FFPE suure läbilaskevõimega proovide ettevalmistus: valgu ekstraheerimine ja nukleiinhapete nihkelõikus
Suure läbilaskevõimega ultraheli homogenisaatoriga UIP400MTP lahendab Hielscher Ultrasonics formaliiniga fikseeritud ja parafiini sisestatud (FFPE) kudede ettevalmistuse väljakutsed. Siit saate teada, kuidas ultraheli töötlus (sonikeerimine) töötleb suurel hulgal FFPE proove FFPE deparafiniseerimiseks, koe lüüsiks, homogeniseerimiseks, valgu ekstraheerimiseks ning DNA/RNA nihkelõikuseks! Kasutage ära ultraheli abil toimuva FFPE koe ettevalmistuse eeliseid – suure proovide arvu töötlemist mitmekannulistel plaatidel! Saate kvaliteetsed proovid ja suure proovide arvu usaldusväärsete uurimistulemuste jaoks! Ja mis kõige tähtsam – säästate aega ja raha!
FFPE proovide ettevalmistuse hõlbustamine suure läbilaskevõimega ultraheli töötlusega (sonikeerimisega)
Formaliinfiksatsioon ja parafiini sisestamine (FFPE) on kõige levinum meetod tahkete kudede säilitamiseks ja arhiveerimiseks. Biomolekulide ekstraheerimine FFPE koeproovidest on säilitatud proovide kvaliteedi tõttu sageli märkimisväärselt keeruline. Need proovid, mis on molekulaarbioloogias ja kliinilises uurimistöös hindamatu väärtusega, pakuvad rikkalikku bioloogilist teavet retrospektiivsete uuringute ja diagnostiliste biomarkerite valideerimise jaoks. Formaliinfiksatsiooni ja parafiini sisestamise protsess küll säilitab koe arhitektuuri ja morfoloogia, kuid muudab kvaliteetsete nukleiinhapete ja valkude ekstraheerimise keerulisemaks. Formaliin põhjustab nukleiinhapete ja valkude ristsiduvust, mis viib molekulide fragmenteerumise ja keemiliste modifikatsioonideni. Siit saate teada, kuidas suure läbilaskevõimega ultraheli homogenisaator UIP400MTP ületab FFPE proovide ettevalmistuse väljakutsed!
Ultraheli homogenisaator tõhusaks FFPE proovide ettevalmistuseks
- Lihtsasti kasutatav töövoog: lihtsustatud protsessid, mis on kasutajasõbralikud.
- Deparafiniseerimine, valgu ekstraheerimine, DNA / RNA nihkelõikus
- Kiire suure läbilaskevõimega töötlus: mitmekannuliste plaatide tõhus käsitsemine.
- Tõhus deparafiniseerimine: valkude parem lahustumine.
- Mittetoksilised lahustid: väldib kahjulike orgaaniliste lahustite, näiteks ksüleeni kasutamist.
UIP400MTP suure läbilaskevõimega sonikaator FFPE proovide suure läbilaskevõimega töötlemiseks mitmekannulistel plaatidel
Edusammud valgu ekstraheerimise meetodites FFPE koest
Hielscher Ultrasonics lahendab suure läbilaskevõimega FFPE proovide ettevalmistuse väljakutsed. Ultraheli töötlus (sonikeerimine) kasutab ultraheli laineid mehaaniliste vibratsioonide ja fokuseeritud kavitatsiooni tekitamiseks, mis lõhub tõhusalt rakustruktuure ja parandab biomolekulide lahustumist. See meetod on populaarsust kogunud tänu oma võimele suurendada nukleiinhapete ja valkude ekstraheerimise tõhusust ja saagist FFPE kudedest ning DNA ja RNA nihkelõikuseks raamatukogu ettevalmistuse jaoks. On väga oluline rõhutada, et ultraheli töötlus mitmekannulise plaadi sonikaatoriga UIP400MTP säilitab nende biomolekulide terviklikkuse järgnevate rakenduste jaoks.
Nukleiinhapete nihkelõikus suure läbilaskevõimega ultraheli töötlusega
Mitme süvendiga plaatide ultraheli homogenisaator UIP400MTP, mis on mõeldud kasutamiseks suure läbilaskevõimega keskkonnas, viib FFPE-proovide ettevalmistamise uuele tasemele. See mitme süvendiga plaatide ultraheli töötlusmeetod pakub tõhusa ja usaldusväärse lahenduse mitme proovi samaaegseks töötlemiseks. See võimaldab DNA, RNA ja valkude kiiret ning korratavat ekstraheerimist, mis on olulised mitmesuguste analüütiliste meetodite jaoks, sealhulgas järgmise põlvkonna sekveneerimine (NGS), kvantitatiivne PCR ja proteoomikaanalüüsid. Ultraheli töötluse parameetrite, nagu amplituud, kestus ja temperatuur, optimeerimine parandab veelgi ekstraheeritud biomolekulide kvaliteeti ja kogust.
Mitme süvendiga plaatide sonikaator UIP400MTP pakub olulisi eeliseid DNA ja RNA fragmenteerimisel ning nihkel FFPE-koest. Üks selle süsteemi silmapaistvamaid omadusi on võime saavutada DNA ja RNA kitsas fragmentide suuruste vahemik, kusjuures ultraheli töötluse intensiivsuse täpne reguleeritavus võimaldab saada lühikesi fragmente pikkusega 150–200 aluspaari (bp) või pikemaid fragmente pikkusega 15–20 kilo-aluspaari (kbp). Tänu sellele mitmekülgsusele on UIP400MTP asendamatu nii lühikeste kui ka pikkade lugemite sekveneerimisel, tagades kvaliteetsed tulemused järgmise põlvkonna sekveneerimisel (NGS) ja kogugenoomi sekveneerimisel (WGS). Täpne fragmendi suuruse kontroll on olulise tähtsusega teadlastele kõigis genoomika valdkondades, kuna see võimaldab valmistada proove vastavalt nõuetele.
Võtke meiega ühendust – täiustatud lahendused FFPE-koe jaoks
Avastage mitme süvendiga plaatide sonikaator UIP400MTP, mis võimaldab FFPE-proovidest tõhusalt eraldada biomolekule, säilitades ekstraheeritud nukleiinhapete ja valkude terviklikkuse ning tagades tulemuste korratavuse. See tehnoloogia sulandub sujuvalt teiste ettevalmistus- ja analüüsitöövoogudega, muutes FFPE-koearhiividega tehtavad molekulaaruuringud sujuvamaks ja tõhusamaks.
Fikseerivad ained ja nende mõju
Fikseerimine on proovide ettevalmistamisel oluline etapp, mis säilitab rakustruktuurid, peatab biokeemilised reaktsioonid ja hoiab ära lagunemise. Sõltuvalt konkreetsetest katsenõuetest kasutatakse erinevaid fikseerivaid aineid. Kaks levinumat fikseerivat ainet on formaldehüüd ja paraformaldehüüd, mis seovad valke ja nukleiinhappeid ristsidemetega ning säilitavad rakkude ja kudede morfoloogia ja antigeensuse. Muid fikseerivaid aineid, näiteks etanooli, metanooli ja glutaaraldehüüdi, kasutatakse spetsiifilistes rakendustes.
Formaldehüüdi ja paraformaldehüüdi fikseerivad ained moodustavad aminorühmade vahel metüleensildu, mille tulemusena valgud seotakse ristsidemetega. See protsess immobiliseerib rakukomponendid tõhusalt, säilitades nende terviklikkuse järgmiste analüüsietappide ajal. Nende fikseerivate ainete mõju võivad mõjutada sellised tegurid nagu kontsentratsioon, pH ja temperatuur ning nende parameetrite optimeerimine on rakustruktuuride optimaalse säilimise tagamiseks väga oluline.
Ultraheliga FFPE-proovide ettevalmistamise eelised
Ultraheli töötlus on võimas meetod fikseeritud rakkude ja kudede lõhkumiseks, mis ületab tavapäraseid meetodeid. Sellel on mitu märkimisväärset eelist traditsiooniliste lüüsimeetodite ees:
- Kiirus ja tõhusus: Ultraheli lüüs tagab rakkude ja kudede kiire lõhkumise, vähendades oluliselt töötlemisaega võrreldes mehaaniliste või keemiliste lüüsimeetoditega. Ultraheli sonotroodi tekitatud kõrgsageduslikud helilained tekitavad mehaanilisi nihkejõude, mis põhjustavad fikseeritud rakustruktuuride lõhkumist. See kiire ja tõhus lõhkumine võimaldab teadlastel töödelda suuri proovimahtusid lühikese ajaga.
- Õrn ja reguleeritav: Ultraheli lüüs pakub õrna lõhkumismehhanismi, mis minimeerib tundlike biomolekulide, näiteks valkude, nukleiinhapete ja ensüümide kahjustamist. Erinevalt mehaanilistest meetoditest, mis tekitavad liigset soojust või nihkejõude, kasutab ultraheli lüüs rakkude lõhkumiseks kontrollitud kavitatsiooni, säilitades samal ajal rakusiseste komponentide terviklikkuse ja funktsionaalsuse.
- Mitmekülgsus: Ultraheli lüüsi saab rakendada erinevate fiksaatoritega fikseeritud proovidele, mis võimaldab teadlastel töötada väga erinevate fikseeritud proovidega. Olenemata sellest, kas kasutatakse formaldehüüdi, paraformaldehüüdi või alternatiivseid fiksaatoreid, tagab ultraheli lüüs järjepidevalt tõhusa lõhkumise ning rakukomponentide optimaalse taastumise.
- Kõrge saagis ja kvaliteet: Ultraheli lüüs võimaldab saada suure saagise terveid rakukomponente, kuna see suudab fikseeritud rakke ja kudesid ühtlaselt lõhkuda. See võimaldab järgnevatel rakendustel, nagu valkude analüüs, nukleiinhapete eraldamine ja ensümaatilised testid, anda usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid tulemusi.
- Ühilduvus automatiseerimisega: Ultraheli lüüsi saab hõlpsasti integreerida automatiseeritud süsteemidesse, mis võimaldab proovide suure läbilaskevõimega töötlemist. See ühilduvus võimaldab teadlastel oma töövoogu sujuvamaks muuta ja tootlikkust suurendada, eriti suuremahulistes uuringutes.
96-süvendiline plaadisonikaator UIP400MTP mikrotiiter- ja mitmekannuplaatide ultraheli töötluseks (sonikeerimiseks)
Ultraheli lüüs on muutnud revolutsiooniliselt fikseeritud rakkude ja kudede lõhkumist, pakkudes arvukalt eeliseid traditsiooniliste lüüsimeetodite ees. Selle kiirus, tõhusus, selektiivsus, mitmekülgsus, kõrge saagis ja ühilduvus automatiseerimisega teevad sellest asendamatu vahendi molekulaarbioloogia ja biotehnoloogia uuringutes. Pakkudes nii kontaktivabu sonikaatoreid kui ka sondtüüpi sonikaatoreid, pakub Hielscher Ultrasonics teie bioteaduste rakendusele sobivaimat ultraheli homogenisaatorit. Olenemata sellest, kas soovite töödelda üksikproove, mitut proovi või väga suurt arvu proove üheaegselt, pakume teile parimat sonikaatorit, mis vastab teie uuringu- ja diagnostikavajadustele.
Lugege lähemalt Hielscheri kontaktivabadest sonikaatoritest mitme proovi ja suure läbilaskevõimega proovide ettevalmistamiseks!
- ühekordne investeering
- kasutage oma tarbekaupu
- puuduvad korduvad kulud patenteeritud lisatarvikutele ja tarbekaupadele
- suur läbilaskevõime
- täppisjuhtimine
- tipptehnoloogia
- töökindlus ja vastupidavus
- reguleeritav, täpne protsessijuhtimine
- tööstuslik klass: saab pidevalt töötada 24/7
- lihtne ja ohutu kasutada
- vähene hooldusvajadus
Plaadisonikaator UIP400MTP kõigile 96-süvendilistele plaatidele, mikrotiiterplaatidele ja mitmekannuplaatidele.
Disain, tootmine ja konsulteerimine – kvaliteet, mis on valmistatud Saksamaal
Hielscheri ultrasonikaatorid on tuntud oma kõrgeima kvaliteedi ja disainistandardite poolest. Töökindlus ja lihtne kasutamine võimaldavad meie ultrasonikaatorite sujuvat integreerimist tööstusrajatistesse. Hielscheri ultrasonikaatorid tulevad raskete tingimuste ja nõudlike keskkondadega hõlpsasti toime.
Hielscher Ultrasonics on ISO-sertifitseeritud ettevõte ning pöörab erilist tähelepanu suure jõudlusega ultrasonikaatoritele, mis ühendavad tipptehnoloogia ja kasutajasõbralikkuse. Loomulikult vastavad Hielscheri ultrasonikaatorid CE nõuetele ning UL-i, CSA ja RoHs nõuetele.
Võtke meiega ühendust! / Küsige meilt!
Ultrasonikaator UIP400MTP: FFPE proovide ettevalmistamine suure läbilaskevõimega mitmekannuplaadil
KKK
Allpool vastame sagedasti esitatavatele küsimustele, mis on olulised FFPE koe ettevalmistamisel ja FFPE proovide ultraheli töötlemisel.
Kuidas FFPE kude ette valmistatakse?
FFPE-koe ettevalmistuse etapid: Värske koe hoolikas käsitsemine ja töötlemine on kvaliteetsete FFPE-proovide saamiseks ülioluline. Rakkude arhitektuuri, nukleiinhapete ja valkude säilimise tagamine on täpse järgneva analüüsi jaoks hädavajalik. Iga etapp – alates kogumisest kuni valamiseni – nõuab täpsust, et säilitada proovi terviklikkus erinevate analüüside jaoks, sealhulgas histoloogilise uuringu, immunohistokeemia ja molekulaaruuringute jaoks. Korrektselt teostatud fikseerimis- ja valamisprotsess tagab, et säilitatud kude peegeldab täpselt in vivo seisundit, võimaldades usaldusväärseid diagnostika- ja uurimistulemusi.
Tutvustame teile FFPE-koeproovide valamisprotsessi 6 peamist etappi.
- Koe kogumine
Elusate imetajate biopsiad ja koekultuurid on mõlemad sobivad allikad värske koe saamiseks FFPE-proovide ettevalmistamiseks.
Oluline on kasutada aseptilist tehnikat: kasutage saastumise vältimiseks steriilseid instrumente ja kindaid. Ideaalis koguge kude steriilses keskkonnas, näiteks operatsioonisaalis või laminaarse õhuvooluga kapis.
Kuna proov on väga õrn, on selle ettevaatlik käsitsemine hädavajalik: minimeerige töötlemise viivitusi ja alustage koe järgnevat töötlemist kohe pärast väljalõikamist. See on autolüüsi ja lagunemise vältimiseks ülioluline. Hoidke kudet toatemperatuuril; vältige külmutamist, sest see võib põhjustada jääkristallide teket ja koekahjustust. - Koe fikseerimine
Esiteks töödeldakse kudet fiksatiivilahusega: kasutage 10% neutraalse puhverdusega formaliini (NBF), mis vastab 4% formaldehüüdile vees, puhverdatud neutraalse pH-ni.
Uputage kude täielikult formaliini. Tagage fiksatiivi ja koe mahusuhe vähemalt 10:1. Fikseerimisaeg on tavaliselt 6 kuni 24 tundi sõltuvalt koe tüübist ja suurusest. On oluline, et fiksatiiv suudaks koesse põhjalikult tungida. Ülefikseerimine võib aga põhjustada ristsidumist, mis raskendab antigeeni taastamist, samas kui alafikseerimine võib kaasa tuua koe halva säilimise. - Koe lõikamine sobivasse suurusse
Teiseks lõigake kude umbes 3-5 mm paksuseks, et fiksatiiv saaks piisavalt tungida. Tagage koe õige orientatsioon, et jäädvustada asjakohased histoloogilised struktuurid. See hõlbustab ekstraheerimisprotsessi, kui kude hiljem analüüsiks kasutatakse. - Fikseeritud proovi töötlemine
Nüüd tuleb fikseeritud kude dehüdreerida: pärast fikseerimist tuleb kude dehüdreerida, et parafiinvaha saaks seda põhjalikult läbi imbuda. Laske kude läbi etanooli astmelise seeria (70%, 80%, 90% ja 100%), et eemaldada vesi.
Selgitamine ksüleeniga: parafiinvaha ei lahustu vees, kuid lahustub ksüleenis. Seetõttu tuleb koes olev vesi asendada ksüleeniga. Ksüleen ise ei lahustu aga vees, kuid lahustub alkoholis, mistõttu on vaja vahepealset etappi, kus vesi asendatakse esmalt alkoholiga.Kastke kude ksüleeni või ksüleeni asendajasse, et eemaldada etanool ja valmistada kude ette parafiiniga imbumiseks.
Parafiiniga imbumine: valage kude sulatatud parafiinvahasse, tagades täieliku imbumise. See etapp hõlmab tavaliselt parafiini mitut vahetust, et tagada põhjalik immutamine. - Koe valamine
Selles etapis vormitakse kude koeplokiks: asetage kude soovitud orientatsioonis vormi ja valage sellele sulatatud parafiin. Laske parafiinil tahkuda, jahutades seda toatemperatuuril või külmal plaadil. - Lõikamine ja kinnitamine
Mikrotoomia: immutatud koe lõikamiseks kasutage mikrotoomi, et lõigata parafiinplokist õhukesi lõike (tavaliselt 4-5 mikromeetrit). Seejärel kinnitatakse proov, asetades lõigud klaasilaatidele järgnevaks värvimiseks ja mikroskoopiliseks analüüsiks.
Lõpuks kontrollige histoloogia kvaliteeti: hinnake esimesi lõike mikroskoobi all, et veenduda õiges fikseerimises ja töötlemises. Kohandage protokolle vastavalt vajadusele, lähtudes koe tüübist ja täheldatud kvaliteedist.
FFPE-kudesid sobivad RNA, DNA ja valkude väljaeraldamiseks ning vähi või muude haiguste tunnuste tuvastamiseks. Neid saab säilitada aastaid ning need on oluline osa sellest, kuidas teadlased ja arstid kasutavad koeproove diagnostikas ja uurimistöös.
Millised on FFPE-koe levinumad probleemid ja väljakutsed?
Formaliiniga fikseeritud ja parafiini sisestatud (FFPE) koeproove kasutatakse laialdaselt teadustöös ja diagnostikas, kuid nendega kaasneb mitu väljakutset ja levinud probleemi:
- Biomolekulide lagunemine: Pikaajaline fikseerimine võib põhjustada DNA, RNA ja valkude lagunemist, mistõttu on raske eraldada kvaliteetseid nukleiinhappeid või valke järgnevateks rakendusteks. Õige fikseerimine (alafikseerimise ja ülefikseerimise vältimine) on koe säilimiseks hädavajalik.
- Antigeenide maskeerimine: Fikseerimisprotsess võib maskeerida antigeenseid saite, vähendades antikehade seondumise tõhusust immunohistokeemias ja muudes immunoloogilistes analüüsides. See nõuab sageli antigeeni taastamist – protseduuri, mille käigus epitoobi maskeering tühistatakse ning epitoobi ja antikeha vaheline seondumine taastatakse. Täielikku antigeensust ei pruugi siiski alati õnnestuda taastada.
- Muutlik fikseerimise kvaliteet: Erinevused fikseerimisaegades ja -tingimustes võivad põhjustada ebaühtlast proovikvaliteeti, mõjutades tulemuste reprodutseeritavust ja võrreldavust. Kasutage usaldusväärseid fikseerimisprotokolle ning vältige alafikseerimist ja ülefikseerimist.
- DNA kahjustused ja fragmenteerumine: FFPE-proovide formaliinfikseerimine võib põhjustada mitmesuguseid DNA kahjustusi, sealhulgas tsütosiini deaminatsiooni (C-st T-ks mutatsioonid), oksüdatiivseid kahjustusi (nt 8-okso-guaniin, mis põhjustab G-st T-ks mutatsioone), samuti füüsilisi katkestusi, nagu katked, lüngad ja abaasilised saidid, mis takistavad DNA polümeraasi aktiivsust. Formaliinfikseerimise protsess võib põhjustada DNA fragmenteerumist, mis raskendab geneetilisi ja genoomseid analüüse, nagu PCR ja sekveneerimine.
- RNA kvaliteet: FFPE-kudedest eraldatud RNA on sageli fragmenteerunud ja keemiliselt modifitseeritud, mistõttu on kvaliteetsete transkriptoomianalüüside tegemine keeruline.
- Valkude modifikatsioonid: Formaliin võib esile kutsuda valkude keemilisi modifikatsioone, mis mõjutavad nende struktuuri ja funktsiooni ning võivad segada proteoomianalüüse.
- Proovi töötlemisel tekkivad artefaktid: Sisestamise ja lõikamise käigus võivad mehaaniline pinge ja kuumus tekitada artefakte ning põhjustada koele täiendavaid kahjustusi.
- Partiidevaheline varieeruvus: Fikseerimis- ja sisestamisprotokollide erinevused eri partiide vahel võivad põhjustada tulemustes olulist varieeruvust, raskendades uuringute vahelist võrdlemist.
- Säilitamisega seotud probleemid: FFPE-plokkide pikaajaline säilitamine võib aja jooksul põhjustada täiendavat lagunemist ja nukleiinhapete terviklikkuse kadu, mis mõjutab arhiiviproovide sobivust retrospektiivseteks uuringuteks.
Ristsidumine: Formaliinfikseerimine põhjustab valkude ja nukleiinhapete ristsidumist, mis võib takistada molekulaaranalüüsi ning mõjutada immunohistokeemia ja muude analüüside täpsust.
Optimeeritud protokollide kasutamine, hoolikas proovide käsitsemine ja täiustatud tehnikate rakendamine aitavad parandada FFPE-kudedest saadud andmete kvaliteeti ja usaldusväärsust.
Mis vahe on FFPE- ja külmutatud koel?
FFPE-kude (formaliiniga fikseeritud, parafiini sisestatud) säilitatakse, fikseerides koe formaliiniga ja sisestades seejärel parafiinvahasse, mis võimaldab pikaajalist säilitamist toatemperatuuril, säilitades samal ajal koe morfoloogia. Seevastu külmutatud kude säilitatakse kiiresti külmutamise teel, mis säilitab paremini nukleiinhapete ja valkude terviklikkuse, kuid nõuab säilitamist väga madalatel temperatuuridel.
Milliseid kemikaale kasutatakse FFPE-sisestamisel?
FFPE-sulundamisel kasutatavad kemikaalid hõlmavad tavaliselt fikseerimiseks formaliini ja sulundamiseks parafiinvaha. FFPE-sulundamiseks fikseeritakse kuded tavaliselt kas 10% (v/v) neutraalse puhverdatud formaliiniga (FA) või värskelt valmistatud 4% (w/v) formaldehüüdilahusega (PFA), mis on valmistatud paraformaldehüüdipulbrist. Formaliin, mis on formaldehüüdi vesilahus, on puhverdatud neutraalse pH-ni, et säilitada koe morfoloogiat ja vältida liigset ristsidumist. Paraformaldehüüdipõhine lahus tagab samuti tõhusa fikseerimise valkude ristsidumise kaudu, stabiliseerides seeläbi koe struktuuri edasiseks parafiinvahasse sulundamiseks. Need kemikaalid on olulised koe terviklikkuse ja morfoloogia säilitamiseks fikseerimis- ja sulundamisprotsessi käigus.
Kuidas eemaldatakse parafiin FFPE-proovidest?
Parafiini eemaldamiseks FFPE-proovidest töödeldakse koelõike tavaliselt mitme ksüleenipesuga, millele järgneb rehüdreerimine astmelise alkoholide seeria ja lõpuks vee kaudu. Kuna ksüleen on väga toksiline ning põhjustab terviseriske, nagu hingamisprobleemid, nahaärritus ja korduval kokkupuutel võimalikud pikaajalised toimed, on ultrahelipõhine parafiini eemaldamine paljudes laborites esilekerkiv paljutõotav alternatiiv. See meetod kasutab intensiivseid ultraheli laineid, et tõhusalt ja ohutult eemaldada parafiin ilma toksiliste lahustiteta, nagu ksüleen, vähendades seeläbi riski laboripersonalile ja luues ohutuma töökeskkonna.
Kui kaua peaksin oma kudesid fikseerima hea FFPE-proovi kvaliteedi saavutamiseks?
Fikseerimise kestuse üldised soovitused näevad tavaliselt ette koeproovide fikseerimist formaliinis 24 kuni 48 tundi. See kestus on üldiselt piisav koe morfoloogia ja rakustruktuuride säilitamiseks, minimeerides samal ajal ülefikseerimist, mis võib põhjustada liigset ristsidumist ning nukleiinhapete ja valkude lagunemist. Optimaalne fikseerimisaeg võib siiski varieeruda sõltuvalt koe suurusest ja tüübist, kusjuures väiksemad või õrnemad proovid vajavad lühemat fikseerimisaega. On oluline leida tasakaal piisava fikseerimise, mis hhoiab ära koe autolüüsi ja lagunemise, ning pikaajalise fikseerimise vältimise vahel, mis võiks edasisi molekulaaranalüüse keerulisemaks muuta.