Замените соскабливание клеток высокопроизводительным ультразвуковым аппаратом UIP400MTP

Отделение и экстракция адгезивных клеточных линий из многолуночных планшетов для мультиомного анализа – повседневная задача в лабораториях. Высокопроизводительное отделение клеток с помощью ультразвукового аппарата UIP400MTP для многолуночных планшетов заменяет ручное соскабливание клеток, обеспечивая более высокий выход РНК, общих липидов и общих полярных метаболитов. Новый метод объединяет ультразвуковой аппарат Hielscher UIP400MTP с рабочей станцией для обработки жидкостей Beckman Coulter i7, обеспечивая высокопроизводительную, воспроизводимую и эффективную обработку клеток для экстракции РНК, метаболитов и липидов. Представленный метод превосходит традиционные методы ручного соскабливания клеток, обеспечивая более высокую воспроизводимость и выход для различных типов клеток и условий эксперимента.

Упростите отделение клеток с помощью ультразвукового аппарата UIP400MTP для микропланшетов

Системы культивирования адгезивных клеток играют важнейшую роль в токсикологических и биомедицинских исследованиях. В этом контексте Cruchley-Fuge и соавт. (2024) рассмотрели существенную проблему в рамках проекта PrecisionTox, направленного на использование омиксных технологий для оценки опасности химических веществ. Целью проекта был высокопроизводительный анализ тысяч образцов, обработанных различными химическими веществами. Для решения этой задачи исследователи разработали автоматизированный рабочий процесс, объединяющий ультразвуковой аппарат UIP400MTP с устоявшимися протоколами двухфазной экстракции для анализа методом жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (LC-MS). В их исследовании оценивается эффективность ультразвукового аппарата UIP400MTP для многолуночных планшетов при отделении адгезивных клеток по сравнению с ручным соскабливанием и другими традиционными методами.

Оптимизация мультиомного анализа: автоматизированная экстракция адгезивных клеток с помощью UIP400MTP

Исследовательская группа Laura Cruchley-Fuge из Бирмингемского университета использовала три клеточные линии человека: HepG2 (клетки рака печени), HepaRG (дифференцированные гепатоцитоподобные клетки) и H295R (клетки рака надпочечников). Эти клетки культивировали в 24-луночных и 96-луночных планшетах и подвергали воздействию исследуемых химических веществ, таких как афлатоксин B1 и форсколин.

План эксперимента:

• Этап 1: Оптимизация настроек мощности ультразвукового аппарата UIP400MTP и сравнение с ручным соскабливанием клеток и ультразвуковыми водяными ваннами. Для оценки выхода РНК, метаболитов и липидов использовали клетки HepG2.
• Этап 2: Интеграция UIP400MTP в рабочий процесс двухфазной экстракции с использованием системы Beckman Coulter i7. Валидацию проводили с использованием клеток HepaRG и H295R.

Рабочий процесс экстракции: Рабочий процесс включал воздействие химических веществ в многолуночных планшетах, отделение клеток с помощью UIP400MTP и двухфазную экстракцию методом Bligh & Dyer (B&D). Анализ липофильных и полярных соединений методом LC-MS проводили с использованием Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120. Метод B&D, являющийся золотым стандартом количественного определения липидов, включает двухэтапную экстракцию с использованием метанола, хлороформа и воды с последующим количественным определением липидов в хлороформной фазе.

Ультразвуковой аппарат UIP400MTP для микропланшетов облегчает отделение адгезивных клеточных линий от многолуночных планшетов и чашек Петри

Результаты:

• Этап 1: Оптимальные условия обработки ультразвуком были установлены при мощности 60%.
  UIP400MTP обеспечил самый высокий выход РНК с исключительной воспроизводимостью по сравнению с ручным соскабливанием и ультразвуковыми ваннами.
  Выход полярных метаболитов был сопоставимым при использовании разных методов, тогда как выход липидов при использовании UIP400MTP был заметно выше.
• Этап 2: Валидация на клетках HepaRG и H295R продемонстрировала высокую воспроизводимость липидомных и метаболомных данных, о чём свидетельствовала плотная кластеризация значений главных компонент (PCA).
  Образцы, обработанные афлатоксином B1 и форсколином, эффективно отличались от контрольных образцов, что подчёркивает чувствительность и надёжность метода.

«Ультразвуковой аппарат Hielscher UIP400MTP обеспечивает высококачественный и воспроизводимый альтернативный подход к „золотому стандарту“ ручного соскабливания клеток, позволяя получать более высокий выход РНК, общих липидов и общих полярных метаболитов». (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge и соавт. подчёркивают преимущества ультразвукового аппарата UIP400MTP для обработки адгезивных клеток. Заменяя ручное соскабливание, этот метод повышает воспроизводимость, производительность и выход, что делает его неоценимым инструментом для масштабных исследований, таких как PrecisionTox. Интеграция UIP400MTP в автоматизированные рабочие процессы не только снижает вариабельность, но и оптимизирует трудоёмкие процессы, обеспечивая получение высококачественных мультиомных данных.

Работа Cruchley-Fuge и соавт. (2024) облегчает и оптимизирует обработку адгезивных клеточных культур для мультиомного анализа. Интеграция ультразвукового аппарата UIP400MTP в автоматизированные рабочие процессы обеспечивает стабильную и эффективную подготовку образцов, благодаря чему он идеально подходит для высокопроизводительных токсикологических исследований.
 

Проектирование, производство и консультирование – качество из Германии

Ультразвуковые аппараты Hielscher хорошо известны высочайшим качеством и стандартами проектирования. Надёжность и простота эксплуатации обеспечивают беспроблемную интеграцию наших ультразвуковых аппаратов в промышленные объекты. Ультразвуковые аппараты Hielscher легко справляются с суровыми условиями и работой в сложной среде.

Hielscher Ultrasonics – компания, сертифицированная по ISO, которая уделяет особое внимание высокопроизводительным ультразвуковым аппаратам, сочетающим самые современные технологии и удобство использования. Разумеется, ультразвуковые аппараты Hielscher соответствуют требованиям CE и отвечают требованиям UL, CSA и RoHs.