Staphylococcus biofilm etishtirish va ajratish protokoli

Standartlashtirilgan usullar ishonchli tadqiqot natijalari uchun zarurdir. Bu erda siz stafilokokk biofilmlarini etishtirish va ajratish protokolini topishingiz mumkin. Ushbu protokol UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatoridan foydalangan holda 96 quduqli plitalarda samarali, yuqori o'tkazuvchanlikdagi biofilmni ajratish uchun soddalashtirilgan yuqori o'tkazuvchanlik namunalarini tayyorlashga qaratilgan. Protokol shuningdek, biofilmni etishtirish, yuvish va vizualizatsiya qilishning asosiy bosqichlarini o'z ichiga oladi, bunda o'zgaruvchanlikni minimallashtirish va takror ishlab chiqarishni ta'minlashga qaratilgan.

Staphylococcus biofilm va antibiotik tadqiqotlari

Stafilokokk biofilmlari antibiotiklarga chidamliligi va immun javoblari tufayli persistent infektsiyalarda hal qiluvchi rol o'ynaydi. Biofilm shakllanishi bakteriyalar uchun himoya muhitini ta'minlaydi, bu infektsiyalarni davolashni qiyinlashtiradi. Biofilmlar bo'yicha tadqiqotlar ko'pincha eksperimental ish oqimlarini soddalashtirish uchun yuqori o'tkazuvchanlik usullariga urg'u berib, ularning shakllanishi, xatti-harakati va mikroblarga qarshi ta'sirchanligini tushunishga qaratilgan.
UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatori 96 quduqli plitalardan biofilmlarni tez va samarali ajratish imkonini berib, biofilm tadqiqotida muhim afzalliklarni taqdim etadi. Ushbu qurilma barcha quduqlarni bir xil ultratovush energiyasi bilan ta'minlaydi va o'zgaruvchanlikni minimallashtirish bilan birga izchil natijalarni ta'minlaydi.

Staphylococcus biofilm etishtirish va ajratish protokoli

Quyida biz sizga stafilokokk biofilmini o'stirish va ajratish jarayoni bo'yicha bosqichma-bosqich ko'rsatma beramiz. Namunaviy analitik bosqich sifatida biz kristal binafsha rangga bo'yash orqali o'stirilgan biomassani spektrofotometrik tarzda qanday aniqlashni ko'rsatamiz.

Staphylococcus Biofilmni etishtirish

Kerakli materiallar:

• Steril tekis taglikli 96 quduqli polistirolli to'qimalar kulturasi bilan ishlov berilgan qopqoqli mikrotitr plitalari
• 0,25% glyukoza bo'lgan triptik soya bulyoni (TSB).
• Biologik xavfsizlik kabineti

Qadamlar:

1. Kontaminatsiyani minimallashtirish uchun biologik xavfsizlik kabinetida steril ish muhitini tayyorlang.
2. Mikrotitr plastinka quduqlariga tarkibida 0,25% glyukoza bo'lgan TSB qo'shing. Glyukozasiz TSB odatda biofilm shakllanishini qo'llab-quvvatlamaydi va agar kerak bo'lsa, faqat nazorat sifatida ishlatilishi kerak.
3. Quduqlarni quyida ta'riflanganidek tayyorlangan bakteriya shtammlari bilan inokulyatsiya qiling:
4. Bakterial suspenziyalarni tayyorlang, bunda oldindan mavjud bo'lgan hujayra klasterlari yo'qligiga ishonch hosil qiling, suspenziyalarni sonikatsiya yordamida bir hil holga keltiring yoki klasterlarni 23 kalibrli igna va qisqa vorteks bilan parchalang.
5. Plastinani qopqog'i bilan yoping va biofilm hosil bo'lishi uchun maqbul sharoitlarda (masalan, 24 soat davomida 37 ° C) inkubatsiya qiling.
6. Ishonchliligini ta'minlash uchun har bir bakteriya shtammi (har bir shtammda uchta quduq) uchun tajribani uch nusxada bajaring.
7. Salbiy nazorat uchun har bir plastinka uchun oltita quduq ajrating. 96 quduqli plastinka uchun 30 tagacha shtammni tekshirish mumkin.

Biofilmni vizualizatsiya qilish va yuvish

1. Inkubatsiyadan so'ng, biofilmni bezovta qilmaslik uchun vositani ehtiyotkorlik bilan tashlang.
2. Planktonik bakteriyalarni olib tashlash uchun har bir quduqni fiziologik sho'r suv bilan to'rt marta yuving.
3. Quduqlarning pastki qismida biofilm mavjudligini ko'rsatadigan oq yamoqlarni tekshiring.

Ko'p quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP yordamida biofilmni ajratish

Qurilmani sozlash va parametrlar:

• UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatori
• Operatsion sozlamalari: 60% amplituda, 60 soniya ON / 30 soniya o'chirish bilan aylanish rejimi

Qadamlar:

1. Yuvilgan mikrotitr plitasini UIP400MTP platformasiga joylashtiring.
2. Namunalarni tavsiya etilgan sozlamalarda soniklashtiring (60% amplituda, 60 soniya ON, 30 soniya OFF). Sozlamalarni bakteriyalar shtammiga moslang.
3. Biofilmni ajratish uchun sonikatsiya jarayonini boshlang. Ultrasonik to'lqinlar biofilm matritsasini buzadi va yopishgan bakteriyalarni chiqaradi.
4. UIP400MTP izchil ajratish natijalari uchun barcha quduqlar bo'ylab bir xil ta'sir qilishni ta'minlaydi.

Analitik bosqich: Kristal binafsha rang yordamida ajratilgan stafilokokk biofilmi biomassasini aniqlash (CV)

Kerakli materiallar:

• 0.1% kristalli binafsha (CV) eritmasi
• 95% etanol yoki 30% sirka kislotasi (eritish uchun)
• 570 nm da o'qishga qodir mikroplata o'quvchi
• Bo'yash uchun steril mikrotitr plitalari

Qadamlar:

1. Bo'yash plitasini tayyorlash: 100 mkL ajratilgan biofilm suspenziyasini tovushli plastinkaning har bir qudug'idan toza, steril 96 quduqli mikrotitr plastinkasining mos keladigan quduqlariga o'tkazing. Bu binoni uchun aniq va bir xil muhitni ta'minlaydi.
2. Ajratilgan biofilmni bo'yash: ajratilgan biofilm suspenziyasi bo'lgan har bir quduqqa 150 mkL 0,1% kristalli binafsha eritma qo'shing. Biofilm suspenziyasi va kristalli binafsha rangning bir tekis aralashishini ta'minlash uchun muloyimlik bilan pipetka bilan torting.
3. Inkubatsiya: kristall binafsha rang biomassani samarali bo'yash uchun plastinkani xona haroratida 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilishiga ruxsat bering.
4. Yuvish: inkubatsiyadan so'ng, biomassani buzmasdan, quduqlardan kristalli binafsha eritmasini ehtiyotkorlik bilan tashlang. Bog'lanmagan dog'ni olib tashlash uchun har bir quduqni steril fiziologik sho'r suv bilan uch marta yuving.
5. Quritish: Plitani xona haroratida yoki steril havo oqimi qopqog'i ostida quriting. Isitishdan saqlaning, chunki bu natijalarni o'zgartirishi mumkin.
6. Eritish: Bog'langan kristalli binafsha rangni eritish uchun har bir quduqqa 200 mkl 95% etanol (yoki standart laboratoriya amaliyotiga qarab 30% sirka kislotasi) qo'shing. Xona haroratida 10 daqiqa davomida lavhani pipetkalash yoki chayqatish orqali muloyimlik bilan aralashtiring.
7. O'lchov: 570 nm da eruvchan kristalli binafsha eritmaning optik zichligini (OD) mikroplata o'quvchi yordamida o'lchang.
8. Ma'lumotlarni tahlil qilish: Fonni bo'yashni hisobga olish uchun eksperimental quduqlardan salbiy nazorat elementlarining o'rtacha OD570 qiymatini (TSB bo'lgan quduqlar, lekin bakterial inokulum yo'q) olib tashlang. Ma'lumotlarni yozib oling va tahlil qiling.

Eslatma: Qayta ishlab chiqarishni ta'minlash uchun har bir shart uchun tajribani uch nusxada bajaring. Kristall binafsha rang va etanol bilan to'g'ri ishlashni, xavfsizlik va utilizatsiya qilish protokollariga rioya qilishni ta'minlang.
 

UIP400MTP ning asosiy afzalliklari bir qarashda:

• Yuqori mahsuldorlikka ega ishlov berish: Ko'p quduqli plitalar uchun maxsus ishlab chiqilgan bo'lib, bir vaqtning o'zida bir nechta namunalarni qayta ishlashga imkon beradi.
• Yagona ultratovush taqsimoti: Quduqlar bo'ylab teng ultratovush intensivligini ta'minlaydi va barcha namunalar bo'yicha izchil natijalarni beradi.
• Har qanday standart plastinkadan foydalaning: UIP400MTP har qanday standart ko'p quduqli plitalar, Petri idishlari va kolba tokchalarini ishlay oladi. Qimmatbaho xususiy plitalar kerak emas!
• Foydalanuvchi uchun qulay interfeys: O'rnatish va boshqarish oson, bu laboratoriya unumdorligini oshirish uchun ajoyib vositadir. Dasturlashtiriladigan sozlamalar va avtomatlashtirish jarayonni standartlashtirishni osonlashtiradi!