ASTM E2799-22 Протокол за оценка на антимикробните средства

Hielscher UIP400MTP е мощен и ефективен многоямков пластинов ултразвукораздирател, предназначен да рационализира стъпката на ултразвук в протокола ASTM E2799-22. Чрез доставяне на равномерна ултразвукова енергия по цялата микротитърна плоча, UIP400MTP осигурява последователно и надеждно отделяне на биофилмите от капаците, без да уврежда клетките или да нарушава целостта на пробата. Неговата висока производителност и лесна за използване работа значително намаляват времето за обработка, като същевременно подобряват възпроизводимостта, което го прави идеално решение за лаборатории, провеждащи тестове за жизнеспособност на биофилма и тестове за антимикробна ефикасност.

ASTM E2799

ASTM E2799 е стандартизиран метод за изпитване, предназначен да оцени ефикасността на антимикробните агенти срещу биофилми, специално фокусиран върху Pseudomonas aeruginosa. Биофилмите са сложни микробни общности, които се придържат към повърхностите и проявяват повишена резистентност към антимикробни лечения, което ги прави значително предизвикателство в здравния, индустриалния и екологичния контекст. Този метод използва анализа за минимална концентрация на ерадикация на биофилм (MBEC), за да осигури надеждна и възпроизводима рамка за тестване на дезинфектанти при реалистични условия на биофилм.

Как Sonication допринася за ASTM E2799?

Уникирането играе критична роля в протокола ASTM E2799, като улеснява отделянето на биофилми от тестовите повърхности, осигурявайки точна оценка на жизнеспособността на микробите след третиране. Чрез използване на контролирана ултразвукова енергия, протоколът постига ефективно и последователно разрушаване на биофилма, без да уврежда клетките, което позволява прецизни и възпроизводими резултати. Това прави ASTM E2799 основен инструмент за напредък в изследванията на биофилма и разработването на ефективни антимикробни стратегии.

Как да стартирате MBEC теста в съответствие с ASTM E2799-22

Протоколът ASTM E2799-22 очертава стъпките за оценка на ефикасността на антимикробните агенти срещу биофилми. Когато се използва ултразвукораздвижителят на Hielscher UIP400MTP микротитърна плоча, протоколът може да бъде адаптиран, за да включи този усъвършенстван метод за ултразвук за отделяне на биофилма. По-долу е дадено описание на стъпките, пригодени за използване на микроплаката sonicator UIP400MTP:

1. Приготвяне на биофилми
   Пригответе стерилна 96-ямкова микротитърна плоча с подвижни капаци.
   Инокулирайте кладенците със стандартизирана бактериална суспензия в подходяща среда за растеж.
   Поставете капака на колчето върху чинията, като се уверите, че колчетата са напълно потопени в бактериалната суспензия.
   Инкубирайте плочата при контролирани условия (напр. температура и време), за да позволите образуването на биофилм върху колчетата.
2. Лечение с антимикробни средства
   След образуването на биофилм средата се заменя с прясна среда, съдържаща изпитваните антимикробни агенти в различни концентрации.
   Поставете отново капака на колчето и инкубирайте при условията, посочени в дизайна на изпитването.
3. Подготовка за отделяне на биофилм
   След третирането изплакнете капака на колчето, като го потопите в стерилен разтвор за изплакване, за да премахнете остатъчните антимикробни агенти и хлабаво полепналите планктонни клетки.
4. Отделяне на биофилм с помощта на UIP400MTP Sonicator
   Пригответе прясна 96-ямкова микротитърна плака, съдържаща среда за възстановяване (напр. неутрализиращ бульон).
   Отделете биофилмите, като поставите капака на колчето в кладенците на плочата на средата за възстановяване.
   Поставете плочата в UIP400MTP ултразвука, като се уверите, че капакът и плочата са правилно подравнени.
   Настройте ултразвука на 70%-80% амплитуда и ултразвук за 3-4 минути в режим на цикъл, за да осигурите последователно отделяне на биофилма без клетъчен лизис.
5. Оценка на жизнеспособността на биофилма
   След ултразвук обработете средата за възстановяване, съдържаща отделени клетки от биофилм, като използвате стандартни микробиологични или аналитични техники, като например:
   • Брой колониеобразуващи единици (CFU): Извършете серийни разреждания и плочи върху агар за жизнеспособно преброяване на клетките.
   • Измервания на оптична плътност (OD): Използвайте спектрофотометричен анализ за оценка на плътността на клетките.
   • Тестове за жизнеспособност, базирани на флуоресценция: Количествено определяне на живи и мъртви клетки с помощта на флуоресцентни багрила.
6. Анализ на данни
   Сравнете данните за жизнеспособността на третираните и нетретираните биофилми, за да определите ефикасността на антимикробните агенти.
   Изчислява се минималната концентрация на ликвидиране на биофилма (MBEC) въз основа на концентрацията, необходима за елиминиране на жизнеспособни клетки от биофилм.
7. контрол на качеството
   Осигурете постоянни условия на ултразвук чрез редовно калибриране на UIP400MTP и проверка дали процесът на отделяне на биофилма не води до значителна клетъчна лизис или разрушаване.
   Включете подходящи контроли, като нетретирани биофилми и заготовки само за среда, за да се потвърдят резултатите.

Клетките на биофилма, образувани върху щифтовете, са изместени чрез ултразвук (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Германия, UIP250MTP) за 5 минути в 96-ямкови плаки, съдържащи прясна хранителна среда за възстановяване на клетките.
(Снимка и проучване: ©de Oliveira et al., 2016)

Чрез интегриране на UIP400MTP в работния процес на ASTM E2799-22, процесът на отделяне на биофилма е оптимизиран за последователност, ефективност и приложения с висока производителност.