Ultrasonikadan istifadə edərək Bitki Hüceyrələrində Genetik Transformasiya

Sonication-Assisted Agrobacterium-Mediated Transformation (SAAT) daşıyıcı kimi Agrobacterium istifadə edərək, bitki hüceyrələrini xarici genlərlə yoluxdurmaq üçün effektiv üsuldur. Ultrasonik kavitasiya, bitki toxumasının hədəflənmiş mikro-yaralanması kimi təsvir edilə bilən sonoporasiyaya səbəb olur. Bu ultrasəs vasitəsilə mikro yaralar yaradır, DNT və DNT vektorları hüceyrə matrisinə səmərəli şəkildə nəql edilə bilər.

sonoporasiya – Ultrasonik olaraq Təkmilləşdirilmiş Hüceyrə Transformasiyası

Ultrasonicator UP100H tez-tez hüceyrə kulturası plitələrindən nümunə hazırlamaq üçün istifadə edilən laboratoriya homojenizatorudur.Hüceyrə süspansiyonlarına aşağı tezlikli ultrasəs (təxminən 20kHz) tətbiq edildikdə, akustik kavitasiyanın təsiri hüceyrə toxumalarında keçici membran keçiriciliyinə səbəb olur. Bu ultrasəs effekti sonoporasiya kimi tanınır və genlərin hüceyrələrə və ya toxumalara köçürülməsi üçün istifadə olunur.
Ultrasonikasiyanın üstünlükləri onun qeyri-termal mexaniki iş prinsipinə əsaslanır ki, bu da sonikasiyanı tez-tez daha çox yönlü və hüceyrə tiplərindən daha az asılı edir. Sonoporasiyanın çox yönlü tətbiqi mürəkkəb insan terapevtik zülallarının bioistehsalında əhəmiyyətli potensiala malik olan transgen bitkilərin istifadəsinə imkan yaradır. Belə bitki əsaslı bioreaktorlar asanlıqla genetik manipulyasiya edilə bilər, insan patogenləri ilə potensial çirklənmənin qarşısını alır, transformasiya vasitəçiliyi edən bakteriyalara (məsələn, Agrobacterium) zərər vermir və biosintezin ucuz, effektiv üsuludur.

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


Videoda UIP400MTP ultrasəs nümunəsi hazırlama sistemi göstərilir ki, bu da yüksək intensivlikli ultrasəsdən istifadə etməklə istənilən standart çoxquyulu lövhələrdən etibarlı nümunə hazırlamağa imkan verir. UIP400MTP-nin tipik tətbiqlərinə hüceyrə lizisi, DNT, RNT və xromatinin kəsilməsi, həmçinin zülal çıxarılması daxildir.

Çox yaxşı boşqablı sonikasiya üçün UIP400MTP Ultrasonicator

Video Miniatür

Ultrasonik Yardımlı Hüceyrə Transformasiyası

UP200St kimi zond tipli ultrasəs cihazları etibarlı toxuma homojenizatorlarıdır və genetikada nümunə hazırlamaq üçün geniş istifadə olunur, məsələn, Sonication-Assisted Agrobacterium-Vasited Transformation (SAAT) üçün.Sonication, məhluldakı hissəcikləri qarışdırmaq, məhlulları qarışdırmaq və bununla da kütlə ötürmə və həll sürətini artırmaq üçün aşağı tezlikli ultrasəs dalğalarını tətbiq edən bir texnikadır. Eyni zamanda, sonikasiya mayelərdən həll olunmuş qazları çıxara bilər. Bitki transformasiyasında sonikasiya bitki toxumasında mikro yaraların əmələ gəlməsinə səbəb olacaq və çılpaq DNT-nin bitki protoplastına çatdırılmasını gücləndirəcək.

Genetik transformasiya üçün, Sonication-Assisted Agrobacterium-vosiated Transformation (SAAT) üstünlük verilən üsuldur və çılpaq DNT və DNT vektorlarını birbaşa protoplasta köçürmək üçün istifadə edilən sonikasiyadan əhəmiyyətli dərəcədə yüksək effektivliyə malikdir. Çoxsaylı tədqiqatlar göstərdi ki, ultrasəs dalğaları və nəticədə akustik kavitasiya ilə bitki hüceyrələrində mexaniki pozulma və yaraların əmələ gəlməsinə səbəb olan sonikasiya ilə Agrobacterium vasitəçiliyi ilə transformasiya (SAAT) istifadə edilə bilər. Qısa bir ultrasəs müalicəsi eksplantların səthində mikro yaralar yaradır. Yaralı hüceyrələr Agrobacterium-un bitki toxumalarının daha dərin hissəsinə nüfuz etməsinə imkan verərək, bitki hüceyrələrinin yoluxma ehtimalını artırır. Bundan əlavə, ifraz olunan fenolik birləşmələr transformasiyanı artırır. Ultrasəs üsulu ilə yaradılan mikro yaralar, eksplantların bakteriyaların nüfuz etməsini də daha mümkün edir. SAAT xüsusilə Agrobacterium-a davamlı hesab edilən bitki növlərində genetik transformasiya üçün uğurla istifadə edilmişdir.
Çox sadə və ucuz üsul olması, həmçinin Agrobacterium-vasitəçiliyi ilə gen transferinin əhəmiyyətli dərəcədə təkmilləşdirilməsi SAAT-ın əsas üstünlükləridir. Chenopodium rubrum L. və Beta vulgaris L.-nin transformasiyasında SAAT-ın uğurlu tətbiqindən başqa, bu yanaşma Nicotiana tabacum-da rekombinant Escherichia coli vəhşi tipli istiliyə davamlı holotoksin və Escherichia coli mutant LT peyvəndi adyuvantlarının istehsalında da tətbiq edilmişdir. , burada ən yüksək sistemli LT-B spesifik IgG titrləri quşlarda aşkar edilmişdir.
(müq. Laere və başqaları, 2016; M. Klimek-Chodacka və R. Baranski, 2014)

VialTweeter plan hüceyrələrinin DNT infeksiyası üçün istifadə edilə bilər, məsələn, sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation (SAAT) istifadə edərək.

VialTweeter birdən çox nümunə borularının eyni vaxtda sonikasiyası üçün, məsələn, sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation (SAAT) üçün

Bitki Hüceyrələrində Sonoporasiya yolu ilə Gen Transferinin Ümumi Proseduru

  1. Genetik materialın hazırlanması: Bitki hüceyrələrinə təqdim etmək istədiyiniz genetik materialı hazırlamaqla başlayın. Bu plazmid DNT, RNT və ya digər nuklein turşuları ola bilər.
  2. Bitki Hüceyrəsinin İzolyasiyası: Hədəf etmək istədiyiniz bitki hüceyrələrini təcrid edin. Təcrübənizdən asılı olaraq, bu hüceyrələr bitki toxumalarından və ya mədəniyyətlərdən təcrid oluna bilər.
  3. Hüceyrə dayandırılması: Bitki hüceyrələrini uyğun mühitdə və ya tamponda dayandırın. Bu, hüceyrələrin sağlam olmasını və genlərin qəbulu üçün əlverişli vəziyyətdə olmasını təmin etmək üçün vacibdir.
  4. Sonicatorunuzu qurun: Prob tipli sonikatorunuzu amplituda, vaxt, enerji və temperatur kimi sonikasiya parametrlərini əvvəlcədən təyin etməklə hazırlayın. Ultrasəs zondunu hüceyrə süspansiyonuna batırın.
  5. sonication: Sonikasiya proseduruna başlayın. Zond ucunun sürətli salınması mayedə kavitasiya qabarcıqları yaradır. Bu qabarcıqlar ultrasəs dalğaları səbəbindən genişlənir və dağılır, asqıda mexaniki qüvvələr və mikro axın yaradır.
  6. Sonoporasiya: Kavitasiya nəticəsində yaranan mexaniki qüvvələr və mikro axın bitki hüceyrələrinin membranlarında müvəqqəti məsamələr və deşiklər yaradır. Süspansiyonda mövcud olan genetik material bu məsamələr vasitəsilə bitki hüceyrələrinə daxil ola bilər.
  7. İnkubasiya: Sonoporasiya müalicəsindən sonra, onların membranlarını bərpa etmək və sabitləşdirmək üçün bitki hüceyrələrini inkubasiya edin. Bu, hüceyrənin sağ qalması və uğurlu gen transferini təmin etmək üçün mühüm addımdır.

Agrobacterium və ya Liposomlar vasitəsilə gen ötürülməsi

Bitki hüceyrəsini transfeksiya etmək üçün iki ümumi forma var. Onlar genetik materialın daşıyıcısı kimi ya qram-mənfi bakteriyaların cinsi olan agrobacterium, ya da liposomlardan istifadə edirlər.

  • Agrobacterium-Vasitəli Sonoporasiya: Agrobacterium tumefaciens bitki gen mühəndisliyində geniş istifadə olunan bakteriyadır. Bu üsulda, arzu olunan geni ehtiva edən plazmid DNT Agrobacterium-a daxil edilir, daha sonra bitki hüceyrələri ilə qarışdırılır. Hüceyrə suspenziyası zond tipli sonikatordan istifadə edərək sonoporasiyaya məruz qalır. Ultrasəs enerjisi genetik materialın Agrobacterium-dan bitki hüceyrələrinə ötürülməsini gücləndirir. Bu üsul bitkilərin genetik modifikasiyası üçün geniş istifadə olunur.
  • Liposom vasitəçiliyi ilə sonoporasiya: Liposomlar genetik material daşıya bilən lipid əsaslı veziküllərdir. Bu üsulda plazmid DNT və ya digər nuklein turşuları ilə yüklənmiş liposomlar bitki hüceyrələri ilə qarışdırılır. Bitki hüceyrələri tərəfindən liposomların qəbulunu asanlaşdırmaq üçün bir zond tipli sonikatordan istifadə edərək sonoporasiya istifadə olunur. Ultrasəs lipozomların lipid iki qatını pozaraq, genetik materialı bitki hüceyrələrinə buraxır. Bu yanaşma bitki hüceyrələrində keçici gen ifadəsi tədqiqatları üçün faydalıdır.

Sonication-Assisted Agrobacterium-Vasited Transformation-un (SAAT) elmi cəhətdən sübut edilmiş faydaları

Sonication-Assisted Agrobacterium-Mediated Transformation (SAAT) çoxsaylı bitki növlərinə tətbiq edilmişdir. Bitki hüceyrə kulturalarının qısa və nisbətən yumşaq ultrasəs müalicəsi sonoporasiyaya səbəb olur ki, bu da sonradan Agrobacterium-un gen daşıyıcısı kimi dərindən nüfuz etməsinə imkan verir. Aşağıda SAAT-ın faydalı təsirlərini nümayiş etdirən nümunəvi tədqiqatları oxuya bilərsiniz.

Sonicator UP200Ht, sonoporasiya yolu ilə bitki hüceyrəsini genlərlə transfeksiya etmək üçün mikro ucu ilə

Sonicator UP200Ht sonoporasiya yolu ilə gen transfeksiyası üçün

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


Ashwagandha'nın Ultrasəs Dəstəyi ilə çevrilməsi

W. somniferada (ashwagandha və ya qış albalı kimi tanınır) transformasiya səmərəliliyini artırmaq üçün Dehdashti və həmkarları (2016) asetosiringonun (AS) və sonication istifadəsini araşdırdılar.
Acetosyringone (AS) üç mərhələdə əlavə edildi: Agrobacterium maye mədəniyyəti, Agrobacterium infeksiyası və Agrobacterium ilə eksplantların birgə kulturası. Agrobacterium maye kulturasına 75 μM AS əlavə edilməsinin vir genlərinin induksiyası üçün optimal olduğu müəyyən edilmişdir.
Sonikasiyanın əlavə tətbiqi (SAAT) ən yüksək gen ifadəsi ilə nəticələndi. Tüklü köklərdə gusA geninin ifadəsi, yarpaqlar və tumurcuq ucları müvafiq olaraq 10 və 20 saniyə ərzində sonikasiya edildikdə ən yaxşı olduğu aşkar edilmişdir. Təkmilləşdirilmiş protokolun transformasiya effektivliyi yarpaq və tumurcuq ucu eksplantlarında müvafiq olaraq 66,5 və 59,5% qeydə alınıb. Digər protokollarla müqayisədə bu təkmilləşdirilmiş protokolun transformasiya effektivliyinin yarpaqlar üçün 2,5 dəfə, tumurcuq ucları üçün isə 3,7 qat daha çox olduğu aşkar edilmişdir. Southern blot analizləri W1-W4 sətirlərində gusA transgeninin 1-2 nüsxəsini, təkmilləşdirilmiş protokol tərəfindən yaradılan W5 xəttində isə 1-4 transgen nüsxəsini təsdiqlədi.

Sonikasiya müddəti (ultrasəsə məruz qalma müddəti) W. somniferada çevrilmədə sonikasiya ilə dəstəklənən Agrobacterium vasitəçiliyi ilə transformasiyaya (SAAT) təsir göstərir.

W. somnifera yarpağı (a) və tumurcuq ucu (b) eksplantlarının transformasiya tezliyinə sonication-assisted Agrobacterium-vosiated transformasiya (SAAT) müddətinin təsiri
(tədqiqat və qrafika: © Dehdashti et al., 2016)

UP200St kimi sonikatorlar DNT, RNT, miRNA və sonoporasiya yolu ilə sonrakı gen transfeksiyası kimi genetik material hazırlamaq üçün istifadə olunur. Sonoporasiya aqrobakteriyadan istifadə edərək bitki hüceyrələrini genetik materialla köçürməyə imkan verir.

UP200St zond tipli homojenizator sonoporasiya və gen transfeksiyası üçün

Pambığın Ultrasəs Yardımlı Transformasiyası

Hussain et al. (2007) sonikasiya ilə dəstəklənən pambıq çevrilməsinin faydalı təsirlərini nümayiş etdirir. Aşağı tezlikli ultrasəsin səbəb olduğu akustik kavitasiya bitki toxumasının səthində və altında mikro yaralar yaradır (sonoporasiya) və Agrobacteriumun bitki toxuması boyunca daha dərinə və tamamilə hərəkət etməsinə imkan verir. Bu yaralanma modası toxumanın daha dərinliyində yerləşən bitki hüceyrələrinə yoluxma ehtimalını artırır. SAAT-ın transformasiya effektivliyini qiymətləndirmək üçün GUS gen ifadəsi ölçüldü. GUS reportyor sistemi, xüsusilə bitki molekulyar biologiyası və mikrobiologiyasında faydalı olan məruzəçi gen sistemidir. Müxtəlif SAAT parametrlərinin tənzimlənməsi, eksplant kimi yetkin embrionlardan istifadə edərək pambıqda GUS-un keçici ifadəsi əhəmiyyətli dərəcədə artırıldı. GUS ilk dəfə eksplantların inkubasiyasından 24 saat sonra aşkar edilmişdir və 48 saat ərzində GUS ifadəsi çox intensiv olmuşdur ki, bu da sonikasiya ilə Agrobacterium vasitəçiliyi ilə transformasiyadan (SAAT) sonra pambıq eksplantının uğurlu transformasiyasının faydalı göstəricisi olmuşdur. Müxtəlif transformasiya üsullarının (yəni biolistik, Agro, BAAT, SAAT), sonication-assisted Agrobacterium-vosited transformasiya (SAAT) müqayisəsi transformasiyanın ən yaxşı nəticələrini göstərdi.

Sonication-assisted Agrobacterium-vosiated transformation (SAAT) alternativ infeksiya üsulları ilə müqayisədə əhəmiyyətli dərəcədə yüksək keçici ifadə göstərir.

QUS-un keçici ifadəsi əsasında transformasiya prosedurunun seçilməsi. Sonication-assisted Agrobacterium-vosiated transformation (SAAT) əhəmiyyətli dərəcədə yüksək keçid ifadəsini göstərir.
(tədqiqat və qrafika: © Hussain et al., 2007)

 

Bu dərslik lizis, hüceyrənin pozulması, zülal izolyasiyası, laboratoriyalarda DNT və RNT fraqmentasiyası, analiz və tədqiqat kimi nümunə hazırlama tapşırıqlarınız üçün hansı tip sonikatorun ən yaxşı olduğunu izah edir. Tətbiqiniz, nümunə həcmi, nümunə sayı və ötürmə qabiliyyəti üçün ideal sonikator tipini seçin. Hielscher Ultrasonics sizin üçün ideal ultrasəs homojenizatoruna malikdir!

Elm və təhlildə hüceyrənin pozulması və zülal çıxarılması üçün mükəmməl sonikatoru necə tapmaq olar

Video Miniatür

 

Sonoporasiya və SAAT üçün Yüksək Performanslı Ultrasəs Həlləri

Hielscher Ultrasonics, laboratoriyalar, tədqiqat obyektləri, eləcə də çox yüksək ötürmə qabiliyyəti olan sənaye istehsalı üçün yüksək performanslı ultrasəs cihazların inkişafı və istehsalında uzun müddətdir təcrübəlidir. Mikrobiologiya və həyat elmi üçün Hielscher xüsusi toxumalar və onların müalicəsi üçün zəruri olan müxtəlif tələbləri yerinə yetirmək üçün müxtəlif həllər təklif edir. Çoxsaylı nümunələrin eyni vaxtda ultrasəslənməsi üçün Hielscher çoxqulu plitələr üçün UIP400MTP, 10 flakonun (məsələn, Eppendorf boruları) və ya ultrasəs CupHornun sonikasiyası üçün VialTweeter təklif edir. Prob tipli ultrasəs cihazları laboratoriya homogenizatorları kimi 50 ilə 400 vatt arasında, sənaye sistemləri isə 500 vattdan 16 kVt-a qədər güc diapazonunu əhatə edir.
Zəhmət olmasa bizimlə əlaqə saxlayın və ərizə və proses tələbləriniz barədə bizə bildirin. Təcrübəli əməkdaşlarımız sizin bioloji prosesinizə ən uyğun ultrasəs aparatını tövsiyə etməkdən məmnun olacaqlar.
Aşağıdakı cədvəldə bizim ultrasonicators təxmini emal gücü bir göstəriş verir:

Partiyanın həcmiAxıntövsiyə Cihazlar
çoxqulu / mikrotitr plitələrnaUIP400MTP
10 flakona qədərnaVialTweeter
5 flakon/boru və ya 1 daha böyük gəmiyə qədərnaCuphorn
1 500ml10 200ml / dəqUP100H
10 2000ml üçün20 400ml / dəqUf200 ः t, UP400St
0.1 20L üçün04L / min .2UIP2000hdT
10 100L üçün10L 2 / dəqUIP4000hdT
na10 100L / dəqUIP16000
nadaha böyükçoxluq UIP16000

Bizimlə əlaqə saxlayın! Bizdən soruşun!

Daha ətraflı məlumat üçün müraciət edin

Zəhmət olmasa ultrasəs aparatlarımız, onların tətbiqi və qiyməti haqqında əlavə məlumat tələb etmək üçün aşağıdakı formanı doldurun. Prosesinizi sizinlə müzakirə etməkdən və tələblərinizə cavab verən ultrasəs sistemi təklif etməkdən şad olarıq!









Xahiş edirik unutmayın Gizlilik Siyasəti.



Ultrasonik yüksək kəsici homogenizatorlar laboratoriya, dəzgah üstü, pilot və sənaye emalında istifadə olunur.

Hielscher Ultrasonics, laboratoriya, pilot və sənaye miqyasında tətbiqetmələri qarışdırmaq, dağılmaq, emulsiya etmək və hasil etmək üçün yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir.



Ədəbiyyat / İstinadlar


Yüksək performanslı ultrasəs! Hielscher-in məhsul çeşidi kompakt laboratoriya ultrasəs cihazından tutmuş tam sənaye ultrasəs sistemlərinə qədər tam spektri əhatə edir.

Hielscher Ultrasonics, yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir Laboratoriya qədər sənaye ölçüsü.


Prosesinizi müzakirə etməkdən məmnun olarıq.

Əlaqə saxlayaq.