FFPE suure läbilaskevõimega proovi ettevalmistus: valgu ekstraheerimine ja nukleiinhappe lõikamine

Suure läbilaskevõimega ultrasonikaatori UIP400MTP, Hielscher Ultrasonics tegeleb formaliini fikseerimise ja parafiiniga varjatud (FFPE) koe ettevalmistamise väljakutsetega. Siit saate teada, kuidas ultraheli töötleb FFPE proovi suurel hulgal FFPE deparafiinimiseks, kudede lüüsiks, homogeniseerimiseks, valgu ekstraheerimiseks ja DNA / RNA lõikamiseks! Kasutage ultraheli FFPE koe ettevalmistamist – suurte proovinumbrite töötlemine mitmekihilistes plaatides! Hankige kvaliteetseid proove ja hankige usaldusväärsete uurimistulemuste saamiseks kõrgeid proovinumbreid! Ja viimane, kuid mitte vähem oluline on säästa aega ja raha!

FFPE proovi ettevalmistamine, mida hõlbustab suure läbilaskevõimega ultrahelitöötlus

Formaliini fikseerimine ja parafiini manustamine (FFPE) on kõige tavalisem meetod tahkete kudede säilitamiseks ja arhiveerimiseks. Biomolekulide ekstraheerimine FFPE koeproovidest tekitab säilitatavate proovide kvaliteedi tõttu sageli märkimisväärseid väljakutseid. Need proovid, mis on hindamatu vara molekulaarbioloogias ja kliinilistes uuringutes, pakuvad rikkalikku bioloogilise teabe allikat retrospektiivseteks uuringuteks ja diagnostiliseks biomarkerite valideerimiseks. Kuid formaliini fikseerimise ja parafiini kinnistamise protsess, säilitades samal ajal koe arhitektuuri ja morfoloogia, raskendab kvaliteetsete nukleiinhapete ja valkude ekstraheerimist. Formaliin indutseerib nukleiinhapete ja valkude ristsidumist, mis põhjustab molekulaarset killustumist ja keemilisi modifikatsioone. Siit saate teada, kuidas suure läbilaskevõimega ultrasonikaator UIP400MTP ületab FFPE proovi ettevalmistamise väljakutsed!

Ultrasonikaator tõhusaks FFPE proovi ettevalmistamiseks

  • Lihtsalt kasutatav töövoog: lihtsustatud protsessid, mis on kasutajasõbralikud.
  • Deparafiniseerimine, valgu ekstraheerimine, DNA / RNA lõikamine
  • Kiire suure läbilaskevõimega töötlemine: mitme kaevuga plaatide tõhus käsitsemine.
  • Tõhus deparafiniseerimine: valkude parem lahustumine.
  • Mittetoksilised lahustid: Väldib kahjulike orgaaniliste lahustite, näiteks ksüleeni kasutamist.

 

Mitmekihilise plaadi ultrasonikaatori UIP400MTP saab töödelda FFPE proove suure läbilaskevõimega valgu ekstraheerimiseks ning DNA ja RNA lõikamiseks

UIP400MTP suure läbilaskevõimega sonikaator suure läbilaskevõimega FFPE proovide töötlemiseks mitmekihilistel plaatidel

Infonõue




Pange tähele, et meie Privaatsuspoliitika.


 
FFPE proovi ettevalmistamine ultraheli abil - UIP400MTP Multwelli plaadi sonikaator Hielscheri poolt
 

FFPE koest valkude ekstraheerimise tehnikate edusammud

Hielscher Ultrasonics tegeleb suure läbilaskevõimega FFPE proovi ettevalmistamise väljakutsetega. Sonikatsioon kasutab ultraheli laineid, et tekitada mehaanilisi vibratsioone ja fokuseeritud kavitatsiooni, häirides tõhusalt rakustruktuure ja suurendades biomolekulide lahustumist. See meetod on populaarsust kogunud oma võime tõttu suurendada FFPE kudedest nukleiinhappe ja valgu ekstraheerimise efektiivsust ja saagist, samuti DNA ja RNA lõikamist raamatukogu ettevalmistamiseks. On väga oluline rõhutada, et ultraheliuuring, kasutades UIP400MTP mitmekihilise plaadi sonikaatorit, säilitab nende biomolekulide terviklikkuse järgnevate rakenduste jaoks.

 

Video näitab ultraheli proovi ettevalmistamise süsteemi UIP400MTP, mis võimaldab usaldusväärset proovi ettevalmistamist mis tahes standardse mitme kaevu plaadiga, kasutades suure intensiivsusega ultraheli. UIP400MTP tüüpilised rakendused hõlmavad rakkude lüüsi, DNA-d, RNA-d ja kromatiini lõikamist ning valkude ekstraheerimist.

Ultrasonikaator UIP400MTP multi-well plaadi ultrahelitöötluseks

Video pisipilt

 

Nukleiinhappe lõikamine suure läbilaskevõimega ultraheli abil

96-süvendiga plaate ja muid mitmekihilisi plaate töödeldakse kõige paremini sonikaatori UIP400MTP abil. See ultraheli süsteem sobib ideaalselt lüüsimiseks, DNA killustumiseks ja rakkude lahustumiseks, proovide töötlemiseks suure läbilaskevõimega.Mitme kaevuga ultrasonikaatori UIP400MTP kasutamiseks suure läbilaskevõimega seadetes toob FFPE proovide ettevalmistamise uuele tasemele. See mitmekülgse plaadi ultrahelitöötluse meetod pakub tõhusat ja usaldusväärset lahendust mitme proovi samaaegseks töötlemiseks. See hõlbustab DNA, RNA ja valkude kiiret ja reprodutseeritavat ekstraheerimist, mis on kriitilise tähtsusega erinevate analüütiliste tehnikate, sealhulgas järgmise põlvkonna sekveneerimise (NGS), kvantitatiivse PCR-i ja proteoomiliste analüüside jaoks. Ultrahelitöötluse parameetrite, nagu amplituud, kestus ja temperatuur, optimeerimine suurendab veelgi ekstraheeritud biomolekulide kvaliteeti ja kogust.

Mitmekihiliste plaatide UIP400MTP sonikaator pakub olulisi eeliseid DNA ja RNA killustumiseks ja lõikamiseks FFPE koest. Selle süsteemi üks silmapaistvaid omadusi on selle võime saavutada DNA ja RNA kitsaste fragmentide suurusi, pakkudes ultrahelitöötluse intensiivsuse täpset häälestatavust, et saada lühikesi fragmente 150-200 aluspaarist (bp) või pikematest fragmentidest 15-20 kilobase paaridest (kbp). See mitmekülgsus muudab UIP400MTP hädavajalikuks nii lühi- kui ka pikalugemisega sekveneerimisrakenduste jaoks, tagades kvaliteetsed tulemused järgmise põlvkonna sekveneerimiseks (NGS) ja kogu genoomi sekveneerimiseks (WGS). Selle täpne kontroll fragmendi suuruse üle on ülioluline kõigi genoomika valdkondade teadlaste jaoks, kuna see võimaldab valmistada proove vastavalt spetsifikatsioonidele.

FFPE koe täiustatud lahenduste saamiseks võtke meiega ühendust

Avastage UIP400MTP mitmekihilise plaadi sonikaator tõhusaks biomolekulide taastumiseks FFPE proovidest, säilitades ekstraheeritud nukleiinhapete ja valkude terviklikkuse ning tagades tulemuste reprodutseeritavuse. See tehnoloogia integreerub sujuvalt teiste preparatiivsete ja analüütiliste töövoogudega, lihtsustades ja tõhustades molekulaarseid uuringuid FFPE koearhiivide abil.

Infonõue




Pange tähele, et meie Privaatsuspoliitika.


Kinnistid ja nende mõju

Fikseerimine on proovi ettevalmistamise oluline samm, mis säilitab rakustruktuurid, peatab biokeemilised reaktsioonid ja hoiab ära lagunemise. Sõltuvalt konkreetsetest eksperimentaalsetest nõuetest kasutatakse erinevaid fiksaatoreid. Kaks kõige levinumat fiksaatorit on formaldehüüd ja paraformaldehüüd, mis ristseovad valke ja nukleiinhappeid, säilitades rakkude ja kudede morfoloogia ja antigeensuse. Teisi fiksaatoreid, nagu etanool, metanool ja glutaaraldehüüd, kasutatakse spetsiifilisteks rakendusteks.

Formaldehüüdi ja paraformaldehüüdi fiksaatorid moodustavad metüleensildu aminorühmade vahel, mille tulemuseks on valgu ristsidumine. See protsess immobiliseerib tõhusalt rakulised komponendid, säilitades nende terviklikkuse järgnevate analüüsietappide ajal. Nende fiksaatorite mõju võivad mõjutada sellised tegurid nagu kontsentratsioon, pH ja temperatuur ning nende parameetrite optimeerimine on rakustruktuuride optimaalse säilimise tagamiseks ülioluline.

 
Ultraheli FFPE ettevalmistamise eelised
 

Ultraheli on võimas tehnika fikseeritud rakkude ja kudede häirimiseks, mis paistab silma tavapäraste tehnikatega. See pakub traditsiooniliste lüüsimeetoditega võrreldes mitmeid märkimisväärseid eeliseid:

  • Kiirus ja tõhusus: Ultraheli lüüs tagab rakkude ja kudede kiire katkemise, vähendades oluliselt töötlemisaega võrreldes mehaaniliste või keemiliste lüüsimeetoditega. Ultraheli sondi tekitatud kõrgsageduslikud helilained tekitavad mehaanilisi nihkejõude, põhjustades fikseeritud rakustruktuuride häireid. See kiire ja tõhus katkestus võimaldab teadlastel töödelda suuri valimimahte lühikese aja jooksul.
  • Õrn ja reguleeritav: Ultraheli lüüs pakub õrna häiremehhanismi, mis minimeerib tundlike biomolekulide, nagu valgud, nukleiinhapped ja ensüümid, kahjustusi. Erinevalt mehaanilistest meetoditest, mis tekitavad liigset soojust või nihkejõudu, kasutab ultraheli lüüs rakkude häirimiseks kontrollitud kavitatsiooni, säilitades samal ajal rakusiseste komponentide terviklikkuse ja funktsionaalsuse.
  • Mitmekülgsus: Ultraheli lüüsi saab rakendada erinevatele fiksaatoritele, võimaldades teadlastel töötada paljude fikseeritud proovidega. Kas kasutate formaldehüüdi, paraformaldehüüdi või alternatiivseid fiksaatoreid, ultraheli lüüs tagab järjekindlalt tõhusad häired, tagades rakuliste komponentide optimaalse taastumise.
  • Kõrge saagikus ja kvaliteet: Ultraheli lüüs hõlbustab tervete rakuliste komponentide suurt saagist, kuna see on võimeline fikseeritud rakke ja kudesid ühtlaselt häirima. See võimaldab järgnevatel rakendustel, nagu valguanalüüs, nukleiinhappe ekstraheerimine ja ensümaatilised analüüsid, saada usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid tulemusi.
  • Automaatika ühilduvus: Ultraheli lüüsi saab hõlpsasti integreerida automatiseeritud süsteemidesse, võimaldades suure läbilaskevõimega proovide töötlemist. See ühilduvus võimaldab teadlastel oma töövoogu sujuvamaks muuta ja tootlikkust suurendada, eriti suuremahulistes uuringutes.
96-augulise plaadi sonikaatori UIP400MTP rakkude lüüsiks, DNA ekstraheerimiseks, DNA killustumiseks, rakkude lahustumiseks ja valgu puhastamiseks.

96-augulise plaadiga sonikaatori UIP400MTP mikrotiiteri ja mitmekihiliste plaatide ultrahelitöötluseks

Ultraheli lüüs on muutnud fikseeritud rakkude ja kudede katkemist, pakkudes mitmeid eeliseid traditsiooniliste lüüsimeetoditega võrreldes. Selle kiirus, tõhusus, selektiivsus, mitmekülgsus, kõrge saagikus ja automatiseerimise ühilduvus muudavad selle asendamatuks vahendiks molekulaarbioloogia ja biotehnoloogia uuringutes. Pakkudes kontaktivabasid sonikaatoreid ja sondi tüüpi sonikaatorit, pakub Hielscher Ultrasonics kõige sobivamat ultraheli homogenisaatorit teie eluteaduse rakenduse jaoks. Ükskõik, kas soovite korraga töödelda üksikuid proove, mitut proovi või väga kõrgeid proovinumbreid, pakume teile parimat sonikaatorit, mis vastab teie uurimis- ja diagnostikanõuetele.
Lisateavet Hielscheri mittekontaktsete sonikaatorite kohta mitme proovi ja suure läbilaskevõimega proovide ettevalmistamiseks!

FFPE proovi ettevalmistamine UIP400MTP Multiwell-Plate Sonikaatoriga

  • Ühekordne investeering
  • kasutage oma tarbekaupu
  • varaliste tarvikute ja tarvikute puhul ei ole korduvaid kulusid
  • kõrge läbilaskevõimega
  • Täpne kontroll
  • Tipptasemel tehnoloogia
  • usaldusväärsus & stabiilsus
  • reguleeritav, täpne protsessi juhtimine
  • tööstuslik klass: saab pidevalt kasutada 24/7
  • Lihtne ja ohutu tegutseda
  • Madal hooldus

 
Loe lähemalt sonikaatorite rakendustest eluteaduses!

Sonicator suure läbilaskevõimega proovi ettevalmistamiseks! Plaadi sonikaatori UIP400MTP hõlbustab bioloogiliste proovide lüüsi, valgu ekstraheerimist, DNA killustumist ja rakkude lahustumist 96-süvendi plaatidel.

Plaadi sonikaatorit UIP400MTP mis tahes 96-süvendi plaatide, mikrotiiterplaatide ja mitme süvendiga plaatide jaoks.

Disain, tootmine ja nõustamine – Kvaliteet Valmistatud Saksamaal

Hielscheri ultrasonikaatorid on tuntud oma kõrgeimate kvaliteedi- ja disainistandardite poolest. Vastupidavus ja lihtne kasutamine võimaldavad meie ultrasonikaatorite sujuvat integreerimist tööstusrajatistesse. Karmid tingimused ja nõudlikud keskkonnad on Hielscheri ultrasonikaatorite poolt kergesti käsitsetavad.

Hielscher Ultrasonics on ISO sertifitseeritud ettevõte ja paneb erilist rõhku suure jõudlusega ultrasonikaatoritele, millel on tipptasemel tehnoloogia ja kasutajasõbralikkus. Loomulikult on Hielscheri ultrasonikaatorid CE-nõuetele vastavad ja vastavad UL, CSA ja RoHs nõuetele.

Võta meiega ühendust! / Küsi meiega!

Küsige lisateavet

Palun kasutage allolevat vormi, et taotleda lisateavet UIP400MTP mitme kaevuga plaadi ultrasonikaatori, selle rakenduste kohta FFPE proovi ettevalmistamisel ja hindades. Meil on hea meel arutada teiega teie rakendust genoomikas ja proteoomikas!









Palun pange tähele, et meie Privaatsuspoliitika.


Suure läbilaskevõimega RNA sekveneerimine mitme kaevuga plaadil

UIP400MTP Ultrasonicator: Suure läbilaskevõimega FFPE proovi ettevalmistus mitme kaevuga plaadil



KKK
Allpool vastame korduma kippuvatele küsimustele, mis on olulised FFPE kudede ettevalmistamisel ja FFPE proovide ultraheliuuringul.

Kuidas FFPE kudet ette valmistatakse?

FFPE kudede ettevalmistamise sammud: Värskete kudede hoolikas käitlemine ja töötlemine on kvaliteetsete FFPE proovide saamiseks kriitilise tähtsusega. Rakulise arhitektuuri, nukleiinhapete ja valkude säilimise tagamine on täpse järgneva analüüsi jaoks hädavajalik. Iga etapp – alates kogumisest kuni kinnistamiseni – nõuab täpsust, et säilitada proovi terviklikkus erinevate analüüside, sealhulgas histoloogilise uuringu, immunohistokeemia ja molekulaarsete uuringute jaoks. Nõuetekohaselt teostatud fikseerimis- ja kinnistamisprotsess tagab, et säilinud kude peegeldab täpselt in vivo olekut, võimaldades usaldusväärseid diagnostilisi ja uurimistulemusi.
Tutvustame teile FFPE koeproovide manustamisprotsessi 6 peamist sammu.

  • Kudede kogumine
    Elusimetajate biopsiad ja koekultuurid on mõlemad elujõulised allikad värske koe saamiseks FFPE proovi ettevalmistamiseks.
    Oluline on kasutada aseptilist tehnikat: Saastumise vältimiseks kasutage steriilseid instrumente ja kindaid. Ideaalis koguge kudesid steriilses keskkonnas, näiteks kirurgilises komplektis või laminaarse voolu kapuutsis.
    Kuna proov on väga habras, on selle tundlik käsitsemine hädavajalik: minimeerige töötlemise viivitused ja alustage kohe pärast ekstsisiooni kudede töötlemist. See on autolüüsi ja lagunemise vältimiseks ülioluline. Hoidke koe toatemperatuuril; vältige külmumist, kuna see võib põhjustada jääkristallide moodustumist ja koekahjustusi.
  • Kudede fikseerimine
    Esiteks töödeldakse koe fikseeriva lahusega: Kasutage 10% neutraalse puhverdatud formaliini (NBF), mis vastab 4% formaldehüüdile vees, puhverdatud neutraalse pH-ni.
    Sukeldage kude täielikult formaliini. Tagatakse, et fiksaatori ja koe mahu suhe on vähemalt 10:1. Fikseerimisaeg on tavaliselt vahemikus 6 kuni 24 tundi, sõltuvalt koe tüübist ja suurusest. On oluline, et fikseeriv aine saaks koesse põhjalikult tungida. Kuid liigne fikseerimine võib põhjustada ristsidumist, mis raskendab antigeeni leidmist, samas kui alafikseerimine võib põhjustada kudede halva säilimise.
  • Kudede korrastamine
    Teiseks lõigake kude paksuseni umbes 3-5 mm, et võimaldada fiksaatori piisavat tungimist. Tagage koe õige orientatsioon asjakohaste histoloogiliste struktuuride hõivamiseks. See hõlbustab ekstraheerimisprotsessi, kui koe kasutatakse hiljem analüüsiks.
  • Fikseeritud proovi töötlemine
    Nüüd tuleb fikseeritud kude dehüdreerida: Pärast fikseerimist tuleb kude dehüdreerida, et tagada parafiinvaha põhjalik tungimine. Vee eemaldamiseks viige kude läbi astmelise etanooliseeria (70%, 80%, 90% ja 100%).
    Puhastamine ksüleeniga: Parafiinvaha ei lahustu vees, kuid lahustub ksüleenis. Seetõttu tuleb koes olev vesi asendada ksüleeniga. Kuid ksüleen ise ei lahustu vees, kuid lahustub alkoholis, mistõttu on vaja vaheetappi, kus vesi asendatakse kõigepealt alkoholiga. Kastke kude ksüleeni või ksüleeniasendajasse, et eemaldada etanool ja valmistada kude parafiini infiltratsiooniks.
    Infiltratsioon parafiini abil: Sisestage kude sulatatud parafiinvahasse, tagades täieliku infiltratsiooni. See etapp hõlmab tavaliselt mitmeid parafiini muudatusi, et tagada põhjalik immutamine.
  • Koe kinnistamine
    Selles etapis vormitakse kude koeplokiks: Asetage kude soovitud orientatsiooniga vormi ja valage selle peale sulanud parafiin. Parafiinil lastakse tahkuda, jahutades seda toatemperatuuril või külmal plaadil.
  • Sektsioonid ja paigaldus
    Mikrotoomia: Manustatud koe tükeldamiseks kasutage parafiiniplokist õhukeste lõikude (tavaliselt 4-5 mikromeetri) lõikamiseks mikrotoomi. Seejärel paigaldatakse proov, asetades sektsioonid klaasklaasidele järgnevaks värvimiseks ja mikroskoopiliseks analüüsiks.
    Lõpuks kontrollige histoloogia kvaliteeti: Hinnake esimesi sektsioone mikroskoobi all, et tagada nõuetekohane fikseerimine ja töötlemine. Kohandage protokolle vastavalt vajadusele vastavalt koetüübile ja täheldatud kvaliteedile.

 
FFPE kudesid saab kasutada RNA, DNA ja valkude taastamiseks ning vähi või muu haiguse tunnuste avastamiseks. Neid saab säilitada aastaid ja need on oluline osa sellest, kuidas teadlased ja arstid kasutavad koeproove diagnoosimiseks ja uurimiseks.

Millised on FFPE koega tavalised probleemid ja väljakutsed?

Formaliiniga fikseeritud, parafiiniga manustatud (FFPE) koeproove kasutatakse laialdaselt teadusuuringutes ja diagnostikas, kuid need esitavad mitmeid väljakutseid ja tavalisi probleeme:

  • Biomolekulide lagundamine: Pikaajaline fikseerimine võib põhjustada DNA, RNA ja valkude lagunemist, muutes kvaliteetsete nukleiinhapete või valkude ekstraheerimise järgnevateks rakendusteks keeruliseks. Õige fikseerimine (ala- ja ülefikseerimise vältimine) on kudede säilitamiseks hädavajalik.
  • Ristsidumine: Formaliini fikseerimine põhjustab valkude ja nukleiinhapete ristsidumist, mis võib takistada molekulaarset analüüsi ning mõjutada immunohistokeemia ja teiste analüüside täpsust.

  • Antigeeni maskeerimine: Fikseerimisprotsess võib maskeerida antigeenseid saite, vähendades antikehade sidumise efektiivsust immunohistokeemias ja muudes immunoloogilistes analüüsides. See nõuab sageli antigeeni leidmist, protseduuri, mille kaudu epitoobi maskeerimine pööratakse ümber ja taastatakse epitoopide-antikehade seondumine. Kuid täielikku antigeensust ei pruugi alati taastada.
  • Muutuv fikseerimise kvaliteet: Fikseerimisaegade ja -tingimuste erinevused võivad põhjustada valimi ebaühtlast kvaliteeti, mõjutades tulemuste reprodutseeritavust ja võrreldavust. Kasutage usaldusväärseid fikseerimisprotokolle ja vältige ala- ja ülefikseerimist.
  • DNA kahjustused ja killustatus: FFPE proovide formaliini fikseerimine võib põhjustada erinevat tüüpi DNA kahjustusi, sealhulgas tsütosiini deaminatsiooni (C-T mutatsioonid), oksüdatiivseid kahjustusi (nt 8-okso-guaniin, mis põhjustab G-T mutatsioone), samuti füüsilisi häireid, nagu niklid, lüngad ja aluselised saidid, mis takistavad DNA polümeraasi aktiivsust. Formaliini fikseerimise protsess võib põhjustada DNA killustumist, raskendades geneetilisi ja genoomseid analüüse, nagu PCR ja sekveneerimine.
  • RNA kvaliteet: FFPE kudedest ekstraheeritud RNA on sageli killustatud ja keemiliselt modifitseeritud, mistõttu on kvaliteetsete transkriptoomiliste analüüside tegemine keeruline.
  • Valgu modifikatsioonid: Formaliin võib indutseerida valkudes keemilisi modifikatsioone, mõjutades nende struktuuri ja funktsiooni, mis võib häirida proteoomilisi analüüse.
  • Proovide töötlemise artefaktid: Manustamis- ja lõikamisprotsessi ajal võivad mehaaniline koormus ja kuumus tuua esemeid ja põhjustada kudedele täiendavaid kahjustusi.
  • Partiide kaupa varieeruvus: Fikseerimis- ja kinnistamisprotokollide variatsioonid erinevate partiide vahel võivad põhjustada tulemuste märkimisväärset varieeruvust, raskendades uuringute võrdlemist.
  • Ladustamisega seotud küsimused: FFPE plokkide pikaajaline säilitamine võib aja jooksul põhjustada täiendavat lagunemist ja nukleiinhappe terviklikkuse kadumist, mõjutades retrospektiivsete uuringute jaoks arhiiviproovide elujõulisust.

Optimeeritud protokollide kasutamine, hoolikas proovide käitlemine ja täiustatud tehnikate rakendamine aitavad parandada FFPE kudedest saadud andmete kvaliteeti ja usaldusväärsust.

Mis on FFPE ja külmutatud koe vahel?

FFPE (Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded) kude säilitatakse formaliini abil koe fikseerimiseks ja seejärel parafiinvaha sisse, võimaldades pikaajalist ladustamist toatemperatuuril, säilitades samal ajal koe morfoloogia. Seevastu külmutatud kude säilib kiiresti külmutamise teel, mis säilitab paremini nukleiinhapete ja valkude terviklikkuse, kuid nõuab säilitamist väga madalatel temperatuuridel.

Milliseid kemikaale kasutatakse FFPE manustamiseks?

FFPE manustamiseks kasutatavate kemikaalide hulka kuuluvad tavaliselt formaliin fikseerimiseks ja parafiinvaha kinnistamiseks. FFPE kinnistamiseks fikseeritakse koed tavaliselt kas 10% (v/v) neutraalse puhverdatud formaliiniga (FA) või värskelt valmistatud 4% (w/v) formaldehüüdi lahusega (PFA), mis on valmistatud paraformaldehüüdi pulbrist. Formaliin, mis on formaldehüüdi lahus vees, puhverdatakse neutraalse pH-ni, et säilitada koe morfoloogia ja vältida liigset ristsidumist. Paraformaldehüüdil põhinev lahus tagab ka tõhusa fikseerimise valkude ristsidumise teel, stabiliseerides seeläbi koe struktuuri järgnevaks parafiinvahasse kinnistamiseks. Need kemikaalid on olulised kudede terviklikkuse ja morfoloogia säilitamiseks fikseerimis- ja kinnistamisprotsessi ajal.

Kuidas parafiin FFPE proovidest eemaldatakse?

Parafiini eemaldamiseks FFPE proovidest allutatakse koelõigud tavaliselt ksüleenpesu seeriale, millele järgneb rehüdratsioon läbi astmeliste alkoholide seeria ja lõpuks vee. Kuna ksüleen on väga mürgine, põhjustades terviseriske, nagu hingamisteede probleemid, nahaärritus ja võimalikud pikaajalised mõjud korduval kokkupuutel, on ultraheli parafiini eemaldamine paljudes laborites paljutõotava alternatiivina. See meetod kasutab intensiivseid ultraheli laineid, et tõhusalt ja ohutult eemaldada parafiin ilma toksiliste lahustiteta nagu ksüleen, vähendades seeläbi ohtu laboritöötajatele ja luues ohutuma töökeskkonna.

Kui kaua peaksin oma kudesid FFPE proovi hea kvaliteedi tagamiseks fikseerima?

Üldised soovitused fikseerimise kestuse kohta soovitavad tavaliselt koeproovide fikseerimist formaliinis 24–48 tundi. See kestus on üldiselt piisav kudede morfoloogia ja rakustruktuuride säilitamiseks, minimeerides samal ajal ülefikseerimist, mis võib põhjustada nukleiinhapete ja valkude liigset ristsidumist ja lagunemist. Kuid optimaalne fikseerimisaeg võib varieeruda sõltuvalt koe suurusest ja tüübist, kusjuures väiksemad või õrnemad proovid nõuavad lühemat fikseerimisaega. On ülioluline tasakaalustada piisavat fikseerimist, et vältida kudede autolüüsi ja lagunemist, vältides samal ajal pikaajalist fikseerimist, mis võib raskendada järgnevaid molekulaaranalüüse.

Meil on hea meel arutada teie protsessi.

Võtame ühendust.