ASTM E2799-22 Antimikrobiyal baholash protokoli

Hielscher UIP400MTP ASTM E2799-22 protokolida sonikatsiya bosqichini tartibga solish uchun mo'ljallangan kuchli va samarali ko'p quduqli plastinka sonikatoridir. UIP400MTP butun mikrotitr plitasi bo'ylab yagona ultratovush energiyasini etkazib berish orqali hujayralarga zarar bermasdan yoki namunaning yaxlitligini buzmasdan biofilmlarni qoziq qopqoqlaridan izchil va ishonchli ajratishni ta'minlaydi. Uning yuqori o'tkazuvchanlik qobiliyati va foydalanuvchilarga qulay ishlashi qayta ishlash vaqtini sezilarli darajada qisqartiradi, shu bilan birga takrorlanuvchanlikni oshiradi, bu uni biofilmning hayotiyligini tahlil qilish va mikroblarga qarshi samaradorlik sinovlarini o'tkazadigan laboratoriyalar uchun ideal echimga aylantiradi.

ASTM E2799

ASTM E2799 - bu mikroblarga qarshi vositalarning biofilmlarga qarshi samaradorligini baholash uchun mo'ljallangan standartlashtirilgan sinov usuli bo'lib, ayniqsa Pseudomonas aeruginosaga e'tibor qaratiladi. Biofilmlar murakkab mikrobial jamoalar bo'lib, ular yuzalarga yopishadi va mikroblarga qarshi davolanishga yuqori qarshilik ko'rsatadi, bu ularni sog'liqni saqlash, sanoat va atrof-muhit sharoitida jiddiy muammoga aylantiradi. Ushbu usul biofilmning haqiqiy sharoitlarida dezinfektsiyalash vositalarini sinovdan o'tkazish uchun ishonchli va takrorlanadigan asosni ta'minlash uchun Minimal biofilmni yo'q qilish kontsentratsiyasi (MBEC) tahlilidan foydalanadi.

Sonication ASTM E2799 ga qanday hissa qo'shadi?

Sonication ASTM E2799 protokolida biofilmlarni sinov sirtlaridan ajratishni osonlashtirish orqali hal qiluvchi rol o'ynaydi, davolashdan keyin mikroblarning hayotiyligini aniq baholashni ta'minlaydi. Boshqariladigan ultratovush energiyasidan foydalangan holda, protokol hujayralarga zarar bermasdan samarali va izchil biofilm buzilishiga erishadi, bu aniq va takrorlanadigan natijalarni beradi. Bu ASTM E2799 ni biofilm tadqiqotlarini ilgari surish va mikroblarga qarshi samarali strategiyalarni ishlab chiqish uchun muhim vositaga aylantiradi.

ASTM E2799-22 ga muvofiq MBEC tahlilini qanday bajarish kerak

ASTM E2799-22 protokoli biofilmlarga qarshi mikroblarga qarshi vositalarning samaradorligini baholash bosqichlarini belgilaydi. Hielscher UIP400MTP mikrotitr plastinka sonikatoridan foydalanganda, protokol biofilmni ajratish uchun ushbu ilg'or sonikatsiya usulini qo'shish uchun moslashtirilishi mumkin. Quyida UIP400MTP mikroplastinka sonikatoridan foydalanishga moslashtirilgan qadamlar tavsifi keltirilgan:

1. Biofilmlarni tayyorlash
   Olinadigan qoziqli qopqoqli steril 96 quduqli mikrotitr plitasini tayyorlang.
   Quduqlarni mos o'sish muhitida standartlashtirilgan bakterial suspenziya bilan emlash.
   Qoziq qopqog'ini plastinka ustiga qo'ying, qoziqlar bakterial suspenziyaga to'liq botirilishiga ishonch hosil qiling.
   Qoziqlarda biofilm hosil bo'lishiga imkon berish uchun plastinkani nazorat qilinadigan sharoitlarda (masalan, harorat va vaqt) inkubatsiya qiling.
2. Antimikrobiyal vositalar bilan davolash
   Biofilm hosil bo'lgandan so'ng, muhitni turli konsentratsiyalarda sinovdan o'tgan mikroblarga qarshi vositalarni o'z ichiga olgan yangi muhit bilan almashtiring.
   Qoziq qopqog'ini qayta ulang va sinov loyihasida ko'rsatilgan sharoitlarda inkubatsiya qiling.
3. Biofilmni ajratishga tayyorgarlik
   Davolanishdan so'ng, qoldiq mikroblarga qarshi vositalarni va bo'shashmasdan yopishtirilgan plankton hujayralarini olib tashlash uchun qoziq qopqog'ini steril chayish eritmasiga botirib yuving.
4. UIP400MTP Sonicator yordamida biofilmni ajratish
   Qayta tiklash muhiti (masalan, neytrallashtiruvchi bulon) bo'lgan yangi 96 quduqli mikrotitr plitasini tayyorlang.
   Qoziq qopqog'ini tiklash muhiti plastinkasining quduqlariga qo'yib, biofilmlarni ajratib oling.
   Plitani UIP400MTP sonikatoriga soling, qopqoq va plastinka to'g'ri tekislanganligiga ishonch hosil qiling.
   Sonikatorni 70% -80% amplitudaga o'rnating va hujayra lizisiz biofilmning izchil ajralishini ta'minlash uchun tsikl rejimida 3-4 daqiqa davomida sonikatsiya qiling.
5. Biofilmning hayotiyligini baholash
   Sonikatsiyadan so'ng, ajratilgan biofilm hujayralarini o'z ichiga olgan tiklash muhitini standart mikrobiologik yoki analitik usullardan foydalangan holda qayta ishlang, masalan:
   • Koloniya hosil qiluvchi birlik (CFU) soni: yashovchan hujayralarni sanab o'tish uchun agarda ketma-ket suyultirish va plastinkani bajaring.
   • Optik zichlik (OD) o'lchovlari: Hujayra zichligini baholash uchun spektrofotometrik tahlildan foydalaning.
   • Floresansga asoslangan yashovchanlik tahlillari: lyuminestsent bo'yoqlar yordamida tirik va o'lik hujayralar miqdorini aniqlang.
6. ma'lumotlarni tahlil qilish
   Antimikrobiyal vositalarning samaradorligini aniqlash uchun davolangan va ishlov berilmagan biofilmlarning hayotiylik ma'lumotlarini solishtiring.
   Hayotiy biofilm hujayralarini yo'q qilish uchun zarur bo'lgan kontsentratsiya asosida minimal biofilmni yo'q qilish kontsentratsiyasini (MBEC) hisoblang.
7. sifat nazorati
   UIP400MTP ni muntazam ravishda kalibrlash va biofilmni ajratish jarayoni sezilarli hujayra lizisiga yoki yo'q qilinishiga olib kelmasligini tekshirish orqali izchil sonikatsiya shartlarini ta'minlang.
   Natijalarni tasdiqlash uchun ishlov berilmagan biofilmlar va faqat o'rta bo'shliqlar kabi tegishli nazorat vositalarini qo'shing.

Pimlarda hosil bo'lgan biofilm hujayralari sonikatsiya (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germaniya, UIP250MTP) orqali hujayralarni qayta tiklash uchun yangi madaniyat muhitini o'z ichiga olgan 96 quduqli plastinkalarda 5 daqiqa davomida ajratildi.
(Rasm va tadqiqot: ©de Oliveira va boshqalar, 2016)

UIP400MTP ni ASTM E2799-22 ish oqimiga integratsiyalashgan holda, biofilmni ajratish jarayoni izchillik, samaradorlik va yuqori o'tkazuvchanlik ilovalari uchun optimallashtirilgan.