Ultrazvučno odvajanje ćelija

Ultrazvučno odvajanje ćelija je veoma efikasna i pouzdana tehnika pripreme uzoraka koja se koristi u različitim oblastima ćelijske biologije i biotehnologije. Koristeći ultrazvučne talase, sonikator ploča sa više jažica UIP400MTP odvaja adherentne ćelije sa površina kulture i priprema ćelijske suspenzije za nizvodne primene. Sonikacija nudi nekoliko prednosti u odnosu na tradicionalne enzimske, hemijske i mehaničke tehnike odvajanja, što ga čini vrijednim alatom za istraživače.

Princip ultrazvučnog odvajanja ćelija

Ultrazvučno odvajanje ćelija oslanja se na upotrebu ultrazvuka snage da poremeti interakciju između ćelija i supstrata na koji su pričvršćene. Ultrazvučni talasi stvaraju mikromehuriće, akustičnu kavitaciju i vibracije u medijumu kulture, proizvodeći mehaničke sile koje nežno, ali efikasno pomeraju ćelije. Ovaj proces se obično izvodi pomoću beskontaktnog sonikatora UIP400MTP za ploče sa više jažica.

Ispod ćete pronaći primjer uputa za odvajanje ćelija pomoću ultrazvučnog uređaja za ploče sa više jažica UIP400MTP.
 

Oprema i materijali za ultrazvučno odvajanje ćelija

• Beskontaktni sonikator za ploče sa više jažica UIP400MTP: Ovaj sonikator visoke propusnosti je ključni alat. Sonikator ploča UIP400MTP je pogodan za sve standardne ploče sa više jažica i mikrotitarske ploče, kao i za Petrijeve zdjelice. Ultrazvučni talasi obezbeđuju potrebnu mehaničku energiju za odvajanje ćelija.
• Ploče za kulturu ćelija ili Petrijeva posuda: Standardne posude koje se koriste za uzgoj adherentnih ćelijskih kultura.
• Kulturni medij: Tečni medij u kojem se ćelije uzgajaju i održavaju.
• Sterilni PBS (fiziološka otopina puferirana fosfatom): Koristi se za pranje ćelija prije odvajanja.
• Cijevi za prikupljanje: Za sakupljanje suspenzije odvojenih ćelija.

Protokol za ultrazvučno odvajanje pomoću Plate Sonicator UIP400MTP

1. Priprema
   – Uvjerite se da je sva oprema čista i sterilna kako biste spriječili kontaminaciju.
   – Prethodno zagrijte medij kulture i PBS na odgovarajuću temperaturu (obično 37°C).
2. Cell Washing
   – Aspirirajte podlogu za kulturu iz tikvice ili ploče za kulturu ćelija.
   – Nežno operite ćelije sterilnim PBS-om da biste uklonili zaostali medij i odvojene ćelije.
3. sonication
   – Dodajte malu količinu PBS-a ili svježeg medija za kulturu u tikvicu ili ploču da pokrijete monosloj ćelija.
   – Postavite Petrijevu posudu ili ploču u sonikator UIP400MTP.
   – Sonicate u određenom trajanju, obično u rasponu od nekoliko sekundi do nekoliko minuta, ovisno o vrsti ćelije i jačini vezivanja.
4. Zbirka ćelijske suspenzije
   – Nakon ultrazvuka, promatrajte ćelije pod mikroskopom kako biste osigurali odvajanje.
   – Nežno pipetirajte suspenziju ćelija da prikupite odvojene ćelije.
   – Prebacite suspenziju u epruvetu za sakupljanje.
5. Obrada nakon odvajanja
   – Centrifugirajte suspenziju stanica ako je potrebno da se ćelije koncentriraju.
   – Resuspendirajte ćelije u svježem mediju kulture ili puferu za daljnje primjene.

napomene: Parametri (kao što su vrijeme i intenzitet sonikacije) moraju biti optimizirani za različite tipove ćelija kako bi se izbjeglo oštećenje ćelija. Neke osjetljive vrste ćelija mogu biti osjetljivije na ultrazvučni tretman, što zahtijeva pažljivu optimizaciju.

Praktične primjene ultrazvučnog odvajanja ćelija

Ultrazvučno odvajanje ćelija koristi se u različitim istraživačkim i kliničkim okruženjima:

1. protočna citometrija: Priprema jednoćelijske suspenzije za analizu.
2. Brojanje ćelija i testovi vitalnosti: Odvajanje ćelija za precizno brojanje i procenu održivosti.
3. subkultura: Prenošenje ćelija iz jedne posude za kulturu u drugu.
4. Eksperimenti molekularne biologije: Izolacija ćelija za ekstrakciju DNK, RNK i proteina.