Ultratovush bilan ishlov berish orqali tayyorlangan bufer eritmalar
Lizis buferlarini ultratovushli toʻqima gomogenizatorlari yordamida samarali va tez tayyorlash mumkin. Ultratovush qurilmalari aralashtirish, eritish va disperslash uchun orzudagi vosita boʻlgani sababli, ular lizis buferlarini ishonchli va foydalanuvchi uchun qulay tarzda tayyorlash imkonini beradi.
Lizis buferlarini ultratovush yordamida tayyorlash
Ultratovushli toʻqima gomogenizatorlari hujayralarni parchalash, lizis va ekstraksiya uchun keng qoʻllaniladigan vosita boʻlib, shu sababli aksariyat laboratoriyalarda mavjud. Zond tipidagi ultratovush qurilmalarining qoʻshimcha qoʻllanilish sohalaridan biri lizis buferlarini tayyorlashdir.
Lizis buferi hujayralarni yorib ochish (lizis qilish) va keyingi tahlil uchun ularning tarkibiy qismlarini chiqarish maqsadida ishlatiladigan eritmadir. Lizis buferining aniq tarkibi lizis qilinayotgan hujayralar turiga va keyingi qoʻllanilish sohasiga qarab oʻzgarishi mumkin. Biroq odatiy lizis buferi detergentlar, tuzlar va proteaza ingibitorlari kabi komponentlarni oʻz ichiga oladi. Buferlovchi tuzlar (masalan, Tris-HCl) va ionli tuzlar (masalan, NaCl) odatda lizatning pH qiymati va osmolyarligini boshqarish uchun ishlatiladi.
Lizis buferini tayyorlash uchun komponentlar tegishli konsentratsiyalarda va pH qiymatida birga aralashtiriladi. Aralashma odatda komponentlar eriguncha va eritma bir jinsli boʻlguncha aralashtiriladi yoki chayqatiladi.
Ultratovushli gomogenizatsiya komponentlarning aralashishi va erishini yaxshilash orqali sifatli lizis buferini tayyorlashga yordam berish uchun qoʻllanilishi mumkin boʻlgan usuldir. Bu usulda aralashmaga ultratovush toʻlqinlari – odatda 20 dan 30 kHz gacha boʻlgan diapazonda – taʼsir ettiriladi. Natijada kavitatsiya pufakchalari hosil boʻlib, ular qulaydi va kuchli mahalliy energiya hosil qiladi, bu esa mexanik siljishga va komponentlarning aralashishiga olib keladi.
Ultratovushli gomogenizatsiya jarayoni komponentlarning har qanday uyumlari yoki agregatlarini parchalashga yordam berishi va eritmaning bir tekis aralashishini taʼminlashi mumkin. Binobarin, shu tarzda yaxshilangan lizis buferi hujayralarning samaraliroq parchalanishiga va ekstraksiya qilingan material chiqishining yuqoriroq boʻlishiga olib kelishi mumkin. Bundan tashqari, ultratovushli gomogenizatsiya anʼanaviy aralashtirish yoki chayqatish usullariga nisbatan lizis buferini tayyorlash uchun zarur vaqtni qisqartirishi mumkin.
Umuman olganda, ultratovushli gomogenizatsiya lizis buferini tayyorlash sifati va samaradorligini oshirish uchun kuchli vositadir.
UP200Ht ultratovushli laboratoriya gomogenizatori tadqiqot laboratoriyalarida namunalarni tayyorlash, lizis, ekstraksiya, DNKni fragmentlash va eritish uchun keng qoʻllaniladi.
Lizis buferini ultratovush yordamida tayyorlash protokoli
Bu zond tipidagi ultratovush qurilmasi yordamida lizis buferini tayyorlash uchun umumiy protokoldir:
Materiallar:
- Tanlangan detergent(lar) (masalan, Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Tanlangan tuz(lar) (masalan, NaCl, KCl)
- Proteaza ingibitorlari (masalan, PMSF, aprotinin, leupeptin)
- Ultratovush qurilmasi
- Aralashtirgich
- Deionizatsiyalangan suv
- pH-metr yoki pH indikator tasmalari
Bosqichma-bosqich koʻrsatmalar:
- Lizis buferining tarkibini lizis qilinadigan hujayralar yoki toʻqima hamda lizatning keyingi qoʻllanilish maqsadlariga qarab aniqlang. Detergentlar, tuzlar va proteaza ingibitorlarining zaxira eritmalarini kerakli konsentratsiyalarda tayyorlang.
- Detergentlar, tuzlar va proteaza ingibitorlarining zaxira eritmalarini laboratoriya stakaniga yoki kolbaga qoʻshing.
- Bufer hajmini kerakli miqdorga yetkazish uchun deionizatsiyalangan suv qoʻshing.
- Dastlabki aralashma eritmasini olish uchun komponentlarni aralashtirgich yordamida aralashtiring.
- Buferning pH qiymatini pH-metr yoki pH indikator tasmalari yordamida oʻlchang va zaruratga qarab oz miqdorda kislota yoki asos qoʻshib pH qiymatini sozlang.
- Juda bir jinsli eritma olish uchun dastlabki aralashma eritmasini zond tipidagi ultratovush qurilmasi yordamida gomogenizatsiya qiling. Buning uchun eritma yaxshilab aralashguncha va har qanday uyumlar yoki agregatlar parchalanguncha unga bir necha soniya davomida ultratovush bilan ishlov bering. Ultratovush bilan ishlov berish davomiyligi va quvvatini ishlatilayotgan muayyan lizis buferi va ultratovush qurilmasiga qarab optimallashtirish mumkin.
- Ultratovush bilan ishlov berilgandan keyin buferning pH qiymatini qayta oʻlchang va zaruratga qarab sozlang.
- Ultratovush bilan ishlov berish vaqtida hosil boʻlgan boʻlishi mumkin boʻlgan har qanday qoldiq yoki agregatlarni olib tashlash uchun buferni 0,2 mikronli filtr orqali filtrlang.
- Lizis buferi endi foydalanishga tayyor.
Izoh: Lizis buferining aniq tarkibi va pH qiymati lizis qilinayotgan hujayralar yoki toʻqimaga hamda keyingi qoʻllanilish maqsadlariga qarab oʻzgarishi mumkin. Yuqoridagi protokol umumiy yoʻriqnoma boʻlib, muayyan qoʻllanilish maqsadlari uchun optimallashtirishni talab qilishi mumkin.
Ultratovushli gomogenizatorlar odatda hujayralarni parchalash va hujayra ichidagi molekulalarni ekstraksiya qilish uchun ishlatiladi. Shu sababli koʻplab lizis jarayonlarida zond tipidagi ultratovush bilan ishlov berish nafaqat lizis buferini tayyorlash, balki hujayralarni mexanik parchalash va ekstraksiya uchun ham qoʻllaniladi.
Bu ultratovushli toʻqima gomogenizatorlarini laboratoriyalar uchun koʻp maqsadli vositaga aylantiradi va ultratovush qurilmalarining mikrobiologiya, biotexnologiya hamda hayot haqidagi fanlarda keng qoʻllanilishini izohlaydi.
Ultratovushli laboratoriya gomogenizatorlari
Hielscher Ultrasonics turli quvvat darajalari va namuna hajmlari uchun ultratovushli gomogenizatorlar va zondlarni (sonotrodlarni) ishlab chiqaradi va yetkazib beradi. Bu bizga namunangizni tayyorlash uchun eng mos ultratovushli parchalash qurilmasini taklif qilish imkonini beradi. Biz eng yuqori sifatga, foydalanuvchi uchun ajoyib qulaylikka va ultratovush bilan ishlov berishning ishonchli natijalariga eʼtibor qaratamiz. Barcha raqamli ultratovush qurilmalari aqlli dasturiy taʼminot, ultratovush bilan ishlov berish protokollarini dasturlash va oldindan sozlash, brauzer orqali masofadan boshqarish, haroratni boshqarish, namunani yoritish hamda oʻrnatilgan SD-kartaga maʼlumotlarni avtomatik qayd etish funksiyalariga ega.
Loyihalash, ishlab chiqarish va maslahat berish – Germaniyada yaratilgan sifat
Hielscher ultratovush qurilmalari oʻzining eng yuqori sifati va loyihalash standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va foydalanishning osonligi ultratovush qurilmalarimizni sanoat obyektlariga muammosiz integratsiya qilish imkonini beradi. Hielscher ultratovush qurilmalari ogʻir sharoitlar va yuqori talab qoʻyiladigan muhitlarda osonlik bilan ishlaydi.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya boʻlib, eng zamonaviy texnologiyalarga ega va foydalanuvchi uchun qulay boʻlgan yuqori unumdor ultratovush qurilmalariga alohida eʼtibor qaratadi. Albatta, Hielscher ultratovush qurilmalari CE talablariga mos keladi va UL, CSA hamda RoHs talablariga javob beradi.
Quyidagi jadval turli laboratoriya ultratovush qurilmalarimiz haqida umumiy maʼlumot beradi:
| UP200St bilan VialTweeter | 200W | 26kHz | kichik flakonlarga ultratovush bilan ishlov berish, masalan, Eppendorf 1,5mL |
| UP50H | 50W | 30kHz | qoʻlda ushlab ishlatiladigan yoki shtativga oʻrnatiladigan laboratoriya gomogenizatori |
| UP100H | 100W | 30kHz | qoʻlda ushlab ishlatiladigan yoki shtativga oʻrnatiladigan laboratoriya gomogenizatori |
| UP200Ht | 200W | 26kHz | qoʻlda ushlab ishlatiladigan yoki shtativga oʻrnatiladigan laboratoriya gomogenizatori |
| UP200St | 200W | 26kHz | shtativga oʻrnatiladigan laboratoriya gomogenizatori |
| UP400St | 400W | 24kHz | shtativga oʻrnatiladigan laboratoriya gomogenizatori |
| SonoStep | 200W | 26kHz | ultratovush bilan ishlov berish, nasos, aralashtirgich va idishni birlashtiruvchi laboratoriya reaktori |
| GDmini2 | 200W | 26kHz | kontaminatsiyasiz oqim hujayrasi |
| CupHorn | 200W | 26kHz | flakonlar va laboratoriya stakanlari uchun kuchli ultratovush vannasi |
| UIP400MTP | 400W | 24kHz | koʻp quduqchali plastinalar / mikrotitr plastinalari uchun ultratovush tizimi |
Ultratovushli cuphorn namunalarni steril gomogenizatsiya qilish uchun yopiq probirkalar va flakonlarga kuchli ultratovush bilan ishlov berishga moʻljallangan.
Biz bilan bogʻlaning! / Bizdan soʻrang!
UP400St ultratovushli laboratoriya gomogenizatori odatda lizis buferini tayyorlash va keyinchalik hujayralarni parchalash uchun ishlatiladi.
Adabiyotlar / Manbalar
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics yuqori unumdor ultratovushli gomogenizatorlarni laboratoriya oʻlchamidan sanoat oʻlchamigacha ishlab chiqaradi.