Буферни разтвори, приготвени чрез ултразвукова обработка

Буферите за лизис могат да се приготвят ефективно и бързо с помощта на ултразвукови тъканни хомогенизатори. Тъй като ултразвуковите устройства са идеален инструмент за смесване, разтваряне и диспергиране, те позволяват надеждно и лесно за потребителя приготвяне на буфери за лизис.

Ултразвуково приготвяне на буфери за лизис

Ултразвуковите тъканни хомогенизатори са широко използван инструмент за разрушаване на клетките, лизис и екстракция и затова са налични в повечето лаборатории. Допълнително приложение на ултразвуковите устройства със сонда е приготвянето на буфери за лизис.

Буферът за лизис е разтвор, използван за разрушаване (лизиране) на клетките и освобождаване на съдържанието им за последващ анализ. Конкретният състав на буфера за лизис може да варира в зависимост от вида на лизираните клетки и последващото приложение. Типичният буфер за лизис обаче съдържа компоненти като детергенти, соли и протеазни инхибитори. Буферни соли (напр. Tris-HCl) и йонни соли (напр. NaCl) обикновено се използват за регулиране на pH и осмоларитета на лизата.
За приготвяне на буфер за лизис компонентите се смесват при подходящи концентрации и pH. Сместа обикновено се разбърква или разклаща, докато компонентите се разтворят и разтворът стане хомогенен.
Ултразвуковата хомогенизация е метод, който може да подпомогне приготвянето на добър буфер за лизис чрез подобряване на смесването и разтварянето на компонентите. При този метод към сместа се прилагат ултразвукови вълни – обикновено в диапазона от 20 до 30 kHz – което създава кавитационни мехурчета, които колабират и генерират интензивна локална енергия, водеща до механично срязване и смесване на компонентите.
Процесът на ултразвукова хомогенизация може да помогне за разбиването на всички бучки или агрегати от компонентите и да осигури равномерно смесване на разтвора. Следователно така подобреният буфер за лизис може да доведе до по-ефективно разрушаване на клетките и по-високи добиви на екстрахиран материал. Освен това ултразвуковата хомогенизация може да намали времето, необходимо за приготвяне на буфер за лизис, в сравнение с традиционните методи на разбъркване или разклащане.
Като цяло ултразвуковата хомогенизация е мощен инструмент за подобряване на качеството и ефективността на приготвянето на буфери за лизис.

Протокол за ултразвуково приготвяне на буфер за лизис

Това е общ протокол за приготвяне на буфер за лизис с помощта на ултразвуково устройство със сонда:
 
Материали:

• Детергент(и) по избор (напр. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Сол(и) по избор (напр. NaCl, KCl)
• Протеазни инхибитори (напр. PMSF, апротинин, леупептин)
• Ултразвуково устройство
• Бъркалка
• Дейонизирана вода
• pH метър или индикаторни ленти за pH

 
 
Инструкции стъпка по стъпка:

1. Определете състава на буфера за лизис въз основа на клетките или тъканта, които ще лизирате, и последващите приложения, за които ще използвате лизата. Пригответе изходните разтвори на детергентите, солите и протеазните инхибитори с желаните концентрации.
2. Добавете изходните разтвори на детергентите, солите и протеазните инхибитори в лабораторна чаша или колба.
3. Добавете дейонизирана вода, за да доведете обема до желаното количество буфер.
4. Смесете компонентите с помощта на бъркалка, за да получите предварително смесен разтвор.
5. Измерете pH на буфера с помощта на pH метър или индикаторни ленти за pH и при необходимост коригирайте pH с малки количества киселина или основа.
6. Използвайте ултразвуковото устройство със сонда, за да хомогенизирате предварително смесения разтвор и да получите разтвор с висока хомогенност. За целта обработвайте разтвора с ултразвук в продължение на няколко секунди, докато се смеси напълно и всички бучки или агрегати се разбият. Продължителността и мощността на ултразвуковата обработка могат да се оптимизират според конкретния буфер за лизис и използваното ултразвуково устройство.
7. След ултразвуковата обработка измерете отново pH на буфера и го коригирайте при необходимост.
8. Филтрирайте буфера през филтър с размер на порите 0,2 микрона, за да отстраните всички остатъци или агрегати, които може да са се образували по време на ултразвуковата обработка.
9. Буферът за лизис вече е готов за употреба.

 
Забележка: Точният състав и pH на буфера за лизис могат да варират в зависимост от лизираните клетки или тъкан и последващите приложения. Горният протокол е общо ръководство и може да се наложи да бъде оптимизиран за конкретни приложения.
 
Ултразвуковите хомогенизатори обикновено се използват за разрушаване на клетките и екстракция на вътреклетъчни молекули. Затова много приложения за лизис използват ултразвукова обработка със сонда не само за приготвяне на буфера за лизис, но и за механично разрушаване на клетките и екстракция.
Това прави ултразвуковите тъканни хомогенизатори универсален инструмент за лабораториите и обяснява широкото използване на ултразвукови устройства в микробиологията, биотехнологиите и науките за живота.

Ултразвукови лабораторни хомогенизатори

Hielscher Ultrasonics произвежда и доставя ултразвукови хомогенизатори и сонди (сонотроди) с различни номинални мощности и за различни обеми на пробите. Това ни позволява да ви предложим най-подходящото ултразвуково устройство за разрушаване на клетките за подготовката на вашите проби. Фокусираме се върху най-високо качество, изключително удобство за потребителя и надеждни резултати от ултразвуковата обработка. Всички цифрови ултразвукови устройства разполагат с интелигентен софтуер, програмиране и предварително задаване на протоколи за ултразвукова обработка, дистанционно управление чрез браузър, контрол на температурата, осветяване на пробата, както и автоматично записване на данни на вградена SD карта.

Проектиране, производство и консултации – качество, произведено в Германия

Ултразвуковите устройства на Hielscher са добре познати с най-високите си стандарти за качество и проектиране. Здравината и лесната работа позволяват безпроблемното интегриране на нашите ултразвукови устройства в промишлени съоръжения. Ултразвуковите устройства на Hielscher лесно се справят с тежки условия и взискателни среди.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и поставя специален акцент върху високопроизводителните ултразвукови устройства, които се отличават с най-съвременни технологии и удобство за потребителя. Разбира се, ултразвуковите устройства на Hielscher съответстват на изискванията за CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.

Таблицата по-долу ви дава общ преглед на различните ни лабораторни ултразвукови устройства: