrada enzimom Zymolyase, Lyticase ili drugim enzimom koji razgrađuje staničnu stijenku. Ta enzimska predobrada nije obavezna, ali može poboljšati učinkovitost lize ili smanjiti potreban intenzitet ultrazvuka.
3. Prenesite uzorke u prikladnu mikroploču
Raspodijelite suspenziju kvasca u mikroploču prikladnu za sonikaciju. Često se prednost daje pločama sa zaobljenim dnom jer poboljšavaju prikupljanje uzorka i smanjuju mrtve zone. Upotrijebite jednake volumene uzoraka u svim jažicama kako biste poboljšali ponovljivost.
Zatvorite ploču prikladnim brtvenim pokrovom ili folijom kako biste spriječili isparavanje, stvaranje aerosola i unakrsnu kontaminaciju. Provjerite je li brtveni materijal kompatibilan s odabranom temperaturom i uvjetima sonikacije.
Tipični radni volumeni ovise o formatu ploče i primjeni. Uobičajeni formati uključuju ploče s 96 jažica, ploče s dubokim jažicama, PCR ploče ili prikladne stalke za epruvete.
4. Pripremite hlađenje
Liza kvasca zahtijeva visok intenzitet ultrazvuka, a mehaničko razaranje stvara toplinu. Stoga je kontrola temperature ključna, osobito za analizu proteina, enzima, RNA ili fosforilacije.
Primijenite odgovarajuću strategiju hlađenja, kao što su:
- prethodno ohlađen pufer za lizu
- prethodno ohlađene mikroploče
- stanke za hlađenje između intervala sonikacije
- vanjsko hlađenje platforme za sonikaciju, gdje je primjenjivo
Cilj je održavati uzorak dovoljno hladnim kako bi se spriječile denaturacija proteina, inaktivacija enzima, razgradnja RNA i varijabilnost uzoraka uzrokovana toplinom.
5. Sonicirajte suspenziju kvasca
Stavite zatvorenu ploču u sonikator za mikroploče Hielscher UIP400MTP ili UIP550MTP i odaberite program pulsne sonikacije. Pulsni rad preporučuje se jer omogućuje mehaničko razaranje tijekom faza uključenog ultrazvuka (ON) i odvođenje topline tijekom faza isključenog ultrazvuka (OFF).
Kao početne postavke za lizu stanica kvasca:
| Parametar | Preporučeni početni raspon | Svrha |
|---|---|---|
| Amplituda | 60–100% | Visok intenzitet kavitacije za otporne stanice kvasca |
| Pulsni način rada | 10–30 sec uključeno / 30–60 sec isključeno | Učinkovita liza uz kontrolirano nakupljanje topline |
| Ukupno vrijeme uključenog ultrazvuka | 5–15 min | Prilagodite prema soju, gustoći i ciljnoj molekuli |
| Temperatura | Održavajte uzorke hladnima | Zaštita proteina, enzima, RNA i metabolita |
| Brtvljenje ploče | Preporučeno | Sprječava isparavanje, stvaranje aerosola i križnu kontaminaciju |
Za vrlo otporne suspenzije kvasca, gustu biomasu P. pastoris ili zahtjevnu ekstrakciju rekombinantnih proteina postupno povećavajte ukupno vrijeme uključenog ultrazvuka. Za proteine osjetljive na toplinu ili enzimske testove primjenjujte kraće pulseve, dulje stanke za hlađenje i nižu početnu amplitudu.
6. Bistrenje lizata
Nakon sonikacije centrifugirajte mikroploču ili prenesite uzorke u epruvete za centrifugiranje. Uklonite stanične ostatke centrifugiranjem pri odgovarajućoj brzini i temperaturi. Prikupite supernatant za daljnju analizu.
Ovisno o primjeni, lizat se može upotrebljavati za:
- kvantifikaciju proteina
- testove enzimske aktivnosti
- SDS-PAGE i Western blot analizu
- ELISA i imunotestove
- proteomiku metodom LC-MS/MS
- analizu metabolita
- pročišćavanje DNA ili RNA
7. Optimizacija i dokumentiranje metode
Za ponovljivu lizu kvasca dokumentirajte sve relevantne parametre, uključujući soj, uvjete uzgoja, OD600, mokru staničnu masu, sastav pufera, vrstu ploče, volumen uzorka, amplitudu, pulsni ciklus, ukupno vrijeme uključenog ultrazvuka, način hlađenja i konačnu temperaturu uzorka.
Ako je sonikator Hielscher opremljen automatskim bilježenjem podataka, procesni podaci mogu se upotrebljavati za dokumentiranje, razvoj metode, povećanje mjerila i kontrolu kvalitete.
Savjeti za optimizaciju lize kvasca
Za maksimalno oslobađanje proteina upotrebljavajte guste suspenzije kvasca, visok intenzitet ultrazvuka i dovoljno dugo ukupno vrijeme uključenog ultrazvuka. Za osjetljive proteine smanjite amplitudu, produljite stanke za hlađenje i održavajte ploču hladnom tijekom cijelog postupka.
Ako liza nije potpuna, postupno povećavajte vrijeme sonikacije, ispitajte enzimsku predobradu, smanjite viskoznost uzorka ili optimizirajte pufer. Ako se proteini razgrađuju ili gube aktivnost, poboljšajte hlađenje, skratite intervale uključenog ultrazvuka, dodajte inhibitore i provjerite je li sustav detergenata kompatibilan s ciljnim proteinom.
Budući da se sojevi kvasca znatno razlikuju po strukturi stanične stijenke, fazi rasta, ekspresijskom sustavu i gustoći biomase, preporučuje se mala matrica optimizacijskih pokusa. Na primjer, ispitajte tri amplitude, dva pulsna ciklusa i dva ukupna vremena uključenog ultrazvuka, a zatim procijenite učinkovitost lize i cjelovitost proteina.
Bez obzira na to obrađujete li nekoliko ploča za testove ili provodite probir kvasca uz velik kapacitet obrade uzoraka, Hielscher vam može pomoći odabrati odgovarajući sonikator za mikroploče i razviti pouzdan protokol lize. Obratite nam se s podacima o soju kvasca, radnom postupku i potrebnom kapacitetu obrade uzoraka!
Prednosti sonikatora za mikroploče Hielscher za lizu kvasca
Sonikatori za mikroploče Hielscher idealni su za laboratorije kojima je potrebna ponovljiva liza velikog broja uzoraka. Uklanjaju sporu obradu pojedinačnih uzoraka sonikacijom sondom i smanjuju varijabilnost uzrokovanu ručnim postavljanjem sonde, dubinom uranjanja i razlikama u rukovanju pojedinim uzorcima.
Ključne prednosti uključuju:
- Velik kapacitet obrade uzoraka: Sonicirajte brojne uzorke kvasca paralelno u mikropločama ili kompatibilnim stalcima za uzorke.
- Ponovljivi uvjeti: Jednaki uvjeti sonikacije u svim jažicama za ujednačene, usporedive rezultate lize.
- Bez križne kontaminacije sondom: Uzorci ostaju zatvoreni tijekom sonikacije, čime se smanjuju prijenos materijala između uzoraka i broj koraka čišćenja.
- Prikladno za otporne stanice: Ultrazvuk visokog intenziteta pospješuje razaranje staničnih stijenki kvasca.
- Učinkovit tijek rada: Idealno za probir sojeva, klonova, uvjeta ekspresije i pufera za lizu.
- Učinkovit tijek rada: Programabilne postavke, automatsko bilježenje podataka i prikladnost za laboratorijsku automatizaciju.
Primjene u biotehnologiji kvasaca i istraživanjima u znanostima o životu
Ultrazvučna liza kvasaca u mikropločama podržava brojne istraživačke postupke i postupke probira. Pri ekspresiji rekombinantnih proteina klonovi kvasaca P. pastoris i S. cerevisiae mogu se paralelno lizirati radi usporedbe razina ekspresije ili enzimske aktivnosti. U sistemskoj biologiji i omici standardizirana liza poboljšava usporedivost između različitih uvjeta. U mikrobiologiji sonikacija omogućuje brzu pripremu lizata iz više sojeva, različitih uvjeta uzgoja u hranjivim podlogama ili različitih tretmana stresom.
Tipična područja primjene uključuju:
- ekstrakciju proteina iz kvasaca
- probir rekombinantnih proteina
- probir enzimske aktivnosti
- odabir klonova nakon transformacije
- optimizaciju fermentacije
- pripremu uzoraka za proteomiku
- pripremu uzoraka za metabolomiku
- istraživanja razaranja stanične stijenke
- mikrobiološke testove s velikim brojem uzoraka
Pouzdana liza kvasaca počinje kontroliranom sonikacijom
Liza kvasaca može biti zahtjevna kada se broj uzoraka poveća, no Hielscher sonikatori za mikroploče čine taj postupak bržim, čišćim i reproducibilnijim. UIP400MTP i UIP550MTP omogućuju istraživačima obradu cijelih ploča u definiranim ultrazvučnim uvjetima, povećavajući kapacitet obrade uz istodobno smanjenje ručnog rukovanja.
Za mikrobiologe, molekularne biologe, znanstvenike koji istražuju proteine i biotehnološke laboratorije sonikacija u mikropločama moćan je alat za učinkovito i reproducibilno oslobađanje unutarstaničnih sastavnica kvasaca.
Često postavljana pitanja o lizi stanica kvasaca sonikacijom u mikropločama
Mogu li se stanice kvasaca lizirati sonikacijom?
Da. Stanice kvasaca kao što su Saccharomyces cerevisiae i Pichia pastoris mogu se lizirati sonikacijom visokog intenziteta. Ultrazvučna kavitacija stvara snažne mehaničke smične sile koje razaraju staničnu stijenku i membranu kvasaca, oslobađajući proteine, enzime, nukleinske kiseline i metabolite.
Zašto je stanice kvasaca teže lizirati nego bakterijske stanice?
Stanice kvasaca imaju debelu i mehanički otpornu staničnu stijenku sastavljenu uglavnom od glukana, manoproteina i hitina. Zbog te je krute strukture kvasce teže razoriti nego mnoge bakterijske stanice ili stanice sisavaca. Stoga liza kvasaca obično zahtijeva veći intenzitet, dulju obradu ili neobveznu enzimsku predobradu.
Koji su Hielscher sonikatori prikladni za lizu kvasaca u mikropločama?
Hielscher UIP400MTP i UIP550MTP prikladni su za lizu velikog broja uzoraka kvasaca u mikropločama. UIP400MTP idealan je za rutinsku paralelnu pripremu uzoraka, dok UIP550MTP pruža veću ultrazvučnu snagu za zahtjevne postupke lize, guste suspenzije i otporne sojeve kvasaca.
Može li se Pichia pastoris lizirati u sonikatoru za mikroploče?
Da. Pichia pastoris, poznat i kao Komagataella phaffii, može se lizirati sonikacijom visokog intenziteta u mikropločama. Budući da P. pastoris može stvarati gustu biomasu i ima otpornu staničnu stijenku, preporučuje se optimizacija amplitude, pulsnog ciklusa, hlađenja i ukupnog vremena sonikacije.
Koji su tipični parametri sonikacije za lizu kvasaca?
Koristan početni raspon obuhvaća amplitudu od 50–80%, pulsni rad, primjerice 10–30 sekundi u uključenoj fazi (ON) i 30–60 sekundi u isključenoj fazi (OFF), te 5–15 minuta kumulativnog vremena uključenosti (ON). Točni parametri ovise o soju kvasca, gustoći stanica, volumenu uzorka, vrsti ploče, puferu i ciljnoj molekuli.
Zašto bi lizu kvasaca trebalo provoditi u pulsnom načinu rada?
Pulsni način rada smanjuje nakupljanje topline tijekom sonikacije. Tijekom uključene faze (ON) ultrazvučna kavitacija razara stanice. Tijekom isključene faze (OFF) uzorak se može ohladiti. To je važno jer prekomjerna toplina može denaturirati proteine, smanjiti enzimsku aktivnost, razgraditi RNA i narušiti reproducibilnost.
Je li prije sonikacije stanica kvasaca potrebna enzimska predobrada?
Enzimska predobrada nije uvijek potrebna, ali može poboljšati učinkovitost lize. Enzimi kao što su Zymolyase ili Lyticase djelomično razgrađuju staničnu stijenku kvasca i mogu smanjiti intenzitet ultrazvuka ili vrijeme potrebno za potpunu lizu. To može biti korisno za osjetljive proteine ili zahtjevne sojeve.
Kako se može spriječiti pregrijavanje tijekom sonikacije kvasca?
Upotrebljavajte prethodno ohlađene pufere, pulsni način rada, stanke za hlađenje i sustav s hlađenjem pločice. Držite mikropločicu zatvorenom i pratite temperaturu gdje je to moguće. Za osjetljive proteine upotrebljavajte kraće intervale uključenog ultrazvuka (ON) i dulje intervale isključenog ultrazvuka (OFF) te obrađujte uzorke u hladnim uvjetima.
Može li sonikacija u mikropločicama zamijeniti mehaničko razaranje kuglicama pri lizi kvasca?
U mnogim radnim postupcima može. Sonikacija u mikropločicama može zamijeniti mehaničko razaranje kuglicama kada je potrebna čista, reproducibilna i paralelna liza. Njome se izbjegava rukovanje kuglicama, smanjuje složenost potrošnog materijala i pojednostavljuje automatizacija. Međutim, svaku primjenu treba validirati usporedbom prinosa lize, cjelovitosti proteina i uspješnosti analitičkog ispitivanja.
Je li sonikacija u mikropločicama prikladna za ekstrakciju proteina iz kvasca?
Da. Sonikacija u mikropločicama vrlo je prikladna za ekstrakciju proteina iz kvasca, osobito kada treba usporediti mnogo klonova ili uvjeta uzgoja. Inhibitori proteaza, hladni puferi i kontrolirane postavke pulsiranja pomažu očuvati kvalitetu proteina.
Može li se ista metoda upotrebljavati za ekstrakciju DNA, RNA i proteina?
Može se primijeniti isto osnovno načelo sonikacije, ali pufer i uvjete postupka treba prilagoditi ciljnoj molekuli. Radni postupci za proteine zahtijevaju inhibiciju proteaza i kontrolu temperature. Radni postupci za RNA zahtijevaju rukovanje bez prisutnosti RNaza i snažno hlađenje. Radni postupci za DNA mogu zahtijevati različite uvjete lize i pročišćavanja, ovisno o tome želi li se dobiti cjelovita genomska DNA ili fragmentirana DNA.
Koju vrstu pločice treba upotrebljavati za lizu kvasca?
Upotrebljavajte mikropločicu ili pločicu s dubokim jažicama prikladnu za sonikaciju, s odgovarajućim zatvaranjem. Pločice s okruglim dnom često su korisne za rukovanje suspenzijama. Pločica treba izdržati odabrane uvjete sonikacije, temperaturu uzorka i korake centrifugiranja.
Kako mogu znati je li liza kvasca potpuna?
Učinkovitost lize može se provjeriti mikroskopijom, prinosom proteina, aktivnošću enzima, smanjenjem viskoznosti, analizom SDS-PAGE, prinosom DNA/RNA ili usporedbom s poznatom metodom lize. Pri razvoju metode procijenite i prinos i kvalitetu oslobođene ciljne molekule.
UIP400MTP ili UIP550MTP: koji sonikator za mikropločice odabrati?
UIP400MTP snažan je sonikator za mikropločice za rutinsku pripremu velikog broja uzoraka, uključujući lizu kvasca, ekstrakciju proteina, fragmentaciju DNA smičnim silama, odvajanje biofilma i pripremu za analitička ispitivanja. Prikladan je za laboratorije kojima je potrebna reproducibilna sonikacija u standardnim formatima pločica.
UIP550MTP pruža veću ultrazvučnu snagu i preporučuje se kada zahtjevnije primjene zahtijevaju veći akustički intenzitet, kraća vremena obrade, veća opterećenja uzorcima ili snažnije uvjete razaranja. Pri lizi kvasca UIP550MTP osobito je koristan za gustu biomasu, zahtjevne sojeve, veće radne volumene i probir ekspresije u velikom broju uzoraka.
Može li se liza kvasca sonikacijom u mikropločicama automatizirati?
Da. Sonikacija u mikropločicama vrlo je prikladna za automatizirane laboratorijske radne postupke jer uzorci ostaju u formatu pločice. To podržava integraciju sa sustavima za pipetiranje, rukovanjem pločicama, centrifugiranjem, pripremom za analitička ispitivanja i radnim postupcima probira velikog broja uzoraka.
Literatura / Reference
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- FactSheet UIP550MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics 2024.



