Ultrasonikadan istifadə edərək Bitki Hüceyrələrində Genetik Transformasiya

Sonication-Assisted Agrobacterium-Mediated Transformation (SAAT) daşıyıcı kimi Agrobacterium istifadə edərək, bitki hüceyrələrini xarici genlərlə yoluxdurmaq üçün effektiv üsuldur. Ultrasonik kavitasiya, bitki toxumasının hədəflənmiş mikro-yaralanması kimi təsvir edilə bilən sonoporasiyaya səbəb olur. Bu ultrasəs vasitəsilə mikro yaralar yaradır, DNT və DNT vektorları hüceyrə matrisinə səmərəli şəkildə nəql edilə bilər.

sonoporasiya – Ultrasonik olaraq Təkmilləşdirilmiş Hüceyrə Transformasiyası

Ultrasonicator UP100H tez-tez hüceyrə kulturası plitələrindən nümunə hazırlamaq üçün istifadə edilən laboratoriya homojenizatorudur.Hüceyrə süspansiyonlarına aşağı tezlikli ultrasəs (təxminən 20kHz) tətbiq edildikdə, akustik kavitasiyanın təsiri hüceyrə toxumalarında keçici membran keçiriciliyinə səbəb olur. Bu ultrasəs effekti sonoporasiya kimi tanınır və genlərin hüceyrələrə və ya toxumalara köçürülməsi üçün istifadə olunur.
Ultrasonikasiyanın üstünlükləri onun qeyri-termal mexaniki iş prinsipinə əsaslanır ki, bu da sonikasiyanı tez-tez daha çox yönlü və hüceyrə tiplərindən daha az asılı edir. Sonoporasiyanın çox yönlü tətbiqi mürəkkəb insan terapevtik zülallarının bioistehsalında əhəmiyyətli potensiala malik olan transgen bitkilərin istifadəsinə imkan yaradır. Belə bitki əsaslı bioreaktorlar asanlıqla genetik manipulyasiya edilə bilər, insan patogenləri ilə potensial çirklənmənin qarşısını alır, transformasiya vasitəçiliyi edən bakteriyalara (məsələn, Agrobacterium) zərər vermir və biosintezin ucuz, effektiv üsuludur.

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


Videoda UIP400MTP ultrasəs nümunəsi hazırlama sistemi göstərilir ki, bu da yüksək intensivlikli ultrasəsdən istifadə etməklə istənilən standart çoxquyulu lövhələrdən etibarlı nümunə hazırlamağa imkan verir. UIP400MTP-nin tipik tətbiqlərinə hüceyrə lizisi, DNT, RNT və xromatinin kəsilməsi, həmçinin zülal çıxarılması daxildir.

Çox yaxşı boşqablı sonikasiya üçün UIP400MTP Ultrasonicator

Ultrasonik Yardımlı Hüceyrə Transformasiyası

UP200St kimi zond tipli ultrasəs cihazları etibarlı toxuma homojenizatorlarıdır və genetikada nümunə hazırlamaq üçün geniş istifadə olunur, məsələn, Sonication-Assisted Agrobacterium-Vasited Transformation (SAAT) üçün.Sonication, məhluldakı hissəcikləri qarışdırmaq, məhlulları qarışdırmaq və bununla da kütlə ötürmə və həll sürətini artırmaq üçün aşağı tezlikli ultrasəs dalğalarını tətbiq edən bir texnikadır. Eyni zamanda, sonikasiya mayelərdən həll olunmuş qazları çıxara bilər. Bitki transformasiyasında sonikasiya bitki toxumasında mikro yaraların əmələ gəlməsinə səbəb olacaq və çılpaq DNT-nin bitki protoplastına çatdırılmasını gücləndirəcək.

Genetik transformasiya üçün, Sonication-Assisted Agrobacterium-vosiated Transformation (SAAT) üstünlük verilən üsuldur və çılpaq DNT və DNT vektorlarını birbaşa protoplasta köçürmək üçün istifadə edilən sonikasiyadan əhəmiyyətli dərəcədə yüksək effektivliyə malikdir. Çoxsaylı tədqiqatlar göstərdi ki, ultrasəs dalğaları və nəticədə akustik kavitasiya ilə bitki hüceyrələrində mexaniki pozulma və yaraların əmələ gəlməsinə səbəb olan sonikasiya ilə Agrobacterium vasitəçiliyi ilə transformasiya (SAAT) istifadə edilə bilər. Qısa bir ultrasəs müalicəsi eksplantların səthində mikro yaralar yaradır. Yaralı hüceyrələr Agrobacterium-un bitki toxumalarının daha dərin hissəsinə nüfuz etməsinə imkan verərək, bitki hüceyrələrinin yoluxma ehtimalını artırır. Bundan əlavə, ifraz olunan fenolik birləşmələr transformasiyanı artırır. Ultrasəs üsulu ilə yaradılan mikro yaralar, eksplantların bakteriyaların nüfuz etməsini də daha mümkün edir. SAAT xüsusilə Agrobacterium-a davamlı hesab edilən bitki növlərində genetik transformasiya üçün uğurla istifadə edilmişdir.
Çox sadə və ucuz üsul olması, həmçinin Agrobacterium-vasitəçiliyi ilə gen transferinin əhəmiyyətli dərəcədə təkmilləşdirilməsi SAAT-ın əsas üstünlükləridir. Chenopodium rubrum L. və Beta vulgaris L.-nin transformasiyasında SAAT-ın uğurlu tətbiqindən başqa, bu yanaşma Nicotiana tabacum-da rekombinant Escherichia coli vəhşi tipli istiliyə davamlı holotoksin və Escherichia coli mutant LT peyvəndi adyuvantlarının istehsalında da tətbiq edilmişdir. , burada ən yüksək sistemli LT-B spesifik IgG titrləri quşlarda aşkar edilmişdir.
(müq. Laere və başqaları, 2016; M. Klimek-Chodacka və R. Baranski, 2014)

VialTweeter plan hüceyrələrinin DNT infeksiyası üçün istifadə edilə bilər, məsələn, sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation (SAAT) istifadə edərək.

VialTweeter birdən çox nümunə borularının eyni vaxtda sonikasiyası üçün, məsələn, sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation (SAAT) üçün

Sonication-Assisted Agrobacterium-Vasited Transformation-un (SAAT) elmi cəhətdən sübut edilmiş faydaları

Sonication-Assisted Agrobacterium-Mediated Transformation (SAAT) çoxsaylı bitki növlərinə tətbiq edilmişdir. Bitki hüceyrə kulturalarının qısa və nisbətən yumşaq ultrasəs müalicəsi sonoporasiyaya səbəb olur ki, bu da sonradan Agrobacterium-un gen daşıyıcısı kimi dərindən nüfuz etməsinə imkan verir. Aşağıda SAAT-ın faydalı təsirlərini nümayiş etdirən nümunəvi tədqiqatları oxuya bilərsiniz.

Ashwagandha'nın Ultrasəs Dəstəyi ilə çevrilməsi

W. somniferada (ashwagandha və ya qış albalı kimi tanınır) transformasiya səmərəliliyini artırmaq üçün Dehdashti və həmkarları (2016) asetosiringonun (AS) və sonication istifadəsini araşdırdılar.
Acetosyringone (AS) üç mərhələdə əlavə edildi: Agrobacterium maye mədəniyyəti, Agrobacterium infeksiyası və Agrobacterium ilə eksplantların birgə kulturası. Agrobacterium maye kulturasına 75 μM AS əlavə edilməsinin vir genlərinin induksiyası üçün optimal olduğu müəyyən edilmişdir.
Sonikasiyanın əlavə tətbiqi (SAAT) ən yüksək gen ifadəsi ilə nəticələndi. Tüklü köklərdə gusA geninin ifadəsi, yarpaqlar və tumurcuq ucları müvafiq olaraq 10 və 20 saniyə ərzində sonikasiya edildikdə ən yaxşı olduğu aşkar edilmişdir. Təkmilləşdirilmiş protokolun transformasiya effektivliyi yarpaq və tumurcuq ucu eksplantlarında müvafiq olaraq 66,5 və 59,5% qeydə alınıb. Digər protokollarla müqayisədə bu təkmilləşdirilmiş protokolun transformasiya effektivliyinin yarpaqlar üçün 2,5 dəfə, tumurcuq ucları üçün isə 3,7 qat daha çox olduğu aşkar edilmişdir. Southern blot analizləri W1-W4 sətirlərində gusA transgeninin 1-2 nüsxəsini, təkmilləşdirilmiş protokol tərəfindən yaradılan W5 xəttində isə 1-4 transgen nüsxəsini təsdiqlədi.

Sonikasiya müddəti (ultrasəsə məruz qalma müddəti) W. somniferada çevrilmədə sonikasiya ilə dəstəklənən Agrobacterium vasitəçiliyi ilə transformasiyaya (SAAT) təsir göstərir.

W. somnifera yarpağı (a) və tumurcuq ucu (b) eksplantlarının transformasiya tezliyinə sonication-assisted Agrobacterium-vosiated transformasiya (SAAT) müddətinin təsiri
(tədqiqat və qrafika: © Dehdashti et al., 2016)

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


Pambığın Ultrasəs Yardımlı Transformasiyası

Hussain et al. (2007) sonikasiya ilə dəstəklənən pambıq çevrilməsinin faydalı təsirlərini nümayiş etdirir. Aşağı tezlikli ultrasəsin səbəb olduğu akustik kavitasiya bitki toxumasının səthində və altında mikro yaralar yaradır (sonoporasiya) və Agrobacteriumun bitki toxuması boyunca daha dərinə və tamamilə hərəkət etməsinə imkan verir. Bu yaralanma modası toxumanın daha dərinliyində yerləşən bitki hüceyrələrinə yoluxma ehtimalını artırır. SAAT-ın transformasiya effektivliyini qiymətləndirmək üçün GUS gen ifadəsi ölçüldü. GUS reportyor sistemi, xüsusilə bitki molekulyar biologiyası və mikrobiologiyasında faydalı olan məruzəçi gen sistemidir. Müxtəlif SAAT parametrlərinin tənzimlənməsi, eksplant kimi yetkin embrionlardan istifadə edərək pambıqda GUS-un keçici ifadəsi əhəmiyyətli dərəcədə artırıldı. GUS ilk dəfə eksplantların inkubasiyasından 24 saat sonra aşkar edilmişdir və 48 saat ərzində GUS ifadəsi çox intensiv olmuşdur ki, bu da sonikasiya ilə Agrobacterium vasitəçiliyi ilə transformasiyadan (SAAT) sonra pambıq eksplantının uğurlu transformasiyasının faydalı göstəricisi olmuşdur. Müxtəlif transformasiya üsullarının (yəni biolistik, Agro, BAAT, SAAT), sonication-assisted Agrobacterium-vosited transformasiya (SAAT) müqayisəsi transformasiyanın ən yaxşı nəticələrini göstərdi.

Sonication-assisted Agrobacterium-vosiated transformation (SAAT) alternativ infeksiya üsulları ilə müqayisədə əhəmiyyətli dərəcədə yüksək keçici ifadə göstərir.

QUS-un keçici ifadəsi əsasında transformasiya prosedurunun seçilməsi. Sonication-assisted Agrobacterium-vosiated transformation (SAAT) əhəmiyyətli dərəcədə yüksək keçid ifadəsini göstərir.
(tədqiqat və qrafika: © Hussain et al., 2007)

Sonoporasiya və SAAT üçün Yüksək Performanslı Ultrasəs Həlləri

Hielscher Ultrasonics, laboratoriyalar, tədqiqat obyektləri, eləcə də çox yüksək ötürmə qabiliyyəti olan sənaye istehsalı üçün yüksək performanslı ultrasəs cihazların inkişafı və istehsalında uzun müddətdir təcrübəlidir. Mikrobiologiya və həyat elmi üçün Hielscher xüsusi toxumalar və onların müalicəsi üçün zəruri olan müxtəlif tələbləri yerinə yetirmək üçün müxtəlif həllər təklif edir. Çoxsaylı nümunələrin eyni vaxtda ultrasəslənməsi üçün Hielscher çoxqulu plitələr üçün UIP400MTP, 10 flakonun (məsələn, Eppendorf boruları) və ya ultrasəs CupHornun sonikasiyası üçün VialTweeter təklif edir. Prob tipli ultrasəs cihazları laboratoriya homogenizatorları kimi 50 ilə 400 vatt arasında, sənaye sistemləri isə 500 vattdan 16 kVt-a qədər güc diapazonunu əhatə edir.
Zəhmət olmasa bizimlə əlaqə saxlayın və ərizə və proses tələbləriniz barədə bizə bildirin. Təcrübəli əməkdaşlarımız sizin bioloji prosesinizə ən uyğun ultrasəs aparatını tövsiyə etməkdən məmnun olacaqlar.
Aşağıdakı cədvəldə bizim ultrasonicators təxmini emal gücü bir göstəriş verir:

Partiyanın həcmi Axın tövsiyə Cihazlar
çoxqulu / mikrotitr plitələr na UIP400MTP
10 flakona qədər na VialTweeter
5 flakon/boru və ya 1 daha böyük gəmiyə qədər na Cuphorn
1 500ml 10 200ml / dəq UP100H
10 2000ml üçün 20 400ml / dəq Uf200 ः t, UP400St
0.1 20L üçün 04L / min .2 UIP2000hdT
10 100L üçün 10L 2 / dəq UIP4000hdT
na 10 100L / dəq UIP16000
na daha böyük çoxluq UIP16000

Bizimlə əlaqə saxlayın! Bizdən soruşun!

Daha ətraflı məlumat üçün müraciət edin

Zəhmət olmasa ultrasəs aparatlarımız, onların tətbiqi və qiyməti haqqında əlavə məlumat tələb etmək üçün aşağıdakı formanı doldurun. Prosesinizi sizinlə müzakirə etməkdən və tələblərinizə cavab verən ultrasəs sistemi təklif etməkdən şad olarıq!









Xahiş edirik unutmayın Gizlilik Siyasəti.



Ultrasonik yüksək kəsici homogenizatorlar laboratoriya, dəzgah üstü, pilot və sənaye emalında istifadə olunur.

Hielscher Ultrasonics, laboratoriya, pilot və sənaye miqyasında tətbiqetmələri qarışdırmaq, dağılmaq, emulsiya etmək və hasil etmək üçün yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir.



Ədəbiyyat / İstinadlar


Yüksək performanslı ultrasəs! Hielscher-in məhsul çeşidi kompakt laboratoriya ultrasəs cihazından tutmuş tam sənaye ultrasəs sistemlərinə qədər tam spektri əhatə edir.

Hielscher Ultrasonics, yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir Laboratoriya qədər sənaye ölçüsü.