Mikroblarga qarshi samaradorlikni baholash uchun ASTM E2799-22 protokoli

Hielscher UIP400MTP – ASTM E2799-22 protokolidagi ultratovush bilan ishlov berish bosqichini soddalashtirish uchun ishlab chiqilgan kuchli va samarali koʻp quduqchali plastinka sonikatori. UIP400MTP butun mikrotitr plastinkasi boʻylab bir xil ultratovush energiyasini yetkazib, hujayralarni shikastlamasdan va namuna yaxlitligini buzmasdan biofilmlarning shtiftli qopqoqlardan izchil va ishonchli ajratilishini taʼminlaydi. Uning koʻp sonli namunalarga ishlov berish imkoniyati va foydalanish qulayligi natijalarning takrorlanuvchanligini oshirish bilan birga ishlov berish vaqtini sezilarli darajada qisqartiradi. Bu uni biofilm hayotchanligini tahlil qiluvchi va mikroblarga qarshi vositalar samaradorligini sinovdan oʻtkazuvchi laboratoriyalar uchun ideal yechimga aylantiradi.

ASTM E2799

ASTM E2799 – mikroblarga qarshi vositalarning biofilmlarga nisbatan samaradorligini baholash uchun ishlab chiqilgan standartlashtirilgan sinov usuli boʻlib, unda ayniqsa Pseudomonas aeruginosa ga eʼtibor qaratiladi. Biofilmlar yuzalarga yopishadigan va mikroblarga qarshi ishlovlarga yuqori chidamlilik koʻrsatadigan murakkab mikrob jamoalaridir. Shu sababli ular sogʻliqni saqlash, sanoat va atrof-muhit sohalarida jiddiy muammo tugʻdiradi. Ushbu usul biofilmning haqiqiy sharoitlarida dezinfeksiya vositalarini sinash uchun ishonchli va takrorlanuvchan asos yaratish maqsadida biofilmni yoʻq qilishning minimal konsentratsiyasi (MBEC) tahlilidan foydalanadi.

Ultratovush bilan ishlov berish ASTM E2799 ga qanday hissa qoʻshadi?

Ultratovush bilan ishlov berish biofilmlarni sinov yuzalaridan ajratishni osonlashtirib, ishlovdan keyin mikroblarning hayotchanligini aniq baholashni taʼminlash orqali ASTM E2799 protokolida hal qiluvchi rol oʻynaydi. Boshqariladigan ultratovush energiyasidan foydalanish orqali protokol hujayralarni shikastlamasdan biofilmni samarali va izchil parchalashga erishadi hamda aniq va takrorlanuvchan natijalar olish imkonini beradi. Bu ASTM E2799 ni biofilm tadqiqotlarini rivojlantirish va mikroblarga qarshi samarali strategiyalarni ishlab chiqish uchun muhim vositaga aylantiradi.

MBEC tahlilini ASTM E2799-22 ga muvofiq qanday oʻtkazish kerak

ASTM E2799-22 protokoli mikroblarga qarshi vositalarning biofilmlarga nisbatan samaradorligini baholash bosqichlarini belgilaydi. Hielscher UIP400MTP mikrotitr plastinkasi sonikatoridan foydalanilganda, biofilmlarni ajratish uchun ushbu ilgʻor ultratovush bilan ishlov berish usulini kiritish maqsadida protokolni moslashtirish mumkin. Quyida UIP400MTP mikroplastinka sonikatoridan foydalanishga moslashtirilgan bosqichlar tavsifi keltirilgan:

Biofilmlarni tayyorlash
Olinadigan qoziqli qopqoqli steril 96 quduqli mikrotitr plitasini tayyorlang.
Quduqlarni mos o’sish muhitida standartlashtirilgan bakterial suspenziya bilan emlash.
Qoziq qopqog’ini plastinka ustiga qo’ying, qoziqlar bakterial suspenziyaga to’liq botirilishiga ishonch hosil qiling.
Qoziqlarda biofilm hosil bo’lishiga imkon berish uchun plastinkani nazorat qilinadigan sharoitlarda (masalan, harorat va vaqt) inkubatsiya qiling.
Mikroblarga qarshi vositalar bilan ishlov berish
Biofilm hosil bo’lgandan so’ng, muhitni turli konsentratsiyalarda sinovdan o’tgan mikroblarga qarshi vositalarni o’z ichiga olgan yangi muhit bilan almashtiring.
Qoziq qopqog’ini qayta ulang va sinov loyihasida ko’rsatilgan sharoitlarda inkubatsiya qiling.
Biofilmlarni ajratishga tayyorgarlik
Davolanishdan so’ng, qoldiq mikroblarga qarshi vositalarni va bo’shashmasdan yopishtirilgan plankton hujayralarini olib tashlash uchun qoziq qopqog’ini steril chayish eritmasiga botirib yuving.
UIP400MTP sonikatori yordamida biofilmlarni ajratish
Prepare a fresh 96-well microtiter plate containing a recovery medium (e.g., neutralizing broth).
Qoziq qopqog’ini tiklash muhiti plastinkasining quduqlariga qo’yib, biofilmlarni ajratib oling.
Plitani UIP400MTP sonikatoriga soling, qopqoq va plastinka to’g’ri tekislanganligiga ishonch hosil qiling.
Sonikatorni 70% -80% amplitudaga o’rnating va hujayra lizisiz biofilmning izchil ajralishini ta’minlash uchun tsikl rejimida 3-4 daqiqa davomida sonikatsiya qiling.
Biofilm hayotchanligini baholash
Ultratovush bilan ishlov berilgandan keyin ajratilgan biofilm hujayralarini saqlovchi tiklash muhitini quyidagi kabi standart mikrobiologik yoki analitik usullar yordamida tahlil qiling:
- Koloniya hosil qiluvchi birlik (CFU) soni: yashovchan hujayralarni sanab o’tish uchun agarda ketma-ket suyultirish va plastinkani bajaring.
- Optik zichlikni (OD) oʻlchash: hujayra zichligini baholash uchun spektrofotometrik tahlildan foydalaning.
- Fluoressensiyaga asoslangan hayotchanlik tahlillari: fluoressent boʻyoqlar yordamida tirik va oʻlik hujayralar miqdorini aniqlang.
Maʼlumotlarni tahlil qilish
Mikroblarga qarshi vositalarning samaradorligini aniqlash uchun ishlov berilgan va ishlov berilmagan biofilmlarning hayotchanligi haqidagi maʼlumotlarni taqqoslang.
Hayotchan biofilm hujayralarini yoʻq qilish uchun zarur konsentratsiya asosida biofilmni yoʻq qilishning minimal konsentratsiyasini (MBEC) hisoblang.
Sifat nazorati
UIP400MTP ni muntazam kalibrlash va biofilmni ajratish jarayoni sezilarli hujayra lizisi yoki nobud boʻlishiga olib kelmasligini tekshirish orqali ultratovush bilan ishlov berish sharoitlarining izchilligini taʼminlang.
Natijalarni tasdiqlash uchun ishlov berilmagan biofilmlar va faqat muhitdan iborat boʻsh namunalar kabi tegishli nazorat namunalarini kiriting.

Hielscher kontaktsiz UIP400MTP sonikatori yordamida biofilmlarni 96 quduqchali plastinkalarning tubi yoki shtiftlaridan, probirkalardan yoki Petri idishlaridan ishonchli ravishda ajratish mumkin.

Pimlarda hosil bo’lgan biofilm hujayralari sonikatsiya (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germaniya, UIP250MTP) orqali hujayralarni qayta tiklash uchun yangi madaniyat muhitini o’z ichiga olgan 96 quduqli plastinkalarda 5 daqiqa davomida ajratildi.
(Rasm va tadqiqot: ©de Oliveira et al., 2016)

UIP400MTP ni ASTM E2799-22 ish jarayoniga integratsiya qilish orqali biofilmni ajratish jarayoni izchillik, samaradorlik va koʻp sonli namunalarga ishlov beriladigan qoʻllanishlar uchun optimallashtiriladi.

UIP400MTP qurilmasining ilg‘or konstruksiyasi ultratovush tebranishlarining planshetdagi har bir quduqchaga imkon qadar bir tekis uzatilishini ta’minlaydi. Natijada barcha quduqchalarda ultratovush bilan ishlov berish bir xil natija beradi.

Tegishli mavzular

Adabiyotlar / Manbalar

FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.

Koʻp beriladigan savollar

ASTM E2799 nima?

ASTM E2799 – MBEC tahlili yordamida dezinfeksiya vositalarining Pseudomonas aeruginosa biofilmiga nisbatan samaradorligini sinash uchun ASTM International tomonidan belgilangan standart sinov usuli. Ushbu usul biofilm hosil boʻlishi, mikroblarga qarshi samaradorlik va material yuzasi bilan oʻzaro taʼsirlarni baholashda keng qoʻllanadi hamda biofilmga oid tadqiqotlarda standartlashtirilgan taqqoslashlarni amalga oshirish imkonini beradi.

ASTM E2799-22 bilan ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 va ASTM E2799-17 oʻrtasidagi farq nima?

ASTM E2799 – MBEC (biofilmni yoʻq qilishning minimal konsentratsiyasi) tahlili yordamida dezinfeksiya vositalarining Pseudomonas aeruginosa biofilmlariga nisbatan samaradorligini baholaydigan standartlashtirilgan sinov usuli. Ushbu usul aniqligi va qoʻllash imkoniyatlarini oshirish uchun bir necha marta qayta koʻrib chiqilgan.

ASTM E2799-11: bu standartning dastlabki nashri boʻlib, MBEC tahlili yordamida dezinfeksiya vositalarining P. aeruginosa biofilmlariga nisbatan samaradorligini baholashning asosiy tartiblarini belgilagan.
ASTM E2799-12: ushbu tahrir tushunarlilikni yaxshilash va 2011-yilgi versiyada aniqlangan noaniqliklarni bartaraf etish uchun kichik texnik yangilanishlarni oʻz ichiga olgan.
ASTM E2799-17: ushbu yangilanishda natijalarning takrorlanuvchanligini oshirish va biofilm tadqiqotlaridagi yutuqlarga muvofiqlikni yaxshilash maqsadida protokolga yanada sezilarli oʻzgartirishlar, jumladan biofilmni oʻstirish jarayoni, ishlov berish va neytrallash tartiblariga tuzatishlar kiritilgan.
ASTM E2799-22: eng soʻnggi tahrir biofilm tadqiqotlaridagi eng yangi ilmiy tushunchalar va texnologik yutuqlarni aks ettiradi. U biofilmni oʻstirish, ishlov berish va tahlil qilishning takomillashtirilgan metodologiyalarini oʻz ichiga olib, sinov usulining dezinfeksiya vositalari samaradorligini hozirgi baholashlar uchun dolzarb va samarali boʻlib qolishini taʼminlaydi.

ASTM E2799 ning har bir tahriri usulning ishonchliligi, takrorlanuvchanligi va dolzarbligini yaxshilash, shu orqali uning biofilm tadqiqotlari sohasidagi ilmiy va texnologik taraqqiyotga mos boʻlib qolishini taʼminlash maqsadida amalga oshirilgan.

MBEC va MBIC tahlillari oʻrtasidagi farq nima?

MBEC (biofilmni yoʻq qilishning minimal konsentratsiyasi) va MBIC (biofilmni ingibitsiya qilishning minimal konsentratsiyasi) tahlillari oʻrtasidagi asosiy farq ularning nimaga qaratilganidadir:
MBEC tahlillari oldindan hosil boʻlgan biofilmlarni toʻliq yoʻq qilish uchun zarur boʻlgan mikroblarga qarshi vositaning eng past konsentratsiyasini oʻlchaydi va moddaning biofilm ichidagi mikroorganizmlarni oʻldirish qobiliyatini baholaydi.
MBIC tahlillari biofilmlarning dastlabki hosil boʻlishini oldini oladigan mikroblarga qarshi vositaning eng past konsentratsiyasini aniqlaydi va uning biofilm rivojlanishini ingibitsiya qilish qobiliyatini baholaydi.
Har ikkala tahlil mikroblarga qarshi vositalarning biofilmlarga nisbatan samaradorligini tushunish uchun nihoyatda muhim, biroq biofilm hayot siklining turli bosqichlariga qaratilgan.
UIP400MTP mikroplastinka sonikatori MBIC tahlillarida biofilmlarni ajratish uchun qanday ishlatilishini bilib oling!
Chidamli biofilmlarni parchalash uchun yangi mikroplastinka sonikatorlari