ASTM E2799-22 Протокол оценки антимикробных препаратов

Hielscher UIP400MTP - это мощный и эффективный многолуночный ультразвуковой аппарат, предназначенный для упрощения этапа ультразвуковой обработки в соответствии с протоколом ASTM E2799-22. Подавая равномерную ультразвуковую энергию по всей микротитрообразующей пластине, UIP400MTP обеспечивает равномерное и надежное отделение биопленок от колышковых крышек без повреждения клеток и нарушения целостности образца. Его высокая пропускная способность и удобство работы значительно сокращают время обработки и повышают воспроизводимость, что делает его идеальным решением для лабораторий, проводящих анализы жизнеспособности биопленки и тестирование эффективности противомикробных препаратов.

АСТМ Е2799

ASTM E2799 — это стандартизированный метод испытаний, предназначенный для оценки эффективности противомикробных препаратов против биопленок, в частности, с акцентом на Pseudomonas aeruginosa. Биопленки представляют собой сложные микробные сообщества, которые прилипают к поверхностям и демонстрируют повышенную устойчивость к антимикробным препаратам, что делает их серьезной проблемой в здравоохранении, промышленности и окружающей среде. В этом методе используется анализ минимальной концентрации уничтожения биопленки (MBEC) для обеспечения надежной и воспроизводимой основы для тестирования дезинфицирующих средств в реалистичных условиях биопленки.

Какой вклад внесла ультразвуковая обработка в ASTM E2799?

Ультразвуковая обработка играет важнейшую роль в протоколе ASTM E2799, способствуя отделению биопленок от тестовых поверхностей, обеспечивая точную оценку жизнеспособности микроорганизмов после обработки. Используя контролируемую ультразвуковую энергию, протокол обеспечивает эффективное и последовательное разрушение биопленки без повреждения клеток, что позволяет получить точные и воспроизводимые результаты. Это делает стандарт ASTM E2799 важным инструментом для продвижения исследований биопленки и разработки эффективных антимикробных стратегий.

Как проводить анализ MBEC в соответствии со стандартом ASTM E2799-22

В протоколе ASTM E2799-22 изложены шаги по оценке эффективности противомикробных препаратов против биопленок. При использовании ультразвукового аппарата Hielscher UIP400MTP микротитровочной пластине протокол может быть адаптирован для включения этого передового метода ультразвуковой обработки для отслоения биопленки. Ниже приведено описание шагов, адаптированных к использованию ультразвукового аппарата для микропланшетов UIP400MTP:

1. Получение биопленок
   Подготовьте стерильную 96-луночную микротитровую пластину со съемными колышковыми крышками.
   Инокулируйте лунки стандартизированной бактериальной суспензией в подходящую среду для выращивания.
   Положите колышки на тарелку, убедившись, что колышки полностью погружены в бактериальную суспензию.
   Инкубируйте планшет в контролируемых условиях (например, при температуре и времени), чтобы обеспечить образование биопленки на колышках.
2. Лечение противомикробными препаратами
   После образования биопленки замените среду свежей средой, содержащей тестируемые противомикробные препараты в различных концентрациях.
   Снова прикрепите колышек к крышке и инкубируйте в условиях, указанных в дизайне испытания.
3. Подготовка к отслоению биопленки
   После обработки промыть крышку колышка, погрузив ее в стерильный раствор для полоскания, чтобы удалить остатки противомикробных агентов и слабо прилипшие планктонные клетки.
4. Отслоение биопленки с помощью ультразвукового аппарата UIP400MTP
   Приготовьте свежий 96-луночный микротитровальный планшет, содержащий восстановительную среду (например, нейтрализующий бульон).
   Отсоедините биопленки, поместив колышковую крышку в лунки пластины для восстановительной среды.
   Вставьте пластину в ультразвуковой аппарат UIP400MTP, убедившись, что крышка и пластина правильно выровнены.
   Установите ультразвуковой аппарат на амплитуду 70%-80% и обрабатывайте ультразвуком в течение 3-4 минут в циклическом режиме, чтобы обеспечить равномерное отслоение биопленки без лизиса клеток.
5. Оценка жизнеспособности биопленки
   После обработки ультразвуком обрабатывают восстановительную среду, содержащую отделившиеся биопленочные клетки, с использованием стандартных микробиологических или аналитических методов, таких как:
   • Подсчет колониеобразующих единиц (КОЕ): Выполните серийное разведение и нанесите пластину на агар для подсчета жизнеспособных клеток.
   • Измерения оптической плотности (OD): используйте спектрофотометрический анализ для оценки плотности клеток.
   • Флуоресцентные анализы жизнеспособности: количественное определение живых и мертвых клеток с использованием флуоресцентных красителей.
6. анализ данных
   Сравните данные о жизнеспособности обработанных и необработанных биопленок для определения эффективности противомикробных препаратов.
   Рассчитайте минимальную концентрацию для уничтожения биопленки (MBEC) на основе концентрации, необходимой для уничтожения жизнеспособных биопленочных клеток.
7. контроль качества
   Обеспечьте стабильные условия ультразвуковой обработки путем регулярной калибровки UIP400MTP и проверки того, что процесс отслоения биопленки не приводит к значительному лизису или разрушению клеток.
   Включите соответствующие средства контроля, такие как необработанные биопленки и заготовки только для среды, для проверки результатов.

Образующиеся на штифтах биопленочные клетки вытесняли с помощью ультразвуковой обработки (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Германия, UIP250MTP) в течение 5 мин в 96-луночных планшетах, содержащих свежую питательную среду для восстановления клеток.
(Фото и исследование: ©де Оливейра и др., 2016)

Благодаря интеграции UIP400MTP в рабочий процесс ASTM E2799-22 процесс отделения биопленки оптимизируется для обеспечения стабильности, эффективности и высокой производительности.