96-quduqli Plate Sonicator UIP400MTP yordamida MBEC Assay Protocol
MBEC tahlili qoziq qopqoqlarida hosil bo'lgan biofilmlarni yo'q qilish uchun zarur bo'lgan antimikrobiyal vositalar kontsentratsiyasini aniqlash uchun ishlatiladi. Biofilmning hayotiyligini baholash uchun avval biofilmlarni 96 quduqli plastinkaning qoziq qopqoqlaridan ajratish kerak. Sonication - bu otryad uchun eng ishonchli va samarali usul. UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatori tahlil plitalarini maksimal samaradorlik va qulaylik bilan qayta ishlash, yuqori o'tkazuvchanlik MBEC tahlillarini tartibga solish va tezlashtirish uchun maxsus mo'ljallangan.
Biofilm dekolmanı uchun sonikatsiya
Sonikatsiya biofilmni yo'q qilishning minimal kontsentratsiyasi (MBEC) tahlillarida muhim qadam bo'lib, biofilm hujayralarini ularning sirt biriktirilishidan samarali ravishda olib tashlashga imkon beradi. Biofilmlar hujayradan tashqari matritsaga o'ralgan mikroorganizmlarning tabiatan tuzilgan jamoalari bo'lib, bu ularni planktonik hujayralarga nisbatan mikroblarga qarshi vositalarga sezilarli darajada chidamli qiladi. MBEC tahlillari paytida ultratovush to'lqinlarini ultratovush to'lqinlaridan foydalanib, boshqariladigan kavitatsiyani hosil qiladi, biofilm matritsasini buzadi va o'rnatilgan hujayralarni suspenziyaga chiqaradi. Ushbu qadam biofilm hujayralarining tiklanish muhitida bir tekis taqsimlanishini ta'minlaydi, bu esa qoplama, suyultirish yoki spektrofotometrik usullar orqali aniq hayotiylikni baholashga yordam beradi. To'g'ri biofilm ajratilmasa, qoldiq matritsa komponentlari hujayralarni himoya qilishi mumkin, bu esa mikroblarga qarshi samaradorlikni kam baholanishiga olib keladi. Shuning uchun, sonikatsiya ishonchli va takrorlanadigan MBEC qiymatlarini olish uchun ajralmas bo'lib, sinovdan o'tgan agentlarning haqiqiy yo'q qilish potentsialini aks ettiradi. UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatori tahlil plitalarida oson yuqori o'tkazuvchanlik namunalarini tayyorlashga imkon beradi.
Ko'p quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP tahlil plitalarida yuqori o'tkazuvchanlik namunalarini tayyorlashni osonlashtiradi.
Minimal biofilmni yo'q qilish kontsentratsiyasi (MBEC) tahlil protokoli
1-qadam: Biofilm shakllanishi
- Bakterial suspenziyani tayyorlang:
Log-faza o'sishi uchun bakteriyalarni tegishli muhitda o'stiring.
Bakterial madaniyatni belgilangan optik zichlikka (masalan, OD600 ~ 0,1) suyultiring. - 96-quduqli plastinkani emlash:
Bakterial suspenziyani (masalan, 150–200 µL) standart 96-quduqli mikrotitr plastinkasining har bir qudug‘iga qo‘shing. - Qopqoq qopqog'ini mahkamlang:
Qoziq yuzalarida biofilm shakllanishiga imkon berish uchun qoziq qopqog'ini emlangan plastinka ustiga qo'ying. - Plitani inkubatsiya qiling:
Biofilm o'sishini rag'batlantirish uchun moslamani mos haroratda (masalan, 37 ° C) 24-48 soat davomida silkitmasdan inkubatsiya qiling.
2-qadam: Antimikrobiyal vositalar bilan davolash
- Antimikrobiyal eritmalarni tayyorlang:
Yangi muhitda bir qator mikroblarga qarshi konsentratsiyalarni tayyorlang.
Biofilmlarni mikroblarga qarshi vositalarga ta'sir qilish:
Planktonik hujayralarni olib tashlash uchun bakterial madaniyatdan qoziq qopqog'ini olib tashlang va steril sho'r suv yoki PBS bilan yuving.
Qoziq qopqog'ini mikroblarga qarshi eritmalar solingan yangi 96 quduqli plastinkaga joylashtiring. - Plitani inkubatsiya qiling:
Antimikrobiyal ta'sir qilish uchun ma'lum muddat (masalan, 24 soat) inkubatsiya qiling.
Ko'p quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP yuqori o'tkazuvchanlik namunalarini tayyorlash uchun
3-qadam: 96-quduqli Plitalar Sonicator UIP400MTP bilan sonikatsiya
Sonikatsiya bosqichi biofilmlarni qoziq qopqog'idan ajratish uchun hayotiylikni baholash uchun juda muhimdir. UIP400MTP sonikatori uchun quyidagi amallarni bajaring:
- O'rnatishni tayyorlang:
Har bir quduqqa 96-quduqli yangi plastinkani qayta tiklash muhiti (masalan, neytrallashtiruvchi bulon yoki yangi o'sish muhiti) bilan to'ldiring. - Qopqoq qopqog'ini o'tkazing:
Antimikrobiyal davolash plastinkasidan qoziq qopqog'ini olib tashlang.
Qoldiq mikroblarga qarshi vositalarni olib tashlash uchun qoziq qopqog'ini steril sho'r suv yoki PBS bilan yuving. - Plastinka va sonikatorni joylashtiring:
Qoziq qopqog'ini qutqaruvchi vosita plastinkasiga ulang.
Qayta tiklash o'rta plitasini UIP400MTP sonikator platformasiga joylashtiring va plastinka markazlashtirilgan va barqaror bo'lishini ta'minlang. - Sonikatsiya parametrlarini sozlang:
UIP400MTP da sonikatsiya parametrlarini o'rnating (Sozlamalar biofilmga sozlanishi mumkin):
Amplituda: 70–100%.
Sonikatsiya vaqti: sikl rejimida 1-3 daqiqa (biofilm mustahkamligiga qarab sozlang). - Sonicate:
Sonikatsiya jarayonini boshlang. Ultrasonik tebranish biofilmlarni qoziq yuzalaridan qayta tiklash muhitiga olib tashlaydi. - Jarayonni kuzatib boring:
Quduqlardagi namuna haroratini kuzatish uchun o'rnatilgan harorat sensori foydalaning. UIP400MTP sovutish uchun laboratoriya chilleriga ulanishi mumkin. - Sonikatsiyadan keyingi ishlov berish:
Darhol qayta tiklash muhitini (hozirda ajratilgan biofilmlarni o'z ichiga olgan) quyi oqim tahlili uchun yangi steril plastinkaga o'tkazing.
(A) 2% glyukozali TSB bo'lgan plastinka biofilm hosil qilish, hujayralarni tiklash va
MIC va MBCB ni aniqlash; (B) Stafilokokk biofilmlarini hosil qilish uchun pinli qopqoq. MIC va MBCB ni aniqlash; (B) Stafilokokk biofilmlarini hosil qilish uchun pinli qopqoq.
Pimlarda hosil bo'lgan biofilm hujayralari sonikatsiya (Hielscher Ultrasound Technology) yordamida hujayralarni qayta tiklash uchun yangi madaniyat muhitini o'z ichiga olgan 96 quduqli plastinkalarda 5 daqiqa davomida ajratilgan.
(Rasm va tadqiqot: ©de Oliveira va boshqalar, 2016)
4-qadam: Hayotiylikni baholash
Plitalar va kulturadan ajratilgan biofilmlar:
- Koloniya hosil qiluvchi birliklarni (CFU) sanab o'tish uchun qayta tiklash muhiti va plastinkani agar ustiga ketma-ket suyultirishni amalga oshiring.
Shu bilan bir qatorda, kolorimetrik yoki flüoresansga asoslangan hayotiylik tahlilidan foydalaning. - Natijalarni qayd etish:
MBEC ni mikroblarga qarshi vositaning eng past konsentratsiyasi sifatida aniqlang, bu aniqlangan biofilmning hayotiyligini yo'q qiladi.
Dizayn, ishlab chiqarish va konsalting – Germaniyada ishlab chiqarilgan sifat
Hielscher ultrasonikatorlari eng yuqori sifat va dizayn standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va qulay foydalanish ultratovush qurilmalarimizni sanoat ob'ektlariga muammosiz integratsiya qilish imkonini beradi. Qiyin sharoitlar va talabchan muhit Hielscher sonikatorlari tomonidan osonlik bilan boshqariladi.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya bo'lib, eng zamonaviy texnologiya va foydalanuvchilarga qulaylik bilan ajralib turadigan yuqori samarali ultratovush apparatlariga alohida e'tibor beradi. Albatta, Hielscher ultrasonikatorlari Idoralar talablariga javob beradi va UL, CSA va RoHs talablariga javob beradi.
96 quduqli plitalar va tahlil plitalarida namuna tayyorlashni soddalashtiring ko'p quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP yordamida
Adabiyot / Adabiyotlar
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
- Microplate Sonicator Validated in Peer-Reviewed Proteomics Study
tez-tez so'raladigan savollar
MBEC tahlili nima?
Minimal biofilmni yo'q qilish kontsentratsiyasi (MBEC) tahlili biofilm bilan bog'liq bakteriyalarni yo'q qilish uchun zarur bo'lgan mikroblarga qarshi vositaning eng past konsentratsiyasini aniqlash uchun ishlatiladigan standartlashtirilgan usuldir. Bu ixtisoslashtirilgan sirtlarda biofilmlarni o'stirish, ularni turli mikroblarga qarshi konsentratsiyalarga ta'sir qilish va davolash samaradorligini baholash uchun odatda sonikatsiya orqali biofilm buzilganidan keyin ajratilgan hujayralarning hayotiyligini baholashni o'z ichiga oladi.
MBIC va MBEC o'rtasidagi farq nima?
Minimal biofilmni inhibe qiluvchi kontsentratsiya (MBIC) biofilm hosil bo'lishining oldini olish uchun zarur bo'lgan mikroblarga qarshi vositaning eng past konsentratsiyasidir, minimal biofilmni yo'q qilish kontsentratsiyasi (MBEC) esa o'rnatilgan biofilmni yo'q qilish uchun zarur bo'lgan eng past konsentratsiyadir. MBIC biofilmning oldini olishga e'tibor qaratadi, MBEC esa etuk biofilmlarga qarshi davolash samaradorligini baholaydi.
MBEC tahlillari uchun qanday plitalar odatda ishlatiladi?
MBEC tahlillari uchun odatda ishlatiladigan mikrotiter plitalari odatda polistirol yoki polipropilendan tayyorlangan 96 quduqli plitalardir. Ushbu materiallar biofilm shakllanishi uchun mos sirtni ta'minlaydi va tahlil davomida sinovdan o'tgan mikroblarga qarshi vositalarga kimyoviy jihatdan chidamli. Polistirol plitalari optik tiniqligi tufayli keng tarqalgan bo'lib afzal ko'riladi, bu esa spektrofotometrik yoki flüoresansga asoslangan o'lchovlar kabi quyi oqim tahlillari uchun foydalidir. Ushbu plitalarning dizayni olinadigan qoziq qopqoqlarini o'z ichiga oladi, ular tahlil uchun zarurdir, chunki o'sish muhitini o'z ichiga olgan quduqlarga botiriladigan qoziqlarda bioplyonkalar hosil bo'ladi. MBEC tahlil protokoliga mos keladiganlar kabi standartlashtirilgan plitalar UIP400MTP sonikatori yoki boshqa ishlov berish uskunalari bilan takrorlanuvchanlik va moslikni ta'minlash uchun maxsus ishlab chiqilgan.
PEG-qopqoq plitalari nima?
PEG-qopqoq plitalari ixtisoslashgan ko'p quduqli plastinka tizimlari bo'lib, qopqoq har bir quduqqa cho'zilgan kichik polietilen glikol (PEG) qoziqlar yoki pinlar bilan jihozlangan. Ushbu qoziqlar nazorat ostidagi sharoitlarda mikrobial biofilm hosil bo'lishi uchun sirtni ta'minlaydi va haqiqiy biofilm o'sishiga taqlid qiladi. Dizayn biofilmlarning qoziqlarda rivojlanishiga imkon beradi, quduqlarda o'sish muhiti yoki antimikrobiyal vositalar mavjud bo'lib, MBEC va MBIC tahlillari kabi davolashlarga biofilmning sezgirligini yuqori o'tkazuvchanlik bilan sinovdan o'tkazish imkonini beradi.
Hielscher Ultrasonics kompaniyasi yuqori samarali ultratovushli homogenizatorlarni ishlab chiqaradi laboratoriya uchun sanoat hajmi.