Заменете изстъргването на клетки с UIP400MTP високопроизводителен Sonicator

Отделянето и извличането на прилепнали клетъчни линии от многоямкови плочи за мултиомичен анализ е ежедневна задача в лабораториите. Високопроизводителното отделяне на клетките с помощта на многоямковия плачен соникатор UIP400MTP замества ръчното изстъргване на клетките, което води до по-висок добив на РНК, общи липиди и общи полярни метаболити. Нов метод интегрира ултразвуковия апарат Hielscher UIP400MTP с работната станция за работа с течности Beckman Coulter i7, позволявайки висока производителност, възпроизводима и ефективна обработка на клетки за екстракция на РНК, метаболит и липиди. Представеният метод превъзхожда традиционните методи за ръчно изстъргване на клетки, като постига превъзходна възпроизводимост и добив при различни типове клетки и експериментални условия.

Рационализирайте отделянето на клетките с Microplate Sonicator UIP400MTP

Адхезивните системи за клетъчни култури играят критична роля в токсикологичните и биомедицинските изследвания. В този контекст Cruchley-Fuge et al. (2024) адресира значително предизвикателство в проекта PrecisionTox, фокусиран върху използването на омически технологии за оценка на химическата опасност. Проектът имаше за цел да направи високопроизводителен анализ на хиляди проби, третирани с различни химикали. За да отговорят на това търсене, изследователите разработиха автоматизиран работен процес, комбиниращ UIP400MTP sonicator с установени двуфазни протоколи за екстракция за анализ на течна хроматография-масспектрометрия (LC-MS). Тяхното проучване оценява ефикасността на UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator при отделяне на прилепнали клетки в сравнение с ръчното изстъргване и други традиционни методи.

Рационализиране на мултиомиката: Автоматизирано извличане на прилепнали клетки с UIP400MTP

Изследователският екип на Лора Кръчли-Фюдж от Университета в Бирмингам използва три човешки клетъчни линии: HepG2 (ракови клетки на черния дроб), HepaRG (диференцирани хепатоцитоподобни клетки) и H295R (ракови клетки на надбъбречната жлеза). Тези клетки са култивирани в 24-ямкови и 96-ямкови плаки и са изложени на изпитвани химикали като афлатоксин В1 и форсколин.

Експериментален дизайн:

• Фаза 1: Оптимизиране на настройките на мощността на UIP400MTP ултразвуков апарат и сравнение с ръчно изстъргване на клетки и звукови водни бани. HepG2 клетките са използвани за оценка на възстановяването на РНК, метаболит и липиди.
• Фаза 2: Интегриране на UIP400MTP в двуфазен работен процес за извличане с помощта на системата Beckman Coulter i7. Валидирането е проведено с помощта на HepaRG и H295R клетки.

Работен процес на извличане: Работният процес включва експозиции на химикали в многоямкови плочи, отделяне на клетки с помощта на UIP400MTP и двуфазна екстракция чрез Bligh & Бояджия (Б&Г) метод. LC-MS анализът е извършен с помощта на Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 за липофилни и полярни съединения. Б&Методът D, златен стандарт за количествено определяне на липидите, включва двуетапна екстракция с метанол, хлороформ и вода, последвана от количествено определяне на липидите в хлороформната фаза.

UIP400MTP микроплачен ултразвук улеснява отделянето на прилепналите клетъчни линии от многоямкови плочи и чаши на Петри

Резултати:

• Фаза 1: Идентифицирани са оптимални условия за ултразвук при 60% мощност.
  UIP400MTP дава най-високото възстановяване на РНК с изключителна възпроизводимост в сравнение с ръчното изстъргване и звуковите вани.
  Възстановяването на полярни метаболити е последователно в различните методи, докато възстановяването на липидите е значително по-добро при UIP400MTP.
• Фаза 2: Валидирането на HepaRG и H295R клетки показва висока възпроизводимост в данните от липидомика и метаболомика, както се вижда от плътно клъстерирани PCA резултати.
  Лечението с афлатоксин В1 и форсколин е ефективно разграничено от контролите, подчертавайки чувствителността и надеждността на метода.

“Устройството за ултразвук Hielscher UIP400MTP осигурява висококачествен и възпроизводим алтернативен подход към "златния стандарт" на ръчното изстъргване на клетки, което води до по-високи добиви на РНК, общи липиди и общи полярни метаболити.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. подчертават предимствата на UIP400MTP sonicator за прилепнала обработка на клетки. Замествайки ръчното изстъргване, този метод подобрява възпроизводимостта, производителността и добива, което го прави безценен инструмент за широкомащабни проучвания като PrecisionTox. Интегрирането на UIP400MTP в автоматизирани работни процеси не само намалява променливостта, но и рационализира трудоемките процеси, позволявайки висококачествено събиране на мултиомични данни.

Работата на Cruchley-Fuge et al. (2024) улеснява и рационализира обработката на адхезивни клетъчни култури за мултиомичен анализ. Интегрирането на UIP400MTP ултразвука с автоматизирани работни процеси осигурява последователна и ефективна подготовка на проби, което го прави идеално подходящ за токсикологични изследвания с висока производителност.
 

Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

Ултразвуковите апарати Hielscher са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват безпроблемното интегриране на нашите ултразвукови апарати в промишлени съоръжения. Тежките условия и взискателните условия се справят лесно с ултразвуковите апарати на Hielscher.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и поставя специален акцент върху високопроизводителните ултразвукови уреди, отличаващи се с най-съвременна технология и удобство за потребителя. Разбира се, ултразвуковите апарати на Hielscher са съвместими с CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.