PMCA fir den Noweis vu Prione mat héijem Proufduerchsaz mam UIP400MTP-Sonikator

Den UIP400MTP-Sonikator fir Multiwell-Placke bitt eng leeschtungsstaark Léisung fir d’Proufvirbereedung mat héijem Proufduerchsaz bei der zyklescher Amplifikatioun vun der Proteinfeelfaaltung (PMCA). Duerch eng gläichméisseg Energieverdeelung iwwer verschidde Wells an d’Anhale vu prezise Beschallungsparameter erméiglecht dëse System déi gläichzäiteg Veraarbechtung vu ville Prouwe mat aussergewéinlecher Reproduzéierbarkeet. Dës Fäegkeete sinn entscheedend, fir d’PMCA fir den Noweis vu Prione bei niddrege Konzentratiounen a schwierege biologesche Prouwen, wéi Spaut, ze optiméieren, an deenen Assayinhibitoren d’Resultater verschleiere kënnen.

Prionekrankheeten, wéi Chronic Wasting Disease (CWD) bei Hirschaarten an d’Creutzfeldt-Jakob-Krankheet (CJD) beim Mënsch, sinn neurodegenerativ Erkrankungen, déi duerch feelgefaalte Prioneproteinnen (PrP^Sc) verursaacht ginn. Bei dëse Krankheete sinn dacks nëmme kleng Quantitéiten un infektiéise Prionen a Kierperflëssegkeete wéi Spaut, Blutt an Urin ze fannen, wat d’Diagnos an d’Fuerschung erschwéiert. Déi horizontal Iwwerdroung vu CWD duerch Prionen, déi an Ëmweltmatricen ausgeschidd ginn, huet besonnesch bedeitend Auswierkungen op d’Gestioun vu Wëlldéierbestänn an d’Gesondheet vun den Ökosystemer. Och bei Krankheete wéi der Creutzfeldt-Jakob-Krankheet ass déi zouverlässeg Amplifikatioun vu feelgefaalte Prioneproteinnen aus mënschleche Prouwen entscheedend, fir d’Diagnostik virunzebréngen an de Krankheetsverlaf ze verstoen.

D’Uwendung vun engem modifizéierte PMCA-Protokoll erméiglecht et, heefeg Assayinhibitoren (z. B. Muzinen am Spaut) ze ëmgoen an eng héich Sensibilitéit beim Noweis vu Prionen z’erreechen, déi mat Technike wéi der duerch Schëddelen induzéierter Konversioun an Echtzäit (RT-QuIC) soss net noweisbar wieren oder onkloer Resultater géife liwweren. Dës Fortschrëtter verbesseren de Prionennoweis fir verschidde Krankheeten a maachen d’PMCA zu engem onverzichtbaren Instrument fir d’Prionefuerschung an d’Diagnostik. Den UIP400MTP-Sonikator fir Multiwell-Placken erliichtert d’PMCA mat héijem Proufduerchsaz, andeems e vill Prouwen a Mikroplacken (z. B. Placke mat 6, 24 oder 96 Wells) oder a Prouffläscherecher an engem Réiergestell beschallt.

Protokoll fir d’zyklesch Amplifikatioun vun der Proteinfeelfaaltung (PMCA) mat héijem Proufduerchsaz

De folgende Protokoll erméiglecht déi effizient Veraarbechtung vun enger grousser Zuel vu Prouwen ënner genee de selwechte Bedéngunge fir robust Fuerschungsresultater.

Proufvirbereedung

Ausgangsmaterial:
Bereet d’Prouwe vir duerch:

• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

Substrat:

• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.^C Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

Virbereedung vun de Prouwen an enger Mikroplack oder a Réierer:
Réierer:

• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

Mikroplack mat 6 Wells:

• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

PMCA-Prozedur

Positionéierung:
Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

Zykleprogramm:
Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

Uschléissend Ronnen:
Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
• Detailléiert Uweisunge fir d’Amplifikatioun vun infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

Noweis vu PrP^Sc

1. Verdauung mat Proteinase K:
   Detailléiert Uweisunge fir d’Veraarbechtung an den Noweis vun amplifizéierten infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.
2. Western-Blot-Analys:
   Detailléiert Uweisunge fir d’Veraarbechtung an den Noweis vun amplifizéierten infektiéise Prione kann ech net iwwersetzen.

 

Den Hielscher UIP400MTP ass dee flexibelsten Ultraschallapparat fir Är Multiwell-Placken, PCR-Placken oder Proufréiercher. Mat 400 Watt kontinuéierlecher Ultraschallleeschtung ass en fir Uwendunge wéi Zelllys, Emulgéierung, Proteinextraktioun, DNA- / RNA-Fragmentéierung, Desagglomeratioun, FFPE-Extraktioun, Ofléisung vun Zellen a Biofilmer oder Emulgéierung konzipéiert. Den UIP400MTP ass keen Ultraschallbad. Et ass eng Bechersonotrod mat héijer Intensitéit fir eng gezilt Ultraschallbehandlung. Dëse leeschtungsstaarken, kontaktlosen Ultraschallapparat garantéiert eng gläichméisseg Ultraschallbehandlung an alle Verdéiwunge vun Ärer Standard-Multiwell-Plack. Dir kënnt d'Amplitud, d'Leeschtung an de Pulsbetrib präzis steieren. En integréierten Timer an eng Temperatursond garantéiere konstant Resultater. Den UIP400MTP fir d'Ultraschallbehandlung vu Placke killt d'Prouwe mat engem Waasserbad of; en externe Killapparat ass optional verfügbar.

 

Veraarbecht méi Prouwe fir méi robust Resultater

Den UIP400MTP-Sonikator fir Multiwell-Placke verbessert d’Effizienz an d’Skaléierbarkeet vun der zyklescher Amplifikatioun vun der Proteinfeelfaaltung (PMCA) däitlech a reduzéiert domat den traditionell héijen Zäitopwand vun der Prozedur. Well de System déi gläichzäiteg Veraarbechtung vu bis zu 96 Prouwen an enger Plack mat 96 Wells erméiglecht, vereinfacht en d’PMCA-Aarbechtsleef a behält dobäi prezis a gläichméisseg Beschallungsbedéngungen iwwer all Wells bäi. Dës Fäegkeet fir en héije Proufduerchsaz miniméiert manuell Handhabung, reduzéiert aarbechtsintensiv Schrëtt a garantéiert Reproduzéierbarkeet, wat en zu engem onverzichtbaren Instrument fir d’Prionefuerschung mécht. Egal ob Chronic Wasting Disease oder d’Creutzfeldt-Jakob-Krankheet ënnersicht gëtt, den UIP400MTP erliichtert grouss ugeluechte Studie mat méi héijer Effizienz an erméiglecht et de Fuerscher, den Ufuerderunge vu modernen diagnosteschen a wëssenschaftlechen Uwendungen gerecht ze ginn.

---

---

Literatur / Referenzen

• FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
• Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
• De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
• Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
• Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
• Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
• Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.