Minimal inhibitiv kontsentratsiyani (MIC) tahlil protokoli

Biofilmga asoslangan minimal inhibitiv kontsentratsiya (MIC) tahlili mikroblarga qarshi vositalarning biofilm bilan bog'liq mikroorganizmlarga qarshi samaradorligini baholashning muhim usuli bo'lib, ular hujayradan tashqari himoya matritsasi tufayli yuqori qarshilik ko'rsatadi. Ushbu tahlilda hal qiluvchi qadam biofilm tuzilmalarini to'g'ri yashash qobiliyatini baholash uchun ko'milgan hujayralarni chiqarish uchun buzishdir. UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatori nazorat qilinadigan kavitatsiyani yaratish, biofilm hujayralarini samarali ravishda ajratish va ularni bir xil suspenziyaga tarqatish uchun fokuslangan ultratovush yordamida ushbu jarayonni osonlashtiradi. Ushbu aniq va takrorlanadigan biofilm buzilishi MIC tahlillarining ishonchliligi va o'tkazuvchanligini oshiradi, bu UIP400MTPni biofilm tadqiqotlarini rivojlantirishda muhim vositaga aylantiradi.

Biofilm dekolmanı uchun sonikatsiya

Biofilmga asoslangan MIC tahlili odatda qoplama, koloniyalarni hisoblash yoki optik zichlikni o'lchash kabi usullar yordamida bakteriyaning hayotiyligini yoki o'sishini inhibe qilishni o'lchaydi. Sonikatsiya biofilm bilan bog'liq mikroorganizmlarning antimikrobiyal sezgirligini baholashda biofilmga asoslangan MIC tahlillarida muhim qadamdir. Uning asosiy vazifasi aniq tahlil qilish uchun biofilm matritsasiga joylashtirilgan hujayralarni bir xil suspenziyaga ajratish va tarqatishdir.
Biofilmlar planktonik hujayralar bilan solishtirganda mikroblarga qarshi vositalarga sezilarli darajada chidamli bo'lib, to'g'ri ajralish aniq tahlil qilish uchun juda muhimdir. Ushbu jarayon davomida ultratovush to'lqinlari boshqariladigan kavitatsiyani hosil qiladi, biofilm matritsasini parchalaydi va o'rnatilgan hujayralarni qayta tiklash muhitida bir xil suspenziyaga chiqaradi. Ushbu bosqich qoplama, suyultirish va koloniyalarni hisoblash kabi usullar orqali biofilm-tarqalgan hujayralarning hayotiyligini aniq baholash imkonini beradi. Sonikatsiya orqali biofilmning to'g'ri buzilishi qoldiq matritsa komponentlarini hujayralarni himoya qilishdan saqlaydi, aks holda mikroblarga qarshi faollikni kam baholanishiga olib kelishi mumkin. Ko'p quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP, ayniqsa, bu maqsad uchun juda mos keladi, tahlil plitalarini ishonchli va yuqori mahsuldorlikka tayyorlashni ta'minlash uchun aniq va takrorlanadigan sonikatsiya shartlarini taklif qiladi.

Biofilmga asoslangan minimal ingibitor konsentratsiyani tahlil qilishda sonikatsiya nima uchun kerak

Hayotiylikni o'lchash va hujayralarni hisoblash uchun bitta hujayralarni to'liq va ishonchli ajratish va tarqatish talab qilinadi. UIP400MTP ishonchli tahlil natijalari uchun bir xil, zarar etkazmaydigan biofilm ajralishini va hujayra dispersiyasini ta'minlaydi.

• Biofilmning murakkabligi: Biofilmlar mikroorganizmlarni himoya qiladigan va ularni mikroblarga qarshi vositalarga nisbatan chidamliroq qiladigan hujayradan tashqari polimerik modda (EPS) matritsasiga o'ralgan tuzilgan mikrobial jamoalardir.
• Yagona dispersiya: Biofilm o'rnatilgan hujayralarning hayotiyligini yoki ularning mikroblarga qarshi ta'sirchanligini to'g'ri o'lchash uchun birinchi navbatda biofilmni bo'shatish va bir hil suspenziyaga bo'lish kerak.

Biofilmga asoslangan minimal inhibitiv kontsentratsiyani tahlil qilish protokoli

Minimal inhibitiv konsentratsiya (MIC) tahlili mikroorganizmlarning ko'rinadigan o'sishini inhibe qilish uchun zarur bo'lgan mikroblarga qarshi vositaning eng past konsentratsiyasini aniqlaydi. Ushbu protokol biofilmni buzish uchun UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatoridan foydalangan holda biofilm bilan bog'liq mikroorganizmlar uchun mo'ljallangan.

1-qadam: Bakterial inokulum tayyorlash

1. Bakterial suspenziyani tayyorlang:
   Bakteriyalarni o'rta logarifmik fazaga mos muhitda o'stiring.
   Standartlashtirilgan hujayra zichligiga erishish uchun madaniyatni suyultiring (masalan, 0,5 McFarland standarti yoki OD600 ~ 0,1).
2. Antimikrobiyal eritmalarni tayyorlang:
   Bir qator kontsentratsiyalarni yaratish uchun mikroblarga qarshi vositani mos muhitda suyultiring (masalan, ikki marta ketma-ket suyultirish).
3. 96 quduqli plastinkaga to'kib tashlang:
   Yakuniy quduq hajmi ~150–200 µL bo‘lgan standart 96-quduqli plastinkaning quduqlariga mikroblarga qarshi eritmalarni qo‘shing.
   O'sishni nazorat qilishni (mikroblarga qarshi vositalarsiz) va sterillikni nazorat qilishni (bakterial emlash yo'q) o'z ichiga oladi.

2-qadam: Peg qopqog'ida biofilm shakllanishi

• Qopqoq qopqog'ini mahkamlang:
  Ixtisoslashtirilgan qoziq qopqog'ini emlangan quduqlarga qo'ying, bunda qoziqlar bakterial suspenziyaga to'liq botganligiga ishonch hosil qiling.
• Plitani inkubatsiya qiling:
  Tegishli haroratda (masalan, 37°C) maʼlum muddat (masalan, 24 soat) qoziqlarda biofilm hosil boʻlishiga imkon berish uchun statik sharoitda inkubatsiya qiling.

3-qadam: Antimikrobiyal ta'sir qilish

• Iplarni yuving:
  Bakterial suspenziyadan qoziq qopqog'ini olib tashlang va yumshoq biriktirilgan planktonik hujayralarni olib tashlash uchun steril sho'r suv yoki PBS bilan yaxshilab yuvib tashlang.
• Antimikrobiyallarga ta'sir qilish:
  Qopqoq qopqog'ini avval tayyorlangan mikroblarga qarshi suyultirishlar bo'lgan yangi 96 quduqli plastinkaga o'tkazing.
  Antimikrobiyal vositaning biofilmlarga ta'sir qilishiga imkon berish uchun statik sharoitda ma'lum bir muddat (masalan, 24 soat) inkubatsiya qiling.

4-qadam: Microplate Sonicator UIP400MTP bilan sonikatsiya

Sonikatsiya bosqichi biofilmlarni qoziq qopqog'idan ajratish uchun hayotiylikni baholash uchun juda muhimdir. UIP400MTP sonikatori uchun quyidagi amallarni bajaring:

1. O'rnatishni tayyorlang:
   Har bir quduqqa 96-quduqli yangi plastinkani qayta tiklash muhiti (masalan, neytrallashtiruvchi bulon yoki steril o'sish muhiti) bilan to'ldiring.
2. Qopqoq qopqog'ini o'tkazing:
   Antimikrobiyal davolash plastinkasidan qoziq qopqog'ini olib tashlang.
   Qoldiq mikroblarga qarshi vositalarni olib tashlash uchun qoziq qopqog'ini steril sho'r suv yoki PBS bilan yuving.
3. Plitani sonikatorga joylashtiring:
   Qoziq qopqog'ini qutqaruvchi vosita plastinkasiga ulang.
   Qayta tiklash vositasi plitasini UIP400MTP sonikatoriga joylashtiring va plastinka qo'llanmada tasvirlanganidek markazlashtirilgan va barqaror o'tirishiga ishonch hosil qiling.
4. Sonikatsiya parametrlarini sozlang:
   UIP400MTP da sonikatsiya parametrlarini o'rnating (sozlamalar biofilmga moslashtirilishi mumkin):
   Amplituda: 70–100%.
   Sonikatsiya vaqti: sikl rejimida 1-3 daqiqa (biofilm tuzilishiga qarab sozlang).
5. Sonicate:
   Sonikatsiya jarayonini boshlang. Ultrasonik to'lqinlar biofilm matritsasini buzadi va hujayralarni tiklash muhitiga joylashtiradi.
6. Jarayonni kuzatib boring:
   Quduqlardagi namuna haroratini kuzatish uchun o'rnatilgan harorat sensori foydalaning. UIP400MTP sovutish uchun laboratoriya chilleriga ulanishi mumkin.
7. Sonikatsiyadan keyingi ishlov berish:
   Ajratilgan biofilmlarni o'z ichiga olgan qayta tiklash muhitini darhol keyingi tahlil qilish uchun yangi steril plastinkaga o'tkazing.

(A) Biofilm hosil qilish, hujayralarni tiklash va MIC va MBECni aniqlash uchun ishlatiladigan 2% glyukozali TSB o'z ichiga olgan plastinka; (B) Stafilokokk biofilmlarini hosil qilish uchun pinli qopqoq.
Pimlarda hosil bo'lgan biofilm hujayralari sonikatsiya (Hielscher Ultrasound Technology) yordamida hujayralarni qayta tiklash uchun yangi madaniyat muhitini o'z ichiga olgan 96 quduqli plastinkalarda 5 daqiqa davomida ajratilgan.
(Rasm va tadqiqot: ©de Oliveira va boshqalar, 2016)

4-qadam: Hayotiylikni baholash

Plitalar va kulturadan ajratilgan biofilmlar:

1. Koloniya hosil qiluvchi birliklarni (CFU) sanab o'tish uchun qayta tiklash muhiti va plastinkani agar ustiga ketma-ket suyultirishni amalga oshiring.
2. MICni baholang:
   MICni tiklash muhitida ko'rinadigan mikrob o'sishini to'liq inhibe qiluvchi eng past mikroblarga qarshi kontsentratsiya sifatida aniqlang.

MICning minimal inhibitiv kontsentratsiyasi: mikrotitr plitasining namunasi va mikrodilüsyon natijalarini sharhlash.
(O'rganish va rasm: © Jaskiewicz va boshq. 2019)

Dizayn, ishlab chiqarish va konsalting – Germaniyada ishlab chiqarilgan sifat

Hielscher ultrasonikatorlari eng yuqori sifat va dizayn standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va qulay foydalanish ultratovush qurilmalarimizni sanoat ob'ektlariga muammosiz integratsiya qilish imkonini beradi. Qiyin sharoitlar va talabchan muhit Hielscher sonikatorlari tomonidan osonlik bilan boshqariladi.

Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya bo'lib, eng zamonaviy texnologiya va foydalanuvchilarga qulaylik bilan ajralib turadigan yuqori samarali ultratovush apparatlariga alohida e'tibor beradi. Albatta, Hielscher ultrasonikatorlari Idoralar talablariga javob beradi va UL, CSA va RoHs talablariga javob beradi.

UIP400MTP ASTM E2799 protokolida biofilmni ajratish uchun qanday ishlatilishini bu erda o'qing. – MBEC tahlili yordamida Pseudomonas aeruginosa biofilmiga qarshi dezinfektsiyalash samaradorligini tekshirish.