البحوث البروتينية – لماذا لا غنى عن Sonicator لإعداد العينات
تعطي الأبحاث البروتينية رؤى عميقة في بيولوجيا الخلية وتوسع فهمنا للأنظمة البيولوجية من خلال تمكين التحليل الشامل للبروتينات ووظائفها. من الأمور الأساسية لنجاح الدراسات البروتينية إعداد عينات عالية الجودة ، والتي غالبا ما تنطوي على إعداد عينات معقدة وكثيفة العمالة. Sonication هي أداة راسخة وقوية لإعداد العينات ، وتقدم العديد من المزايا على الطرق التقليدية. توفر نماذج الصوتنة المختلفة مثل الصوتيات من نوع المسبار ، و VialTweeter ، و UIP400MTP صوتنة اللوحة عالية الإنتاجية مزايا فريدة في معالجة العينات البروتينية وتمهد الطريق لنتائج بحثية موثوقة وقابلة للتكرار.
لماذا أحتاج إلى جهاز Sonicator لأبحاثي البروتينية؟
في مجال البحوث البروتينية ، تنبع الحاجة إلى صوتي من الأهمية الحاسمة لتحقيق عينات عالية الجودة للتحليل. يعد استخدام الصوتنة في أبحاث البروتينات أمرا ضروريا لتحقيق نتائج موثوقة وقابلة للتكرار من خلال ضمان تحلل الخلايا بكفاءة ، وتحسين استخراج البروتين ، وتجانس العينات المعقدة ، وتسهيل الهضم الأنزيمي ، والحد من تلوث العينات ، وقدرات المعالجة عالية الإنتاجية.
أهمية تحضير العينة في البروتيوميات: يتوقف تحقيق نتائج موثوقة وقابلة للتكرار في التجارب البروتينية على التحضير الدقيق للعينة. من تحلل الخلايا إلى استخراج البروتين وتنقيته ، يجب تنفيذ كل خطوة بدقة لتقليل القطع الأثرية وضمان سلامة العينة. ومع ذلك ، فإن الطرق التقليدية مثل الاضطراب الميكانيكي والتحليل الكيميائي غالبا ما تقصر في تحقيق النتائج المرجوة بسبب مشكلات مثل الاستخراج غير الكامل وتدهور البروتين وتلوث العينات.
صوتي عالي الإنتاجية UIP400MTP لإعداد العينة في البروتينات.
الموجات فوق الصوتية: مغير قواعد اللعبة في إعداد عينة بروتينية
ظهرت الموجات فوق الصوتية ، وهي عملية استخدام الموجات الصوتية عالية التردد لتعطيل العينات البيولوجية ، كمغير للعبة في إعداد العينات البروتينية. من خلال تسخير قوة الطاقة الصوتية ، تسهل الصوتيات تحلل الخلايا السريع والفعال ، واستخراج البروتين ، والهضم الأنزيمي ، مما يؤدي إلى زيادة الغلة وتحسين نقاء العينة.
البروتوكول: ابحث عن تعليمات خطوة بخطوة باستخدام Hielscher Multi-Sample Sonicators في Biofilm والتحليل البروتيني هنا!
مهام إعداد العينات التي تسهلها Sonication
- تحلل الخلايا واستخراج البروتين: تعتبر أجهزة Sonicators مثالية لتحلل الخلايا واستخراج البروتين نظرا لتعدد استخداماتها ودقتها. من خلال تقديم رشقات نارية خاضعة للرقابة من الطاقة فوق الصوتية ، فإن الصوتيات تعطل بشكل فعال أغشية الخلايا ، وتطلق البروتينات داخل الخلايا دون المساس بسلامتها. هذا مهم بشكل خاص في الدراسات البروتينية التي تتطلب هياكل بروتينية سليمة للتحليل النهائي ، مثل دراسات تفاعل البروتين والبروتين والبروتينات الهيكلية.
- معالجة العينات عالية الإنتاجية: يوفر صوتنة لوحة UIP400MTP كفاءة لا مثيل لها في معالجة العينات البروتينية عالية الإنتاجية. من خلال الاستفادة من الطاقة فوق الصوتية في شكل لوحة متعددة الآبار ، يتيح UIP400MTP صوتنة متزامنة لعينات متعددة ، مما يقلل بشكل كبير من وقت المعالجة وتكاليف العمالة. هذا مفيد بشكل خاص في الدراسات البروتينية واسعة النطاق التي تتطلب فحصا سريعا لمكتبات العينات أو إنتاجية عينات عالية لاكتشاف العلامات الحيوية والتحقق من صحتها.
- زيادة الغلة بعد ترسيب البروتين: يشيع استخدام ترسيب البروتين في المعالجة النهائية للعينات البيولوجية من أجل تركيز البروتينات وتنقيتها من الملوثات المختلفة. وقد ثبت Sonication كتقنية فعالة لإعادة التعليق لزيادة غلة البروتين عندما حمض ثلاثي هيدرو الخليك (TCA) البروتينات المترسبة حيث صوتي في وقت لاحق. إن سونيك العينات ، بعد ترسيب TCA متبوعا بالشطف في المخزن المؤقت للعينة ، يزيد من إجمالي استرداد البروتين ، ويحسن نسب التكاثر والمطابقة.
- الهضم المحلل للبروتين: هضم البروتين بمساعدة الموجات فوق الصوتية يتفوق بشكل كبير على الهضم التقليدي بين عشية وضحاها من حيث السرعة والكفاءة. يتيح الصوتنة الاختزال السريع ، والألكلة ، والهضم المحلل للبروتين للبروتينات المعقدة ، مما يقلل من الوقت المطلوب من 12-24 ساعة تقليدية إلى بضع دقائق فقط. لا يعمل هذا النهج بالموجات فوق الصوتية على تسريع سير العمل فحسب ، بل يعزز أيضا قابلية التكرار والاتساق في التحليلات البروتينية. اقرأ المزيد هنا!
- علم البروتينات الفوسفاتية: تعمل الصوتيات على تحسين سير عمل البروتينات الفوسفوبروتينية في المقام الأول من خلال تحسين كفاءة تحلل الخلايا واستخراج البروتين، خاصةً بالنسبة للبروتينات المرتبطة بإحكام أو المرتبطة بالأغشية. حيث تعمل قوى القص الميكانيكية المتولدة أثناء عملية الصوتيات على تعطيل الهياكل الخلوية وتحت الخلوية، مما يسهل إطلاق البروتينات الفسفورية التي قد يتعذر الوصول إليها. وهذا يؤدي إلى زيادة تغطية البروتيوم وتحسين الكشف عن البروتينات الفوسفورية منخفضة الوفرة. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يساعد الصوتنة الخاضعة للتحكم في تقليل لزوجة العينة (على سبيل المثال، عن طريق تفتيت الأحماض النووية)، مما يحسن من عملية الهضم الأنزيمي في المراحل النهائية وكفاءة تخصيب الفوسفوببتيد، مما يؤدي في النهاية إلى إنتاج ملفات تعريف فسفورية أكثر شمولاً وقابلية للتكرار. اقرأ المزيد هنا!
- تحضير العينات بمساعدة الترشيح (FASP): في تدفقات عمل FASP، يساهم الصوتنة في تعزيز ذوبان البروتين وتجانسه قبل الترشيح. ويضمن التعطيل الفعال للخلايا وتجمعات البروتين تعرض البروتينات بشكل كامل لعوامل تغيير طبيعة البروتين مثل اليوريا، وهو أمر بالغ الأهمية للاحتفاظ الفعال على المرشح والهضم اللاحق. كما تساعد الصوتيات أيضًا على تقليل لزوجة العينة، مما يتيح ترشيحًا أكثر سلاسة ويقلل من انسداد المرشح. ونتيجةً لذلك، يصبح الهضم المحلِّل للبروتين (عادةً باستخدام التربسين) أكثر كفاءة واتساقًا، مما يحسن من استعادة الببتيد وقابلية استنساخ بروتوكول FASP بشكل عام. اقرأ المزيد هنا!
- تجانس العينة وخلط المخزن المؤقت: يسهل Sonication تجانس العينة وذوبان الخلايا وخلط المخزن المؤقت في سير عمل البروتينات.
VialTweeter متعدد الأنابيب Sonicator من أجل صوتنة متزامنة لما يصل إلى 10 عينات ، على سبيل المثال لتعطيل الخلايا واستخراج البروتينات.
أفضل Sonicator لعينات البروتينات الخاصة بي
Hielscher الموجات فوق الصوتية تقدم نماذج صوتيات مختلفة, التي تجعل التصاميم إعداد عينة مثالية ممكن.
سواء كنت بحاجة إلى صوتنة أرقام عينات صغيرة أو عالية ، دقيقة أو أحجام كبيرة – Hielscher لديه صوتنة الأنسب للتطبيق الخاص بك البروتين ذات الصلة.
قوارير وأكواب – سونيكاتور من نوع المسبار: يستخدم جهاز الصوتنة الكلاسيكي من نوع المسبار على نطاق واسع كخالط مختبري لأعداد العينات الأصغر ، عندما تكون العينات الفردية في قوارير أو أكواب هي العمليات. المجانسات المختبرية UP50H أو UP100H مع الطرف الصغير هي مسبار نموذجي / صوتيات القرن المستخدمة في الموجات فوق الصوتية المباشرة للعينة.
96 لوحة بئر / لوحات عيار دقيق – لوحة UIP400MTP سونيكاتور: مع زيادة أعداد العينات واستخدام الآبار المتعددة والألواح الدقيقة مع 96 أو 384 أو 1536 بئرا ، تسمح صوتنة اللوحة عالية الإنتاجية UIP400MTP صوتنة متزامنة مبسطة وإثارة عينات متعددة ، مما يضمن عزل البروتين اللطيف والفعال بالإضافة إلى الخلط الشامل والتشتت الموحد للكواشف. هذا مفيد بشكل خاص في التجارب البروتينية التي تنطوي على مصفوفات عينات معقدة أو مستحضرات عينات متعددة ، حيث يكون التجانس أمرا بالغ الأهمية للحصول على نتائج دقيقة وقابلة للتكرار.
ما يصل إلى 10 قوارير – فيالتويتر: إذا كنت تعمل مع العديد من القوارير مثل أنابيب Eppendorf في وقت واحد ، فإن VialTweeter هي الأداة التي تختارها. يوفر VialTweeter تصميما فريدا يسمح بصوتنة ما يصل إلى 10 قوارير أو أنابيب مغلقة في وقت واحد. يتم تجنب التلوث المتبادل والتلوث المحمول جوا تماما.
عدة قوارير أو أوعية مفردة – ذا كوبهورن: UP200St_TD-Cuphorn هو جهاز صوتي قوي ، والذي يمكنك من معالجة عدة قوارير في وقت واحد باستخدام حامل القارورة أو وضع وعاء فردي في حمام مائي CupHorn.
نحن هنا للمساعدة
موظفينا الفنيين هم خبراء في الموجات فوق الصوتية وعلى دراية جيدة في التوصية لك sonicator الأنسب التي تلبي الاحتياجات الخاصة بك ويحول البحوث الخاصة بك إلى نجاح. كما أصبحت sonicators أدوات لا غنى عنها في البحوث البروتينية، وتقديم كفاءة لا مثيل لها، براعة، والتكاثر في إعداد العينة، Hielscher يتأكد من أن صوتنة هو الأكثر فعالية وموثوق بها مما يوفر لك نموذج صوتي مثالي. من تحلل الخلية إلى استخراج البروتين وما بعده ، يتفوق الموجات فوق الصوتية على الطرق التقليدية ، مما يمكن الباحثين من دفع حدود علم البروتين. مع استمرار تطور الأبحاث البروتينية ، تعد الصوتيات أداة رئيسية لإعداد العينات ، مما يساهم في تحقيق نتائج موثوقة ويساعد على فهم العالم المعقد للبروتينات ووظائفها.
- كفاءة عالية
- إنتاجية عالية
- أحدث التقنيات
- نتائج قابلة للتكرار وقابلة للتكرار
- موثوقيه & متانه
- تحكم دقيق وقابل للتعديل في العملية
- للأكواب والقوارير والأنابيب والألواح الدقيقة
- لأي حجم عينة
- برنامج ذكي
- الميزات الذكية (على سبيل المثال ، قابلة للبرمجة ، وبروتوكول البيانات ، والتحكم عن بعد)
- سهل وآمن للعمل
- صيانة منخفضة
- التنظيف المكاني (التنظيف المكاني)
التصميم والتصنيع والاستشارات – جودة صنع في ألمانيا
Hielscher الموجات فوق الصوتية معروفة جيدا لأعلى معايير الجودة والتصميم. المتانة والتشغيل السهل تسمح بالتكامل السلس للموجات فوق الصوتية لدينا في المنشآت الصناعية. يتم التعامل بسهولة مع الظروف القاسية والبيئات الصعبة بواسطة الموجات فوق الصوتية Hielscher.
Hielscher Ultrasonics هي شركة حاصلة على شهادة الأيزو وتركز بشكل خاص على الموجات فوق الصوتية عالية الأداء التي تتميز بأحدث التقنيات وسهولة الاستخدام. بطبيعة الحال، الموجات فوق الصوتية Hielscher هي CE المتوافقة وتلبية متطلبات UL، وكالة الفضاء الكندية وبنفايات.
يمنحك الجدول أدناه مؤشرا على قدرة المعالجة التقريبية لأجهزة الموجات فوق الصوتية في المختبر ، والتي تعتبر مثالية لمهام إعداد العينة مثل تجزئة الحمض النووي والحمض النووي الريبي ، وتحلل الخلايا ، وعزل الحمض النووي والبروتين ، والهضم المحلل للبروتين أو انفصال الأغشية الحيوية:
| سونيكاتور | الطاقة [W] | نوع | الحجم [مل] |
|---|---|---|---|
| UIP400MTP | 400 | للألواح الدقيقة | 6 – 3456 بئر | VialTweeter | 200 | لما يصل إلى 10 قوارير بالإضافة إلى إمكانية التثبيت | 0.5 – 1.5 |
| UP50H | 50 | نوع التحقيق | 0.01 – 250 |
| UP100H | 100 | نوع التحقيق | 0.01 – 500 |
| UP200Ht | 200 | نوع التحقيق | 0.1 – 1000 |
| UP200St | 200 | نوع التحقيق | 0.1 – 1000 |
| UP400St | 400 | نوع التحقيق | 5.0 – 2000 |
| كوبهورن | 200 | كوبهورن ، سونومفاعل | 10 – 200 |
| جي دي ميني2 | 200 | خلية تدفق خالية من التلوث |
اتصل بنا! / اسألنا!
كوب بالموجات فوق الصوتيةهورن لإعداد العينات المتزامن والفعال للغاية لعينات متعددة في ظل نفس الظروف لعزل البروتين وتجزئة الحمض النووي.
صحائف الوقائع – نماذج Hielscher Sonicator للبروتينات
الأسئلة المتداولة المتعلقة بالصوتنة والبروتيوميات
ما هي العينات المستخلصة من البروتينات؟
يتم استخلاص البروتينات من مجموعة واسعة من العينات البيولوجية، بما في ذلك الخلايا المستزرعة، والأنسجة الحيوانية والبشرية، والدم، والبلازما، والبلازما، والمصل، والبول، والسائل الدماغي الشوكي، واللعاب، والأنسجة النباتية، والخلايا الميكروبية مثل البكتيريا والخميرة، والأجزاء تحت الخلوية مثل النوى أو الأغشية أو الميتوكوندريا أو الحويصلات خارج الخلية. ويعتمد اختيار العينة على السؤال البيولوجي، لأن أنواع العينات المختلفة توفر إمكانية الوصول إلى أجزاء مختلفة من البروتيوم، مثل بروتينات الخلية الكاملة أو البروتينات المفرزة أو البروتينات الغشائية أو بروتينات الإشارات الخاصة بالأنسجة.
انقر هنا للحصول على بروتوكول استخلاص البروتين بمساعدة الصوتنة من أنسجة الورم!
يمكن صوتنة كسر السندات ثاني كبريتيد؟
يمكن أن يؤدي Sonication بقوة عالية إلى كسر الروابط التساهمية أثناء استخراج البروتين. ومع ذلك ، عندما يتم إجراء صوتنة في مستويات الطاقة التي تسيطر عليها مطابقة العينات. لن يؤدي Ulrasonication إلى كسر روابط ثاني كبريتيد. هذا هو السبب في أن التحكم الدقيق في معلمات العملية بالموجات فوق الصوتية مثل السعة والطاقة والوقت ودرجة الحرارة مهم للغاية. Hielscher sonicators تعطيك السيطرة الكاملة على هذه المعلمات.
يمكن صوتنة كسر الروابط الببتيد؟
Sonication هي طريقة فعالة لتعزيز ذوبان الببتيد عن طريق تجزئة الببتيدات الصلبة إلى جزيئات أصغر. ومع ذلك ، إذا كان محلول الببتيد بعد الصوتنة يظهر الهلام أو التعكر أو وجود فلوكولات مرئية ، فهذا يشير إلى انحلال غير مكتمل ، مع تعليق الببتيد فقط داخل مصفوفة المحلول.
في مثل هذه الحالات ، تنشأ ضرورة وجود مذيب أكثر قوة لتحقيق الذوبان الكامل. إذا استمر الذوبان كتحد ، فيمكنك تجفيف وإزالة محلول المخزن المؤقت المتطاير. بعد ذلك ، تسمح هذه العينة المجففة باستكشاف مذيبات بديلة لتعزيز قابلية ذوبان الببتيد ، وبالتالي تمكين تحديد نظام المذيبات الأمثل.
الأدب / المراجع
- Lindemann C, Lupilova N, Müller A, Warscheid B, Meyer HE, Kuhlmann K, Eisenacher M, Leichert LI. (2013): Redox proteomics uncovers peroxynitrite-sensitive proteins that help Escherichia coli to overcome nitrosative stress. Journal of Biological Chemistry 288(27); 2013. 19698-714.
- Gonçalo Martins, Javier Fernández-Lodeiro, Jamila Djafari, Carlos Lodeiro, J.L. Capelo, Hugo M. Santos (2019): Label-free protein quantification after ultrafast digestion of complex proteomes using ultrasonic energy and immobilized-trypsin magnetic nanoparticles. Talanta, Volume 196, 2019. 262-270.
- Andreas Hofmann, Bertran Gerrits, Alexander Schmidt, Thomas Bock, Damaris Bausch-Fluck, Rudolf Aebersold, Bernd Wollscheid (2010): Proteomic cell surface phenotyping of differentiating acute myeloid leukemia cells.
Blood, Volume 116, Issue 13; 2010. e26-e34. - Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 2011.
- Fic, E., Kedracka-Krok, S., Jankowska, U., Pirog, A. and Dziedzicka-Wasylewska, M. (2010): Comparison of protein precipitation methods for various rat brain structures prior to proteomic analysis. Electrophoresis, 31; 2020. 3573-3579.
- Manadas B.J., Vougas K., Fountoulakis M., Duarte C.B. (2006): Sample sonication after trichloroacetic acid precipitation increases protein recovery from cultured hippocampal neurons, and improves resolution and reproducibility in two-dimensional gel electrophoresis. Electrophoresis 27(9); 2006. 1825-1831.
- Pooreydy, B., Jafari, M., Tajik, F., Karimi, M., Rezaei-Tavirani, M., Ghassempour, A., Rezadoost, H., & Khodabandeh, M. (2013): Organelle Isolation for Proteomics: Mitochondria from Peripheral Blood Mononuclear Cells. Archives of Advances in Biosciences 4, 2013.
Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع الخالط بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء من المختبر ل الحجم الصناعي.