Лизис буферите могат да бъдат ефективно и бързо приготвени с помощта на ултразвукови хомогенизатори на тъкани. Тъй като ultrasonicators са мечта инструмент за смесване, разтваряне и диспергиране, те позволяват надеждна и лесна за употреба подготовка на лизис буфери.

Ултразвукова подготовка на Lysis буфери

Ултразвуковите хомогенизатори на тъкани са общ инструмент за разрушаване на клетките, лизис и екстракция, поради което се предлагат в повечето лаборатории. Вторично приложение за ултрасоникатори тип сонда е приготвянето на лизисни буфери.

Лизисният буфер е разтвор, използван за разбиване на отворени (лизни) клетки и освобождаване на съдържанието им за анализ надолу по веригата. Специфичният състав на лизисния буфер може да варира в зависимост от вида на клетките, които се лизират и приложението надолу по веригата. Въпреки това, типичният лизис буфер съдържа компоненти като детергенти, соли и протеазни инхибитори. Буферните соли (напр. Tris-HCl) и йонните соли (напр. NaCl) обикновено се използват за регулиране на pH и осмоларността на лизата.
За да се направи лизисен буфер, компонентите се смесват заедно в подходящи концентрации и рН. Сместа обикновено се разбърква или разклаща, докато компонентите се разтворят и разтворът стане хомогенен.
Ултразвукова хомогенизация е метод, който може да се използва, за да помогне да се направи добър лизис буфер чрез подобряване на смесването и разтварянето на компонентите. При този метод ултразвуковите вълни – обикновено в диапазона от 20 до 30 kHz – се прилагат към сместа, която създава кавитационни мехурчета, които се свиват и генерират интензивна локална енергия, което води до механично срязване и смесване на компонентите.
Процесът на ултразвукова хомогенизация може да помогне да се разпаднат всякакви бучки или агрегати на компонентите и да се гарантира, че разтворът е равномерно смесен. Следователно, такъв подобрен лизис буфер може да доведе до по-ефективно разрушаване на клетките и по-високи добиви на извлечения материал. Освен това, ултразвукова хомогенизация може да намали времето, необходимо да се направи лизис буфер в сравнение с традиционните методи за разбъркване или разклащане.
Като цяло, ултразвукова хомогенизация е мощен инструмент за подобряване на качеството и ефективността на лизис буфер подготовка.

Протокол за подготовка на ултразвуков лизис буфер

Това е общ протокол за вземане на лизис буфер с помощта на сонда тип ultrasonicator:
 
Материали:

• Детергент(и) по избор (напр. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Сол(и) по избор (напр. NaCl, KCl)
• Протеазни инхибитори (напр. PMSF, апротинин, левпептин)
• ултрасоникатор
• Бъркалка
• Дейонизирана вода
• рН метър или рН ленти

 
 
Инструкции стъпка по стъпка:

1. Определете състава на лизис буфера въз основа на клетките или тъканта, които ще лизирате, и приложенията надолу по веригата, за които ще използвате лизата. Пригответе изходните разтвори на детергенти, соли и протеазни инхибитори при желаните концентрации.
2. Добавят се изходните разтвори на детергенти, соли и протеазни инхибитори в бехерова чаша или колба.
3. Добавете дейонизирана вода, за да доведете обема до желаното количество буфер.
4. Смесете компонентите с помощта на бъркалка, за да получите предварително смесен разтвор.
5. Измерва се рН на буфера с помощта на рН-метър или рН ленти и се регулира рН, ако е необходимо, с малки количества киселина или основа.
6. Използвайте ултрасоникатор тип сонда, за да хомогенизирате предварителния разтвор, така че да се получи силно хомогенен разтвор. Ето защо, ултразвук разтвора за няколко секунди, докато разтворът се смесва добре и всички бучки или агрегати са разбити. Продължителността и силата на ултразвук могат да бъдат оптимизирани въз основа на специфичния лизис буфер и ultrasonicator използва.
7. След ултразвук, повторно измерване на рН на буфера и коригира, ако е необходимо.
8. Филтрирайте буфера през 0,2 микрона филтър, за да премахнете всички отломки или агрегати, които може да са се образували по време на ултразвук.
9. Лизисният буфер вече е готов за употреба.

 
Забележка: Точният състав и рН на лизисния буфер могат да варират в зависимост от клетките или тъканите, които се лизират и приложенията надолу по веригата. Горният протокол е обща насока и може да се наложи да бъде оптимизиран за конкретни приложения.
 
Ултразвуковите хомогенизатори обикновено се използват за разрушаване на клетките и екстракция на вътреклетъчни молекули. Ето защо много приложения лизис използват сонда тип ултразвук не само за подготовката на лизис буфера, но също така и за механично разрушаване на клетките и екстракция.
Това прави ултразвуковите хомогенизатори на тъкани универсален инструмент за лаборатории и обяснява широкото използване на ултразвукови апарати в микробиологията, биотехнологиите и науката за живота.

ултразвукови лабораторни хомогенизатори

Hielscher Ultrasonics произвежда и доставя ултразвукови хомогенизатори и сонди (sonotrodes) при различни мощности и обеми на пробите. Това ни позволява да ви предложим най-подходящия ултразвуков разрушител за подготовката на вашата проба. Ние се фокусираме върху най-високо качество, изключителен комфорт на потребителя и надеждни резултати от ултразвук. Всички цифрови ultrasonicators разполагат с интелигентен софтуер, програмиране и предварителна настройка на протоколи за ултразвук, дистанционно управление на браузъра, контрол на температурата, осветление на пробата, както и автоматично записване на данни на вградена SD-карта.

Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

Hielscher ultrasonicators са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват гладкото интегриране на нашите ultrasonicators в промишлени съоръжения. Груби условия и взискателни среди се обработват лесно от Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и постави специален акцент върху високопроизводителни ultrasonicators с участието на най-съвременните технологии и удобство за потребителя. Разбира се, Hielscher ultrasonicators са CE съвместими и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: