تحلل بالموجات فوق الصوتية من عينات ذبابة الفاكهة الميلانوجاستر

يستخدم ذبابة الفاكهة على نطاق واسع في المختبرات ككائن نموذجي. لذلك ، يجب تنفيذ خطوات التحضير قبل التحليلي مثل التحلل وتعطيل الخلايا واستخراج البروتين وقص الحمض النووي لعينات ذبابة الفاكهة الميلانية بشكل متكرر. أجهزة إزالة الموجات فوق الصوتية موثوقة وفعالة ويمكن استخدامها لأداء مهام مختلفة مثل التحلل أو استخراج البروتين أو تجزئة الحمض النووي بسهولة عن طريق ضبط معلمات العملية بالموجات فوق الصوتية فقط. وبالتالي فإن المجانسات بالموجات فوق الصوتية هي أدوات مرنة مع مجموعة واسعة من التطبيقات.

تحلل بالموجات فوق الصوتية واستخراج البروتين

يستخدم ذبابة الفاكهة الميلانوجاستر على نطاق واسع ككائن نموذجي في المختبرات البيولوجية. تجد هنا بروتوكولات التحلل ، واستئصال البروتين وقص الحمض النووي لعينات D. melanogaster.التحلل ، ذوبان الخلايا ، تجانس الأنسجة واستخراج البروتين هي مهام نموذجية لأجهزة إزالة الموجات فوق الصوتية في المختبرات البيولوجية. تعتبر أجهزة إزالة الشعر بالموجات فوق الصوتية واضطرابات الخلايا مناسبة تماما لتجانس الأنسجة الحيوانية أو الحشرات (على سبيل المثال ، ذبابة الفاكهة الميلانوجاستر ، C. elegans) أو العينات النباتية. التطبيقات اللاحقة للموجات فوق الصوتية هي تحلل تعليق الخلايا والكريات وكذلك استخراج البروتينات داخل الخلايا.
التحلل بالموجات فوق الصوتية واستخراج البروتين هي عمليات موثوقة للغاية وقابلة للتكرار ، والتي يمكن إجراؤها على أساس البروتوكولات المعمول بها. نظرا لأنه يمكن ضبط شدة العملية بالموجات فوق الصوتية تماما عبر معلمات الصوتنة مثل السعة ووضع الدورة / النبض ودرجة الحرارة وحجم العينة ، بمجرد تكرار البروتوكولات التي أثبتت جدواها بنفس النتيجة مرارا وتكرارا.

مزايا إعداد عينة بالموجات فوق الصوتية

  • كفاءة عالية
  • قابل للتعديل لمواد عينة محددة
  • مناسبة لأي حجم
  • المعالجة غير الحرارية
  • نتائج قابلة للتكرار
  • بسيطة وآمنة

تجزئة الحمض النووي والحمض النووي الريبي بالموجات فوق الصوتية

بعد تحلل الخلايا واستخراج البروتين ، فإن الخطوة الشائعة المطلوبة في تحضير العينة هي قص وتفتيت الحمض النووي والحمض النووي الريبي والكروماتين ، على سبيل المثال قبل الترسيب المناعي للكروماتين (ChIP). يمكن تحقيق تجزئة الحمض النووي (DNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA) بشكل موثوق عن طريق كسر الروابط التساهمية التي تربط الحمض النووي (DNA) معا بواسطة القوى الفيزيائية. باستخدام القص الجسدي مثل الصوتنة ، في البداية يتم كسر خيوط الحمض النووي ، ثم يتم تجزئة الحمض النووي إلى قطع أصغر.
تجزئة الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية موثوقة وفعالة في قص الحمض النووي إلى طول مستهدف ، على سبيل المثال 500bp (أزواج القواعد). تشمل المزايا الرئيسية لتجزئة الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية التحكم الدقيق في معلمات العملية بالموجات فوق الصوتية وشدتها. يمكن تعديل معلمات العملية بالموجات فوق الصوتية عن طريق ضبط شدة الصوتنة والدورات والوقت بدقة. هذا يجعل من الممكن إنشاء أحجام الحمض النووي المطلوبة ويمكن إنتاج طول الحمض النووي المستهدف بشكل موثوق وكذلك إعادة إنتاجه. قص الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية مثالي أيضا لإنشاء شظايا الحمض النووي عالية الوزن الجزيئي.

بالموجات فوق الصوتية UP200Ht مع microtip S26d2 لتحلل بالموجات فوق الصوتية من عينات ذبابة الفاكهة

Ultrasonicator UP200Ht مع 2mm microtip S26d2 لصوتنة عينات ذبابة الفاكهة

طلب معلومات




لاحظ لدينا سياسة الخصوصية.


بروتوكولات التحلل بالموجات فوق الصوتية لذبابة الفاكهة الميلانية

أدناه يمكنك العثور على بروتوكولات مختلفة للتحلل بمساعدة الموجات فوق الصوتية ، واستخراج البروتين ، وتجزئة الحمض النووي أو الكروماتين لعينات ذبابة الفاكهة.

التحلل بالموجات فوق الصوتية لفحص الترسيب المناعي المتقاطع (CLIP)

تم إجراء اختبار CLIP كما تم الإبلاغ عنه سابقا مع بعض التعديلات. كان ما يقرب من 20 ملغ من المبايض من الإناث من النوع البري من 0 إلى 1 يوم واحد متشابكة للأشعة فوق البنفسجية (3 × 2000 μJ / cm2) ، متجانسة على الجليد في 1 مل RCB buffer (50 mM HEPES pH 7.4 ، 200 mM NaCl ، 2.5 mM MgCl2 ، 0.1٪ Triton X-100 ، 250 mM سكروز ، 1 mM DTT ، 1× مثبطات الأنزيم البروتيني الكاملة الخالية من EDTA ، 1 mM PMSF) مكملة ب 300 U RNAseOUT وتوضع على الثلج لمدة 30 دقيقة. وكان صوتنة متجانسة على الجليد، في 80٪ الطاقة، خمس مرات في رشقات نارية 20 ثانية مع بقية 60 ثانية بين استخدام معالج Hielscher بالموجات فوق الصوتية UP100H (100 واط، 30 كيلوهرتز) والطرد المركزي (16000 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية). تم مسح المستخلص القابل للذوبان مسبقا باستخدام 20 ميكرولتر من دينابيدات البروتين-G لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية. بعد إزالة العينات من أجل النشاف المناعي وكمية مدخلات الحمض النووي الريبي (1٪) ، تم ترسيب HP1 بجسم مضاد ل HP1 9A9 من مستخلص 450 ميكرولتر تم تطهيره مسبقا عن طريق الحضانة لمدة 4 ساعات مع 50 ميكرولتر من سلالات البروتين-G. تم غسل الرواسب المناعية 4 مرات باستخدام RCB. لإذابة الحمض النووي الريبي المترسب مناعيا ، تم غلي الخرزات المحببة في 100 ميكرولتر من المياه المعالجة ب DEFC فائقة النقاء لمدة 5 دقائق ، تمت إضافة 900 ميكرولتر من كاشف Qiazol إلى المادة الطافية المستعادة لإعداد الحمض النووي الريبي. تم استخدام الحمض النووي الريبي المنقى كقالب لتوليف cDNA باستخدام oligo dT ، والسداسيمرات العشوائية و SuperScript reverse transcriptase III وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.
(كاسالي وآخرون 2019)

تحلل بالموجات فوق الصوتية لمقايسة الترسيب المناعي للكروماتين

تم إجراء الترسيب المناعي للكروماتين وفقا للطريقة التي وصفها Menet مع تعديلات طفيفة. تم تجانس ما يقرب من 20 ملغ من المبايض من الإناث البرية من 0 إلى 1 يوم في 1 مل من المخزن المؤقت NEB (10 mM HEPES-Na عند الرقم الهيدروجيني 8.0 ، 10 mM NaCl ، 0.1 mM EGTA-Na عند الرقم الهيدروجيني 8 ، 0.5 mM EDTA-Na عند الرقم الهيدروجيني 8 ، 1 mM DTT ، 0.5٪ NP-40 ، 0.5 mM Spermidine ، 0.15 mM Spermine ، 1× مثبطات الأنزيم البروتيني الكاملة الخالية من EDTA) مع الخالط / مشتت الغمر 1 دقيقة (عند 3000 دورة في الدقيقة). تم نقل التجانس إلى ارتداد زجاجي مبرد مسبقا وتم تطبيق 15 ضربة كاملة بمدقة ضيقة. ثم تم طرد النوى الحرة عند 6000xg لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. تم إعادة تعليق الكريات المحتوية على النوى في 1 مل من NEB والطرد المركزي عند 20000 × جم لمدة 20 دقيقة على تدرج السكروز (0.65 مل من 1.6 M سكروز في NEB ، 0.35 مل من 0.8 M سكروز في NEB). تم إعادة تعليق الحبيبات في 1 مل من NEB والفورمالديهايد إلى تركيز نهائي قدره 1٪. تم ربط النوى لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة وتم إخمادها بإضافة 1/10 حجم من 1.375 M جليكاين. تم جمع النوى عن طريق الطرد المركزي عند 6000 × جم لمدة 5 دقائق. تم غسل النوى مرتين في 1 مل من NEB وإعادة تعليقها في 1 مل من محلول التحلل (15 مللي مول HEPES-Na عند درجة الحموضة 7.6 ، 140 مللي مول كلوريد الصوديوم ، 0.5 مللي مول EGTA ، 1 مللي متر EDTA عند درجة الحموضة 8 ، 1٪ Triton X-100 ، 0.5 mM DTT ، 0.1٪ Na Deoxycholate ، 0.1٪ SDS ، 0.5٪ N-lauroylsarcosine و 1× مثبطات الأنزيم البروتيني الكاملة الخالية من EDTA). تم صوتنة النوى باستخدام معالج Hielscher بالموجات فوق الصوتية UP100H (100 واط، 30 كيلوهرتز) ست مرات لمدة 20 ثانية و 1 دقيقة على الجليد. تم طرد النوى الصوتية بالطرد المركزي عند 13000 × جم لمدة 4 دقائق عند 4 درجات مئوية. كانت غالبية الكروماتين الصوتي من 500 إلى 1000 زوج قاعدة (bp) في الطول. لكل ترسيب مناعي ، تم تحضين 15 ميكروغرام من الكروماتين في وجود 10 ميكروغرام من الجسم المضاد أحادي النسيلة HP1 9A9 (3 ساعات عند 4 درجات مئوية في عجلة دوارة). ثم تمت إضافة 50 ميكرولتر من بروتين dynabeads G واستمرت الحضانة طوال الليل عند 4 درجات مئوية. تم التخلص من المواد الطافية وغسل العينات مرتين في Lysis Buffer (كل غسلة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية) ومرتين في TE Buffer (1 mM EDTA ، 10 mM TrisHCl عند درجة الحموضة 8). تم استخلاص الكروماتين من الخرز في خطوتين. الأول في 100 ميكرولتر من Eluition Buffer 1 (10 mM EDTA ، 1٪ SDS ، 50 mM TrisHCl عند درجة الحموضة 8) عند 65 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، يليه الطرد المركزي واستعادة المادة الطافية. تم إعادة استخراج مادة الخرز في 100 ميكرولتر من TE + 0.67٪ SDS. تم تحضين الشطف المشترك (200 ميكرولتر) طوال الليل عند 65 درجة مئوية لعكس الروابط المتقاطعة ومعالجتها بواسطة 50 ميكروغرام / مل RNaseA لمدة 15 دقيقة عند 65 درجة مئوية وبواسطة 500 ميكروغرام / مل Proteinase K لمدة 3 ساعات عند 65 درجة مئوية. كانت العينات عبارة عن فينول-كلوروفورم مستخلصة وإيثانول مترسب. تم إعادة تعليق الحمض النووي في 25 ميكرولتر من الماء. لتعظيم التحليلات الجزيئية مع الحمض النووي المناعي ، تم تضخيم الجينات المرشحة في أزواج من خلال بروتوكول تفاعل البوليميراز المتسلسل المزدوج الأمثل باستخدام مجموعتين مختلفتين من البادئات التي لها درجات حرارة انصهار مماثلة في تفاعل واحد.
(كاسال وآخرون 2019)
 

يشرح هذا البرنامج التعليمي نوع الصوتنة الأفضل لمهام تحضير العينات مثل التحلل وتعطيل الخلايا وعزل البروتين وتجزئة الحمض النووي والحمض النووي الريبي في المختبرات والتحليل والبحث. اختر نوع الصوتنة المثالي لتطبيقك وحجم العينة ورقم العينة والإنتاجية. Hielscher الفوق صوتيات لديه الخالط بالموجات فوق الصوتية المثالي بالنسبة لك!

كيفية العثور على Sonicator المثالي لتعطيل الخلايا واستخراج البروتين في العلوم والتحليل

صورة مصغرة للفيديو

UP200St TD_CupHorn لصوتنة غير مباشرة من العينات

UP200St TD_CupHorn للصوتنة غير المباشرة للعينات مثل قص الحمض النووي والكروماتين

عالية الأداء اضطرابات الخلايا بالموجات فوق الصوتية للعينات البيولوجية

Hielscher Ultrasonics هو شريكك من ذوي الخبرة الطويلة عندما يتعلق الأمر بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء لتعطيل الخلايا، والتحلل، واستخراج البروتين، الحمض النووي، الحمض النووي الريبي، وتجزئة الكروماتين، فضلا عن غيرها من خطوات إعداد عينة ما قبل التحليل. تقدم مجموعة شاملة من المجانسات مختبر بالموجات فوق الصوتية ووحدات إعداد العينات، Hielscher لديه جهاز الموجات فوق الصوتية المثالي للتطبيق البيولوجي الخاص بك والمتطلبات.
Probe-type insonifier UP200St for lysisالموجات فوق الصوتية الكلاسيكية من نوع المسبار مع طرف صغير مثل UP200St (200 واط ؛ انظر الصورة اليسرى) أو إحدى وحدات تحضير العينات بالموجات فوق الصوتية VialTweeter or UP200St_TD_CupHorn مع VialHolder هي النماذج المفضلة في المختبرات البحثية والتحليلية. يعتبر المسبار الكلاسيكي بالموجات فوق الصوتية مثاليا ، عند إعداد عينات أقل يجب تحليلها أو استخراجها أو تجزئتها. تسمح وحدات تحضير العينات VialTweeter و UP200St_TD_CupHorn بصوتنة متزامنة تصل إلى 10 أو 5 قوارير ، على التوالي.
إذا كان يجب معالجة أعداد العينات العالية (مثل ألواح 96 بئرا ، وألواح المعايرة الدقيقة وما إلى ذلك) ، فإن UIP400MTP هو الإعداد الصوتنة المثالي. يعمل UIP400MTP مثل قرن أكبر مملوء بالماء ولديه مساحة كافية لحمل ألواح الآبار الصغيرة. مدعوما بمعالج بالموجات فوق الصوتية قوي 400 واط ، يوفر UIP400MTP صوتنة موحدة ومكثفة للغاية للوحات متعددة الآبار من أجل تعطيل الخلايا أو عينات التحلل أو إذابة الكريات أو استخراج البروتينات أو قص الحمض النووي.

تحكم دقيق عبر البرامج الذكية

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.وقد تم تجهيز جميع حلول صوتنة Hielscher من 200 واط فصاعدا مع شاشة رقمية ملونة تعمل باللمس وبرنامج ذكي. عبر بروتوكول البيانات الذكية ، يتم حفظ جميع معلمات العملية بالموجات فوق الصوتية تلقائيا كملف CSV على بطاقة SD مدمجة بمجرد بدء تشغيل الموجات فوق الصوتية. هذا يجعل البحث والبروتوكول أكثر ملاءمة. بعد تجارب الصوتنة أو إعداد العينة ، يمكنك ببساطة مراجعة معلمات الصوتنة لكل تشغيل صوتنة ومقارنتها.
عبر القائمة البديهية ، يمكن ضبط العديد من المعلمات مسبقا قبل الصوتنة: على سبيل المثال ، للتحكم في درجة الحرارة في العينة ومنع تدهورها الحراري ، يمكن تعيين حد أعلى لدرجة حرارة العينة. جهاز استشعار درجة الحرارة القابلة للتوصيل ، والذي يأتي مع وحدة الموجات فوق الصوتية ، يعطي ملاحظات المعالج بالموجات فوق الصوتية على درجة حرارة الصوتنة الفعلية. عند الوصول إلى الحد الأقصى لدرجة الحرارة ، يتوقف جهاز الموجات فوق الصوتية مؤقتا حتى يتم الوصول إلى الحد الأدنى للمجموعة ∆T ويبدأ ثم صوتنة تلقائيا مرة أخرى.
إذا كانت هناك حاجة إلى صوتنة مع إدخال طاقة محددة ، فيمكنك ضبط الطاقة فوق الصوتية النهائية لتشغيل الصوتنة مسبقا. بالطبع ، يمكن ضبط النبض بالموجات فوق الصوتية ووضع الدورة بشكل فردي أيضا.
لإعادة استخدام معلمات الصوتنة الأكثر نجاحا ، يمكنك حفظ أوضاع صوتنة مختلفة (مثل وقت الصوتنة ، والشدة ، ووضع الدورة ، وما إلى ذلك) كأوضاع محددة مسبقا ، بحيث يمكن أن تكون سهلة وسريعة البدء مرة أخرى.
لمزيد من الراحة التشغيلية ، يمكن تشغيل جميع وحدات الموجات فوق الصوتية الرقمية عبر جهاز التحكم عن بعد في المتصفح في أي متصفح مشترك (على سبيل المثال ، Internet Explorer و Safari و Chrome وما إلى ذلك). اتصال LAN هو إعداد بسيط للتوصيل والتشغيل ولا يتطلب تثبيت برامج إضافية.
ونحن في Hielscher نعرف أن صوتنة ناجحة من العينات البيولوجية يتطلب الدقة والتكرار. لذلك ، قمنا بتصميم الموجات فوق الصوتية لدينا كأجهزة ذكية مع جميع الميزات التي تتيح إعداد عينة فعالة وموثوقة وقابلة للتكرار ومريحة.

اتصل بنا الآن وأخبرنا عن عيناتك البيولوجية وخطوات التحضير المطلوبة. سنقترح عليك أنسب جهاز لإعداد العينات بالموجات فوق الصوتية ونساعدك بمعلومات إضافية مثل البروتوكولات والتوصيات.

يمنحك الجدول أدناه مؤشرا على قدرة المعالجة التقريبية لأنظمتنا بالموجات فوق الصوتية من النصائح الدقيقة بالموجات فوق الصوتية والمجانسات بالموجات فوق الصوتية الكلاسيكية إلى الموجات فوق الصوتية MultiSample لإعداد مريح وموثوق للعديد من العينات:

حجم الدفعةمعدل التدفقالأجهزة الموصى بها
96-well / microtiter platesن.أ.UIP400MTP
10 قوارير à 0.5 إلى 1.5 ملن.أ.VialTweeter في UP200St
CupHorn للصوتنة غير المباشرة ، على سبيل المثال ما يصل إلى 5 قواريرن.أ.UP200St_TD_CupHorn
0.01 إلى 250 مل5 إلى 100 مل / دقيقةUP50H
0.01 إلى 500 مل10 إلى 200 مل / دقيقةUP100H
0.02 إلى 1 لتر20 إلى 400 مل / دقيقةUP200Ht / UP200St
10 إلى 2000 مل20 إلى 400 مل / دقيقةUP200Ht, UP400ST
0.25 إلى 5 لتر0.05 إلى 1 لتر / دقيقةUIP500hdt

اتصل بنا! / اسألنا!

اطلب المزيد من المعلومات

يرجى استخدام النموذج أدناه لطلب معلومات إضافية حول المعالجات بالموجات فوق الصوتية والتطبيقات والسعر. سنكون سعداء لمناقشة العملية الخاصة بك معك وأن نقدم لك نظام الموجات فوق الصوتية تلبية الاحتياجات الخاصة بك!









يرجى ملاحظة سياسة الخصوصية.


VialTweeter هو جهاز Ultraonicator متعدد العينات يسمح بإعداد عينة موثوق به في ظل ظروف درجة حرارة يتم التحكم فيها بدقة.

وحدة تحضير العينات المتعددة بالموجات فوق الصوتية VialTweeter يسمح لصوتنة في وقت واحد من ما يصل إلى 10 قارورة. مع جهاز التثبيت VialPress ، يمكن ضغط ما يصل إلى 4 أنابيب إضافية إلى الأمام للحصول على صوتنة مكثفة.



حقائق تستحق المعرفة

الأيض

الأيض هو دراسة الجزيئات الصغيرة ، والمعروفة باسم الأيضات ، الموجودة داخل الخلايا أو السوائل الحيوية أو الأنسجة أو الكائنات الحية. يتم تلخيص هذه الجزيئات الصغيرة وتفاعلاتها داخل النظام البيولوجي تحت مصطلح مظلة "الأيض" ويسمى مجال البحث الأيض. ترتبط أبحاث الأيض ارتباطا وثيقا بمجال الطب الدقيق الناشئ بسرعة. يساعد فهم الأيض وعلاقته بالأمراض المختلفة على تطوير استراتيجيات الوقاية من الأمراض والرعاية السريرية مع التباين الفردي في البيئة ونمط الحياة وعلم الوراثة والنمط الظاهري الجزيئي. من أجل إطلاق جزيئات الأيض من الخلايا ، وكثيرا ما يستخدم الموجات فوق الصوتية في المختبرات البيولوجية لإعداد عينة ما قبل التحليل مثل تعطيل الخلايا ، تحلل واستخراج البروتينات والدهون والجزيئات الأخرى.


الأدب / المراجع


Hielscher Ultrasonics توفر المجانسات بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء من المختبر إلى الحجم الصناعي.

الموجات فوق الصوتية عالية الأداء! تغطي مجموعة منتجات Hielscher الطيف الكامل من الموجات فوق الصوتية للمختبر المدمجة على وحدات مقاعد البدلاء إلى أنظمة الموجات فوق الصوتية الصناعية الكاملة.

سنكون سعداء لمناقشة العملية الخاصة بك.

Let's get in contact.