Hujayra qirib tashlashni UIP400MTP yuqori o'tkazuvchan sonikator bilan almashtiring
Ko'p omik tahlil qilish uchun ko'p quduqli plitalardan yopishgan hujayra liniyalarini ajratish va olish laboratoriyalarda kundalik vazifadir. UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatoridan foydalangan holda yuqori o'tkazuvchan hujayralarni ajratish qo'lda hujayralarni qirib tashlashni almashtiradi, bu esa RNK, jami lipidlar va umumiy qutbli metabolitlarning yuqori hosildorligiga olib keladi. Yangi usul Hielscher UIP400MTP sonikatorini Beckman Coulter i7 suyuqlik bilan ishlov berish ish stantsiyasi bilan birlashtirib, RNK, metabolit va lipidlarni olish uchun hujayralarni yuqori o'tkazuvchanlik, takrorlanadigan va samarali qayta ishlash imkonini beradi. Taqdim etilgan usul hujayralarni qo'lda qirib tashlashning an'anaviy usullaridan ustundir, bu har xil hujayra turlari va eksperimental sharoitlarda yuqori takrorlanish va hosildorlikka erishish orqali.
Microplate Sonicator UIP400MTP bilan hujayra ajratilishini soddalashtiring
Birikkan hujayra madaniyati tizimlari toksikologik va biomedikal tadqiqotlarda hal qiluvchi rol o'ynaydi. Shu nuqtai nazardan, Cruchley-Fuge va boshqalar. (2024) kimyoviy xavfni baholash uchun omiks texnologiyalaridan foydalanishga qaratilgan PrecisionTox loyihasida muhim muammoni hal qildi. Loyiha turli xil kimyoviy moddalar bilan ishlov berilgan minglab namunalarni yuqori samarali tahlil qilishga qaratilgan. Ushbu talabni qondirish uchun tadqiqotchilar UIP400MTP sonikatorini suyuq xromatografiya-massa spektrometriyasi (LC-MS) tahlili uchun belgilangan ikki fazali ekstraksiya protokollari bilan birlashtirgan avtomatlashtirilgan ish oqimini ishlab chiqdilar. Ularning tadqiqoti UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator-ning qo'lda qirib tashlash va boshqa an'anaviy usullar bilan solishtirganda yopishgan hujayralarni ajratish samaradorligini baholaydi.
Har qanday standart mikroplatadan yopishgan hujayra madaniyatini ajratish – UIP400MTP sonikator bilan yuqori o'tkazuvchanlikda
Multi-Omics-ni soddalashtirish: UIP400MTP bilan avtomatik yopishtiruvchi hujayra ekstraktsiyasi
Birmingem universitetidan Laura Cruchley-Fuge tadqiqotchilar guruhi uchta inson hujayra liniyasidan foydalangan: HepG2 (jigar saratoni hujayralari), HepaRG (differentsiallangan gepatotsitlarga o'xshash hujayralar) va H295R (buyrak usti bezi saratoni hujayralari). Bu hujayralar 24 va 96 quduqli plastinkalarda ekilgan va aflatoksin B1 va forskolin kabi sinov kimyoviy moddalariga ta'sir qilgan.
Eksperimental dizayn:
- 1-bosqich: UIP400MTP sonikatorining quvvat sozlamalarini optimallashtirish va hujayralarni qo'lda tozalash va tovushli suv hammomlari bilan taqqoslash. HepG2 hujayralari RNK, metabolit va lipidlarning tiklanishini baholash uchun ishlatilgan.
- 2-bosqich: UIP400MTP ni Beckman Coulter i7 tizimidan foydalangan holda ikki fazali qazib olish ish oqimiga integratsiyalash. Tasdiqlash HepaRG va H295R hujayralari yordamida o'tkazildi.
Ekstraksiya ish jarayoni: Ish jarayoni ko'p quduqli plitalardagi kimyoviy ta'sirlarni, UIP400MTP yordamida hujayralarni ajratish va Bligh orqali ikki fazali ekstraktsiyani o'z ichiga oladi. & Dyer (B&D) usul. LC-MS tahlili lipofil va qutbli birikmalar uchun Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 yordamida amalga oshirildi. B&D usuli, lipid miqdorini aniqlashning oltin standarti, metanol, xloroform va suv bilan ikki bosqichli ekstraktsiyani, so'ngra xloroform fazasida lipid miqdorini aniqlashni o'z ichiga oladi.
UIP400MTP mikroplastinka sonikatori ko'p quduqli plitalar va Petri idishlaridan yopishgan hujayra chiziqlarini ajratishni osonlashtiradi.
Natijalar:
- 1-bosqich: 60% quvvatda optimal sonikatsiya shartlari aniqlandi.
UIP400MTP qo'lda qirib tashlash va ovozli vannalar bilan solishtirganda juda yuqori takrorlanishi bilan RNKning eng yuqori tiklanishini ta'minladi.
Polar metabolitlarning tiklanishi usullar bo'yicha izchil edi, lipidlarning tiklanishi esa UIP400MTP bilan sezilarli darajada yuqori edi. - 2-bosqich: HepaRG va H295R hujayralarida tekshirish lipidomika va metabolomika ma'lumotlarida yuqori reproduktivlikni ko'rsatdi, bu qattiq klasterlangan PCA ballari bilan ko'rsatilgan.
Aflatoksin B1 va forskolin bilan davolash usullari nazorat usullaridan samarali tarzda ajralib turdi, bu usulning sezgirligi va ishonchliligini ta'kidladi.
UIP400MTP mikroplastinkali sonikator yuqori o'tkazuvchanlikdagi hujayralarni ajratish uchun
“Hielscher UIP400MTP sonikatsiya qurilmasi hujayralarni qo'lda qirib tashlashning "oltin standarti" ga yuqori sifatli va takrorlanadigan muqobil yondashuvni ta'minlaydi, bu RNK, umumiy lipidlar va umumiy qutbli metabolitlarning yuqori hosildorligiga olib keladi.” (Cruchley-Fuge va boshqalar, 2024)
Cruchley-Fuge va boshqalar. yopishgan hujayralarni qayta ishlash uchun UIP400MTP sonikatorining afzalliklarini ta'kidlang. Qo'lda qirqish o'rnini bosgan holda, bu usul takrorlanuvchanlikni, o'tkazuvchanlikni va rentabellikni oshiradi va uni PrecisionTox kabi keng ko'lamli tadqiqotlar uchun bebaho vositaga aylantiradi. UIP400MTP ning avtomatlashtirilgan ish oqimlariga integratsiyalashuvi nafaqat o'zgaruvchanlikni kamaytiradi, balki ko'p mehnat talab qiladigan jarayonlarni ham soddalashtiradi, bu esa yuqori sifatli multi-omik ma'lumotlarni olish imkonini beradi.
Cruchley-Fuge va boshqalarning ishi. (2024) multi-omik tahlil qilish uchun yopishgan hujayra madaniyatini qayta ishlashni osonlashtiradi va soddalashtiradi. UIP400MTP sonikatorining avtomatlashtirilgan ish oqimlari bilan integratsiyasi namunani izchil va samarali tayyorlashni ta'minlaydi, bu esa uni yuqori samarali toksikologik tadqiqotlar uchun ideal qiladi.
UIP400MTP ultratovushli vanna emas. Bu fokuslangan sonikatsiya uchun yuqori intensivlikdagi chashka shoxi. Ushbu kuchli kontaktsiz sonikator standart quduq plitasining barcha quduqlari bo'ylab yagona sonikatsiyani ta'minlaydi. Siz amplituda, quvvat va pulsatsiya ustidan aniq nazoratga egasiz. O'rnatilgan taymer va harorat probi barqaror natijalarni ta'minlaydi. UIP400MTP plastinka sonikatori namunalarni suv hammomi bilan sovutadi (tashqi chiller ixtiyoriy).
Dizayn, ishlab chiqarish va konsalting – Germaniyada ishlab chiqarilgan sifat
Hielscher ultrasonikatorlari eng yuqori sifat va dizayn standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va qulay foydalanish ultratovush qurilmalarimizni sanoat ob'ektlariga silliq integratsiya qilish imkonini beradi. Qo'pol sharoitlar va talabchan muhit Hielscher ultrasonikatorlari tomonidan osonlik bilan hal qilinadi.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya bo'lib, eng so'nggi texnologiyalar va foydalanuvchilarga qulaylik bilan ajralib turadigan yuqori samarali sonikatorlarga alohida e'tibor beradi. Albatta, Hielscher ultrasonikatorlari Idoralar talablariga javob beradi va UL, CSA va RoHs talablariga javob beradi.
Hujayralarni qirib tashlamasdan yuqori o'tkazuvchan hujayralar ajralishi – UIP400MTP sonikatori laboratoriya ishlarini osonlashtiradi.
Adabiyot / Adabiyotlar
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
tez-tez so'raladigan savollar
Hujayra ajralishi nima?
Tadqiqotda hujayra ajralishi madaniyat idishi yoki substrat yuzasidan yopishgan hujayralarni ajratish jarayonini anglatadi. Bu odatda tahlil, subkulturalash yoki kriyokonservatsiya kabi quyi oqim ilovalari uchun hujayralarni yig'ish uchun amalga oshiriladi. Hujayra turiga va tadqiqot talablariga qarab, fermentativ usullar (masalan, tripsin), kimyoviy vositalar (masalan, EDTA), mexanik usullar (masalan, qirib tashlash) yoki sonikatsiya kabi jismoniy usullar yordamida ajratish mumkin.
Yopishqoq hujayralarni qanday ajratish mumkin?
Sonikatsiya yordamida yopishgan hujayralarni ajratish, nazorat qilinadigan muhitda hujayra yuzasining yopishishini buzish uchun fokuslangan ultratovush to'lqinlarini qo'llashni o'z ichiga oladi. Xususan, UIP400MTP mikroplastinka sonikatori bunga hujayralar va madaniyat yuzasi o'rtasidagi aloqalarni buzadigan mahalliy mexanik tebranishlarni yaratish orqali erishadi. Asosiy qadamlar quyidagilarni o'z ichiga oladi:
- Tayyorlanishi: Hujayralar ko'p quduqli plitalarda o'stiriladi va eksperimental dizaynning bir qismi sifatida maxsus kimyoviy moddalarga ta'sir qilishi mumkin.
- Sonikatsiya: UIP400MTP sonikatori hujayralarga zarar bermasdan yoki biomolekula yaxlitligini buzmasdan samarali ajralishni ta'minlash uchun optimallashtirilgan sozlamalar (masalan, 60% quvvat) bilan dasturlashtirilgan.
- Harorat nazorati: Qurilma issiqlik ta'siridan hujayra yoki molekulyar degradatsiyani oldini olish uchun harorat barqarorligini saqlaydi.
- Ajralishdan keyingi: Ajratilgan hujayralar Bligh kabi quyi oqim protokollariga bo'ysunadi & Dyer bifazik usuli, RNK, lipidlar va metabolitlarni qayta tiklash uchun.
Ushbu usul avtomatlashtirilganligi, takrorlanuvchanligi va yuqori o'tkazuvchanlik namunalarini samarali qayta ishlash qobiliyati tufayli qo'lda qirqishdan ustundir.
Zarar etkazmaydigan hujayralar ajralishi nima?
Zarar ko'rmaydigan hujayralar ajralishi - bu hujayra hayotiyligi, yaxlitligi yoki funksionalligini buzmasdan yopishgan hujayralarni substratidan ajratish jarayoni. Bunga boshqariladigan sonikatsiya yoki fermentsiz eritmalar kabi yumshoq usullar yordamida erishiladi.
Hujayralarni yo'q qilishning oldini olish hujayralarni saqlab qolish uchun juda muhimdir’ ko'p omik tahlillar, funktsional tahlillar yoki terapevtik foydalanish kabi aniq quyi oqim ilovalari uchun muhim bo'lgan strukturaviy va molekulyar xususiyatlar. Shikastlangan hujayralar hujayra ichidagi tarkibni chiqarib yuborishi mumkin, bu esa tajriba natijalarini chalkashtirib yuborishi yoki namuna sifatini buzishi mumkin.
Fermentsiz hujayralar ajralishining afzalligi nimada?
Fermentsiz hujayralar ajralishi bir qator afzalliklarga ega, jumladan, hujayra yuzasi oqsillari va retseptorlarini saqlab qolish, hujayra hayotiyligini saqlab qolish va biomolekulalarga potentsial enzimatik zararni oldini olish. Ushbu yondashuv, ayniqsa, oqim sitometriyasi, proteomika yoki funktsional tahlillar kabi sezgir quyi oqim ilovalari uchun foydalidir, bu erda fermentativ o'zgarishlar ma'lumotlar sifati yoki eksperimental natijalarni buzishi mumkin. Bundan tashqari, fermentsiz usullar ko'pincha takrorlanadi va yuqori o'tkazuvchanlikdagi ish oqimlari uchun moslashtirilishi mumkin.
Hielscher Ultrasonics kompaniyasi yuqori samarali ultratovushli homogenizatorlarni ishlab chiqaradi laboratoriya uchun sanoat hajmi.