Ultratovush yordamida o'simlik hujayralarida genetik transformatsiya

Sonication-Assisted Agrobacterium-mediated Transformation (SAAT) - bu Agrobacterium tashuvchisi sifatida o'simlik hujayralarini begona genlar bilan yuqtirishning samarali usuli. Ultrasonik kavitatsiya o'simlik to'qimalarining maqsadli mikro yaralanishi deb ta'riflanishi mumkin bo'lgan sonoporatsiyani keltirib chiqaradi. Ushbu ultratovush yordamida mikro-yaralar hosil qiladi, DNK va DNK vektorlari hujayra matritsasiga samarali tarzda o'tkazilishi mumkin.

Sonoporatsiya – Ultrasonik takomillashtirilgan hujayra transformatsiyasi

Ultrasonicator UP100H ko'pincha hujayra madaniyati plitalarining namunalarini tayyorlash uchun ishlatiladigan laboratoriya gomogenizatoridir.Hujayra suspenziyalariga past chastotali ultratovush (taxminan 20 kHz) qo'llanilganda, akustik kavitatsiya ta'siri hujayra to'qimalarida vaqtinchalik membrana o'tkazuvchanligini keltirib chiqaradi. Ushbu ultratovush effekti sonoporatsiya deb nomlanadi va genlarni hujayralar yoki to'qimalarga o'tkazish uchun ishlatiladi.
Ultrasonikatsiyaning afzalliklari uning termal bo'lmagan mexanik ish printsipiga asoslanadi, bu esa sonikatsiyani ko'pincha ko'p qirrali va hujayra turlariga kamroq bog'liq qiladi. Sonoporatsiyaning ko'p qirrali qo'llanilishi insonning murakkab terapevtik oqsillarini bioproduktsiyasida muhim salohiyatga ega bo'lgan transgen o'simliklardan foydalanish imkoniyatini ochadi. Bunday o'simlikka asoslangan bioreaktorlar genetik jihatdan oson o'zgartirilishi mumkin, inson patogenlari bilan potentsial ifloslanishning oldini oladi, transformatsiya vositachisi bakteriyalarga (masalan, Agrobacterium) zarar etkazmaydi va biosintezning arzon, samarali usuli hisoblanadi.

Ma'lumot so'rovini




Bizning e'tibor bering Maxfiylik siyosati.


Ultrasonicator UP200St, genetika, mikrobiologiya va hujayra transformatsiyasi uchun 200 vatt kuchli zond tipidagi ultrasonikator.

Ultrasonikator UP200St (200W, 26kHz) ovoz muhofazasi bilan

Videoda UIP400MTP ultratovush namunalarini tayyorlash tizimi ko'rsatilgan, bu yuqori intensivlikdagi ultratovush yordamida har qanday standart ko'p quduqli plitalarning ishonchli namunalarini tayyorlash imkonini beradi. UIP400MTP ning odatiy ilovalari hujayra lizisini, DNK, RNK va xromatinni kesish, shuningdek, oqsillarni ajratib olishni o'z ichiga oladi.

Ultrasonikator UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatsiyasi uchun

Ultratovush yordamida hujayra transformatsiyasi

UP200St kabi prob tipidagi ultrasonikatorlar ishonchli to'qimalar homogenizatorlari bo'lib, genetikada namuna tayyorlash uchun keng qo'llaniladi, masalan, Sonication-Assisted Agrobacterium-mediated Transformation (SAAT) uchun.Sonication - bu past chastotali ultratovush to'lqinlarini eritmadagi zarrachalarni aralashtirish, eritmalarni aralashtirish va shu bilan massa o'tkazish va erish tezligini oshirish uchun qo'llaydigan texnikadir. Bir vaqtning o'zida sonikatsiya suyuqliklardan erigan gazlarni olib tashlashi mumkin. O'simliklarni o'zgartirishda sonikatsiya o'simlik to'qimalarida mikro yaralar paydo bo'lishiga olib keladi va yalang'och DNKni o'simlik protoplastiga etkazib berishni kuchaytiradi.

Genetik transformatsiya uchun Sonication-Assisted Agrobacterium-vositali Transformation (SAAT) afzal qilingan usul bo'lib, yalang'och DNK va DNK vektorlarini to'g'ridan-to'g'ri protoplastga o'tkazish uchun ishlatiladigan sonikatsiyaga qaraganda ancha yuqori samaradorlikka ega. Ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, sonikatsiya yordamida Agrobacterium vositachiligidagi transformatsiya (SAAT) ultratovush to'lqinlari va natijada akustik kavitatsiya orqali o'simlik hujayralarida mexanik buzilish va yaralar hosil bo'lishi uchun ishlatilishi mumkin. Qisqa ultratovushli davolash eksplantlar yuzasida mikro yaralar hosil qiladi. Yaralangan hujayralar Agrobakteriyalarning o'simlik to'qimalarining chuqur qismiga kirib borishiga imkon beradi, bu esa o'simlik hujayralarining infektsiyalanishi ehtimolini oshiradi. Bundan tashqari, ajralib chiqadigan fenolik birikmalar transformatsiyani kuchaytiradi. Ultratovush yordamida hosil bo'lgan mikro-yaralar bakteriyalarning eksplantga kirib borishini ham amalga oshiradi. SAAT, ayniqsa, Agrobacteriumga chidamli bo'lgan o'simlik turlarida genetik transformatsiya uchun muvaffaqiyatli ishlatilgan.
Juda oddiy va arzon usul bo'lishi, shuningdek, Agrobacterium vositachiligida gen transferini sezilarli darajada yaxshilash SAATning asosiy afzalliklari hisoblanadi. Chenopodium rubrum L. va Beta vulgaris L. transformatsiyasida SAATni muvaffaqiyatli qo'llashdan tashqari, ushbu yondashuv Nicotiana tabacumda rekombinant Escherichia coli yovvoyi turdagi issiqlikka chidamli golotoksin va Escherichia coli mutant LT vaktsina adjuvantlarini ishlab chiqarishda ham qo'llanilgan. , unda eng yuqori tizimli LT-B-ga xos IgG titrlari qushlarda aniqlangan.
(Qarang: Laere va boshqalar, 2016; M. Klimek-Chodacka va R. Baranski, 2014).

VialTweeter-dan reja hujayralarining DNK infektsiyasi uchun ishlatilishi mumkin, masalan, sonikatsiya yordamida Agrobakteriya vositachiligidagi transformatsiya (SAAT) yordamida

VialTweeter bir vaqtning o'zida bir nechta namunali naychalarni sonikatsiya qilish uchun, masalan, sonikatsiya yordamida Agrobakteriya vositachiligidagi transformatsiya (SAAT)

Sonication-Assisted Agrobacterium-mediated Transformation (SAAT) ning ilmiy jihatdan tasdiqlangan afzalliklari

Sonication-Assisted Agrobacterium-mediated Transformation (SAAT) ko'plab o'simlik turlariga qo'llanilgan. O'simlik hujayralari madaniyatini qisqa va nisbatan yumshoq ultratovush bilan davolash sonoporatsiyani keltirib chiqaradi, bu keyinchalik Agrobakteriyaning gen tashuvchisi sifatida chuqur kirib borishiga imkon beradi. Quyida SAAT ning foydali ta'sirini ko'rsatadigan namunali tadqiqotlarni o'qishingiz mumkin.

Ashwagandhaning ultratovush yordamida o'zgarishi

W. somniferada (ashwagandha yoki qishki gilos sifatida tanilgan) transformatsiya samaradorligini oshirish uchun Dehdashti va uning hamkasblari (2016) asetosiringon (AS) va sonikatsiyadan foydalanishni o'rgandilar.
Asetosiringon (AS) uch bosqichda qo'shildi: Agrobacterium suyuq madaniyati, Agrobacterium infektsiyasi va Agrobacterium bilan eksplantlarning birgalikda madaniyati. Agrobacterium suyuq madaniyatiga 75 mkM AS qo'shilishi vir genlarini induktsiya qilish uchun maqbul deb topildi.
Sonikatsiyaning qo'shimcha qo'llanilishi (SAAT) eng yuqori gen ekspressiyasiga olib keldi. Barglar va kurtaklar uchlari mos ravishda 10 va 20 soniya davomida sonikatsiyalanganda tukli ildizlardagi gusA genining ifodasi eng yaxshi ekanligi aniqlandi. Yaxshilangan protokolning transformatsiya samaradorligi barg va kurtak uchi eksplantlarida mos ravishda 66,5 va 59,5% ni tashkil etdi. Boshqa protokollar bilan solishtirganda, ushbu takomillashtirilgan protokolning transformatsiya samaradorligi barglar uchun 2,5 baravar va otish uchlari uchun 3,7 baravar yuqori ekanligi aniqlandi. Southern blot tahlillari W1-W4 qatorlarida gusA transgenining 1-2 nusxasini tasdiqladi, takomillashtirilgan protokol tomonidan yaratilgan W5 liniyasida esa 1-4 transgen nusxasi aniqlandi.

Sonikatsiya davomiyligi (ultratovushga ta'sir qilish vaqti) W. somniferada o'zgarishiga sonication yordamida Agrobacterium vositachiligidagi transformatsiyaga (SAAT) ta'sir qiladi.

Somnifera bargi (a) va kurtak uchi (b) eksplantlarining transformatsiya chastotasiga sonikatsiya yordamida Agrobakteriya vositachiligidagi transformatsiya (SAAT) davomiyligining ta'siri
(o'rganish va grafik: © Dehdashti va boshqalar, 2016)

Ma'lumot so'rovini




Bizning e'tibor bering Maxfiylik siyosati.


Paxtani ultratovush yordamida o'zgartirish

Hussain va boshqalar. (2007) sonikatsiya yordamida paxta transformatsiyasining foydali ta'sirini ko'rsatadi. Past chastotali ultratovush natijasida kelib chiqqan akustik kavitatsiya o'simlik to'qimalarining yuzasida va ostida mikro yaralar hosil qiladi (sonoporatsiya) va Agrobacteriumning o'simlik to'qimalari bo'ylab chuqurroq va to'liq harakatlanishiga imkon beradi. Ushbu yaralanish modasi to'qimalarda chuqurroq joylashgan o'simlik hujayralarini yuqtirish ehtimolini oshiradi. SAAT ning transformatsiya samaradorligini baholash uchun GUS gen ifodasi o'lchandi. GUS reportyor tizimi reportyor gen tizimi bo'lib, ayniqsa o'simliklar molekulyar biologiyasi va mikrobiologiyasida foydalidir. Turli SAAT parametrlarini sozlash, eksplant sifatida etuk embrionlardan foydalangan holda paxtada GUS vaqtinchalik ifodasi sezilarli darajada yaxshilandi. GUS birinchi marta eksplantlar inkubatsiya qilinganidan keyin 24 soat o'tgach aniqlandi va 48 soat ichida GUS ifodasi juda qizg'in bo'ldi, bu sonikatsiya yordamida Agrobacterium vositachiligidagi transformatsiyadan (SAAT) keyin paxta eksplantining muvaffaqiyatli transformatsiyasining foydali ko'rsatkichi bo'lib xizmat qildi. Turli xil transformatsiya usullarini (masalan, biolistik, Agro, BAAT, SAAT), sonikatsiya yordamida Agrobacterium vositachiligidagi transformatsiyani (SAAT) taqqoslash transformatsiyaning eng yaxshi natijalarini ko'rsatdi.

Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation (SAAT) muqobil infektsiya usullari bilan solishtirganda sezilarli darajada yuqori vaqtinchalik ifodani ko'rsatadi.

GUSning vaqtinchalik ifodasi asosida transformatsiya protsedurasini tanlash. Sonication-assisted Agrobacterium-vositali transformatsiya (SAAT) sezilarli darajada yuqori vaqtinchalik ifodani ko'rsatadi.
(o'rganish va grafik: © Hussain va boshqalar, 2007)

Sonoporation va SAAT uchun yuqori samarali ultratovushli echimlar

Hielscher Ultrasonics laboratoriyalar, tadqiqot ob'ektlari, shuningdek, juda yuqori o'tkazuvchanlikka ega sanoat ishlab chiqarishi uchun yuqori samarali ultrasonikatorlarni ishlab chiqish va ishlab chiqarishda uzoq vaqt tajribaga ega. Mikrobiologiya va hayot fanlari uchun Hielscher muayyan to'qimalar va ularni davolash uchun zarur bo'lgan turli talablarni qondirish uchun turli xil echimlarni taklif qiladi. Ko'p sonli namunalarni bir vaqtning o'zida ultratovush qilish uchun Hielscher ko'p teshikli plitalar uchun UIP400MTP, 10 flakongacha (masalan, Eppendorf naychalari) sonication uchun VialTweeter yoki ultratovushli CupHorn ni taklif qiladi. Prob tipidagi ultrasonikatorlar laboratoriya gomogenizatorlari sifatida 50 dan 400 vattgacha, sanoat tizimlari esa 500 vattdan 16 kVtgacha bo'lgan quvvat oralig'ini qamrab oladi.
Iltimos, biz bilan bog'laning va arizangiz va jarayoningiz talablari haqida bizga xabar bering. Bizning tajribali xodimlarimiz sizning biologik jarayoningiz uchun eng mos ultratovush apparatini tavsiya qilishdan mamnun bo'lishadi.
Quyidagi jadval sizga bizning ultrasonicators taxminiy qayta ishlash quvvatiga ega ekanligidan dalolat beradi:

Buyurtma miqdori Oqim darajasi Tavsiya Qurilmalar
ko'p teshikli / mikrotitrli plitalar ga UIP400MTP
10 flakongacha ga VialTweeter
5 flakon/naychagacha yoki 1 ta kattaroq idish ga Cuphorn
1 500ml uchun 10 200ml / min uchun UP100H
10 2000mL uchun 20 400ml / min uchun Uf200 ः t, UP400St
0.1 20L 04L / min uchun .2 UIP2000hdT
10 100L uchun 10L 2 / min UIP4000hdT
ga 10 100L / min uchun UIP16000
ga katta Klaster UIP16000

Biz bilan bog'lanish! Bizdan so'rang!

Qo'shimcha ma'lumotni so'rang

Iltimos, ultrasonikatorlarimiz, ularning ilovalari va narxi haqida qo'shimcha ma'lumot so'rash uchun quyidagi shaklni to'ldiring. Biz sizning jarayoningizni siz bilan muhokama qilishdan va sizning talablaringizni qondiradigan ultratovush tizimini taklif qilishdan mamnun bo'lamiz!









Iltimos, bizning e'tibor bering Maxfiylik siyosati.



Ultrasonik yuqori kesish gomogenizatorlari laboratoriya, dastgoh, uchuvchi va sanoat ishlov berishda qo'llaniladi.

Hielscher Ultrasonics laboratoriya, uchuvchi va sanoat miqyosida dasturlarni aralashtirish, tarqatish, emulsifikatsiya va ekstraktsiya qilish uchun yuqori samarali ultratovushli homogenizatorlarni ishlab chiqaradi.



Adabiyotlar / Adabiyotlar


Yuqori samarali ultratovush! Hielscherning mahsulot assortimenti ixcham laboratoriya ultratovush qurilmasidan to'liq sanoat ultratovush tizimlariga qadar to'liq spektrni qamrab oladi.

Hielscher Ultrasonics kompaniyasi yuqori samarali ultratovushli homogenizatorlarni ishlab chiqaradi laboratoriya uchun sanoat hajmi.