Буферни разтвори, приготвени с ултразвук

Буферите за лизис могат да бъдат ефективно и бързо приготвени с помощта на ултразвукови хомогенизатори на тъкани. Тъй като ултразвуковите апарати са мечтан инструмент за смесване, разтваряне и диспергиране, те позволяват надеждно и удобно приготвяне на лизисни буфери.

Ултразвуково приготвяне на лизисни буфери

Ултразвуковите хомогенизатори на тъкани са често срещан инструмент за клетъчно разрушаване, лизис и екстракция, поради което се предлагат в повечето лаборатории. Вторично приложение на ултразвуковите апарати от сондов тип е приготвянето на лизисни буфери.

Лизисният буфер е разтвор, използван за разбиване на клетки и освобождаване на съдържанието им за анализ надолу по веригата. Специфичният състав на лизисния буфер може да варира в зависимост от вида на клетките, които се лизират, и приложението надолу по веригата. Въпреки това, типичният буфер за лизис съдържа компоненти като детергенти, соли и инхибитори на протеазата. Буферните соли (напр. Tris-HCl) и йонните соли (напр. NaCl) обикновено се използват за регулиране на рН и осмоларността на лизата.
За да се получи лизисен буфер, компонентите се смесват заедно в подходящите концентрации и pH. Сместа обикновено се разбърква или разклаща, докато компонентите се разтворят и разтворът стане хомогенен.
Ултразвуковата хомогенизация е метод, който може да се използва за създаване на добър буфер за лизис чрез подобряване на смесването и разтварянето на компонентите. При този метод ултразвуковите вълни – обикновено в диапазона от 20 до 30 kHz – се нанасят върху сместа, което създава кавитационни мехурчета, които се свиват и генерират интензивна локална енергия, което води до механично срязване и смесване на компонентите.
Процесът на ултразвукова хомогенизация може да помогне за разбиването на всички бучки или агрегати на компонентите и да гарантира, че разтворът е равномерно смесен. Следователно, такъв подобрен буфер за лизис може да доведе до по-ефективно разрушаване на клетките и по-високи добиви на извлечен материал. Освен това, ултразвуковата хомогенизация може да намали времето, необходимо за направата на лизисен буфер в сравнение с традиционните методи за разбъркване или разклащане.
Като цяло ултразвуковата хомогенизация е мощен инструмент за подобряване на качеството и ефективността на подготовката на лизисния буфер.

Протокол за ултразвукова лизисна буферна подготовка

Това е общ протокол за изработване на лизис буфер с помощта на ултразвуков ултразвук тип сонда:
 
Материали:

• Препарат(и) по избор (напр. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Сол(и) по избор (напр. NaCl, KCl)
• Протеазни инхибитори (напр. PMSF, апротинин, леупептид)
• ултразвук
• Бъркалка
• Дейонизирана вода
• рН метър или рН ленти

 
 
Инструкции стъпка по стъпка:

1. Определете състава на лизисния буфер въз основа на клетките или тъканта, които ще излизавате, и приложенията надолу по веригата, за които ще използвате лизата. Пригответе основните разтвори на детергенти, соли и протеазни инхибитори в желаните концентрации.
2. Добавете основните разтвори на почистващи препарати, соли и протеазни инхибитори в чаша или колба.
3. Добавете дейонизирана вода, за да увеличите обема до желаното количество буфер.
4. Смесете компонентите с помощта на бъркалка, за да получите разтвор за предварително смесване.
5. Измерете рН на буфера с помощта на рН метър или рН ленти и регулирайте рН, ако е необходимо, с малки количества киселина или основа.
6. Използвайте ултразвуковия апарат със сонда, за да хомогенизирате предварително смесения разтвор, така че да се получи високохомогенен разтвор. Затова разтворът се разбърква с ултразвук в продължение на няколко секунди, докато разтворът се смеси напълно и се разпаднат всички бучки или агрегати. Продължителността и силата на сонирането могат да бъдат оптимизирани въз основа на специфичния буфер за лизис и използвания ултразвуков уред.
7. След ултразвук измерете отново рН на буфера и коригирайте, ако е необходимо.
8. Филтрирайте буфера през филтър от 0,2 микрона, за да отстраните всички остатъци или агрегати, които може да са се образували по време на ултразвук.
9. Лизисният буфер вече е готов за употреба.

 
Забележка: Точният състав и рН на лизисния буфер могат да варират в зависимост от клетките или тъканта, които се лизират и приложенията надолу по веригата. Горният протокол е обща насока и може да се наложи да бъде оптимизиран за конкретни приложения.
 
Ултразвуковите хомогенизатори обикновено се използват за клетъчно разрушаване и екстракция на вътреклетъчни молекули. Поради това много приложения за лизис използват сондова ултразвук не само за приготвяне на лизисния буфер, но и за механично разрушаване на клетките и екстракция.
Това прави ултразвуковите тъканни хомогенизатори универсален инструмент за лабораториите и обяснява широкото използване на ултразвуковите апарати в микробиологията, биотехнологиите и науките за живота.

Ултразвукови лабораторни хомогенизатори

Hielscher Ultrasonics произвежда и доставя ултразвукови хомогенизатори и сонди (сонотроди) при различни номинални мощности и обеми на проби. Това ни позволява да ви предложим най-подходящия ултразвуков разрушител за вашата проба. Ние се фокусираме върху най-високо качество, изключителен комфорт за потребителя и надеждни резултати от ултразвука. Всички цифрови ултразвукови апарати разполагат с интелигентен софтуер, програмиране и предварителна настройка на протоколи за ултразвук, дистанционно управление на браузъра, контрол на температурата, осветление на пробата, както и автоматичен запис на данни на вградена SD-карта.

Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

Ултразвуковите апарати Hielscher са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват безпроблемното интегриране на нашите ултразвукови апарати в промишлени съоръжения. Тежките условия и взискателните условия се справят лесно с ултразвуковите апарати на Hielscher.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и поставя специален акцент върху високопроизводителните ултразвукови уреди, отличаващи се с най-съвременна технология и удобство за потребителя. Разбира се, ултразвуковите апарати на Hielscher са съвместими с CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.

Таблицата по-долу ви дава преглед на различните ни лабораторни ултразвукови апарати: