Заменете остъргването на клетки с ултразвуковия апарат UIP400MTP с висок капацитет за обработка

Отделянето и екстракцията на адхерентни клетъчни линии от многоямкови плаки за мултиомикс анализ са ежедневна задача в лабораториите. Отделянето на клетки с висок капацитет за обработка с помощта на ултразвуковия апарат за многоямкови плаки UIP400MTP заменя ръчното остъргване на клетки и води до по-високи добиви на РНК, общи липиди и общи полярни метаболити. Нов метод интегрира ултразвуковия апарат Hielscher UIP400MTP с работната станция за обработка на течности Beckman Coulter i7, като позволява възпроизводима и ефективна обработка на клетки с висок капацитет за екстракция на РНК, метаболити и липиди. Представеният метод превъзхожда традиционните методи за ръчно остъргване на клетки, като постига по-добра възпроизводимост и по-висок добив при различни типове клетки и експериментални условия.

Оптимизирайте отделянето на клетки с ултразвуковия апарат за микроплаки UIP400MTP

Системите за култивиране на адхерентни клетки играят ключова роля в токсикологичните и биомедицинските изследвания. В този контекст Cruchley-Fuge и съавт. (2024) разглеждат значително предизвикателство в проекта PrecisionTox, насочен към използването на омикс технологии за оценка на опасностите от химични вещества. Проектът има за цел анализ с висок капацитет за обработка на хиляди проби, третирани с разнообразни химични вещества. За да отговорят на тази потребност, изследователите разработват автоматизиран работен процес, съчетаващ ултразвуковия апарат UIP400MTP с утвърдени протоколи за двуфазна екстракция за анализ чрез течна хроматография–масспектрометрия (LC-MS). Тяхното проучване оценява ефективността на ултразвуковия апарат за многоямкови плаки UIP400MTP при отделянето на адхерентни клетки в сравнение с ръчното остъргване и други традиционни методи.

Оптимизиране на мултиомикс анализа: автоматизирана екстракция на адхерентни клетки с UIP400MTP

Изследователският екип на Laura Cruchley-Fuge от University of Birmingham използва три човешки клетъчни линии: HepG2 (ракови клетки на черния дроб), HepaRG (диференцирани хепатоцитоподобни клетки) и H295R (ракови клетки на надбъбречната жлеза). Тези клетки са култивирани в 24-ямкови и 96-ямкови плаки и са изложени на изпитвани химични вещества като aflatoxin B1 и форсколин.

Експериментален дизайн:

• Фаза 1: Оптимизиране на настройките за мощност на ултразвуковия апарат UIP400MTP и сравнение с ръчно остъргване на клетки и ултразвукови водни вани. Клетки HepG2 са използвани за оценка на извличането на РНК, метаболити и липиди.
• Фаза 2: Интегриране на UIP400MTP в работен процес за двуфазна екстракция с използване на системата Beckman Coulter i7. Валидирането е проведено с клетки HepaRG и H295R.

Работен процес за екстракция: Работният процес включва излагане на химични вещества в многоямкови плаки, отделяне на клетки с UIP400MTP и двуфазна екстракция по метода на Bligh & Dyer (B&D). LC-MS анализът на липофилни и полярни съединения е извършен с Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120. Методът B&D, златен стандарт за количествено определяне на липиди, включва двустъпкова екстракция с метанол, хлороформ и вода, последвана от количествено определяне на липидите в хлороформната фаза.

Ултразвуковият апарат за микроплаки UIP400MTP улеснява отделянето на адхерентни клетъчни линии от многоямкови плаки и петриеви блюда

Резултати:

• Фаза 1: Оптималните условия за ултразвукова обработка са установени при 60% мощност.
  UIP400MTP осигурява най-високо извличане на РНК с изключителна възпроизводимост в сравнение с ръчното остъргване и ултразвуковите вани.
  Извличането на полярни метаболити е сходно при различните методи, докато извличането на липиди е значително по-добро с UIP400MTP.
• Фаза 2: Валидирането с клетки HepaRG и H295R показва висока възпроизводимост на липидомните и метаболомните данни, за което свидетелстват плътно групираните стойности на главните компоненти при PCA.
  Третиранията с aflatoxin B1 и форсколин са ефективно разграничени от контролите, което подчертава чувствителността и надеждността на метода.

„Ултразвуковият апарат Hielscher UIP400MTP предоставя висококачествен и възпроизводим алтернативен подход на „златния стандарт“ на ръчното остъргване на клетки, като води до по-високи добиви на РНК, общи липиди и общи полярни метаболити.“ (Cruchley-Fuge и съавт., 2024)

Cruchley-Fuge и съавт. подчертават предимствата на ултразвуковия апарат UIP400MTP при обработката на адхерентни клетки. Като заменя ръчното остъргване, този метод подобрява възпроизводимостта, капацитета за обработка и добива, което го прави безценен инструмент за мащабни проучвания като PrecisionTox. Интегрирането на UIP400MTP в автоматизирани работни процеси не само намалява вариабилността, но и оптимизира трудоемките процеси, като позволява получаването на висококачествени мултиомикс данни.

Работата на Cruchley-Fuge и съавт. (2024) улеснява и оптимизира обработката на адхерентни клетъчни култури за мултиомикс анализ. Интегрирането на ултразвуковия апарат UIP400MTP с автоматизирани работни процеси осигурява постоянна и ефективна подготовка на пробите, което го прави идеално подходящ за токсикологични изследвания с висок капацитет за обработка.
 

Проектиране, производство и консултации – качество, произведено в Германия

Ултразвуковите апарати Hielscher са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и проектиране. Здравината и лесната работа позволяват безпроблемното интегриране на нашите ултразвукови апарати в промишлени съоръжения. Ултразвуковите апарати Hielscher се справят лесно с тежки условия и взискателни работни среди.

Hielscher Ultrasonics е компания, сертифицирана по ISO, и поставя специален акцент върху високопроизводителните ултразвукови апарати, отличаващи се с най-съвременна технология и удобство за потребителя. Разбира се, ултразвуковите апарати Hielscher са в съответствие с CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.