Ултразвучно одвајање ћелија
Ултразвучно одвајање ћелија је веома ефикасна и поуздана техника припреме узорака која се користи у различитим областима ћелијске биологије и биотехнологије. Користећи ултразвучне таласе, соникатор плоча са више бунара УИП400МТП одваја прилепљене ћелије са површина културе и припрема ћелијске суспензије за низводне примене. Соникација нуди неколико предности у односу на традиционалне ензимске, хемијске и механичке технике одвајања, што га чини вредним алатом за истраживаче.
Принцип одвајања ултразвучних ћелија
Ултразвучно одвајање ћелија ослања се на употребу ултразвука снаге да поремети интеракције између ћелија и супстрата за који су причвршћене. Ултразвучни таласи стварају микромехуриће, акустичну кавитацију и вибрације у медијуму културе, производећи механичке силе које нежно, али ефикасно померају ћелије. Овај процес се обично спроводи коришћењем бесконтактног соникатора УИП400МТП за плоче са више јажица.
Бесконтактни соникатор УИП400МТП за одвајање ћелија
Одвајање ћелија је кључно када се узгајају прилепљене ћелије. Док је трипсинизација најчешће коришћена техника, она може смањити виталност ћелије оштећењем ћелијске мембране и екстрацелуларног матрикса. Да би се побољшала ефикасност ћелијске културе, важно је минимизирати ову штету. Ултразвучно одвајање ћелија је веома ефикасна и поуздана техника без ензима. Ово чини соникатор микроплоче УИП400МТП одличном алтернативом за одвајање ћелија засновано на ензимима. Соникација примењује акустичну кавитацију и агитацију у медијуму без серума, који нежно уклања ћелије без оштећења.
Поређење ултразвучног одвајања ћелија са традиционалним техникама
| Предности | Ултрасониц Детацхмент | Ензиматиц Детацхмент | Цхемицал Детацхмент |
|---|---|---|---|
| Виталност ћелија | Високо | Средње | Променљива |
| Брзина | Брзо (минути) | Умерено (од минута до сати) | Променљиво (од минута до сати) |
| Очување површинских маркера | Одлично | Може се мењати | Може се мењати |
| Прилагодљивост | Високо | Средње | Променљива |
| Без остатака | да | Не (остатак ензима) | Променљива (хемијски остатак) |
| Трошкови опреме | Једнократна инвестиција, без власничког материјала за једнократну употребу, без поновних трошкова | Поновни трошкови | Поновни трошкови |
| Једноставност оптимизације | Лако | Лако | Променљива |
Соникатор плоча са више бунара УИП400МТП нуди бројне предности за припрему узорака високог протока, као што је одвајање ћелија.
Овај соникатор Хиелсцхер има ИСО сертификат, УЛ, РоХс и ЦЕ усклађен. Има могућност рада 24 сата дневно, 7 дана у недељи за радне токове велике пропусности.
Испод ћете пронаћи пример инструкција за одвајање ћелија помоћу соникатора плоча са више бунара УИП400МТП.
Опрема и материјали за ултразвучно одвајање ћелија
- Бесконтактни соникатор за плоче са више јажица УИП400МТП: Овај соникатор високе пропусности је кључни алат. Соникатор плоча УИП400МТП је погодан за све стандардне плоче са више јажица и микротитарске плоче, као и за Петријеве здјелице. Ултразвучни таласи обезбеђују неопходну механичку енергију за одвајање ћелија.
- Плоче за културу ћелија или Петријева посуда: Стандардне посуде које се користе за узгој прилепљених ћелијских култура.
- Медијум културе: Течни медијум у коме се ћелије узгајају и одржавају.
- Стерилни ПБС (физиолошки раствор пуферисан фосфатом): Користи се за прање ћелија пре одвајања.
- Цеви за сакупљање: За сакупљање суспензије одвојених ћелија.
Протокол за ултразвучно одвајање помоћу Плате Соницатор УИП400МТП
- Припрема
– Уверите се да је сва опрема чиста и стерилна како бисте спречили контаминацију.
– Претходно загрејте медијум културе и ПБС на одговарајућу температуру (обично 37°Ц). - Целл Васхинг
– Аспирирајте медијум културе из боце или плоче за културу ћелија.
– Нежно исперите ћелије стерилним ПБС-ом да бисте уклонили заостали медијум и одвојене ћелије. - соницатион
– Додајте малу количину ПБС-а или свежег медијума за културу у балон или плочу да покријете монослој ћелија.
– Поставите Петријеву посуду или плочу у соникатор УИП400МТП.
– Соницате у одређеном трајању, обично у распону од неколико секунди до неколико минута, у зависности од типа ћелије и јачине везивања. - Сакупљање суспензије ћелија
– Након ултразвука, посматрајте ћелије под микроскопом да бисте осигурали одвајање.
– Нежно пипетирајте суспензију ћелија да бисте сакупили одвојене ћелије.
– Пребаците суспензију у епрувету за сакупљање. - Обрада после одреда
– Центрифугирајте суспензију ћелија ако је потребно да се ћелије концентришу.
– Ресуспендујте ћелије у свежем медијуму за културу или пуферу за низводне примене.
напомене: Параметри (као што су време и интензитет соникације) морају бити оптимизовани за различите типове ћелија да би се избегло оштећење ћелија. Неки деликатни типови ћелија могу бити осетљивији на ултразвучни третман, што захтева пажљиву оптимизацију.
Практичне примене ултразвучног одвајања ћелија
Ултразвучно одвајање ћелија се користи у различитим истраживачким и клиничким окружењима:
- Проточна цитометрија: Припрема једноћелијске суспензије за анализу.
- Бројање ћелија и тестови одрживости: Одвајање ћелија за тачно бројање и процену одрживости.
- субкултура: Преношење ћелија из једне посуде за културу у другу.
- Експерименти молекуларне биологије: Изоловање ћелија за екстракцију ДНК, РНК и протеина.
Зашто би требало да заменим стругање ћелије одвајањем ћелије са УИП400МТП микроплочом Сонциатор?
Замена стругања ћелија одвајањем ћелија помоћу соникатора микроплоче УИП400МТП нуди истраживачима неколико предности. За разлику од ручног стругања, прецизно контролисана соникација са УИП400МТП обезбеђује доследно и нежно одвајање ћелија, минимизирајући механичка оштећења и чувајући виталност ћелије. УИП400МТП пружа прецизну контролу над параметрима соникације, омогућавајући уједначен третман у свим бунарима и елиминишући варијабилност између узорака. Овај метод је бржи, ефикаснији и скалабилан, што га чини идеалним за апликације велике пропусности уз одржавање поновљивости и интегритета осетљивих ћелијских култура. Компаративну студију пронађите овде!
Соникатор плоча са 96 јажица УИП400МТП за соникацију микротитарских и плоча са више јажица
Соникатор плоча са 96 јажица УИП400МТП: Течност која преноси ултразвук окружује све бушотине и обезбеђује уједначену соникацију сваког узорка
Уобичајени типови ћелија за ултразвучно одвајање ћелија
- фибробласти:
Обично се користи у ткивном инжењерству и истраживању зарастања рана.
Адхерентне ћелије које захтевају одвајање за пролаз и експерименте. - Епителне ћелије:
Користи се у студијама баријера ткива, истраживању рака и тестирању лекова.
Захтева одвојеност за анализу и субкултуру. - Ендотелне ћелије:
Важно за васкуларна истраживања и студије ангиогенезе.
Адхерентне ћелије којима је потребно одвајање за ин витро тестове. - Матичне ћелије:
Укључујући мезенхималне матичне ћелије и индуковане плурипотентне матичне ћелије.
Захтевају нежне методе одвајања да би се одржала одрживост и плурипотенција. - Ћелијске линије рака:
Широко се користи у истраживању рака и развоју лекова.
Адхерентне ћелије које захтевају редовно одвајање за експерименталну манипулацију. - Хепатоцити:
Користи се у студијама функције јетре и истраживању метаболизма лекова.
Захтевати одвајање за ин витро моделе и тестове. - кератиноцити:
Преовлађујући тип ћелија у епидермису и обично се користи у истраживању коже, студијама зарастања рана и козметичким тестирањима.
Као и друге адхерентне ћелије, кератиноцити расту причвршћени за површину боца или плоча за културу и морају се одвојити за различите експерименталне процедуре, укључујући пасирање, анализу и субкултурирање. - Макрофаги:
Често захтевају одвајање када се узгајају ин витро.
Макрофаги су адхерентне ћелије, које се обично везују за површину боца или плоча за културу. Да би их прикупили за низводне примене као што су анализа, субкултура или експерименти, потребно их је одвојити од површине културе.
Литература / Референце
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- UIP400MTP-Multi-well-Plate-Sonicator-Infographic
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Чињенице које вреди знати
Шта је одвајање ћелија?
Одвајање ћелија је процес одвајања адхерентних ћелија са површине њихове посуде за културу, омогућавајући њихово сакупљање и припрему за даље експерименталне поступке или анализу. Ово се може постићи ензимским, хемијским, механичким или ултразвучним методама.
Шта је ћелијска дисоцијација?
Дисоцијација ћелија је процес разлагања ћелијских агрегата или ткива у појединачне, одрживе ћелије. Ово се постиже ометањем екстрацелуларног матрикса и адхезија ћелија-ћелија коришћењем ензимских, механичких (нпр. соникација) или хемијских метода. Дисоцијација ћелија је неопходна за различите примене, укључујући примарну ћелијску културу, анализу једне ћелије и припрему ћелијских суспензија за експерименте и терапеутску употребу.
Која је разлика између адхерентне ћелијске културе и биофилма?
Адхерентна ћелијска култура се односи на раст ћелија, типично еукариотских, које се везују за супстрат у контролисаном лабораторијском окружењу, ослањајући се на хранљиве материје које се уносе кроз медијум за културу. Насупрот томе, биофилм је сложена, природна микробна заједница која се држи површине и затворена је у екстрацелуларни матрикс, са ћелијама које показују колективно понашање, хемијске градијенте и повећану отпорност на спољашње стресове. Док су адхерентне ћелијске културе вештачке и користе се у истраживачке сврхе, биофилми су динамични екосистеми који се налазе у природном или пројектованом окружењу.
Соникација са УИП400МТП је веома ефикасна техника без ензима за одвајање адхерентних ћелија и уклањање биофилма. Прочитајте више о предностима уклањања биофилма са микроплоча и Петријевих здјелица користећи УИП400МТП соникатор плоча са више јажица!
Које су предности ултразвучног одвајања ћелија?
- Нежно према ћелијама: Ултразвучно одвајање је мање грубо у поређењу са ензимским методама (попут трипсинизације) и механичким стругањем, чувајући виталност ћелија и површинске маркере.
- Брзо и ефикасно: Процес је брз, често траје само неколико минута и може ефикасно да одвоји ћелије чак и са великих површина културе.
- Прилагодљивост: Погодан и за мале лабораторијске апликације и за веће биотехнолошке процесе.
- Без остатака ензима: Елиминише потребу за ензимима, смањујући ризик од промене протеина на површини ћелије или уношења контаминаната.