Hielscher تكنولوجيا الموجات فوق الصوتية

بروتوكول لSs sars-CoV-2 كورونا فيروس التنشيط مع سونيكيشن

وHielscher VialTweeter هي فريدة من نوعها بالموجات فوق الصوتية متعددة العينات وحدة إعداد، والذي يستخدم في تعطيل فيروس كورونا سارس-COV-2. فيالتويتر تسمح لإعداد ما يصل إلى 10 قنينات عينة في وقت واحد، وبالتالي هو وحدة مثالية لمعالجة العينة الشامل.

تعطيل فيروس كورونا SARS-CoV-2 مع VialTweeter

بعد إزالة المثبت، تم غسلها monolayers ثلاث مرات مع المالحة الفوسفات المخزنة مؤقتا (PBS) قبل كشط الخلايا في 1mL MEM/5٪ FBS و sonicated (3 × 10 ثانية على، 10 ثانية قبالة في 100٪ السلطة والسعة) باستخدام معالج الموجات فوق الصوتية Hielscher UP200St مع VialTweeter المرفق. تم توضيح اغراءات عن طريق الطرد المركزي في 3000 × غرام لمدة 10 دقائق. 

اقرأ البروتوكول الكامل هنا لتنشيط فيروس كورونا سارس-CoV-2 من قبل ويلش وآخرون (2020) أدناه:

الخلايا والفيروسات

خلايا فيرو E6 (فيرو C1008; ATCC CRL-1586) كانت تربية في تعديل المتوسط الأساسية النسر (MEM) تكملت مع 10٪ (الخامس / الخامس) مصل عجل الجنين (FCS). وكان الفيروس المستخدم هو سلالة SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020، التي عزلتها PHE عن أول مجموعة للمرضى في المملكة المتحدة في 29/01/2020. تم الحصول على هذا الفيروس في مرور 1 واستخدامها لدراسات إلغاء التنشيط في مرور 2 أو 3.
بالنسبة للكواشف والمواد الكيميائية المستخدمة في تعطيل السارس -CoV-2 وكذلك إزالة السمية الخلوية الكاشفة، يرجى الاطلاع على التقرير العلمي لويلش وآخرون (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

تعطيل الفيروسات بواسطة المنظفات – بروتوكول تنشيط فيروس كورونا SARS-CoV-2 من قبل ويلش وآخرون 2020

تنشيط SARS-CoV-2

للمنتجات التجارية، والمستحضرات الفيروسات (الأنسجة السائل ثقافة، titers تتراوح بين 1 × 106 إلى 1 × 108 تم علاج PFU/ml) في ثلاث مرات مع الكواشف بتركيزات و لأوقات الاتصال الموصى بها في تعليمات المصنعين للاستخدام، حيثما كان ذلك متاحا، أو التركيزات والأوقات التي طلبتها مختبرات الاختبار تحديدا. وحيثما أعطى الصانع مجموعة من التركيزات، تم اختبار أدنى نسبة من المنتج إلى العينة (أي أقل تركيز يوصى به لمنتج الاختبار). وقد تم اختبار الكواشف الأنبوبية لنقل العينات باستخدام نسبة حجم واحد من سائل زراعة الأنسجة إلى عشرة كميات من الكاشف، ما لم تحدد الشركة المصنعة نسبة حجم سائل العينة إلى الكاشف. وقد تم اختبار المنظفات والمثبتات والمذيبات في التركيزات المشار إليها في الأوقات المشار إليها. تم تنفيذ جميع خطوات التعطيل في درجة حرارة الغرفة المحيطة (18 - 25 درجة مئوية). لاختبار أنواع العينات البديلة، تم ارتفاع الفيروس في مصفوفة العينة المشار إليها بنسبة 1:9، ثم تعامل مع الكواشف الاختبارية على النحو الوارد أعلاه. وشملت جميع التجارب ثلاثية النماذج التحكم وهمية العينات مع حجم معادل من برنامج تلفزيوني بدلا من كاشف الاختبار. مباشرة بعد وقت الاتصال المطلوبة، تمت معالجة 1 مل من العينة المعالجة باستخدام مصفوفة الترشيح المختارة بشكل مناسب. تم إجراء إزالة الكاشف لاختبار التعطيل في شكل عمود دوران أكبر باستخدام بيرس 4mL إزالة المنظفات أعمدة سبين (ثيرمو فيشر)، أو عن طريق ملء فارغة بيرس 10mL قدرة الأعمدة الطرد المركزي (ثيرمو فيشر) مع SM2 الخرز الحيوي، Sephacryl S-400HR أو Sephadex LH-20 لإعطاء 4mL معبأة الخرز / الراتنج. لتنقية باستخدام مرشحات أميكون، 2 × 500μl العينات تم تنقيتها باستخدام اثنين من المرشحات الطرد المركزي من الطريقة الموصوفة سابقا، ثم تجميعها معا. للفورمالديهايد والفورمالديهايد مع إزالة الجلوتارالديهيد، تم استخدام مرشح واحد مع 1× حجم العينة 500μl، resuspended بعد المعالجة في PBS 500μl، وأضاف إلى 400ul MEM/5٪ FBS. من أجل تعطيل الإصابة VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STأحادية الطبقات، 12.5 سم2 قارورة خلايا Vero E6 (2.5 × 106 كانت الخلايا / القارورة في 2.5mL MEM / 5 ٪ FBS) المصابة في وزارة الداخلية 0.001 وتحتضن في 37 درجة مئوية / 5 ٪ CO2 لمدة 24 ساعة. تمت إزالة سوبرناتانت، والخلايا الثابتة باستخدام 5mL من الفورمالديهايد، أو الفورمالديهايد والغلوتارالدهيد في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 أو 60 دقيقة. تمت إزالة المثبت ، وغسلت monolayers ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني قبل كشط الخلايا في 1ml MEM / 5 ٪ FBS و sonicated (3 × 10 ثانية ، 10 ثانية في 100 ٪ من السلطة والسعة) باستخدام UP200St مع مرفق VialTweeter (Hielscher تكنولوجيا الموجات فوق الصوتية). تم توضيح اغراءات عن طريق الطرد المركزي في 3000 × غرام لمدة 10 دقائق.

فيالتويتر لسونيكيشن مكثفة من قوارير مغلقة

VialTweeter ل Sonication مكثفة من قارورة مغلقة

طلب معلومات





Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

تفاصيل الكاشف المستخدم في تعطيل فيروس كورونا SARS-CoV-2 مع فيالتويتر بالموجات فوق الصوتية وفقًا للبروتوكول الذي قدمه ويلش وآخرون 2020

يمكن العثور على البروتوكول الكامل بما في ذلك استخدام Hielscher VialTweeter هنا:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter عن فيروس الموجات فوق الصوتية تعطيل

مزايا VialTweeter في لمحة

  • سونيكيشن تصل إلى 10 قنينات في وقت واحد
  • لا تلوث عبري
  • لا توجد عينة من الخسائر
  • تسجيل تلقائي للبيانات
  • سهلة وآمنة للعمل
ويستخدم أيضا فيالتويتر ل

  • خلية اللايس
  • اضطراب الجسيمات الفيروسية
  • استخراج الحمض النووي: الحمض النووي/ الحمض النووي الريبي العزل
  • تجزئة الحمض النووي/الحمض النووي الريبي
  • Lysate solubilization
  • متطورة بالموجات فوق الصوتية Dismembrators وخلية Disruptors

    متعدد العينات فيلTweeter أولتر هو مجرد واحد من العديد من الحلول بالموجات فوق الصوتية لإعداد العينة في المختبرات البيولوجية والبيوكيميائية والسريرية. Hielscher الفوق صوتيات يقدم dismembrator المثالي بالموجات فوق الصوتية للتطبيق الخاص بك، على سبيل المثال تحلل الخلايا، واستخراج الخلايا، تجانس الأنسجة، lysate solubilization، حل، عينة degassing الخ.
    إعلامنا كم عدد العينات لديك لمعالجة في الساعة واليوم، إذا كنت تفضل sonication المباشر أو غير المباشر وما هو الهدف من العلاج عينة بالموجات فوق الصوتية. سوف نوصي لك وحدة الموجات فوق الصوتية الأكثر ملاءمة لروتين العمل اليومي الخاص بك!
    Hielscher الفوق صوتيات 'معالجات الموجات فوق الصوتية الرقمية مجهزة البرمجيات الذكية، وتسجيل البيانات التلقائي، خيارات سهلة قبل الإعداد للتحكم في درجة الحرارة، ومدة sonication، دورة / نبض الوضع، فضلا عن الإضاءة عينة والتحكم عن بعد المتصفح. ونحن نسعى جاهدين لجعل أجهزة الموجات فوق الصوتية لدينا ذكية قدر الإمكان بحيث يصبح البحث الخاص بك وروتين العمل مريحة وناجحة قدر الإمكان.
    انقر هنا، للعثور على مزيد من التطبيقات بما في ذلك بروتوكولات إعداد عينة بالموجات فوق الصوتية مع VialTweeter!

    اتصل بنا! / اسألنا!

    اطلب المزيد من المعلومات

    يرجى استخدام النموذج أدناه لطلب معلومات إضافية حول المعالجات بالموجات فوق الصوتية والتطبيقات والسعر. سنكون سعداء لمناقشة العملية الخاصة بك معك ونقدم لكم نظام الموجات فوق الصوتية تلبية الاحتياجات الخاصة بك!









    يرجى ملاحظة لدينا سياسة الخصوصية.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع عالية الأداء المجانسة بالموجات فوق الصوتية لخلط التطبيقات، تشتت، استحلاب واستخراج على المختبر، والطيارية ومقياس الصناعية.

    الأدب / المراجع



    حقائق تستحق العلم

    ما هي خلايا فيرو؟

    فيرو E6، المعروف أيضا باسم فيرو C1008 (ATCC رقم CRL-1586) هو خط الخلية المستنسخة من فيرو 76 ويستخدم في أبحاث السارس-سف وSss-CoV-2 كورونافيروسات. خلايا فيرو هي سلالة من الخلايا المستخدمة في الثقافات الخلية. فيرو’ تم عزل النسب من الخلايا الظهارية الكلى المستخرجة من أخضر أفريقي (Chlorocebus sp.).
    تظهر خلايا Vero E6 بعض التثبيط المتلامس ، لذلك فهي مناسبة لنشر الفيروسات التي تتكاثر ببطء. وتستخدم عادة خطوط الخلايا فيرو E6 للتحقيق في علم الخلايا الخلوية من فيروس كورونا سارس-سف وSs sars-CoV-2 كما خلايا فيرو (خلايا الكلى القرد الأخضر الأفريقية) تظهر تعبيرا وفيرا من الانزيم تحويل angiotensin 2 (ACE2) مستقبلات. مستقبلات ACE2 هي موقع الرسو الرئيسية لل SARS-CoV-2 كورونافيروس.
    فعلى سبيل المثال، وجد أوغاندو وآخرون (2020) أن SARS-CoV-2 – بالمقارنة مع السارس-COV – ولدت مستويات أعلى من الحمض النووي الريبي الفيروسي داخل الخلايا، ولكن بشكل لافت للنظر حوالي 50 أضعاف أقل ذرية الفيروسية المعدية تم استردادها من وسط الثقافة. وعلاوة على ذلك، قرروا أن حساسية الفيروسين إلى ثلاثة مثبطات ثابتة لتكرار الفيروس التاجي (Remdesivir، السبوريفير والكلوروكوين) مشابهة جدا، ولكن عدوى السارس-CoV-2 كانت أكثر حساسية بكثير للعلاج المسبق للخلايا مع الإنترفيرون ألفا. الفرق المهم بين الفيروسين هو حقيقة أن – عند تمرير في خلايا E6 فيرو – يبدو أن سارس-CoV-2 يتعرض لضغوط اختيار قوية للحصول على طفرات متكيفة في جينه البروتيني المرتفع. هذه الطفرات تغيير أو حذف المفترضة 'موقع الانقسام مثل الفراء' في المنطقة التي تربط بين المجالات S1 و S2 ويؤدي إلى تغيير ظاهري بارز جدا في مقايسات البلاك.