Экстракция внеклеточного матрикса с помощью ультразвукового устройства UIP400MTP для 96-луночных планшетов

Традиционные методы экстракции внеклеточного матрикса (EM) часто включают несколько этапов разрушения матрикса биоплёнки. Однако эти методы могут требовать много времени и давать нестабильные результаты, что приводит к вариабельности результатов. Ультразвуковое устройство UIP400MTP для 96-луночных планшетов значительно облегчает процесс экстракции EM, обеспечивая высокоэффективное, точное и равномерное разрушение биоплёнки в высокопроизводительных форматах. UIP400MTP использует сфокусированный ультразвук для создания контролируемой кавитации, эффективно разрушая матрикс биоплёнки и сохраняя при этом жизнеспособность и целостность клеток, заключённых в биоплёнке. Использование UIP400MTP повышает воспроизводимость и точность последующих исследований, таких как метаболомный и протеомный анализ, тесты на жизнеспособность и исследования чувствительности к антимикробным препаратам. Упрощая экстракцию EM, UIP400MTP позволяет исследователям получать стабильные и высококачественные результаты, обеспечивая более глубокое понимание динамики биоплёнок и их взаимодействий с внешними агентами.

Экстракция внеклеточного матрикса

Внеклеточный матрикс (EM) является важнейшим компонентом биоплёнок, образуемых микроорганизмами, такими как Candida albicans. Состоящий из полисахаридов, белков, липидов и внеклеточной ДНК, EM обеспечивает структурную целостность, опосредует адгезию к поверхностям и вносит значительный вклад в устойчивость к антимикробным препаратам. Экстракция и анализ EM необходимы для понимания биологии биоплёнок, выяснения механизмов лекарственной устойчивости и выявления новых терапевтических мишеней.

Протокол экстракции внеклеточного матрикса (EM) из биоплёнок Candida albicans с использованием UIP400MTP

Этот протокол предназначен для экстракции внеклеточного матрикса (EM) биоплёнок Candida albicans, сформированных в статических условиях. Он предусматривает использование ультразвукового устройства UIP400MTP вместо традиционных этапов соскабливания или обработки ферментами для повышения эффективности и воспроизводимости.

Необходимые материалы

Пошаговые инструкции по экстракции EM

1. Формирование биоплёнки в статических условиях
   Для получения биоплёнок в статических условиях внесите инокулят C. albicans в лунки 96-луночного планшета, используя среду RPMI-1640. Каждая лунка должна содержать одинаковый объём инокулята (например, 200 µL на лунку).
   Инкубируйте планшет при 37°C в статических условиях в течение 24 часов, чтобы обеспечить формирование биоплёнки на поверхностях лунок.
2. Подготовка биоплёнки к экстракции
   После инкубации осторожно аспирируйте и удалите использованную среду из каждой лунки, не нарушая биоплёнку.
   Осторожно промойте каждую лунку стерильным PBS (например, 200 µL), чтобы удалить слабо прикреплённые клетки и планктонные остатки. Повторите этот этап дважды.
   Добавьте свежий PBS или буфер для экстракции (например, 200 µL) в каждую лунку для подготовки к обработке ультразвуком.
3. Обработка ультразвуком с помощью UIP400MTP
   Поместите 96-луночный планшет, содержащий PBS или буфер для экстракции, в лоток ультразвукового устройства UIP400MTP. Для правильного размещения многолуночного планшета следуйте указаниям руководства.
   Обрабатывайте ультразвуком в течение 5–6 минут в щадящем режиме (амплитуда 60%, импульсный режим), обеспечивая равномерное разрушение структуры биоплёнки и высвобождение компонентов EM.
   Используйте контроль температуры ультразвукового устройства UIP400MTP (датчик температуры и настройки), чтобы избежать чрезмерного нагрева или повреждения образцов.
4. Обработка катионообменной смолой (CER)
   Перенесите обработанную ультразвуком жидкость из каждой лунки в новый 96-луночный планшет.
   Добавьте в каждую лунку двукратный объём суспензии CER (приготовленной в PBS или буфере) (например, общий объём 400 µL на лунку).
   Герметично закройте планшет и инкубируйте его на планшетном шейкере или ротаторе при 400 rpm в течение 3 часов для связывания и выделения компонентов EM.
5. Разделение и фильтрация
   Центрифугируйте планшет при 2 000 × g в течение 10 минут, чтобы отделить смолу и клетки от супернатанта.
   Осторожно перенесите содержащий EM супернатант из каждой лунки в новый 96-луночный планшет.
   Профильтруйте супернатант через фильтр с размером пор 0,22 µm, используя систему вакуумной фильтрации с коллектором для планшетов или её аналог, чтобы получить чистый экстракт EM.
6. Анализ EM
   Для характеристики компонентов EM используйте такие методы, как UPLC-Q-TOF-MS для нецелевого профилирования метаболитов, или применяйте специфические анализы (например, BCA для белков и наборы для количественного определения триглицеридов и углеводов).

Высокопроизводительная экстракция внеклеточного матрикса

Высокая эффективность экстракции внеклеточного матрикса (EM) с помощью ультразвукового устройства UIP400MTP произвела революцию в подготовке образцов для исследований, требующих точного анализа свойств биоплёнок. UIP400MTP использует ультразвуковые волны для точного и равномерного разрушения матрикса биоплёнки, обеспечивая эффективное высвобождение компонентов EM и сохраняя при этом жизнеспособность и целостность клеток. Этот подход значительно повышает надёжность таких исследований, как тесты на жизнеспособность биоплёнок, протеомные и метаболомные исследования и оценка чувствительности к антимикробным препаратам.

В исследованиях восстановления биоплёнок, таких как подсчёт колониеобразующих единиц (CFU), экстракция EM с помощью UIP400MTP обеспечивает беспрепятственный доступ реагентов к клеткам, заключённым в биоплёнке. Аналогичным образом протеомный и метаболомный анализ, например UPLC-Q-TOF-MS, выигрывает от выделения белков, липидов и метаболитов с высоким выходом. UIP400MTP также позволяет проводить точное тестирование чувствительности к антимикробным препаратам, обеспечивая точное определение значений MIC и MBEC для биоплёнок. Кроме того, эффективная экстракция с помощью UIP400MTP способствует проведению анализов ферментативной активности, количественному определению компонентов и структурным исследованиям, позволяя получить ценные сведения о роли внеклеточных матриксов в архитектуре биоплёнок, адгезии и механизмах устойчивости.

Этот высокопроизводительный и воспроизводимый метод экстракции оптимизирует подготовку EM, обеспечивая превосходные результаты в целом ряде исследований биоплёнок.