Genetička transformacija u biljnim ćelijama pomoću ultrazvučnika

Sonication-Assisted Agrobacterium-Mediated Transformation (SAAT) je efikasna metoda za zarazu biljnih ćelija stranim genima koristeći Agrobacterium kao transporter. Ultrazvučna kavitacija uzrokuje sonoporaciju, koja se može opisati kao ciljano mikro-ranjavanje biljnog tkivo. Preko ovih ultrazvučno stvara mikro-rane, DNK i DNK vektori mogu se efikasno transportirati u ćelijsku matricu.

Sonoporacija – Ultrazvučno poboljšana transformacija ćelija

Ultrasonicator UP100H je laboratorijski homogenizer koji se često koristi za pripremu uzoraka ćelijskih ploča kulture.Kada se ultrazvuk niske frekvencije (cca. 20kHz) nanese na ćelijske suspenzije, efekti akustičke kavitacije uzrokuju prolaznu membransku permeabilizaciju na ćelijska tkiva. Ovaj ultrazvučni efekat je poznat kao sonoporacija i koristi se za prenos gena u ćelije ili tkivo.
Prednosti ultrasonication su zasnovane na njegovom ne-termalnom mehaničkom principu rada, što čini sonikaciju često svestranom i manje zavisnom od tipova ćelija. Svestrana primjena sonoporacije otvara mogućnost za iskorišćenje transgenih biljaka, koje imaju značajan potencijal u bioprodukciji složenih ljudskih terapeutskih proteina. Takvi bioreaktori na bazi biljaka mogu se lako genetski manipulirati, spriječiti potencijalnu kontaminaciju ljudskim patogenima, ne oštećuju transformaciju posredujućih bakterija (npr. Agrobacterium), te su jeftina, učinljiva metoda bio-sinteze.

Informativni zahtev




Zabilježi naš Politika privatnosti.


Ultrasonicator UP200St, 200 vata snažan ultrasonikator tipa sonde za genetiku, mikrobiologiju i transformaciju ćelija

Ultrasonicator UP200St (200W, 26kHz) sa zvučnim održanim

Video prikazuje ultrazvučni sistem pripreme uzoraka UIP400MTP, koji omogućava pouzdanu pripremu uzoraka bilo koje standardne multi-well ploče pomoću ultrazvuka visokog inteziteta. Tipične primjene UIP400MTP uključuju lizu ćelija, DNK, RNK, i šariranje hromatina kao i ekstrakciju proteina.

Ultrasonicator UIP400MTP za multi-well sonication ploča

Ultrazvučno-asistirana transformacija ćelija

Ultrasonikatori tipa sonde kao što je UP200St su pouzdani homogenizatori tkiva i naširoko se koriste za pripremu uzoraka u genetiku, npr. za Sonication-Assisted Agrobacterium-Mediated Transformation (SAAT).Sonication je tehnika koja primjenjuje ultrazvučne talase niske frekvencije za agitaciju čestica u rastvoru, za miješanje rješenja, i time povećava brzinu prijenosa mase i rastvaranja. Istovremeno, sonikacija može ukloniti otošene gasove iz tečnosti. U biljno-transformaciji, sonikacija će izazvati formiranje mikro-lova na biljnom tkivu i pojačati isporuku gole DNK u biljni protoplast.

Za genetičku transformaciju, Transformacija posredovana Sonication-Assisted Agrobacterium (SAAT) je preferirana metoda i ima znatno veću efikasnost od sonikacije koja se koristi za prijenos golih DNK i DNK vektora direktno u protoplast. Brojne studije su pokazale da sonication asisted Agrobacterium-posredovan transformacija (SAAT) može koristiti za izazivanje mehaničkih poremećaja i formiranje rana na biljnim ćelijama ultrazvučnim valovima i rezultirajući akustička kavitacija. Kratki ultrazvučni tretman stvara mikro rane na površini objašnjenja. Kako će ranjene ćelije omogućiti prodiranje Agrobacteriuma u dublji dio biljnih tkiva, povećavajući tako i moguænost zaraze biljnih ćelija. Osim toga, izlučiva fenolički spojovi pojačava transformaciju. Ultrazvučno generirane mikro rane čine eksplantnu penetraciju bakterijama također izvodljivije. SAAT je uspješno korišten za genetičku transformaciju kod biljnih vrsta koje se posebno smatraju otpornim na Agrobacterium.
To što je vrlo jednostavna i jeftina metoda, kao i značajno poboljšanje transfera gena posredovanog agrobakterijom su glavne prednosti SAAT-a. Osim uspješne primjene SAAT-a u transformaciji Chenopodium rubrum L. i Beta vulgaris L., ovaj pristup je primijenjen i u proizvodnji rekombinantnih escherichia coli divljeg tipa toplotno-labilan holotoksina i escherichia coli mutant LT cjepiva adjuvanti u Nicotiana tabacum, u kojima su kod ptica otkriveni najviši sistemski IgG titri specifični za LT-B.
(usp. Laere et al., 2016; M. Klimek-Chodacka i R. Baranski, 2014)

VialTweeter se može koristiti za DNK infekciju planskih ćelija, npr. pomoću sonication-assisted Agrobacterium- posredovane transformacije (SAAT)

VialTweeter za istovremenu sonikaciju više uzoraka cijevi, npr. za sonication-assisted Agrobacterium- posredovanu transformaciju (SAAT)

Naučno dokazane prednosti sonication-assisted Agrobacterium-Mediated Transformation (SAAT)

Sonication-Assisted Agrobacterium-Mediated Transformation (SAAT) primijenjen je na brojne biljne vrste. Kratko i relativno blago ultrazvučno liječenje kultura biljnih ćelija uzrokuje sonoporaciju, što nakon toga omogućava dubok prodor Agrobacteriuma kao genskog transportera. U nastavku možete pročitati uzorne studije koje pokazuju blagotvornog efekta SAAT-a.

Ultrazvučno-asistirana transformacija Ashwagandha

Kako bi se poboljšala efikasnost transformacije u W. somnifera (poznata kao ashwagandha ili zimska trešnja), Dehdashti i kolege (2016) istraživali su upotrebu acetosiringona (AS) i sonication.
Acetosyringone (AS) je dodat u tri faze: Agrobacterium tečni kultura, Agrobacterium infekcija i ko-kultura objašnjenja sa Agrobacterium. Za dodavanje 75 μM AS u agrobakterijsku tekuću kulturu je pronađeno da je optimalno za indukciju vir gena.
Dodatna primjena sonikacije (SAAT) rezultirala je najvišim genom ekspresije. Izraz gusA gena u dlakavim korijenima je bio najbolji kada su savjeti za lišće i snimanje sonicirani za 10 odnosno 20-ih godina. Efikasnost transformacije poboljšanog protokola zabilježena je 66,5 odnosno 59,5% u slučaju objašnjenja za list i pucanje savjeta. Kada se uporedi sa drugim protokolima, za efikasnost transformacije ovog poboljšanog protokola je bilo 2,5 puta više za lišće i 3,7 puta više za vrhove pucanja. Analize južnih blotova su potvrdile 1–2 kopije gusA transgena u linijama W1-W4, dok su 1-4 transgene kopije otkrivene u liniji W5 koju je generirao poboljšani protokol.

Trajanje sonikacije (vrijeme izloženo ultrazvuku) utječe na sonication-assisted Agrobacterium- posredovane transformacije (SAAT) na transformaciju u W. somnifera

Efekt trajanja sonication-assisted Agrobacterium- posredovane transformacije (SAAT) na transformacijsku frekvenciju W. somnifera list (a) i pucati vrh (b) objašnjenja
(studija i grafika: © Dehdashti et al., 2016)

Informativni zahtev




Zabilježi naš Politika privatnosti.


Ultrazvučno-asistirana transformacija pamuka

Hussain et al. (2007) pokazuju blagotvornog efekta transformacije pamuka uz pomoć sonicationa. Akustična kavitacija uzrokovana ultrazvukom niske frekvencije stvara mikro-rane na i ispod površine biljnog tkivo (sonoporacija) i omogućava Agrobacteriumu da putuje dublje i potpuno u cijelom biljnom tkivu. Ova moda ranjavanja povećava vjerojatnost zaraze biljnih ćelija koje su dublje u tkivu. Da bi se ocijenila efikasnost transformacije SAAT-a, izmjerena je gus ekspresija gena. Gus reporterski sistem je genski sistem reportera, posebno koristan u molekularnoj biologiji biljaka i mikrobiologiji. Podešavanje raznih SAAT parametara, GUS prolazan izraz u pamuk koristeći zrele embrione kao objašnjenje je značajno poboljšan. GUS je prvi put otkriven 24h nakon inkubacije objašnjenja i do 48h, GUS izraz je bio vrlo intezivan što je poslužilo kao koristan pokazatelj uspješne transformacije pamuk objašnjenja nakon sonication pomogla Agrobacterium posredovane transformacije (SAAT). Poređenje različitih tehnika transformacije (i to biolistika, Agro, BAAT, SAAT), transformacija posredovana u sonicijama (SAAT) pokazala je daleko najbolje rezultate transformacije.

Sonication-assisted Agrobacterium-posredovane transformacije (SAAT) pokazuje znatno veći prolazni izraz kada se u odnosu na alternativne metode infekcije.

Izbor postupka transformacije na osnovu prolazne ekspresije GUS-a. Sonication-assisted Agrobacterium-posredovane transformacije (SAAT) pokazuje znatno veći prolazni izraz.
(studija i grafika: © Hussain et al., 2007)

Ultrazvučna rješenja visokih performansi za sonoporaciju i SAAT

Hielscher Ultrasonics je dugo vremena iskusna u razvoju i proizvodnji ultrazvučnikatora visokih performansi za laboratorije, istraživačkih objekata kao i industrijske proizvodnje sa vrlo visokim ulazima. Za mikrobiologiju i nauku o životu, Hielscher nudi različita rješenja za smještaj različitih zahtjeva neophodnih za specifična tkiva i njihove tretmane. Za istovremenu ultrazvuku brojnih uzoraka Hielscher nudi UIP400MTP za multiwell ploče, VialTweeter za sonication do 10 bočica (npr. Eppendorfove cijevi) ili ultrazvučni CupHorn. Ultrasonikatori tipa sonde dostupni su od 50 do 400 vata kao laboratorijski homogenizatori, dok industrijski sistemi pokrivaju raspon snage od 500 vata do 16kW.
Molimo vas da nam se javite i javite nam o vašim zahtjevima za prijavu i procese. Našem dobro iskusnom osoblju će biti drago da vam preporuči najpo odgovara ultrasonikator za vaš biološki proces.
Tabela u nastavku daje naznaku približan kapacitet prerade naših ultrasonicators:

Batch Volumen protok Preporučeni uređaji
multiwell / microtiter ploce N / A. UIP400MTP
do 10 bočica N / A. VialTweeter
do 5 bočica/cijevi ili 1 veća posuda N / A. Cufir
1 do 500ml 10 do 200ml / min UP100H
10 do 2000mL 20 do 400mL / min Uf200 ः t, UP400St
00,1 do 20L 00,2 do 4L / min UIP2000hdT
10 do 100l 2 do 10L / min UIP4000hdT
N / A. 10 do 100L / min UIP16000
N / A. veći klaster UIP16000

Kontaktiraj nas! / Pitajte nas!

Traži više informacija

Molimo vas da popunite obrazac ispod da zatražite dodatne informacije o našim ultrazvučnicima, njihovim prijavama i cijeni. Biće nam drago da razgovaramo o vašem procesu sa vama i da vam ponudimo ultrazvučni sistem koji ispunjava vaše zahteve!









Molim vas, obratite se našem Politika privatnosti.



Ultrazvučni homogenizatori visoke smice se koriste u laboratoriji, klupi-vrhu, pilotu i industrijskoj obradi.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi za miješanje aplikacija, disperziju, emulgaciju i ekstrakciju na laboratorijskim, pilotskim i industrijskim skalama.



Književnost/reference


Ultrazvuka visokih performansi! Hielscherov proizvodni raspon pokriva cijeli spektar od kompaktnog lab ultrasonicatora preko klupa-top jedinica do puno-industrijskih ultrazvučnih sistema.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi od laboratorija u industrijske veličine.