Ultrasonikatsiya bilan tayyorlangan buferli eritmalar
Lizis tamponlari ultratovushli to'qima gomogenizatorlari yordamida samarali va tez tayyorlanishi mumkin. Ultrasonikatorlar aralashtirish, eritish va tarqatish uchun orzu vositasi bo'lganligi sababli, ular liziz buferlarini ishonchli va foydalanuvchilarga qulay tarzda tayyorlashga imkon beradi.
Lizis tamponlarini ultratovush yordamida tayyorlash
Ultrasonik to'qimalarni gomogenizatorlari hujayra buzilishi, lizis va ekstraktsiya uchun keng tarqalgan vositadir, shuning uchun ko'pchilik laboratoriyalarda mavjud. Prob tipidagi ultrasonikatorlar uchun ikkinchi darajali dastur lizis buferlarini tayyorlashdir.
Lizis buferi - bu hujayralarni ochish (lizis) va ularning tarkibini quyi oqim tahlili uchun chiqarish uchun ishlatiladigan eritma. Lizis buferining o'ziga xos tarkibi lizing qilinadigan hujayralar turiga va quyi oqim qo'llanilishiga qarab farq qilishi mumkin. Shu bilan birga, odatiy lizis tamponida yuvish vositalari, tuzlar va proteaz inhibitörleri kabi komponentlar mavjud. Lizatning pH va osmolyarligini tartibga solish uchun odatda bufer tuzlari (masalan, Tris-HCl) va ion tuzlari (masalan, NaCl) ishlatiladi.
Lizis buferini yaratish uchun komponentlar tegishli konsentratsiyalarda va pHda aralashtiriladi. Aralash odatda aralashtiriladi yoki komponentlar eritmaguncha va eritma bir hil holga kelguncha chayqatiladi.
Ultrasonik gomogenizatsiya - bu tarkibiy qismlarni aralashtirish va eritishni yaxshilash orqali yaxshi lizis tamponini yaratishga yordam beradigan usul. Ushbu usulda ultratovush to'lqinlari – odatda 20 dan 30 kHz oralig'ida – aralashmaga qo'llaniladi, bu esa qulab tushadigan va kuchli mahalliy energiya hosil qiluvchi kavitatsiya pufakchalarini hosil qiladi, bu mexanik kesish va tarkibiy qismlarni aralashtirishga olib keladi.
Ultrasonik gomogenizatsiya jarayoni tarkibiy qismlarning har qanday bo'laklari yoki agregatlarini parchalashga yordam beradi va eritma bir xil aralashtirilganligini ta'minlaydi. Binobarin, bunday yaxshilangan lizis buferi hujayraning yanada samarali buzilishiga va ekstraksiya qilingan materialning yuqori hosildorligiga olib kelishi mumkin. Bundan tashqari, ultratovushli gomogenizatsiya an'anaviy aralashtirish yoki chayqash usullariga nisbatan lizis tamponini yaratish uchun zarur bo'lgan vaqtni qisqartirishi mumkin.
Umuman olganda, ultratovushli gomogenizatsiya lizis buferini tayyorlash sifati va samaradorligini oshirish uchun kuchli vositadir.
Ultrasonik laboratoriya gomogenizatori UP200Ht tadqiqot laboratoriyalarida namuna tayyorlash, liziz, ekstraktsiya, DNKni parchalash va eritish uchun mashhur.
Ultrasonik lizis buferini tayyorlash protokoli
Bu prob tipidagi ultrasonikator yordamida lizis buferini yaratish uchun umumiy protokol:
Materiallar:
- Tanlangan yuvish vositalari (masalan, Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Tanlangan tuz(lar) (masalan, NaCl, KCl)
- Proteaz inhibitörleri (masalan, PMSF, aprotinin, leupeptin)
- ultrasonikator
- aralashtirgich
- Deionlashtirilgan suv
- pH metr yoki pH chiziqlar
Bosqichma-bosqich ko'rsatmalar:
- Lizis buferining tarkibini siz lizing qiladigan hujayralar yoki to'qimalarga va lizatdan foydalanadigan quyi oqim ilovalariga qarab aniqlang. Kerakli konsentratsiyalarda yuvish vositalari, tuzlar va proteaz inhibitörlerinin stokli eritmalarini tayyorlang.
- Stakan yoki kolbaga yuvish vositalari, tuzlar va proteaz ingibitorlarining birja eritmalarini qo'shing.
- Ovozni kerakli miqdordagi buferga etkazish uchun deionizatsiyalangan suv qo'shing.
- Oldindan aralashtirilgan eritmani olish uchun tarkibiy qismlarni aralashtirgich yordamida aralashtiring.
- PH o'lchagich yoki pH chiziqlari yordamida buferning pH qiymatini o'lchang va kerak bo'lganda oz miqdordagi kislota yoki asos bilan pH ni sozlang.
- Oldindan aralashtirilgan eritmani bir hil holga keltirish uchun prob tipidagi ultrasonikatordan foydalaning, shunda yuqori darajada bir hil eritma olinadi. Shuning uchun, eritma yaxshilab aralashtirmaguncha va har qanday bo'laklar yoki agregatlar parchalanmaguncha, eritmani bir necha soniya davomida sonikatsiya qiling. Sonikatsiyaning davomiyligi va quvvati ishlatiladigan maxsus lizis buferi va ultrasonikator asosida optimallashtirilishi mumkin.
- Ultrasonikatsiyadan so'ng, buferning pH qiymatini qayta o'lchang va kerak bo'lganda sozlang.
- Sonikatsiya paytida hosil bo'lishi mumkin bo'lgan qoldiqlarni yoki agregatlarni olib tashlash uchun buferni 0,2 mikronli filtr orqali filtrlang.
- Lizis buferi endi foydalanishga tayyor.
Eslatma: Lizis tamponining aniq tarkibi va pH lizislangan hujayralar yoki to'qimalarga va quyi oqim ilovalariga qarab farq qilishi mumkin. Yuqoridagi protokol umumiy ko'rsatma bo'lib, uni muayyan ilovalar uchun optimallashtirish kerak bo'lishi mumkin.
Ultrasonik gomogenizatorlar odatda hujayra buzilishi va hujayra ichidagi molekulalarning ekstraktsiyasi uchun ishlatiladi. Shuning uchun ko'pgina liziz ilovalari zond tipidagi sonikatsiyadan nafaqat lizis buferini tayyorlash uchun, balki hujayraning mexanik buzilishi va ekstraktsiyasi uchun ham qo'llaniladi.
Bu ultratovush to'qimalarining gomogenizatorlarini laboratoriyalar uchun ko'p qirrali vositaga aylantiradi va mikrobiologiya, biotexnologiya va hayot fanlarida ultratovush apparatlaridan keng foydalanishni tushuntiradi.
ultratovush laboratoriya homojenizatörleridir
Hielscher Ultrasonics turli quvvat ko'rsatkichlari va namuna hajmlarida ultratovushli homogenizatorlar va zondlar (sonotrodlar) ishlab chiqaradi va etkazib beradi. Bu sizga namuna tayyorlashingiz uchun eng mos ultratovushli disruptorni taklif qilish imkonini beradi. Biz yuqori sifatli, ajoyib foydalanuvchi qulayligi va ishonchli sonication natijalariga e'tibor qaratamiz. Barcha raqamli ultrasonikatorlar aqlli dasturiy ta'minot, sonikatsiya protokollarini dasturlash va oldindan sozlash, brauzerni masofadan boshqarish, haroratni nazorat qilish, namunani yoritish, shuningdek, o'rnatilgan SD-kartada ma'lumotlarni avtomatik yozishni o'z ichiga oladi.
Dizayn, ishlab chiqarish va konsalting – Germaniyada ishlab chiqarilgan sifat
Hielscher ultrasonikatorlari eng yuqori sifat va dizayn standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va qulay foydalanish ultratovush qurilmalarimizni sanoat ob'ektlariga silliq integratsiya qilish imkonini beradi. Qo'pol sharoitlar va talabchan muhit Hielscher ultrasonikatorlari tomonidan osonlik bilan hal qilinadi.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya bo'lib, eng zamonaviy texnologiya va foydalanuvchilarga qulaylik bilan ajralib turadigan yuqori samarali ultratovush apparatlariga alohida e'tibor beradi. Albatta, Hielscher ultrasonikatorlari Idoralar talablariga javob beradi va UL, CSA va RoHs talablariga javob beradi.
The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators:
| UP200St da VialTweeter | 200w | 26kHz | kichik idishlarni, masalan ultrasonikleştirme Eppendorf 1.5mL |
| UP50H | 50W | 30kHz | Portativ yoki standmounted laboratoriya Gomogenizator |
| UP100H | 100W | 30kHz | Portativ yoki standmounted laboratoriya Gomogenizator |
| Uf200 ः t | 200w | 26kHz | Portativ yoki standmounted laboratoriya Gomogenizator |
| UP200St | 200w | 26kHz | standmounted laboratoriya Gomogenizator |
| UP400St | 400W | 24kHz | standmounted laboratoriya Gomogenizator |
| SonoStep | 200w | 26kHz | laboratoriya reaktor birlashtirib, ultrasonikleştirme, nasos, Mikser va kema |
| GDmini2 | 200w | 26kHz | ifloslanish-ochiq oqimi hujayra |
| Cuphorn | 200w | 26kHz | flakonlar va stakanlar uchun intensiv ultratovushli vanna |
| UIP400MTP | 400W | 24kHz | ko'p quduqli plitalar / mikrotitr plitalari uchun ultratovush tizimi |
ultratovush cuphorn namunalarni steril homogenlash uchun yopiq naychalar va flakonlarni intensiv sonikatsiya qilish uchun.
Biz bilan bog'lanish! Bizdan so'rang!
Ultrasonik laboratoriya gomogenizatori UP400St odatda lizis buferini tayyorlash va keyinchalik hujayra buzilishi uchun ishlatiladi.
Adabiyotlar / Adabiyotlar
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics kompaniyasi yuqori samarali ultratovushli homogenizatorlarni ishlab chiqaradi laboratoriya uchun sanoat hajmi.