Nahraďte zoškrabovanie buniek vysokokapacitným sonikátorom UIP400MTP

Oddeľovanie a extrakcia adherentných bunkových línií z viacjamkových platničiek na multiómovú analýzu sú každodennou úlohou v laboratóriách. Vysokokapacitné oddeľovanie buniek pomocou sonikátora na viacjamkové platničky UIP400MTP nahrádza manuálne zoškrabovanie buniek a vedie k vyšším výťažkom RNA, celkových lipidov a celkových polárnych metabolitov. Nová metóda integruje sonikátor Hielscher UIP400MTP s pracovnou stanicou na manipuláciu s kvapalinami Beckman Coulter i7 a umožňuje vysokokapacitné, reprodukovateľné a efektívne spracovanie buniek na extrakciu RNA, metabolitov a lipidov. Predstavená metóda prekonáva tradičné metódy manuálneho zoškrabovania buniek tým, že dosahuje lepšiu reprodukovateľnosť a vyšší výťažok pri rôznych typoch buniek a experimentálnych podmienkach.

Zefektívnite oddeľovanie buniek pomocou sonikátora na mikroplatničky UIP400MTP

Systémy na kultiváciu adherentných buniek zohrávajú kľúčovú úlohu v toxikologickom a biomedicínskom výskume. V tomto kontexte sa Cruchley-Fuge a kol. (2024) zaoberali významnou výzvou v projekte PrecisionTox zameranom na využívanie ómových technológií na hodnotenie nebezpečnosti chemických látok. Cieľom projektu bola vysokokapacitná analýza tisícov vzoriek ošetrených rôznymi chemickými látkami. Na splnenie tejto požiadavky výskumníci vyvinuli automatizovaný pracovný postup, ktorý kombinuje sonikátor UIP400MTP so zavedenými protokolmi dvojfázovej extrakcie na analýzu kvapalinovou chromatografiou spojenou s hmotnostnou spektrometriou (LC-MS). Ich štúdia hodnotí účinnosť sonikátora na viacjamkové platničky UIP400MTP pri oddeľovaní adherentných buniek v porovnaní s manuálnym zoškrabovaním a ďalšími tradičnými metódami.

Zefektívnenie multiómových analýz: automatizovaná extrakcia adherentných buniek pomocou UIP400MTP

Výskumný tím Laury Cruchley-Fuge z University of Birmingham použil tri ľudské bunkové línie: HepG2 (bunky rakoviny pečene), HepaRG (diferencované bunky podobné hepatocytom) a H295R (bunky rakoviny nadobličiek). Tieto bunky sa kultivovali v 24-jamkových a 96-jamkových platničkách a vystavovali sa testovaným chemickým látkam, ako sú aflatoxín B1 a forskolín.

Návrh experimentu:

• Fáza 1: Optimalizácia nastavení výkonu sonikátora UIP400MTP a porovnanie s manuálnym zoškrabovaním buniek a ultrazvukovými vodnými kúpeľmi. Na vyhodnotenie výťažnosti RNA, metabolitov a lipidov sa použili bunky HepG2.
• Fáza 2: Integrácia UIP400MTP do pracovného postupu dvojfázovej extrakcie s využitím systému Beckman Coulter i7. Validácia sa uskutočnila pomocou buniek HepaRG a H295R.

Pracovný postup extrakcie: Pracovný postup zahŕňal vystavenie buniek chemickým látkam vo viacjamkových platničkách, oddeľovanie buniek pomocou UIP400MTP a dvojfázovú extrakciu metódou Bligh & Dyer (B&D). Analýza lipofilných a polárnych zlúčenín metódou LC-MS sa uskutočnila pomocou prístroja Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120. Metóda B&D, zlatý štandard kvantifikácie lipidov, zahŕňa dvojkrokovú extrakciu metanolom, chloroformom a vodou, po ktorej nasleduje kvantifikácia lipidov v chloroformovej fáze.

Sonikátor na mikroplatničky UIP400MTP uľahčuje oddeľovanie adherentných bunkových línií z viacjamkových platničiek a Petriho misiek

Výsledky:

• Fáza 1: Optimálne podmienky sonikácie sa zistili pri 60% výkone.
  UIP400MTP dosiahol najvyššiu výťažnosť RNA s výnimočnou reprodukovateľnosťou v porovnaní s manuálnym zoškrabovaním a ultrazvukovými kúpeľmi.
  Výťažnosť polárnych metabolitov bola pri jednotlivých metódach porovnateľná, zatiaľ čo výťažnosť lipidov bola pri použití UIP400MTP výrazne vyššia.
• Fáza 2: Validácia na bunkách HepaRG a H295R preukázala vysokú reprodukovateľnosť lipidomických a metabolomických údajov, o čom svedčili tesne zoskupené skóre PCA.
  Vzorky ošetrené aflatoxínom B1 a forskolínom sa účinne odlíšili od kontrolných vzoriek, čo zdôrazňuje citlivosť a spoľahlivosť metódy.

„Sonikačné zariadenie Hielscher UIP400MTP poskytuje vysokokvalitný a reprodukovateľný alternatívny prístup k ‚zlatému štandardu‘ manuálneho zoškrabovania buniek, ktorý vedie k vyšším výťažkom RNA, celkových lipidov a celkových polárnych metabolitov.“ (Cruchley-Fuge a kol., 2024)

Cruchley-Fuge a kol. zdôrazňujú výhody sonikátora UIP400MTP pri spracovaní adherentných buniek. Nahradením manuálneho zoškrabovania táto metóda zlepšuje reprodukovateľnosť, zvyšuje kapacitu spracovania a výťažok, čím sa stáva neoceniteľným nástrojom pre rozsiahle štúdie, ako je PrecisionTox. Integrácia UIP400MTP do automatizovaných pracovných postupov nielen znižuje variabilitu, ale aj zefektívňuje pracovne náročné procesy a umožňuje získavanie vysokokvalitných multiómových údajov.

Práca Cruchley-Fuge a kol. (2024) uľahčuje a zefektívňuje spracovanie adherentných bunkových kultúr na multiómovú analýzu. Integrácia sonikátora UIP400MTP s automatizovanými pracovnými postupmi zabezpečuje konzistentnú a efektívnu prípravu vzoriek, vďaka čomu je ideálny na vysokokapacitný toxikologický výskum.
 

Návrh, výroba a poradenstvo – kvalita vyrobená v Nemecku

Ultrazvukové prístroje Hielscher sú známe najvyššou kvalitou a najvyššími konštrukčnými štandardmi. Robustnosť a jednoduchá obsluha umožňujú bezproblémovú integráciu našich ultrazvukových prístrojov do priemyselných prevádzok. Ultrazvukové prístroje Hielscher ľahko zvládajú drsné podmienky a náročné prostredia.

Hielscher Ultrasonics je spoločnosť s certifikáciou ISO a kladie osobitný dôraz na vysokovýkonné sonikátory s najmodernejšou technológiou a jednoduchým používaním. Ultrazvukové prístroje Hielscher samozrejme spĺňajú požiadavky CE aj požiadavky UL, CSA a RoHs.