Nümunənin hazırlanması üçün zond tipli sonikasiya: hərtərəfli bələdçi
Zond tipli sonikasiya hüceyrələri pozmaq, DNT-ni kəsmək və maye nümunələrində hissəcikləri dağıtmaq üçün güclü vasitədir. Həyat elmi, mikrobiologiya və klinik analizdəki bütün üsullar kimi, sonikasiya nümunənin zədələnməsinin qarşısını almaq üçün diqqətli optimallaşdırma tələb edir, xüsusən də istiliyə həssas materiallarla işləyərkən. Aşağıdakı məsləhətlərlə – nümunələri buzda saxlamaq, sonikasiya amplitüdünü idarə etmək, nəbz rejimindən istifadə etmək və sonotrodun daldırma dərinliyini optimallaşdırmaq kimi – effektiv və təkrarlana bilən nəticələr əldə edə bilərsiniz. Nəhayət, yaxşı optimallaşdırılmış sonikasiya protokolu aşağı axın tətbiqlərinin müvəffəqiyyətini təmin edir və qiymətli nümunələrinizin bütövlüyünü qoruyur.
sonication – Nümunə Hazırlanmasında Vacib Addım
Zond tipli sonikasiya bioloji, kimyəvi və material tədqiqatlarında nümunə hazırlamaq üçün geniş istifadə olunan texnikadır. Proses hüceyrələrin parçalanması, DNT-nin kəsilməsi, nanohissəciklərin yayılması və ya məhlulların emulsiyalaşdırılması üçün ultrasəs enerjisindən istifadəni nəzərdə tutur. Yüksək enerjili ultrasəs dalğalarını bir zond (sonotrode, buynuz, sonoprob) vasitəsilə maye nümunəsi vasitəsilə ötürən zond tipli sonikasiya hüceyrə strukturlarını mexaniki şəkildə pozan və ya hissəcikləri homojen şəkildə dağıtan yüksək təzyiq, turbulentlik və kavitasiyanın lokallaşdırılmış bölgələrini yaradır. Bununla belə, texnika nümunəyə, xüsusilə zülallar və nuklein turşuları kimi həssas bioloji materiallara zərər verməmək üçün diqqətli optimallaşdırma tələb edir. Zond tipli sonikasiya üzrə bu təlimat nümunənin effektiv hazırlanması üçün praktiki məsləhətlər verir.
Ultrasəs laboratoriya homojenizatoru UP200Ht nümunənin hazırlanması, lizisi, çıxarılması, DNT-nin parçalanması və həll edilməsi üçün tədqiqat laboratoriyalarında məşhurdur.
- Amplituda Parametrlərini tənzimləyin
Sonikasiya amplitudası zond tərəfindən istehsal olunan vibrasiyaların böyüklüyünə aiddir. Daha yüksək amplitüdlər daha intensiv ultrasəs enerjisi verir, lakin daha çox istilik yaradır və nümunənin deqradasiyası riskini artırır. Bunun əksinə olaraq, aşağı amplitüdlər daha yumşaq sonikasiya təmin edir, nümunənin bütövlüyünü qoruyarkən istilik yığılmasını azaldır.
Xüsusi tətbiqinizdən asılı olaraq, daha uzun müddət ərzində daha aşağı amplituda istifadə etmək, qısa partlayışlar üçün çox yüksək amplituda tətbiq etməkdən daha yaxşı nəticələr verə bilər. Bu yanaşma nümunənin adekvat pozulmasını və ya qarışdırılmasını təmin etməklə yanaşı, termal deqradasiya şansını azaldır. - Avtomatik Məlumat Protokolundan istifadə edin
Bütün Hielscher rəqəmsal sonikatorunun ağıllı menyusu avtomatik məlumat qeydinə malikdir. Sonicatorunuzu işə saldığınız dəqiqə, enerji girişi (ümumi və xalis), amplituda, güc, vaxt kimi bütün vacib məlumatlar – Əgər siz temperatur və təzyiq sensorlarını qoşmusunuzsa, hətta temperatur və təzyiqə də nəzarət edilir. Bütün məlumatlar daxili SD kartda CSV faylı kimi tarix və vaxt möhürü ilə yazılır. - Sonication Müddətinin optimallaşdırılması: Vaxtı düzgün seçin
Sonication müddəti zərər vermədən uğurlu nümunənin pozulmasında mühüm rol oynayır. Həddindən artıq səslənmə nümunənin deqradasiyasına səbəb ola bilər, az səslənmə isə nümunəni kifayət qədər işlənməmiş tərk edə bilər. İdeal müddət nümunənin növündən (məsələn, hüceyrələr, toxumalar və ya hissəciklər), həcmdən və konsentrasiyadan asılı olaraq dəyişir.
İpucumuz: Kiçik başlayın və sonikasiya müddətini tədricən artırın. Qısa sonikasiya seansları ilə başlayın və nümunənin pozulmasının dərəcəsini qiymətləndirərkən vaxtı tədricən artırın. Əlavə olaraq, həddindən artıq səslənmənin göstəriciləri kimi köpüklənmə və ya həddindən artıq istiləşmə əlamətləri üçün nümunəni vizual olaraq müşahidə edin. - İstilik yığılmasını minimuma endirmək üçün Pulse rejimindən istifadə edin
Hielscher sonikatorları nəbz rejimində işlədilə bilər, bu xüsusilə temperatura həssas nümunələr üçün faydalıdır. Pulse rejimi sonikasiya və istirahət fazaları arasında dəyişir, nümunənin impulslar arasında soyumasına imkan verir. Bu, sürətli temperatur sıçrayışlarının qarşısını alır, istidən qaynaqlanan deqradasiya riskini minimuma endirir. - Temperatur nəzarətinin əhəmiyyəti: Nümunələrinizi sərin saxlayın
Sonikasiya ultrasəs enerjisini mayeyə köçürür, turbulentlik və sürtünmə səbəbindən istilik yaradır. Nəzarət edilməzsə, bu, zülallar, fermentlər və nuklein turşuları kimi həssas bioloji nümunələri pisləşdirə bilən yüksək temperatura səbəb ola bilər. Bunu azaltmaq üçün sonikasiya zamanı temperatur nəzarəti vacibdir.
Həddindən artıq istiləşmənin qarşısını almağın ən sadə və təsirli yollarından biri, sonikasiya prosesi boyunca nümunələrinizi buzda saxlamaqdır. Bu, sabit, aşağı temperaturu saxlamağa kömək edir və nümunənizi termal deqradasiyadan qoruyur.
Bütün Hielscher rəqəmsal sonikatorlarında temperaturun monitorinqi var. Bağlana bilən temperatur sensoru nümunədəki temperaturu davamlı olaraq ölçür. Proqramda müəyyən edilmiş temperatur həddinə uyğun olaraq, sonikator yuxarı temperatur həddinə çatdıqda avtomatik olaraq fasilə verir və müəyyən edilmiş temperatur deltasının aşağı həddinə çatan kimi səslə işləməyə davam edir.
Əlavə olaraq, edə bilərsiniz:- Sonikasiya prosesinə başlamazdan əvvəl nümunə borusunu buz üzərinə qoyun.
- Uzun seanslar lazım olduqda soyumağa imkan vermək üçün sonikasiyanı vaxtaşırı dayandırın.
- Nümunəni daha da sabitləşdirmək üçün sonikasiyadan sonra buz üzərində saxlayın.
Bu, zülal nümunələri üçün xüsusilə vacibdir, çünki zülallar yüksək temperaturda tez denatürasiya edə bilir. Nümunələrinizi soyuq saxlamaqla siz onların funksional bütövlüyünü Western blotting, ferment analizləri və ya kütləvi spektrometriya kimi aşağı axın tətbiqləri üçün qoruyursunuz.
- Nümunəniz üçün Doğru Sonotrode Ölçüsü
Həyat elmləri və mikrobiologiyada nümunə sonikasiya üçün düzgün sonotrode ölçüsünü seçmək optimal enerji transferini və hüceyrələrin və ya biomolekulların effektiv pozulmasını təmin etmək üçün çox vacibdir. Düzgün ölçülü bir sonotrode, hüceyrə divarlarını parçalamaq, hüceyrələri parçalamaq və nümunələri homogenləşdirmək üçün vacib olan səmərəli kavitasiyaya imkan verir. Sonotrot nümunənin həcmi və ya növü üçün çox böyük və ya çox kiçikdirsə, bu, qeyri-bərabər sonication, həddindən artıq istiləşmə və ya qeyri-adekvat hüceyrə pozulmasına səbəb ola bilər, potensial olaraq eksperimental nəticələrə təhlükə yarada bilər. Buna görə də, uyğun sonotrode ölçüsünü seçmək nümunənin bütövlüyünü qorumağa kömək edir və təcrübələrdə təkrarlanmanı təmin edir. - Düzgün Zond Dərinliyi: Köpüklənmədən və vahid məruz qalmadan çəkinin
Probun yerləşdirilməsi sonikasiyada kritik, lakin tez-tez nəzərdən qaçırılan amildir. Müvafiq zond dərinliyi səmərəli enerji ötürülməsini və nümunənin qarışdırılmasını təmin edir. Zond çox dayazdırsa, həddindən artıq köpüklənmə ilə qarşılaşa bilərsiniz, bu da hava qabarcıqlarını tuta və sonikasiyanın effektivliyini azalda bilər. Zond çox dərin olarsa, adekvat dövriyyəyə nail ola bilməyəcəksiniz, bu da nümunənin qeyri-bərabər sonikasiyasına səbəb olur.
İdeal zond dərinliyi adətən boru və ya konteynerdəki mayenin hündürlüyünün 1/4 ilə 1/3 hissəsi arasında olur. Köpüklənməyə səbəb olmadan enerji ötürülməsini maksimuma çatdıran optimal mövqeyi tapmaq üçün müxtəlif dərinliklərlə sınaqdan keçirin.
Böyük nümunə konteyneri, bütün nümunənin vahid sonikasiyasını təmin etmək üçün sonotrodu yavaş-yavaş nümunə vasitəsilə hərəkət etdirməkdən faydalana bilər.
Əgər siz CupHorn və ya UIP400MTP çox nümunəli sonikator modellərindən istifadə edirsinizsə, təlimatda təsvir olunduğu kimi kuboku doldurun. - Sonikasiya prosesini optimallaşdırın: Nümunənizə uyğunlaşdırın
Uğurlu zond tipli sonikasiyanın açarı optimallaşdırmadır. Hüceyrələr, toxumalar və kimyəvi maddələr də daxil olmaqla müxtəlif nümunələr ultrasəs enerjisinə fərqli reaksiya verdiyi üçün prosesi xüsusi ehtiyaclarınıza uyğunlaşdırmaq vacibdir. Optimallaşdırma zamanı nəzərə alınmalı olan amillərə aşağıdakılar daxildir:
Nümunə Həcmi: Daha böyük həcmlər daha uzun sonication vaxtları və ya daha yüksək amplitüdlər tələb edə bilər.
Nümunə viskozitesi: Özlü nümunələr kifayət qədər pozulmaya nail olmaq üçün daha sıx sonikasiyaya ehtiyac duya bilər.
İstənilən nəticə: Əgər siz sərt toxumaları parçalayırsınızsa, daha intensiv sonikasiya rejimi tələb oluna bilər, halbuki daha qısa sonikasiya DNT kəsilməsi üçün kifayət edə bilər.
Parametrləri sistematik şəkildə sınaqdan keçirmək və təkmilləşdirməklə – məsələn, amplituda, müddət və zond dərinliyi — unikal nümunəniz üçün sonikasiya prosesini optimallaşdıra bilərsiniz.
Nümunə Hazırlama Tapşırığınız üçün Doğru Sonicatoru tapın
Hielscher Ultrasonics, nümunə hazırlama tapşırığınız üçün sonikatorların tam spektrli portfelini təklif edir. Nümunənin növü, həcmi və üzərində işlədiyiniz xüsusi proqram kimi vacib amilləri bizə deyin. Mütəxəssislərdən ibarət komandamız tədqiqat təcrübələriniz üçün ən uyğun ultrasəs homojenizatorunu təklif etmək üçün məmnuniyyətlə sizinlə məsləhətləşəcək.
Aşağıdakı cədvəl sizə laboratoriya ölçülü ultrasəs aparatlarımızın təxmini emal qabiliyyətinin göstəricisini verir:
| Tövsiyə olunan Cihazlar | Partiya Həcmi | Axın |
|---|---|---|
| UIP400MTP 96 Quyu Plitə Sonikatoru | çox quyulu / mikrotitr plitələr | na |
| Ultrasonik Kubok Horn | Flakonlar və ya stəkanlar üçün CupBuynuz | na |
| GDmini2 | ultrasəs mikro axın reaktoru | na |
| VialTweeter | 0,5 - 1,5 ml | na |
| UP100H | 1 ilə 500 ml | 10-200 ml/dəq |
| UP200Ht, UP200 St | 10 ilə 1000 ml | 20-200 ml/dəq |
| UP400St | 10 ilə 2000 ml | 20 - 400 ml/dəq |
| Ultrasonik ələk çalkalayıcısı | na | na |
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikatlı bir şirkətdir və ən müasir texnologiya və istifadəçi dostu olan yüksək performanslı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə ki, Hielscher ultrasəs cihazları CE-yə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.
Hielscher Ultrasonics, nümunə hazırlamaq və klinik analiz üçün güclü təmassız sonikatorları təmin edir. Çox quyu boşqab sonikatoru UIP400MTP, VialTweeter, kubok Horn və GDmini2 axın sonikatoru nümunələri onlara toxunmadan emal edin.
- yüksək səmərəlilik
- ən müasir texnologiya
- etibarlılıq & möhkəmlik
- tənzimlənən, dəqiq proses nəzarəti
- dəstə & xətdə
- istənilən həcm üçün
- ağıllı proqram təminatı
- ağıllı funksiyalar (məsələn, proqramlaşdırıla bilən, məlumatların protokollaşdırılması, uzaqdan idarəetmə)
- idarə etmək asan və təhlükəsizdir
- aşağı təmir
- CIP (yerində təmiz)
10 nümunənin eyni vaxtda sonikasiyası üçün VialTweeter sonikatoru, məsələn, hüceyrələri pozmaq, zülalları çıxarmaq və DNT-ni kəsmək
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Turrini, Federica; Donno, Dario; Beccaro, Gabriele; Zunin, Paola; Pittaluga, Anna; Boggia, Raffaella (2019): Pulsed Ultrasound-Assisted Extraction as an Alternative Method to Conventional Maceration for the Extraction of the Polyphenolic Fraction of Ribes nigrum Buds: A New Category of Food Supplements Proposed by The FINNOVER Project. Foods. 8. 466; 2019
- Giricz Z., Varga Z.V., Koncsos G., Nagy C.T., Görbe A., Mentzer R.M. Jr, Gottlieb R.A., Ferdinandy P. (2017): Autophagosome formation is required for cardioprotection by chloramphenicol. Life Science Oct 2017. 11-16.
- Hemida, Yasmine (2016): Effect of Rapamycin as an Inhibitor of the mTOR Cell Cycle Entry Complex on the Selective Lysis of Human Leukemia Cells Lines in Vitro Using 20 kHz Pulsed Low-Frequency Ultrasound. Honors Capstone Projects – All. 942, 2016.
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
Tez-tez soruşulan suallar
Sonikasiyanın məqsədi nədir?
Sonikasiyanın məqsədi, hüceyrənin pozulması, homogenləşmə və molekulyar strukturların parçalanması kimi prosesləri asanlaşdıraraq nümunədəki hissəcikləri qarışdırmaq üçün adətən ultrasəs diapazonunda səs dalğalarından istifadə etməkdir. Qarışığı artırmaq, reaksiyaları təşviq etmək və ya hüceyrə məzmununu buraxmaq üçün bioloji, kimyəvi və material elmləri tətbiqlərində ümumiyyətlə istifadə olunur.
Sonication Texnikası nədir?
Sonikasiya texnikası intensiv ultrasəs dalğalarından istifadə etməyi nəzərdə tutur (adətən 20 arasında tezliklərdə). – 30 kHz) maye mühitdə sürətli vibrasiya yaratmaq üçün. Bu titrəmələr akustik kavitasiya kimi tanınan mikroskopik baloncukların əmələ gəlməsinə və dağılmasına səbəb olur. Bu kavitasiya hüceyrələri poza, hissəcikləri dağıta və ya kimyəvi reaksiyaları asanlaşdıra bilən lokallaşdırılmış yüksək təzyiq və temperatur yaradır. Sonikasiya texnikası laboratoriyalarda hüceyrə lizisi, çıxarılması, DNT-nin kəsilməsi, homogenləşdirmə və nanohissəciklərin sintezi kimi tətbiqlər üçün geniş istifadə olunur.
Sonication üçün nümunəni necə hazırlayırsınız?
Sonikasiya üçün nümunə hazırlamaq üçün nümunə materialı (adətən maye və ya dayandırılmış bərk maddələr) ultrasəs titrəyişlərini yerləşdirmək və dağılmanın qarşısını almaq üçün kifayət qədər həcmdə olan uyğun bir konteynerə, çox vaxt şüşə kolbaya, plastik boruya və ya çoxlu boşqaba yerləşdirilir. . Lazım gələrsə, istənilən konsentrasiyanı saxlamaq və sonikasiya zamanı həddindən artıq istiləşmənin qarşısını almaq üçün nümunə tampon və ya həlledici ilə seyreltilir. İstiliyə həssas nümunələr üçün konteyner ultrasəs dalğalarının yaratdığı istiliyi dağıtmaq üçün qismən buz banyosuna və ya soyuducu gödəkçəyə batırılır. Səmərəli enerji ötürülməsini təmin etmək üçün sonikatorun zondu düzgün yerləşdirilib. Amplituda, vaxt və nəbz rejimi kimi parametrlər eksperimentin xüsusi tələblərinə əsasən təyin edilir.
Sonication DNT-ni pozurmu?
Bəli, sonikasiya DNT-ni qıra bilər. Sonikasiya zamanı yaranan yüksək enerjili ultrasəs dalğaları, DNT zəncirlərində mexaniki gərginliyə səbəb olan yüksək təzyiq və istiliyin lokallaşdırılmış bölgələri yaradaraq DNT molekullarını kəsə bilər. Bu, DNT-nin daha kiçik parçalara parçalanması ilə nəticələnir. DNT qırılma dərəcəsi sonikasiyanın müddətindən və intensivliyindən asılıdır. Xromatin immunoprecipitation (ChIP) və ya növbəti nəsil ardıcıllıq (NGS) kitabxana hazırlanması kimi bəzi təcrübələrdə, sonication nəzarət DNT kəsmə üçün etibarlı texnika kimi istifadə olunur.
Hielscher Ultrasonics yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir laboratoriya üçün sənaye ölçüsü.