بالموجات فوق الصوتية استخراج البروتين من الأنسجة والخلايا الثقافات

  • استخراج البروتين هو خطوة تحضير العينة الأساسية في البروتينات.
  • البروتينات يمكن استخلاصها من الأنسجة النباتية والحيوانية، الخميرة والكائنات الدقيقة.
  • صوتنة هو موثوقة وفعالة طريقة استخراج البروتين يعطي عوائد عالية من البروتين في غضون فترة زمنية قصيرة استخراج.

استخراج البروتين من الأنسجة والخلايا

يعد استخراج البروتين من الأنسجة والخلايا المستزرعة خطوة أساسية لإعداد العينات يتم إجراؤها خلال العديد من التقنيات البيوكيميائية والتحليلية مثل ELISA أو PAGE أو النشاف الغربي أو قياس الطيف الكتلي أو تنقية البروتين. تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتية ، تحلل واستخراج هي تقنية غير حرارية يمكن التحكم فيها بدقة لضمان غلة عالية من البروتينات.

طلب معلومات





الموجات فوق الصوتية من نوع المسبار مثل UP200St هي مجانسات الأنسجة الموثوقة وتستخدم على نطاق واسع لإعداد العينات في البحوث الجينية والبروتينية.

استخراج البروتين من الخلايا مع مسبار بالموجات فوق الصوتية UP200St

مزايا التحلل بالموجات فوق الصوتية واستخراج البروتين
 

  • سريعون
  • عائدات مرتفعه
  • كفاءة عالية
  • مراقبة دقيقة على المعلمات
  • نتائج يمكن استنساخه
  • قابلية الخطية

تعليمات عامة للتحلل بالموجات فوق الصوتية واستخراج البروتين

  • التحكم في درجة الحرارة: لضمان العائد نسبة عالية من البروتين دون تمسخ الحرارية، ودرجة الحرارة أثناء استخراج يجب السيطرة عليها. HIELSCHER للدولة من بين الفن المجانسة بالموجات فوق الصوتية – وتسمى أيضا تفكك الموجات فوق الصوتية أو الموجات فوق الصوتية – يمكن التحكم بدقة. أنها تأتي مع جهاز استشعار درجة الحرارة plugable. في خيارات وضع الخالط بالموجات فوق الصوتية، كحد أقصى يمكن ضبط درجة الحرارة. عندما يتم التوصل إلى هذا الحد درجة الحرارة، وتوقف ultrasonicator تلقائيا حتى تبرد العينة إلى أسفل.
  • متعادل: كويس منطقة عازلة مناسبة وحجم الصحيح من المخزن يختلف من الأنسجة إلى الأنسجة ويجب أن يكون، برزت من خلال اختبار التجربة والخطأ.
  • العزلة / تنقية: لست] البروتين يمكن أن تحتوي على وجود فائض من الجزيئات الحيوية مثل DNA أو الكربوهيدرات، والتي يمكن إزالتها عن طريق البروتين هطول الأمطار (حمض الخليك ثلاثي الكلور deoxycholate) أو المخزن المؤقت الصرف.

أفاد Chittapalo and Noomhorm (2009) في دراستهم أن إنتاج البروتين زاد باستخدام الصوتنة وأن عملية تجانس الأنسجة بالموجات فوق الصوتية وتحليلها يمكن أن تعزز عمليات الاستخراج الحالية بشكل كبير – مؤاتية لفرص استخراج تجارية جديدة.
 

CupHorn بالموجات فوق الصوتية لإعداد عينة متزامنة لعينات متعددة في ظل نفس الظروف لعزل البروتين وتجزئة الحمض النووي.

cuphorn بالموجات فوق الصوتية لإعداد العينات المتزامن والفعال للغاية لعينات متعددة في ظل نفس الظروف لعزل البروتين وتجزئة الحمض النووي.

استخراج البروتين من الأنسجة الحيوانية

Ultrasonicator UP100H هو مجانس مختبري يستخدم غالبا لإعداد عينات من ألواح زراعة الخلايا.لإعداد الأنسجة كاملة الحجم (مثل الكلى والقلب والرئة والعضلات ، إلخ) ، يجب تشريح الأنسجة إلى قطع صغيرة جدًا بأدوات نظيفة ، على الجليد بشكل مفضل ، وبأسرع وقت ممكن لمنع تدهور البروتياز (على سبيل المثال تحلل العازلة مثل RIPA أو تحلل المخزن المؤقت تحلل التي تحتوي على البروتيني ومثبط انزيم الفوسفاتيز. بعد تشريح ، يتم غمر العينة في النيتروجين السائل لتجميد المفاجئة. يمكن تخزين العينة في درجة حرارة -80 درجة مئوية للاستخدام في وقت لاحق أو أن يكون على الجليد على التجانس الفوري. مباشرة قبل الاستخراج بالموجات فوق الصوتية ، يتم تحفيز عازلة الجليد الباردة (مع مثبطات الأنزيم البروتيني DTT ، leupeptin و aprotinin) بسرعة في أنبوب عينة (~ 10 ملغ من الأنسجة تقريبا. يوصى ~ 600 ميكرولتر من المخزن المؤقت). تقريبا. ينصح 20-60mg من الأنسجة في أنبوب عينة.
يتم إجراء التجانس بالموجات فوق الصوتية والتحلل والاستخراج باستخدام خالط بالموجات فوق الصوتية مثل UP100H أو UP200Ht ، المجهز بسونوترود ذو طرف صغير. مدة Sonication هي 60-90 ثانية في وضع دورة الموجات فوق الصوتية من 15 ثانية صوتنة و 10 ثوان وقت الراحة. يجب حفظ العينة في الثلج طوال الوقت.
بعد بالموجات فوق الصوتية التجانس / الاستخراج، ويتم طرد المحللة في 27،000g تقريبا. 20 دقيقة. بعد ذلك يتم جمع supernatent، بحيث تركيز البروتين يمكن تحديده من خلال فحص البروتين مثل بيرس البروتين مقايسة BCA.

استخراج البروتين من مصل الدم

للحصول على خليط متجانس من المصل ومخزن الفوسفات ، يتم تحريك العينة أولا قبل تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية. بالنسبة للتحلل بالموجات فوق الصوتية ، يتم صوتنة العينة باستخدام خالط مختبر بالموجات فوق الصوتية مثل UP100H لمدة 8 دورات بسعة 20٪ ، لدورات كل 5 ثوان و 15 ثانية قبالة. يتم استخراج البروتين عن طريق صوتنة في دورات (وضع النبض) ووضع العينة على الجليد بحيث يتم تجنب ارتفاع درجة الحرارة والتدهور الحراري للعينة. نظرا لأن المصل يحتوي على كمية كبيرة من البروتينات عالية الوزن الجزيئي (مثل الألبومين ، α1-antitrypsin ، الترانسفيرين ، هابتوغلوبولين ، الغلوبولين المناعي G والغلوبولين المناعي A) ، والتي تتداخل مع فصل البروتينات منخفضة الوزن الجزيئي أثناء IEF ، فمن المستحسن استنفادها من المصل باستخدام عمود النضوب.

استخراج البروتين من الأنسجة النباتية

طازجة، لينة الأنسجة النباتية، على سبيل المثال الطحلب وما إلى ذلك، يمكن أن تتعطل بسهولة ببساطة عن طريق وضع مادة العينة المفروم في تحلل العازلة لصوتنة. صعبة، والأنسجة النباتية ligenous، مثل البذور، والتنوب الإبر وما إلى ذلك، يجب أن تكون الأرض جافة. يجب تجميد بعض، المواد النباتية الخشبية الصلبة والأرض في النيتروجين السائل المستخرج قبل صوتنة. للتعليق زراعة الخلايا النباتية، والعلاج بالموجات فوق الصوتية ما بين 30 و 150 ثانية في تحلل العازلة هي في معظمها كافية. المواد أكثر صرامة مثل بذور اليقطين تتطلب صوتنة أكثر كثافة كما هو موضح أدناه.
 

يشرح هذا البرنامج التعليمي نوع الصوتنة الأفضل لمهام تحضير العينات مثل التحلل وتعطيل الخلايا وعزل البروتين وتجزئة الحمض النووي والحمض النووي الريبي في المختبرات والتحليل والبحث. اختر نوع الصوتنة المثالي لتطبيقك وحجم العينة ورقم العينة والإنتاجية. Hielscher الفوق صوتيات لديه الخالط بالموجات فوق الصوتية المثالي بالنسبة لك!

كيفية العثور على Sonicator المثالي لتعطيل الخلايا واستخراج البروتين في العلوم والتحليل

صورة مصغرة للفيديو

 

بروتوكول لاستخراج بالموجات فوق الصوتية من الزلال من بذور اليقطين

بالموجات فوق الصوتية الخالط الأنسجة UP400St مع S24d40 - لاستخراج البروتين من النباتات والأنسجة الحيوانية (انقر للتكبير!)لاستخراج البروتين بالموجات فوق الصوتية من الألبومين من مسحوق بذور اليقطين المطحون ناعما ، تتم إضافة 10 جم من مسحوق بذور اليقطين منزوع الدهن و 100 مل من الماء منزوع الأيونات كمذيب في دورق زجاجي سعة 250 مل. يتكون استخراج البروتين من خطوتين: أولا ، يتم صوتنة العينة باستخدام مسبار من نوع الموجات فوق الصوتية UP400St (400W, 24kHz) مجهزة سونوترود S24d7. توضع الكأس الزجاجية في حمام ماء بارد أثناء التجانس بالموجات فوق الصوتية. يضمن مستشعر درجة الحرارة القابل للتوصيل وإعدادات التحكم في درجة الحرارة لجهاز الموجات فوق الصوتية UP400St أن درجة حرارة العينة تظل دائما أقل من 30 درجة مئوية. من خلال التحكم الدقيق في درجة الحرارة أثناء الصوتنة ، يتم تجنب تمسخ الألبومين. ثانيا ، تم إجراء الاستخراج باستخدام خلاط بسرعة 200 دورة في الدقيقة وعند 30 درجة مئوية. بعد ذلك يتم نقل الدورق إلى شاكر ثرموستاتي. تتم إزالة الجلوبيولين عن طريق غسيل الكلى بالماء المقطر. بعد إزالة الجلوبيولين ، يمكن أخذ عينات من مستخلص البروتين لتحديد ملف تعريف الألبومين ويتم تعديله لاحقا إلى pI = 3.0 باستخدام 0.1 M HCl لتخثر الألبومين. يتم فصل المرحلة الصلبة عن طريق الطرد المركزي عند 5000 جم ، 20 درجة مئوية ويعاد إذابتها في الماء منزوع الأيونات. يتم إجراء تخثر الألبومين مرتين لزيادة نسبة البروتين في مركز الألبومين.

بالموجات فوق الصوتية استخراج البروتين القلوية لإعداد تركيز البروتين من نخالة الأرز ويظهر أن نتائج العلاج بالموجات فوق الصوتية في عائد أعلى من البروتين في وقت أقصر بكثير استخراج – مقارنة أساليب الاستخراج التقليدية.

يظهر مقطع الفيديو هذا المجانس بالموجات فوق الصوتية HIELSCHER UP100H ، وهو جهاز الموجات فوق الصوتية المستخدم على نطاق واسع لإعداد العينات في المختبرات.

مجانس بالموجات فوق الصوتية UP100H

صورة مصغرة للفيديو

بروتوكول إعداد نموذج لانزيم iNOS وظيفية

للحصول على إنزيم iNOS يعمل بكامل طاقته (على سبيل المثال لفحص الدواء) ، يوصى بالبروتوكول التالي: يجب وضع تعليق الخلية على الجليد ويتم صوتنة UP100H بسعة 10 ميكرومتر في وضع دورة 5 ثوان صوتنة و 25 ثانية راحة على الجليد. يجب تكرار الإجراء حوالي 3 مرات. يقلل وقت الراحة بين دورات الصوتنة من ارتفاع درجة الحرارة وبالتالي يقلل من خطر تمسخها.

بالموجات فوق الصوتية البروتين الإذابة

صوتنة قد يسرع عملية ذوبان البروتين، الأمر الذي يتطلب عادة عدة ساعات. لكي لا ارتفاع درجة حرارة العينة ومنع تدهور البروتين والتعديلات في المحاليل المحتوية على اليوريا، ينبغي أن رشقات نارية فوق الصوتية لا تستمر لفترة أطول من بضع ثوان.

فيالتويتر هو نظام الموجات فوق الصوتية فريدة من نوعها لسونيكيشن في وقت واحد من ما يصل إلى 10 قوارير تحت نفس الظروف بالضبط دون التلوث المتبادل.

UP200St مع VialTweeter لسونيكيشن من قارورة مغلقة

صورة مصغرة للفيديو

Ultrasonicator UP200Ht مع microtip S26d2 للتحلل بالموجات فوق الصوتية من العينات البيولوجية

الموجات فوق الصوتية UP200Ht مع 2mm microtip S26d2 لصوتنة العينات الصغيرة.

معدات الموجات فوق الصوتية لاستخراج البروتين

HIELSCHER الفوق نقدم مجموعة واسعة من المجانسة بالموجات فوق الصوتية للتفكك الخلايا والأنسجة، والبكتيريا والكائنات الدقيقة، والخميرة، والجراثيم.
الموجات فوق الصوتية مختبر Hielscher هي قوية وسهلة التشغيل. تم تصميمها للتشغيل على مدار 24/7 ، وهي مصممة كمختبر قوي وفعال وأجهزة منضدة. بالنسبة لجميع الأجهزة ، يمكن التحكم بدقة في خرج الطاقة والسعة. تفتح المجموعة الواسعة من الملحقات المزيد من خيارات الإعداد. الموجات فوق الصوتية الرقمية مثل VialTweeter ، UP200Ht ، UP200St ، و UP400St لديها تحكم متكامل في درجة الحرارة وبطاقة SD مدمجة لتسجيل البيانات التلقائي.
للحصول على صوتنة غير مباشرة وخالية من التلوث المتبادل ومتزامنة لعينات متعددة ، نقدم VialTweeter أو CupHorn بالموجات فوق الصوتية.
الجدول أدناه يعطيك لمحة عامة على الموجات فوق الصوتية لدينا لإعداد العينة، وتعطيل الخلايا واستخراجها. انقر فوق نوع الجهاز للحصول على مزيد من المعلومات حول كل خالط بالموجات فوق الصوتية. سيسعد طاقمنا الفني المدربون تدريبا جيدا والخبرات الطويلة بمساعدتك في اختيار أنسب الموجات فوق الصوتية لإعداد عينتك!
 

دفعة حجم معدل المد و الجزر الأجهزة الموصى بها
ما يصل إلى 10 قوارير أو أنابيب زمالة المدمنين المجهولين VialTweeter
لوحات متعددة الآبار / ميكروتيتر زمالة المدمنين المجهولين UIP400MTP
أنابيب / أوعية متعددة زمالة المدمنين المجهولين كوبهورن
1 إلى 500ML 10 إلى 200ML / دقيقة UP100H
10 إلى 1000 مل 20 إلى 200 مل / دقيقة Uf200 ः ر، UP200St
10 إلى 2000ML 20 إلى 400ML / دقيقة UP400St

اعتمادا على التطبيق، المادة، وحجم العينة الخاصة بك، فإننا ننصح الإعداد الأنسب لعينة الإعدادية الخاص. اتصل بنا اليوم!

اتصل بنا! / اسألنا!

اطلب المزيد من المعلومات

يرجى استخدام النموذج أدناه لطلب معلومات إضافية حول المجانسات بالموجات فوق الصوتية والتطبيقات في التكنولوجيا الحيوية والبروتينات وكذلك الأسعار. سنكون سعداء لمناقشة اضطراب الخلايا وعملية استخراج البروتين معك ونقدم لك الموجات فوق الصوتية تلبية الاحتياجات الخاصة بك!









يرجى ملاحظة لدينا سياسة الخصوصية.


 

يظهر الفيديو نظام إعداد العينة بالموجات فوق الصوتية UIP400MTP ، والذي يسمح بإعداد عينة موثوقة من أي لوحات قياسية متعددة الآبار باستخدام الموجات فوق الصوتية عالية الكثافة. وتشمل التطبيقات النموذجية للUIP400MTP تحلل الخلية، الحمض النووي، الحمض النووي الريبي، والقص الكروماتين، فضلا عن استخراج البروتين.

Ultrasonicator UIP400MTP لسونيكيشن لوحة متعددة الآبار

صورة مصغرة للفيديو

Hielscher ultrasonicators يمكن التحكم فيها عن بعد عن طريق التحكم في المتصفح. يمكن مراقبة معلمات Sonication وتعديلها بدقة وفقا لمتطلبات العملية.

Hielscher ultrasonicators الرقمية ميزة متصفح التحكم عن بعد وبروتوكول البيانات التلقائي على بطاقة SD متكاملة.

بالموجات فوق الصوتية VialTweeter جهاز لاستخراج البروتين من عينات الأنسجة (انقر للتكبير!)

VialTweeter لصوتنة غير مباشر.



حقائق تستحق العلم

البروتينات

البروتينات هي مجال الأبحاث أن يحقق البروتينات وبروتيوم. البروتينات تليفونية مجموعة واسعة من الوظائف الحيوية في الكائنات الحية. بروتيوم هو مجموعة كاملة من البروتينات التي أعرب عنها الجينوم، الخلية، الأنسجة، أو كائن في وقت معين. بروتيوم يختلف مع متطلبات الوقت ومتميزة، أو الضغوط، أن خلية أو كائن حي يخضع. وبشكل أكثر تحديدا، هو مجموعة من البروتينات التي أعرب عنها في نوع معين من الخلايا أو الكائن الحي، في وقت معين، في ظل ظروف محددة. على المدى هو مزيج من البروتينات والجينوم. البروتينات هي دراسة بروتيوم.

بروتين

البروتينات هي هي الجزيئات الحيوية الكبيرة، ما يسمى الجزيئات – التي تتكون من واحدة أو أكثر من سلاسل طويلة من بقايا الأحماض الأمينية. توجد البروتينات في جميع الكائنات الحية من الأصل النباتي والحيواني على حدٍّ سواء ، وهي حاسمة بالنسبة لمعظم الوظائف البيولوجية. بما أن البروتينات تحتوي على الكثير من المعلومات البيولوجية ، يتم استخراجها لغرض تحليلي ، على سبيل المثال للبحوث البروتينية. وتشمل أهم وظيفة تقوم بها البروتينات تحفيز التفاعلات الأيضية ، وتكرار الحمض النووي ، والاستجابة للمنبهات ، ونقل الجزيئات من موقع إلى آخر. تختلف البروتينات عن بعضها البعض في المقام الأول في تسلسلها من الأحماض الأمينية ، التي تمليها تسلسل النوكليوتيدات من جيناتها ، والتي عادة ما ينتج عنها طي البروتين في بنية محددة ثلاثية الأبعاد تحدد نشاطها. البروتينات – إلى جانب الببتيدات – واحدة من المكونات الرئيسية للغذاء. ولذلك، البروتينات هو أداة قوية في علوم الأغذية لتحسين العمليات وسلامة الأغذية والتقييم الغذائي.

Cloud Point Extraction

Cloud Point Extraction هو إجراء تحليلي مسبق لفصل التحليلات وتصورها مسبقا. بالاقتران مع الموجات فوق الصوتية ، يمكن تكثيف استخراج نقطة السحابة مما يجعل العملية أكثر كفاءة وأسرع وأكثر صداقة للبيئة. مع الموجات فوق الصوتية ، يعد استخراج نقطة السحابة طريقة أكثر كفاءة لإعداد التحليل. اقرأ المزيد عن استخراج نقطة السحابة بمساعدة الموجات فوق الصوتية!

هلام الكهربائي

هلام الكهربائي هو الأسلوب الرئيسي للانفصال وتحليل الجزيئات مثل DNA، RNA والبروتينات وكذلك أجزائها، على أساس حجمها والاتهام. فهو يستخدم في الكيمياء السريرية لفصل البروتينات عن طريق تهمة و / أو حجم (IEF الاغاروز، أساسا حجم مستقل) وفي الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية وعلم البروتينات لفصل السكان المختلطين من DNA و RNA شظايا من طول، لتقدير حجم DNA وشظايا RNA أو لفصل البروتينات عن طريق الاتهام.

مزارع الخلايا

زراعة الخلايا هي عملية المتزايدة التي تسيطر عليها والتي تزرع الخلايا تحت ظروف خاضعة للرقابة. تختلف ظروف زراعة الخلايا لكل نوع من الخلايا. بشكل عام، والبيئة ثقافة خلية تتكون من سفينة مناسبة (مثل طبق بيتري) مع الركيزة أو المتوسطة التي تزود العناصر الغذائية الأساسية (الأحماض الأمينية والكربوهيدرات والفيتامينات والمعادن)، عوامل النمو والهرمونات والغازات (CO2إن2)، وينظم البيئة الفيزيائية والكيميائية (درجة الحموضة عازلة، الضغط الاسموزي، ودرجة الحرارة). معظم الخلايا تحتاج إلى السطح أو الركيزة الاصطناعية، في حين الثقافات خلية أخرى يمكن زراعة الحرة العائمة في مستنبت (ثقافة تعليق، تعليق الخلية).
تستخدم الثقافات الجماعية من خطوط الخلايا الحيوانية في الإنتاج الصناعي من اللقاحات الفيروسية وغيرها من المنتجات المشتقة بالتكنولوجيا الأحيائية. الخلايا الجذعية البشرية يتم تربيتها لزيادة عدد الخلايا والتفريق بين الخلايا في مختلف أنواع الخلايا الجسدية لأغراض الزرع.

عينات الأنسجة

الأنسجة مصطلح يصف سيطة الخلوية، حيث المواد الخلية على المستوى التنظيمي بين الخلايا والجهاز كامل. في أنسجة وخلايا مماثلة، من نفس الأصل التي تحمل معا خارج وظيفة محددة، يتم تجميعها. من جانب التجمع الوظيفي للأنسجة متعددة، يتم تشكيل هياكل معقدة من الأجهزة.
وأخذ عينات من الأنسجة للبحث في علم الأحياء، علم الأنسجة / التشريح، علم الطفيليات، والكيمياء الحيوية، المناعية وكذلك لزراعة واستخراج الحمض النووي. ويمكن تمييزها بين الحيوانات (التقسيم: أنسجة الثدييات) والأنسجة النباتية. يتم تجميع الأنسجة الحيوانية إلى أربعة أنواع أساسية من الضام والعضلات والجهاز العصبي، والأنسجة الطلائية. تنقسم الأنسجة النباتية في ثلاثة أنظمة التالية الأنسجة: البشرة، والأنسجة الأرض، والأنسجة الوعائية.
عينات الأنسجة يمكن أن تكون مستعدة من حيوان أو نبات أجزاء، على سبيل المثال العظام والعضلات، وأوراق، الخ

سوائل الجسم

الدم والمصل والبلازما، السائل النخاعي واللعاب والسائل الزليلي وسوائل الجسم، والتي توفر مصدرا كبيرا من المعلومات ذات الصلة في التشخيص. ولذلك، فإن إعداد متطورة من عينات السوائل في الجسم لتحليل مهم. ويرتبط الصعوبة الأولى مع مجموعة ديناميكية واسعة من المكونات الموجودة في سوائل الجسم.

تحديد تركيز البروتين

برادفورد الفحص، لوري فحص وحمض bicinchoninic (BCA) فحص وفحوصات مشتركة لتحديد تركيز البروتينات. ألبومين المصل البقري (BSA) هو واحد من مستوى البروتين الأكثر استخداما.

تحلل العازلة

يجب أن اخترت تحلل العازلة وفقا لهذه المادة الخلايا او الانسجة (زراعة الأنسجة، والنباتات والبكتيريا والفطريات، الخ)، وعما إذا كانت الخلايا في بنية ونوع الهيكل. وهناك مجموعة واسعة من تحلل مخازن لاستخراج البروتينات، والأغشية، وتصاغ العضيات مع واحد أو أكثر من المنظفات. يتم اختيار المنظفات عادة عن طريق اختبارات التجربة والخطأ أو – إذا كان متوفرا – وفقا لبروتوكول استخراج البروتين الموجودة. يجب أن يكون المنظفات متوافق مع مصدر الأنسجة والبروتينات. بشكل عام، أخف المنظفات التي تعمل في النسيج / بروتين معين، يتم اختيار من أجل الحفاظ على وظائف القصوى للاستخراج. وعلاوة على ذلك، في حالة استخراج الأغشية وعضيات، المنظفات معتدل يحافظ على غشاء سليمة. المنظفات التي تستخدم عادة في مخازن تحلل هي في معظمها غير أيوني أو zwitterionic، على سبيل المثال CHAPS، deoxycholate، تريتون ™ X-100، NP40، وتوين 20.
على سبيل المثال، الأنسجة مثل المخ والكبد والأمعاء والكلى والطحال وما يمكن أن مخزنة ببساطة مع RIPA – ولكن ينبغي أن تدرج مثبطات الأنزيم البروتيني وDTT (على سبيل المثال، لالكهربائي للهلام).
تحلل العازلة للالهيكل العظمي الأنسجة العضلية (الجليد الباردة): 20 ملي تريس (الرقم الهيدروجيني 7.8)، 137 مم كلوريد الصوديوم، و 2.7 ملي بوكل، 1 ملم MgCl2، 1٪ تريتون X-100، و 10٪ (ث / ت) الجلسرين، 1 ملم EDTA ، dithiothreitol 1 ملم تستكمل مع البروتيني ومثبط الفوسفاتيز كوكتيل
جدول مخازن المشتركة ومدى درجة الحموضة بها. بشكل عام، يتم استخدام هذه المخازن عادة في تركيزات 20-50 ملم.
 

متعادل نطاق درجة الحموضة
حمض الستريك – هيدروكسيد الصوديوم 2-2 – 6.5
سترات الصوديوم – حمض الستريك 3.0 – 6.2
أسيتات الصوديوم – حمض الاسيتيك 3.6 – 5.6
حمض الكاكوديليك ملح الصوديوم – حمض الهيدروكلوريك 5.0 – 7.4
MY – هيدروكسيد الصوديوم 5.6 – 6.8
الصوديوم هيدروجين فوسفات – فوسفات الصوديوم الهيدروجينية 5.8 – ثمانية
ايميدازول – حمض الهيدروكلوريك 6.2 – 7.8
مُموَزات – كوه 6.6 – 7.8
ترايثولامين هيدروكلوريد – هيدروكسيد الصوديوم 6.8 – 8.8
تريس – حمض الهيدروكلوريك 7.0 – تسعة
HEPES – هيدروكسيد الصوديوم 7.2 – 8.2
تريسين – هيدروكسيد الصوديوم 7.6 – 8.6
بورات ثنائي الصوديوم – حمض البوريك 7.6 – 9.2
بيسين – هيدروكسيد الصوديوم 7.7 – 8.9
الجلايسين – هيدروكسيد الصوديوم 8.6 – 10.6

وتشير معظم مخازن درجة الحموضة الاعتماد مع درجة الحرارة. هذا ينطبق بشكل خاص للمخازن تريس هذا. يغير الباكاف الحمضية من 8.06 في درجة حرارة 25 درجة مئوية إلى 8.85 في 0 درجة مئوية.
(الرقم الهيدروجيني والباكاف الحمضية المخزن المؤقت: درجة الحموضة يقيس تركيز أيونات الهيدروجين في محلول مائي الباكاف الحمضية (= التفكك الحمضي ثابت) هو مقياس ذات الصلة، ولكن أكثر تحديدا، لأنه يساعد على التنبؤ كيف يمكن لجزيء ستعمل على التفاصيل. قيمه الحامضيه.)

TRIzol

TRIzol هو الحل الكيميائية تستخدم لاستخراج RNA / DNA / البروتين خلال استخراج guanidinium ثيوسيانات الفينول كلوروفورم. استخدام بمساعدة بالموجات فوق الصوتية النتائج استخراج TRIzol في DNA عالية، RNA، وعوائد البروتين من نفس العينة وتتفوق أساليب الاستخراج وبالتالي الأخرى.

مراجع الادب

سنكون سعداء لمناقشة العملية الخاصة بك.

دعونا الحصول على اتصال.