Métabolomique facilitée par la sonication à haut débit

La métabolomique est un domaine de recherche qui utilise des techniques à haut débit pour caractériser et quantifier les petites molécules dans divers biofluides, tels que l'urine, le sérum, le plasma, les fèces et la salive, dévoilant ainsi des signatures métaboliques uniques. Le sonicateur à haut débit UIP400MTP, conçu pour les plaques multi-puits, est un outil puissant pour lyser les cellules dans ces échantillons, facilitant la libération des métabolites pour l'analyse en aval. Cette approche précise et fiable est essentielle pour la métabolomique, où la conception précise de l'étude, la préparation méticuleuse des échantillons, la configuration optimisée de la plateforme, l'analyse complète des données et l'interprétation biologique significative sont primordiales. La métabolomique utilise à la fois des approches ciblées, qui se concentrent sur des classes spécifiques de molécules telles que les glucides, les lipides et les acides aminés, et des techniques non ciblées, qui fournissent une vue d'ensemble des profils métaboliques au sein d'un échantillon, révélant la complexité des signaux métaboliques.

Préparation d'échantillons à haut débit avec le sonificateur pour plaques à 96 puits UIP400MTP

L'utilisation du sonicateur sans contact UIP400MTP en combinaison avec des plaques à 96 puits est une méthode efficace pour l'homogénéisation à haut débit et l'extraction de métabolites. Cette configuration évite le contact direct avec l'échantillon, ce qui réduit le risque de contamination croisée lors du traitement simultané de plusieurs échantillons.

Protocole d'homogénéisation étape par étape avec le sonicateur 96 puits UIP400MTP

1. Préparation des échantillons métabolomiques
   Exemple de placement : Distribuer chaque échantillon (par exemple, fèces, tissu intestinal ou contenu luminal) dans des puits individuels d'une plaque à 96 puits ou d'une microplaque.
   Solvant : Les solvants organiques, tels que le méthanol, l'éthanol, l'acétonitrile, le chloroforme et leurs mélanges (aqueux), sont essentiels pour l'extraction des métabolites, car ils contribuent à la libération des métabolites intracellulaires de la matrice cellulaire. Utiliser 100 à 300 µl de solvant par puits, en veillant à ce que le volume soit suffisant pour immerger complètement l'échantillon.
   Normes internes : En option, ajouter des standards internes à chaque puits pour la normalisation lors de l'analyse métabolomique en aval.
2. Moyens d'accouplement Mise en place
   Niveau d'eau : Placer la plaque de 96 puits sur la plate-forme de sonication remplie d'eau (le milieu de couplage) comme décrit dans le manuel.
3. Configuration des paramètres de l'UIP400MTP
   Réglages de puissance : Régler l'amplitude des ultrasons à 50-80% de la puissance maximale pour une homogénéisation efficace.
   Mode d'impulsion : Régler le cycle de sonication pour alterner les impulsions (par exemple, 30 secondes ON, 30 secondes OFF) afin de permettre le refroidissement et d'éviter la surchauffe de l'échantillon.
   Temps total : 4-10 minutes, en fonction de la complexité et de la dureté de l'échantillon.
   Contrôle de la température : Utilisez un refroidisseur de laboratoire pour maintenir l'eau à 4-8°C pendant la sonication afin de protéger les métabolites sensibles à la chaleur.
4. processus de sonication
   Démarrer l'UIP400MTP pour les cycles de sonication.
   Contrôler le processus via l'interface UIP400MTP.
   L'effet de cavitation homogénéise les échantillons et lyse les cellules dans les puits, libérant les métabolites intracellulaires dans le solvant.
5. PostSonication
   Centrifugation : Après la sonication, transférer le contenu de la plaque dans des tubes de collecte si nécessaire. Centrifuger à 4 000-6 000 × g pendant 10 minutes pour éliminer les débris insolubles et le matériel cellulaire.
   Collecte de surnageant : Transférer soigneusement le surnageant de chaque puits dans de nouveaux tubes ou plaques pour analyse.
   Séchage en option : Sécher les surnageants à l'aide d'un concentrateur sous vide (par exemple, SpeedVac) si une concentration est nécessaire, puis les reconstituer dans un petit volume du solvant approprié.

Profitez de la capacité de traitement à haut débit du sonicateur de plaques multi-puits UIP400MTP et facilitez vos recherches et analyses métabolomiques !

Principe de la sonication sans contact avec l'UIP400MTP

L'UIP400MTP applique des ondes ultrasoniques aux puits d'une plaque à 96 puits indirectement par l'intermédiaire d'un milieu de couplage (par exemple, l'eau). Ces ondes créent une cavitation qui perturbe les cellules et libère les métabolites sans contact physique entre la sonde du sonicateur et l'échantillon.

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