بروتوكول تعطيل فيروس كورونا SARS-CoV-2 مع Sonication

Hielscher VialTweeter هي وحدة تحضير عينات متعددة الموجات فوق الصوتية فريدة من نوعها ، والتي تستخدم لتعطيل فيروس كورونا SARS-COV-2. يسمح VialTweeter بإعداد ما يصل إلى 10 قوارير عينة في وقت واحد ، وبالتالي فهو الوحدة المثالية لمعالجة العينات الجماعية.

تعطيل فيروس كورونا SARS-CoV-2 باستخدام VialTweeter

بعد إزالة المثبت ، تم غسل أحادي الطبقات ثلاث مرات بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) قبل كشط الخلايا إلى 1 مل MEM / 5٪ FBS وصوتنة (3 × 10 ثوان ، 10 ثوان عند 100٪ طاقة وسعة) باستخدام معالج Hielscher بالموجات فوق الصوتية UP200St مع فيال تويتر مرفق. تم توضيح المواد الطافية عن طريق الطرد المركزي عند 3000 × جم لمدة 10 دقائق. 

اقرأ البروتوكول الكامل هنا لتعطيل فيروس كورونا SARS-CoV-2 بواسطة Welch et al. (2020) أدناه:

الخلايا والفيروسات

خلايا Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) في الحد الأدنى من الوسط الأساسي المعدل للنسر (MEM) المكمل ب 10٪ (v / v) مصل عجل الجنين (FCS). كان الفيروس المستخدم هو سلالة SARS-CoV-2 hCOV-19 / إنجلترا / 2/2020 ، والتي تم عزلها بواسطة PHE من أول مجموعة مرضى في المملكة المتحدة في 29/01/2020. تم الحصول على هذا الفيروس في الممر 1 واستخدم لدراسات التعطيل في الممر 2 أو 3.
بالنسبة للكواشف والمواد الكيميائية المستخدمة في تعطيل SARS-CoV-2 وكذلك إزالة السمية الخلوية للكواشف ، يرجى الاطلاع على التقرير العلمي ل Welch et al. (2020).

تعطيل الفيروس بواسطة المنظفات – بروتوكول تعطيل فيروس كورونا SARS-CoV-2 بواسطة Welch et al. 2020

تعطيل SARS-CoV-2

بالنسبة للمنتجات التجارية ، مستحضرات الفيروسات (سائل زراعة الأنسجة ، عيار يتراوح من 1 × 10⁶ إلى 1 × 10⁸ PFU / ml) في ثلاث نسخ مع الكواشف بتركيزات ولأوقات الاتصال الموصى بها في تعليمات المصنعين للاستخدام ، حيثما كان ذلك متاحا ، أو للتركيزات والأوقات التي تطلبها مختبرات الاختبار على وجه التحديد. عندما تم إعطاء مجموعة من التركيزات من قبل الشركة المصنعة ، تم اختبار أقل نسبة من المنتج إلى العينة (أي أقل تركيز موصى به لمنتج الاختبار). تم اختبار كواشف أنبوب نقل العينات باستخدام نسبة حجم واحد من سائل زراعة الأنسجة إلى عشرة مجلدات من الكاشف ، ما لم يتم تحديد نسبة حجم سائل العينة إلى الكاشف من قبل الشركة المصنعة. تم اختبار المنظفات والمثبتات والمذيبات بالتركيزات المشار إليها للأوقات المحددة. تم تنفيذ جميع خطوات التعطيل في درجة حرارة الغرفة المحيطة (18-25 درجة مئوية). لاختبار أنواع العينات البديلة ، تم رفع الفيروس في مصفوفة العينة المشار إليها بنسبة 1: 9 ، ثم عولج بكواشف الاختبار على النحو الوارد أعلاه. تضمنت جميع التجارب عينات معالجة وهمية ثلاثية التحكم بحجم مكافئ من PBS بدلا من كاشف الاختبار. مباشرة بعد وقت الاتصال المطلوب ، تمت معالجة 1 مل من العينة المعالجة باستخدام مصفوفة الترشيح المختارة بشكل مناسب. تم إجراء إزالة الكاشف لاختبار التعطيل بتنسيق عمود دوران أكبر باستخدام أعمدة الدوران لإزالة المنظفات Pierce 4mL (Thermo Fisher) ، أو عن طريق ملء أعمدة الطرد المركزي الفارغة بسعة 10 مل من Pierce (Thermo Fisher) مع SM2 Bio-Beads أو Sephacryl S-400HR أو Sephadex LH-20 لإعطاء 4 مل من الخرز / الراتنج المعبأ. للتنقية باستخدام مرشحات Amicon ، تم تنقية عينات 2 × 500μl باستخدام مرشحين للطرد المركزي بالطريقة الموصوفة سابقا ، ثم تم تجميعها معا. بالنسبة للفورمالديهايد والفورمالديهايد مع إزالة الجلوتارالدهيد ، تم استخدام مرشح واحد بحجم عينة 1× 500 ميكرولتر ، وأعيد تعليقه بعد المعالجة في 500 ميكرولتر PBS ، وتمت إضافته إلى 400ul MEM / 5٪ FBS. لتعطيل المصابين أحادي الطبقة، 12.5 سم² قوارير خلايا Vero E6 (2.5 × 10⁶ الخلايا / القارورة في 2.5 مل MEM / 5٪ FBS) أصيبت عند MOI 0.001 وحضنت عند 37 درجة مئوية / 5٪ CO₂ لمدة 24 ساعة. تمت إزالة الطافات ، وتم تثبيت الخلايا باستخدام 5 مل من الفورمالديهايد ، أو الفورمالديهايد والجلوتارالدهيد في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 أو 60 دقيقة. تمت إزالة المثبت ، وغسلت أحاديات الطبقات ثلاث مرات باستخدام PBS قبل كشط الخلايا إلى 1 مل MEM / 5٪ FBS وصوتنة (3 × 10 ثوان ، 10 ثوان عند 100٪ طاقة وسعة) باستخدام UP200St مع مرفق VialTweeter (تقنية الموجات فوق الصوتية Hielscher). تم توضيح المواد الطافية عن طريق الطرد المركزي عند 3000 × جم لمدة 10 دقائق.

تفاصيل الكاشف المستخدم لتعطيل فيروس كورونا SARS-CoV-2 باستخدام VialTweeter بالموجات فوق الصوتية وفقا لبروتوكول Welch et al. 2020

يمكن العثور على البروتوكول الكامل بما في ذلك استخدام Hielscher VialTweeter هنا:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

أجهزة إزالة الموجات فوق الصوتية المتطورة واضطرابات الخلايا

الموجات فوق الصوتية متعددة العينات VialTweeter هو مجرد واحد من العديد من الحلول بالموجات فوق الصوتية لإعداد العينات في المختبرات البيولوجية والكيميائية الحيوية والسريرية. Hielscher Ultrasonics يقدم dismembrator بالموجات فوق الصوتية المثالي للتطبيق الخاص بك، على سبيل المثال تحلل الخلايا، استخراج الخلايا، تجانس الأنسجة، الذوبان المحللة، إذابة، عينة التفريغ الخ.
أخبرنا بعدد العينات التي يجب عليك معالجتها في الساعة واليوم ، إذا كنت تفضل صوتنة مباشرة أو غير مباشرة وما هو الهدف من علاج العينة بالموجات فوق الصوتية. سوف نوصيك بأنسب وحدة بالموجات فوق الصوتية لروتين عملك اليومي!
وقد تم تجهيز Hielscher الفوق صوتيات 'المعالجات الرقمية بالموجات فوق الصوتية مع البرامج الذكية، وتسجيل البيانات التلقائي، وخيارات الإعداد المسبق سهلة للتحكم في درجة الحرارة، ومدة صوتنة، دورة / نبض الوضع، فضلا عن الإضاءة عينة والتحكم عن بعد المتصفح. نحن نسعى جاهدين لجعل أجهزتنا بالموجات فوق الصوتية ذكية قدر الإمكان حتى يصبح روتين البحث والعمل الخاص بك مريحا وناجحا قدر الإمكان.
انقر هنا ، للعثور على المزيد من التطبيقات بما في ذلك بروتوكولات إعداد العينات بالموجات فوق الصوتية باستخدام VialTweeter!