Ultrazvočna priprava seruma, bogatega s trombociti

• Plazma, bogata s trombociti (PRP), je krvna plazma, obogatena s trombociti, ki se uporablja za medicinske in estetske posege.
• Ultrazvočna liza in kondicioniranje sta zelo učinkovita metoda za pripravo plazme, bogate s trombociti.
• Hielscher Ultrasonics ponuja različne ultrazvočne sisteme, ki ustrezajo zahtevam obdelave krvi (npr. za pripravo v čistem prostoru in zunaj njega).

Serum, bogat s trombociti

Sonikacija je zanesljiva in preprosta metoda za lizo trombocitov v avtolognem krvnem serumu za sproščanje rastnih dejavnikov. Frakcije, pridobljene iz trombocitov – znane tudi kot avtologni kondicionirani serum (ACS) – se uporabljajo za obnovo tkiva ali estetske posege. Za doseganje optimalnih rezultatov se PRP pred injiciranjem obogati.
Za pripravo plazme, obogatene z rastnimi dejavniki celic, je sonikacija zelo učinkovita in učinkovito izrabljena metoda za lizo celičnih membran in sproščanje skoraj vseh rastnih dejavnikov celic iz trombocitov. Z ultrazvočno lizo in kondicioniranjem je mogoče uporabiti celo kri, obdelano z antikoagulanti.
Kondicioniranje PRP s sonikacijo je priročen in stroškovno učinkovit način pridobivanja koncentriranih rastnih dejavnikov.

Ultrazvočna liza plazme, bogate s trombociti (PRP)

Učinki ultrazvočne lize

Ultrazvočna obdelava krvnega seruma povzroči homogeno lizo trombocitov, s katero se sprostijo v njih ujeti rastni dejavniki (rastni dejavnik AB (PDGF-AB), rastni dejavnik AA (PDGF-AA), rastni dejavnik BB (PDGF-BB), rastni dejavnik žilnega endotelija (VEGF), transformirajoči rastni dejavnik β (TGF-β), epidermalni rastni dejavnik (EGF), inzulinu podoben rastni dejavnik (IGF), rastni dejavnik epitelijskih celic ECGF in rastni dejavnik fibroblastov (FGF)). Trombociti in njihove granule alfa se razgradijo s sonikacijo, pri kateri se uporablja pojav akustične kavitacije. Uporaba ultrazvočne kavitacije za lizo trombocitov zmanjša morebitni negativni vpliv metode ponavljajočega se zamrzovanja in odtajanja na aktivnost rastnih dejavnikov.

Protokol za ultrazvočno pripravo PRP

Približno 16mL sveže odvzetega vzorca avtologne krvi v epruveti nežno obrnemo 8–10-krat, da se kri in antikoagulanti dobro premešajo. Nato vzorec centrifugiramo pri 1800 g 20 min pri sobni temperaturi. Po centrifugiranju trombociti in mononuklearne celice na dnu plasti plazme tvorijo belkasto plast, imenovano plazma, bogata s trombociti (PRP). Zgornja plast je znana kot plazma, revna s trombociti (PPP). Mononuklearne celice lahko odstranimo ali pa ostanejo v vzorcu. Mononuklearne celice pogosto ostanejo v vzorcu PRP, da se izognemo dodatnim korakom, ki predstavljajo tveganje kontaminacije.
Opomba: Ultrazvočno obdelavo avtologne PRP je treba izvajati v sterilnih pogojih.
PRP in PPP ločimo in zberemo. PPP dodamo 1,5mL 10% raztopine kalcijevega klorida, PRP pa dodamo 0,5mL 5% etanola. Obe suspenziji nežno premešamo in pustimo stati 5 min pri sobni temperaturi. Na koncu suspenziji PRP dodamo 1mL PPP in jo pustimo stati, dokler ne nastane fibrinski strdek.
Ultrazvočna obdelava: Ker nastali trombocitni gel deluje kot rezervoar sproščenih rastnih dejavnikov, je treba fibrinski gel razgraditi, da se sprostijo razpoložljivi rastni dejavniki. Parametri za ultrazvočno lizo in sproščanje rastnih dejavnikov so naslednji: Vzorec v epruveti sonikirajte z napravo UP200Ht ali UP200St (200W, 26kHz) in sonotrodo S26d2. Da preprečimo pregrevanje vzorca krvi, lahko sonikacijo izvajamo v pulznih ciklih (npr. 10 s vključeno, 30 s izključeno). Vzorec je treba za hlajenje postaviti na led, da se temperatura optimalno vzdržuje v območju 2–5°C. Po sonikaciji vzorec centrifugiramo pri 16.000 g 5 min pri sobni temperaturi. Supernatant zberemo in ga lahko shranimo pri -70°C.
Pri metodi s sonikacijo se je koncentracija trombocitov v frakciji PRP povečala za faktor 1,7–4,5 v primerjavi s povprečnim številom trombocitov v polni krvi, navedenim v literaturi.

PRP so kombinirali s terapijo z matičnimi celicami, pridobljenimi iz maščobnega tkiva (avtologne matične celice, ultrazvočno sproščene iz maščobnega tkiva, pomešane s PRP in injicirane nazaj v bolnikovo tkivo za njegovo obnovo).

Ultrazvočna oprema

Hielscher Ultrasonics je strokovnjak za dovršeno in zanesljivo ultrazvočno tehnologijo. Naše ultrazvočne naprave se po vsem svetu uporabljajo za lizo, ekstrakcijo in pripravo vzorcev – neposredno in posredno. Dodatki, ki jih je mogoče avtoklavirati, in dodatki za enkratno uporabo zagotavljajo obdelavo brez kontaminacije avtolognih krvnih vzorcev. Večino naših sistemov je mogoče uporabiti za ultrazvočno lizo matičnih celic in PRP, zato so naše ultrazvočne naprave ekonomsko še učinkovitejše.
Spodnja tabela navaja naše ultrazvočne naprave, primerne za pripravo plazme, bogate s trombociti, in priporočeno prostornino vzorca za vsako napravo. Na voljo so tudi večji ultrazvočni procesorji in prilagojeni sistemi.

Stopite v stik z nami še danes! Z veseljem vam bomo pomagali najti optimalno ultrazvočno napravo!