Ultrazvočna priprava seruma, bogatega s trombociti
- Plazma, bogata s trombociti (PRP) je krvna plazma, ki je bila obogatena s trombociti, ki se uporablja za medicinsko in estetsko zdravljenje.
- Ultrazvočna liza in kondicioniranje je zelo učinkovita metoda za pripravo plazme, bogate s trombociti.
- Hielscher Ultrasonics ponuja različne ultrazvočne sisteme, ki ustrezajo zahtevam krvnega zdravljenja (npr. za notranjo in zunanjo pripravo čistega prostora).
serum bogat s trombociti
Sonication je zanesljiva in enostavna metoda za lizo trombocitov v avtolognem krvnem serumu, da se sprostijo rastni faktorji. Frakcije, pridobljene iz trombocitov – znan tudi kot avtologni kondicionirani serum (AKS) – se uporabljajo za popravilo tkiv ali estetske tretmaje. Za doseganje optimalnih rezultatov se PRP pred injiciranjem obogati.
Za pripravo obogatene plazme s celičnimi rastnimi faktorji je ultrazvočna razbijanje zelo učinkovita in učinkovita metoda za lizo celičnih membran in sproščanje skoraj celotnih celičnih rastnih faktorjev iz trombocitov. Z ultrazvočno lizo in kondicioniranjem se lahko uporablja tudi antikoagulirana kri.
Kondicioniranje PRP s ultrazvočnim razbijanjem je priročen in stroškovno učinkovit način za pridobivanje koncentriranih rastnih faktorjev.
Ultrazvočni učinki lize
Ultrazvočna obdelava krvnega seruma povzroči homogeno lizo trombocitov, da se sprostijo ujeti rastni faktorji (rastni faktor AB (PDGF-AB), rastni faktor AA (PDGF-AA), rastni faktor BB (PDGF-BB), vaskularni endotelijski rastni faktor (VEGF), transformacijski rastni faktor β (TGF-β), epidermalni rastni faktor (EGF), insulinu podoben rastni faktor (IGF), rastni faktor epitelnih celic ECGF in fibroblastični rastni faktor (FGF)). Trombociti in njihova alfa-zrnca so motena s ultrazvočnim razbijanjem z uporabo pojava akustična kavitacija. Uporaba ultrazvočne kavitacije za lizo trombocitov zmanjšuje možen negativen vpliv na aktivnost rastnega faktorja ponavljajoče se metode zamrzovanja in odmrzovanja.
Protokol za ultrazvočno pripravo PRP
Približno 16 ml sveže odvzetega avtolognega vzorca krvi se 8-10-krat nežno obrne v epruveti, tako da se kri in antikoagulanti dobro premešajo. Nato se vzorec centrifugira pri 1800 g 20 minut pri sobni temperaturi. Po centrifugiranju trombociti in mononuklearne celice na dnu plazemske plasti zgradijo belkasto plast, ki je znana kot plazma, bogata s trombociti (PRP). Zgornja plast je znana kot plazma s pomanjkanjem trombocitov (PPP). Mononuklearne celice se lahko odstranijo ali ostanejo v vzorcu. Pogosto mononuklearne celice ostanejo v vzorcu PRP, da bi se izognili dodatnim korakom, ki predstavljajo tveganje kontaminacije.
Opomba: Ultrazvočno zdravljenje avtolognega PRP je treba izvajati v sterilnih pogojih.
PRP in FFS se ločijo in zbirajo. V FFS se doda 1,5 ml 10% raztopine kalcijevega klorida, medtem ko se PRP doda 0,5 ml 5% etanola. Obe suspenziji rahlo premešamo in pustimo stati 5 minut pri sobni temperaturi. Nazadnje se suspenziji PRP doda 1 ml FFS in se pusti stati, dokler se ne oblikuje fibrinski strdek.
Ultrazvočno zdravljenje: Ker nastali trombocitni gel deluje kot rezervoar za sproščene rastne faktorje, je treba fibrinski gel prekiniti, da se sprostijo razpoložljivi rastni faktorji. Parametri za ultrazvočno lizo in sproščanje rastnega faktorja so naslednji: Sonicate z UP200Ht ali UP200St (200W, 26kHz) s sonotrodom S26d2 vzorec v cevi. Da bi se izognili pregrevanju vzorca krvi, se ultrazvočno razbijanje lahko izvaja v pulzirajočih ciklih (npr. 10 sekund vklopljeno, 30 sekund izklopljeno). Vzorec je treba položiti na led za hlajenje, tako da se temperatura optimalno vzdržuje med 2 – 5 °C. Po ultrazvočni obdelavi se vzorec centrifugira pri 16000 g 5 minut pri sobni temperaturi. Supernatant se zbira in lahko shranjuje pri temperaturi -70 °C.
Koncentracija trombocitov v frakciji PRP je bila obogatena za 1,7 – 4,5-krat v primerjavi s povprečnim številom trombocitov v polni krvi v literaturi.
PRP je bil kombiniran s terapijo z matičnimi celicami, pridobljenimi iz maščobe (ultrazvočno sproščene avtologne matične celice iz maščobnega tkiva, zmešana s PRP in injicirana nazaj v bolnikovo tkivo za popravilo).
Ultrazvočna oprema
Hielscher Ultrasonics je strokovnjak za prefinjeno in zanesljivo ultrazvočno tehnologijo. Naše ultrazvočne naprave se uporabljajo po vsem svetu za lizo, ekstrakcijo in pripravo vzorcev – neposredno in posredno. Možnost avtoklaviranja kot tudi Razpoložljivi Dodatki zagotavljajo brez kontaminacije obdelava avtolognih vzorcev krvi. Večina naših sistemov se lahko uporablja za ultrazvočno lizo Matične celice in PRP, zaradi česar so naše ultrazvočne naprave še bolj učinkovite.
V spodnji tabeli so navedene naše ultrazvočne naprave, ki so primerne za pripravo plazme, bogate s trombociti, in njihov priporočeni volumen vzorca. Na voljo so tudi večji ultrazvočni aparati in prilagojeni sistemi.
Naprava | Moč [W] | Frekvenca [kHz] | Vrsta | Prostornina [ml] | ||
---|---|---|---|---|---|---|
VialTweeter | 200 | 26 | samostojno | 0.5 | – | 1.5 |
UP50H | 50 | 30 | ročni ali stoječi | 0.01 | – | 250 |
UP100H | 100 | 30 | ročni ali stoječi | 0.01 | – | 500 |
UP200Ht | 200 | 26 | ročni ali stoječi | 0.1 | – | 1000 |
UP200St | 200 | 26 | stoječe | 0.1 | – | 1000 |
UP400St | 400 | 24 | stoječe | 5.0 | – | 2000 |
UP200St-SonoStep | 200 | 26 | samostojno | 30 | – | 500 |
GDmini2 | 200 | 26 | pretočna celica brez kontaminacije |
Prosimo, kontaktirajte nas še danes! Z veseljem vam bomo pomagali najti optimalno ultrazvočno napravo!
Kontaktirajte nas! / Vprašajte nas!
Literatura/Reference
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Gel za lizat trombocitov in endotelijski predniki spodbujajo tvorbo mikrovaskularne mreže in vitro: posledice tkivnega inženiringa. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, MSA; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): plazma, bogata s trombociti (PRP) za akutno poškodbo mišic: sistematični pregled. PLOS ONE, letnik 9, številka 2, 2014.
Dejstva, ki jih je vredno vedeti
plazma, bogata s trombociti
Plazma, bogata s trombociti, vsebuje rastni faktor AB (PDGF-AB), trombocitni rastni faktor AA (PDGF-AA), trombocitni rastni faktor BB (PDGF-BB), vaskularni endotelijski rastni faktor (VEGF), transformacijski rastni faktor β (TGF-β), epidermalni rastni faktor (EGF), insulinu podoben rastni faktor (IGF), rastni faktor epitelnih celic ECGF in fibroblastni rastni faktor (FGF), ki so pomembni stimulansi za rast in obnovo celic.
Avtologni kondicionirani serum (AKS)
Avtologna kondicionirana plazma (ACP) je plazma, bogata s trombociti, ki se pridobiva iz avtologne krvi, ki se uporablja za podporo regeneraciji pri različnih ortopedskih pogojih in kirurških posegih. Kondicioniran serum pripravimo tako, da ločimo plazmo od drugih komponent krvi (kot so eritrociti) in jo koncentriramo. ACP je plazma, bogata s trombociti (PRP). PRP je splošen izraz za vrsto plazme, ki vsebuje bistveno višjo koncentracijo trombocitov v primerjavi s polno krvjo. Pridobiva se iz polne krvi. Glavne sestavine ACP vključujejo trombocite (trombocite) in več rastnih faktorjev, ki igrajo pomembno vlogo v procesu celjenja. Za razliko od drugih plazemskih formulacij, bogatih s trombociti, se ACP odlikuje po nizki koncentraciji belih krvnih celic, kot so nevtrofilni granulociti, ki so lahko škodljivi za proces celjenja, če so prisotni v visokih koncentracijah.
injekcije plazme, bogate s trombociti
Plazma, bogata s trombociti, se uporablja kot injekcija v regenerativni medicini in kozmetičnih postopkih. Uporaba PRP obljublja znatno pospešitev celjenja mišic in okrevanja mišic. Poleg tega se uspešno uporablja za zdravljenje vnetja, artritisa, bolečine, ran, počasnega celjenja odprtih ran in resnih opeklin kože. PRP vsebuje visoko raven rastnih faktorjev, ki spodbujajo in ščitijo zdravilne celice, da se poškodovano tkivo popravi.
Pri kozmetičnih izdelkih se je PRP izkazal za učinkovitega pri spodbujanju rasti las, obnove kože (znanega tudi kot vampirsko zdravljenje).
Rastni faktorji, pridobljeni iz trombocitov (PDGF)
Izraz trombocitni rastni faktor (PDGF) se nanaša na faktorje PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C in PDGF-D. Je signalna mreža štirih ligandov (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C in PDGF-D) in dveh receptorjev, PDGFR-alfa in PDGFR-beta.
Rastni faktorji ali beljakovine uravnavajo rast in delitev celic. Kot glavni mitogen, ki ga najdemo v serumu sesalcev, ki se sprošča iz trombocitov med nastajanjem strdkov, ima pomembno vlogo pri tvorbi krvnih žil (angiogeneza), rasti krvnih žil iz že obstoječega tkiva krvnih žil.