MBEC протокол за анализ с помощта на 96-ямковия Plate Sonicator UIP400MTP

Анализът MBEC се използва за определяне на концентрацията на антимикробни агенти, необходими за елиминиране на биофилми, образувани върху капаци на колчета. За да се оцени жизнеспособността на биофилма, биофилмите първо трябва да бъдат отделени от капаците на 96-ямковата плоча. Уникирането е най-надеждният и ефективен метод за това отделяне. Многоямковият пластинов сонатор UIP400MTP е специално проектиран да обработва анализни плочи с максимална ефективност и удобство, рационализирайки и ускорявайки високопроизводителните MBEC анализи.

Разпознаване за откъсване на биофилма

Сонирането е решаваща стъпка в анализите за минимална концентрация на биофилм (MBEC), позволяваща ефективното изместване на клетките на биофилма от тяхното повърхностно прикрепване. Биофилмите са структурирани съобщества от микроорганизми, обвити в извънклетъчен матрикс, което ги прави значително по-устойчиви на антимикробни агенти в сравнение с планктонните клетки. По време на MBEC анализите, ултразвукът използва ултразвукови вълни, за да генерира контролирана кавитация, нарушавайки матрицата на биофилма и освобождавайки вградените клетки в суспензия. Тази стъпка гарантира, че клетките на биофилма са равномерно разпръснати в средата за възстановяване, улеснявайки точните оценки на жизнеспособността чрез покритие, разреждане или спектрофотометрични методи. Без подходящо отделяне на биофилма, остатъчните компоненти на матрицата могат да защитят клетките, което води до подценяване на антимикробната ефикасност. Следователно ултразвукът е незаменим за получаване на надеждни и възпроизводими стойности на MBEC, отразяващи истинския потенциал за унищожаване на тестваните агенти. Многоямковият пластинов ултразвук UIP400MTP позволява лесна подготовка на проби с висока производителност в пробирни плочи.

Протокол за анализ на минимална концентрация на ликвидиране на биофилм (MBEC)

Стъпка 1: Образуване на биофилм

1. Пригответе бактериалната суспензия:
   Отглеждайте бактерии в подходяща среда за растеж във фаза log.
   Разредете бактериалната култура до определена оптична плътност (напр. OD600 ~ 0,1).
2. Инокулирайте плочата с 96 ямки:
   Добавете бактериалната суспензия (напр. 150–200 μL) във всяка ямка на стандартна 96-ямкова микротитърна плака.
3. Прикрепете капака на колчето:
   Поставете капака на колчето върху инокулираната плоча, за да позволите образуването на биофилм върху повърхностите на колчето.
4. Инкубирайте чинията:
   Инкубира инсталацията при подходяща температура (напр. 37°C) в продължение на 24–48 часа без разклащане, за да се насърчи растежа на биофилма.

Стъпка 2: Лечение с антимикробни средства

• Пригответе антимикробни разтвори:
  Пригответе набор от антимикробни концентрации в прясна среда.
  Излагайте биофилмите на антимикробни агенти:
  Отстранете капака на колчето от бактериалната култура и го изплакнете със стерилен физиологичен разтвор или PBS, за да премахнете планктонните клетки.
  Поставете капака на колчето в нова плоча с 96 ямки, съдържаща антимикробните разтвори.
• Инкубирайте чинията:
  Инкубират се за определен период от време (напр. 24 часа), за да се даде възможност за експозиция на антимикробни средства.

Стъпка 3: Уникиране с 96-ямковия Sonicator UIP400MTP

Стъпката на ултразвук е от решаващо значение за отделянето на биофилмите от капаците на колчето, за да се оцени жизнеспособността. Следвайте тези стъпки за UIP400MTP sonicator:

1. Подгответе настройката:
   Напълнете прясна чиния с 96 ямки с среда за възстановяване (напр. неутрализиращ бульон или прясна среда за растеж) във всяка ямка.
2. Прехвърлете капака на колчето:
   Свалете капака на колчето от плочата за антимикробно лечение.
   Изплакнете капака на колчето със стерилен физиологичен разтвор или PBS, за да отстраните остатъчните антимикробни агенти.
3. Позиционирайте плочата и ултразвука:
   Прикрепете капака на колчето към плочата на средата за възстановяване.
   Поставете плочата на носителя за възстановяване върху платформата на UIP400MTP ултразвуков уред, като се уверите, че плочата е центрирана и стабилна.
4. Регулирайте параметрите на ултразвука:
   Задайте параметрите на ултразвука на UIP400MTP (Настройките могат да се регулират според биофилма):
   Амплитуда: 70–100%.
   Време за съниране: 1–3 минути (регулирайте въз основа на устойчивостта на биофилма) в режим на цикъл.
5. Соникирайте:
   Започнете процеса на ултразвук. Ултразвуковата вибрация ще измести биофилмите от повърхностите на колчето в средата за възстановяване.
6. Наблюдавайте процеса:
   Използвайте щепселния температурен сензор, за да следите температурата на пробата в кладенците. UIP400MTP може да бъде свързан към лабораторен охладител за охлаждане.
7. Обработка след уникиране:
   Незабавно прехвърлете средата за възстановяване (сега съдържаща отделени биофилми) в нова стерилна плоча за анализ надолу по веригата.

А) Плака, съдържаща TSB с 2% глюкоза, използвана за образуване на биофилм, възстановяване на клетки, и
определяне на MIC и MBCB; (Б) Капак с щифтове за образуване на стафилококови биофилми. определяне на MIC и MBCB; (Б) Капак с щифтове за образуване на стафилококови биофилми.
Клетките на биофилма, образувани върху щифтовете, са изместени чрез ултразвук (ултразвукова технология на Hielscher) за 5 минути в 96-ямкови плаки, съдържащи прясна хранителна среда за възстановяване на клетките.
(Снимка и проучване: ©de Oliveira et al., 2016)

Стъпка 4: Оценка на жизнеспособността

Отделени биофилми от плаки и култури:

1. Извършва се серийно разреждане на средата за възстановяване и плочата върху агар, за да се изброят колониеобразуващите единици (CFU).
   Като алтернатива използвайте колориметричен или флуоресцентен тест за жизнеспособност.
2. Рекордни резултати:
   Определя се MBEC като най-ниската концентрация на антимикробни средства, която елиминира жизнеспособността на откриваемия биофилм.

Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

Ултразвуковите апарати Hielscher са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват безпроблемното интегриране на нашите ултразвукови апарати в промишлени съоръжения. Суровите условия и взискателната среда се справят лесно с ултразвуковите уреди на Hielscher.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и поставя специален акцент върху високопроизводителните ултразвукови уреди, отличаващи се с най-съвременна технология и удобство за потребителя. Разбира се, ултразвуковите апарати на Hielscher са съвместими с CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.

Прочетете тук как UIP400MTP се използва за отделяне на биофилма като стъпка за подготовка на пробата по време на протокола ASTM E2799 за тестване на ефикасността на дезинфектантите срещу биофилм на Pseudomonas aeruginosa с помощта на MBEC анализа.