Буферни разтвори, приготвени с ултразвук

Буферите за лизис могат да бъдат ефективно и бързо приготвени с помощта на ултразвукови хомогенизатори на тъкани. Тъй като ултразвуковите апарати са мечтан инструмент за смесване, разтваряне и диспергиране, те позволяват надеждно и удобно приготвяне на лизисни буфери.

Ултразвуково приготвяне на лизисни буфери

Ултразвуковите хомогенизатори на тъкани са често срещан инструмент за клетъчно разрушаване, лизис и екстракция, поради което се предлагат в повечето лаборатории. Вторично приложение на ултразвуковите апарати от сондов тип е приготвянето на лизисни буфери.

Лизисният буфер е разтвор, използван за разбиване на клетки и освобождаване на съдържанието им за анализ надолу по веригата. Специфичният състав на лизисния буфер може да варира в зависимост от вида на клетките, които се лизират, и приложението надолу по веригата. Въпреки това, типичният буфер за лизис съдържа компоненти като детергенти, соли и инхибитори на протеазата. Буферните соли (напр. Tris-HCl) и йонните соли (напр. NaCl) обикновено се използват за регулиране на рН и осмоларността на лизата.
За да се получи лизисен буфер, компонентите се смесват заедно в подходящите концентрации и pH. Сместа обикновено се разбърква или разклаща, докато компонентите се разтворят и разтворът стане хомогенен.
Ултразвуковата хомогенизация е метод, който може да се използва за създаване на добър буфер за лизис чрез подобряване на смесването и разтварянето на компонентите. При този метод ултразвуковите вълни – обикновено в диапазона от 20 до 30 kHz – се нанасят върху сместа, което създава кавитационни мехурчета, които се свиват и генерират интензивна локална енергия, което води до механично срязване и смесване на компонентите.
Процесът на ултразвукова хомогенизация може да помогне за разбиването на всички бучки или агрегати на компонентите и да гарантира, че разтворът е равномерно смесен. Следователно, такъв подобрен буфер за лизис може да доведе до по-ефективно разрушаване на клетките и по-високи добиви на извлечен материал. Освен това, ултразвуковата хомогенизация може да намали времето, необходимо за направата на лизисен буфер в сравнение с традиционните методи за разбъркване или разклащане.
Като цяло ултразвуковата хомогенизация е мощен инструмент за подобряване на качеството и ефективността на подготовката на лизисния буфер.

Протокол за ултразвукова лизисна буферна подготовка

Това е общ протокол за изработване на лизис буфер с помощта на ултразвуков ултразвук тип сонда:
 
Материали:

• Препарат(и) по избор (напр. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Сол(и) по избор (напр. NaCl, KCl)
• Протеазни инхибитори (напр. PMSF, апротинин, леупептид)
• ултразвук
• Бъркалка
• Дейонизирана вода
• рН метър или рН ленти

 
 
Инструкции стъпка по стъпка:

1. Определете състава на лизисния буфер въз основа на клетките или тъканта, които ще излизавате, и приложенията надолу по веригата, за които ще използвате лизата. Пригответе основните разтвори на детергенти, соли и протеазни инхибитори в желаните концентрации.
2. Добавете основните разтвори на почистващи препарати, соли и протеазни инхибитори в чаша или колба.
3. Добавете дейонизирана вода, за да увеличите обема до желаното количество буфер.
4. Смесете компонентите с помощта на бъркалка, за да получите разтвор за предварително смесване.
5. Измерете рН на буфера с помощта на рН метър или рН ленти и регулирайте рН, ако е необходимо, с малки количества киселина или основа.
6. Използвайте ултразвуковия ултразвук тип сонда, за да хомогенизирате разтвора на предварителното смесване, така че да се получи силно хомогенен разтвор. Затова ултразвук разтвора за няколко секунди, докато разтворът се смеси добре и всички бучки или агрегати се разградят. Продължителността и мощността на ултразвука могат да бъдат оптимизирани въз основа на специфичния използван лизисен буфер и ултразвуков уред.
7. След ултразвук измерете отново рН на буфера и коригирайте, ако е необходимо.
8. Филтрирайте буфера през филтър от 0,2 микрона, за да отстраните всички остатъци или агрегати, които може да са се образували по време на ултразвук.
9. Лизисният буфер вече е готов за употреба.

 
Забележка: Точният състав и рН на лизисния буфер могат да варират в зависимост от клетките или тъканта, които се лизират и приложенията надолу по веригата. Горният протокол е обща насока и може да се наложи да бъде оптимизиран за конкретни приложения.
 
Ултразвуковите хомогенизатори обикновено се използват за клетъчно разрушаване и екстракция на вътреклетъчни молекули. Поради това много приложения за лизис използват сондова ултразвук не само за приготвяне на лизисния буфер, но и за механично разрушаване на клетките и екстракция.
Това прави ултразвуковите тъканни хомогенизатори универсален инструмент за лабораториите и обяснява широкото използване на ултразвуковите апарати в микробиологията, биотехнологиите и науките за живота.

Ултразвукови лабораторни хомогенизатори

Hielscher Ultrasonics произвежда и доставя ултразвукови хомогенизатори и сонди (сонотроди) при различни номинални мощности и обеми на проби. Това ни позволява да ви предложим най-подходящия ултразвуков разрушител за вашата проба. Ние се фокусираме върху най-високо качество, изключителен комфорт за потребителя и надеждни резултати от ултразвука. Всички цифрови ултразвукови апарати разполагат с интелигентен софтуер, програмиране и предварителна настройка на протоколи за ултразвук, дистанционно управление на браузъра, контрол на температурата, осветление на пробата, както и автоматичен запис на данни на вградена SD-карта.

Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

Ултразвуковите апарати Hielscher са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват безпроблемното интегриране на нашите ултразвукови апарати в промишлени съоръжения. Тежките условия и взискателните условия се справят лесно с ултразвуковите апарати на Hielscher.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и поставя специален акцент върху високопроизводителните ултразвукови уреди, отличаващи се с най-съвременна технология и удобство за потребителя. Разбира се, ултразвуковите апарати на Hielscher са съвместими с CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.

Таблицата по-долу ви дава преглед на различните ни лабораторни ултразвукови апарати: