La métabolomique facilitée par la sonication à haute cadence

La métabolomique est le domaine de recherche qui utilise des techniques à haute cadence pour caractériser et quantifier les petites molécules présentes dans divers biofluides, tels que l’urine, le sérum, le plasma, les fèces et la salive, révélant ainsi des signatures métaboliques uniques. Le sonicateur à haute cadence UIP400MTP, conçu pour les plaques multipuits, est un outil performant pour lyser les cellules de ces échantillons, ce qui facilite la libération des métabolites en vue des analyses en aval. Cette approche précise et fiable est essentielle en métabolomique, où une conception rigoureuse de l’étude, une préparation méticuleuse des échantillons, une configuration optimisée de la plateforme, une analyse exhaustive des données et une interprétation biologique pertinente sont primordiales. La métabolomique fait appel à la fois à des approches ciblées, qui se concentrent sur des classes spécifiques de molécules comme les glucides, les lipides et les acides aminés, et à des techniques non ciblées, qui offrent une vue d’ensemble des profils métaboliques d’un échantillon et révèlent la complexité de la signalisation métabolique.

Préparation d’échantillons à haute cadence avec le sonicateur pour plaques à 96 puits UIP400MTP

L’utilisation du sonicateur sans contact UIP400MTP en combinaison avec des plaques à 96 puits constitue une méthode efficace pour l’homogénéisation et l’extraction de métabolites à haute cadence. Ce dispositif évite tout contact direct avec l’échantillon, ce qui réduit le risque de contamination croisée tout en traitant plusieurs échantillons simultanément.

Protocole étape par étape pour l’homogénéisation avec le sonicateur pour plaques à 96 puits UIP400MTP

1. Préparation des échantillons métabolomiques
   Mise en place des échantillons : Répartir chaque échantillon (par ex. fèces, tissu intestinal ou contenu luminal) dans les puits individuels d’une plaque à 96 puits ou d’une microplaque.
   Solvant : Les solvants organiques, tels que le méthanol, l’éthanol, l’acétonitrile, le chloroforme et leurs mélanges (aqueux), sont essentiels à l’extraction des métabolites, car ils favorisent la libération des métabolites intracellulaires hors de la matrice cellulaire. Utiliser 100–300 µL de solvant par puits, en veillant à ce que le volume soit suffisant pour immerger complètement l’échantillon.
   Étalons internes : En option, ajouter des étalons internes dans chaque puits pour la normalisation lors de l’analyse métabolomique en aval.
2. Mise en place du milieu de couplage
   Niveau d’eau : Placer la plaque à 96 puits sur la plateforme de sonication remplie d’eau (le milieu de couplage), comme décrit dans le manuel.
3. Configuration des paramètres de l’UIP400MTP
   Réglages de puissance : Régler l’amplitude ultrasonore sur 50–80% de la puissance maximale pour une homogénéisation efficace.
   Mode pulsé : Régler le cycle de sonication sur des impulsions alternées (par ex. 30 secondes ON, 30 secondes OFF) afin de permettre le refroidissement et d’éviter la surchauffe des échantillons.
   Durée totale : 4–10 minutes, selon la complexité et la résistance de l’échantillon.
   Contrôle de la température : Utiliser un refroidisseur de laboratoire pour maintenir l’eau à 4–8°C pendant la sonication afin de protéger les métabolites thermosensibles.
4. Processus de sonication
   Lancer les cycles de sonication de l’UIP400MTP.
   Surveiller le processus via l’interface de l’UIP400MTP.
   L’effet de cavitation homogénéise les échantillons et lyse les cellules dans les puits, libérant les métabolites intracellulaires dans le solvant.
5. Après la sonication
   Centrifugation : Après la sonication, transférer si nécessaire le contenu de la plaque dans des tubes de collecte. Centrifuger à 4 000–6 000 × g pendant 10 minutes pour culotter les débris insolubles et le matériel cellulaire.
   Récupération du surnageant : Transférer avec précaution le surnageant de chaque puits dans de nouveaux tubes ou de nouvelles plaques pour l’analyse.
   Séchage facultatif : Sécher les surnageants à l’aide d’un concentrateur sous vide (par ex. SpeedVac) si une concentration est nécessaire, puis les reconstituer dans un petit volume du solvant approprié.

Profitez de la capacité de traitement à haute cadence du sonicateur pour plaques multipuits UIP400MTP et facilitez vos recherches et analyses métabolomiques !

Principe de la sonication sans contact avec l’UIP400MTP

L’UIP400MTP applique des ondes ultrasonores aux puits d’une plaque à 96 puits de manière indirecte, par l’intermédiaire d’un milieu de couplage (par ex. de l’eau). Ces ondes génèrent une cavitation qui rompt les cellules et libère les métabolites sans contact physique entre la sonde du sonicateur et l’échantillon.

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