UIP400MTP 96 quduqchali plastinka sonikatoridan foydalanib MBEC tahlilini oʻtkazish protokoli

MBEC tahlili shtiftli qopqoqlarda hosil boʻlgan biofilmlarni yoʻq qilish uchun zarur boʻlgan antimikrob vositalar konsentratsiyasini aniqlashda qoʻllaniladi. Biofilmning hayotchanligini baholash uchun avval biofilmlarni 96 quduqchali plastinkaning shtiftli qopqoqlaridan ajratish kerak. Ultratovush bilan ishlov berish bunday ajratishning eng ishonchli va samarali usulidir. UIP400MTP koʻp quduqchali plastinka sonikatori tahlil plastinkalariga maksimal samaradorlik va qulaylik bilan ishlov berish uchun maxsus ishlab chiqilgan boʻlib, koʻp sonli namunalar bilan bajariladigan MBEC tahlillarini soddalashtiradi va tezlashtiradi.

Biofilmni ajratish uchun ultratovush bilan ishlov berish

Ultratovush bilan ishlov berish biofilmni yoʻq qilishning minimal konsentratsiyasi (MBEC) tahlillarida muhim bosqich boʻlib, biofilm hujayralarini ular birikkan yuzadan samarali ajratish imkonini beradi. Biofilmlar tabiatan hujayradan tashqari matritsa bilan oʻralgan, muayyan tuzilishga ega mikroorganizmlar jamoalaridir; bu ularni plankton hujayralarga nisbatan antimikrob vositalarga ancha chidamli qiladi. MBEC tahlillari davomida ultratovush bilan ishlov berishda nazorat qilinadigan kavitatsiyani hosil qilish uchun ultratovush toʻlqinlaridan foydalaniladi, natijada biofilm matritsasi parchalanadi va uning ichidagi hujayralar suspenziyaga ajralib chiqadi. Bu bosqich biofilm hujayralarining tiklash muhitida bir tekis tarqalishini taʼminlab, ekish, suyultirish yoki spektrofotometrik usullar orqali hayotchanlikni aniq baholashni osonlashtiradi. Biofilm toʻgʻri ajratilmasa, qoldiq matritsa tarkibiy qismlari hujayralarni himoya qilishi mumkin, bu esa antimikrob samaradorlikning past baholanishiga olib keladi. Shuning uchun tekshirilayotgan vositalarning haqiqiy yoʻq qilish salohiyatini aks ettiradigan ishonchli va takrorlanuvchan MBEC qiymatlarini olishda ultratovush bilan ishlov berish ajralmas ahamiyatga ega. UIP400MTP koʻp quduqchali plastinka sonikatori tahlil plastinkalarida koʻp sonli namunalarni oson tayyorlash imkonini beradi.

Biofilmni yoʻq qilishning minimal konsentratsiyasi (MBEC) tahlili protokoli

1-bosqich: Biofilm hosil qilish

1. Bakterial suspenziyani tayyorlang:
   Bakteriyalarni tegishli muhitlarda oʻsishning logarifmik fazasigacha oʻstiring.
   Bakterial kulturani belgilangan optik zichlikkacha (masalan, OD600 ~0,1) suyultiring.
2. 96 quduqchali plastinkaga inokulyatsiya qiling:
   Standart 96 quduqchali mikrotitr plastinkasining har bir quduqchasiga bakterial suspenziya (masalan, 150–200 µL) qoʻshing.
3. Shtiftli qopqoqni oʻrnating:
   Shtift yuzalarida biofilm hosil boʻlishiga imkon berish uchun shtiftli qopqoqni inokulyatsiya qilingan plastinkaga joylashtiring.
4. Plastinkani inkubatsiya qiling:
   Biofilm oʻsishini ragʻbatlantirish uchun yigʻilgan tizimni tegishli haroratda (masalan, 37°C) 24–48 soat davomida chayqatmasdan inkubatsiya qiling.

2-bosqich: Antimikrob vositalar bilan ishlov berish

• Antimikrob eritmalarni tayyorlang:
  Yangi muhitlarda antimikrob vositalarning turli konsentratsiyalarini tayyorlang.
  Biofilmlarga antimikrob vositalar taʼsir ettiring:
  Shtiftli qopqoqni bakterial kulturadan oling va plankton hujayralarni olib tashlash uchun uni steril fiziologik eritma yoki PBS bilan chaying.
  Shtiftli qopqoqni antimikrob eritmalar saqlovchi yangi 96 quduqchali plastinkaga joylashtiring.
• Plastinkani inkubatsiya qiling:
  Antimikrob vositalar taʼsir etishi uchun belgilangan vaqt davomida (masalan, 24 soat) inkubatsiya qiling.

3-bosqich: UIP400MTP 96 quduqchali plastinka sonikatori bilan ultratovush orqali ishlov berish

Ultratovush bilan ishlov berish bosqichi hayotchanlikni baholash uchun biofilmlarni shtiftli qopqoqlardan ajratishda hal qiluvchi ahamiyatga ega. UIP400MTP sonikatori uchun quyidagi bosqichlarni bajaring:

1. Tizimni tayyorlang:
   Yangi 96 quduqchali plastinkaning har bir quduqchasiga tiklash muhitini (masalan, neytrallovchi bulyon yoki yangi oʻstirish muhiti) soling.
2. Shtiftli qopqoqni koʻchiring:
   Shtiftli qopqoqni antimikrob ishlov berish plastinkasidan oling.
   Antimikrob vositalar qoldiqlarini olib tashlash uchun shtiftli qopqoqni steril fiziologik eritma yoki PBS bilan chaying.
3. Plastinka va sonikatorni joylashtiring:
   Shtiftli qopqoqni tiklash muhiti saqlovchi plastinkaga oʻrnating.
   Tiklash muhiti saqlovchi plastinkani UIP400MTP sonikatori platformasiga joylashtiring va plastinka markazda hamda barqaror turganiga ishonch hosil qiling.
4. Ultratovush bilan ishlov berish parametrlarini sozlang:
   UIP400MTP qurilmasida ultratovush bilan ishlov berish parametrlarini belgilang (sozlamalarni biofilmga moslashtirish mumkin):
   Amplituda: 70–100%.
   Ultratovush bilan ishlov berish vaqti: sikl rejimida 1–3 daqiqa (biofilmning mustahkamligiga qarab sozlang).
5. Ultratovush bilan ishlov bering:
   Ultratovush bilan ishlov berish jarayonini boshlang. Ultratovush tebranishlari biofilmlarni shtift yuzalaridan tiklash muhitiga ajratib chiqaradi.
6. Jarayonni kuzating:
   Quduqchalardagi namuna haroratini kuzatish uchun ulanadigan harorat datchigidan foydalaning. Sovitish uchun UIP400MTP qurilmasini laboratoriya sovitgichiga ulash mumkin.
7. Ultratovush bilan ishlov berishdan keyingi amallar:
   Keyingi tahlil uchun tiklash muhitini (endi ajratilgan biofilmlarni saqlaydi) darhol yangi steril plastinkaga koʻchiring.

(A) Tarkibida 2% glyukozali TSB boʻlgan plastinka biofilm hosil qilish, hujayralarni tiklash va
MIC va MBCB ni aniqlash uchun ishlatiladi; (B) Stafilokokk biofilmlarini hosil qilish uchun shtiftli qopqoq. MIC va MBCB ni aniqlash; (B) Stafilokokk biofilmlarini hosil qilish uchun shtiftli qopqoq.
Shtiftlarda hosil boʻlgan biofilm hujayralari hujayralarni tiklash uchun yangi kultura muhiti saqlovchi 96 quduqchali plastinkalarda 5 min davomida ultratovush bilan ishlov berish (Hielscher Ultrasound Technology) orqali ajratildi.
(Rasm va tadqiqot: ©de Oliveira et al., 2016)

4-bosqich: Hayotchanlikni baholash

Ajratilgan biofilmlarni eking va oʻstiring:

1. Koloniya hosil qiluvchi birliklarni (CFU) sanash uchun tiklash muhitini ketma-ket suyultiring va agarga eking.
   Muqobil ravishda, kolorimetrik yoki fluoressensiyaga asoslangan hayotchanlik tahlilidan foydalaning.
2. Natijalarni qayd eting:
   MBEC ni biofilmning aniqlanadigan hayotchanligini yoʻq qilgan antimikrob vositaning eng past konsentratsiyasi sifatida aniqlang.

Loyihalash, ishlab chiqarish va maslahat berish – Germaniyada yaratilgan sifat

Hielscher ultratovush qurilmalari oʻzining eng yuqori sifat va loyihalash standartlari bilan yaxshi tanilgan. Mustahkamlik va oson boshqarish ultratovush qurilmalarimizni sanoat korxonalariga muammosiz integratsiya qilish imkonini beradi. Hielscher sonikatorlari ogʻir sharoitlar va yuqori talablar qoʻyiladigan muhitlarda oson ishlaydi.

Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya boʻlib, eng zamonaviy texnologiya va foydalanish qulayligini oʻzida mujassam etgan yuqori unumdor ultratovush qurilmalariga alohida eʼtibor qaratadi. Albatta, Hielscher ultratovush qurilmalari CE talablariga mos keladi hamda UL, CSA va RoHs talablariga javob beradi.

MBEC tahlilidan foydalangan holda dezinfeksiyalovchi vositalarning Pseudomonas aeruginosa biofilmiga qarshi samaradorligini tekshirishga qaratilgan ASTM E2799 protokoli davomida UIP400MTP qurilmasi namunalarni tayyorlash bosqichida biofilmni ajratish uchun qanday qoʻllanilishini shu yerda oʻqing.