FFPE მაღალი გამტარუნარიანობის ნიმუშის მომზადება: პროტეინის ექსტრაქცია და ნუკლეინის მჟავის გაპარსვა

მაღალი გამტარუნარიანობის ულტრაბგერითი UIP400MTP, Hielscher Ultrasonics მიმართავს ფორმალინის ფიქსაციისა და პარაფინის ჩაშენებული (FFPE) ქსოვილის მომზადების გამოწვევებს. შეიტყვეთ, თუ როგორ ამუშავებს ულტრაბგერითი FFPE ნიმუშს დიდი რაოდენობით FFPE დეპარაფინიზაციისთვის, ქსოვილის ლიზისთვის, ჰომოგენიზაციისთვის, ცილების ექსტრაქციისა და დნმ/რნმ-ის განაწილებისთვის! ისარგებლეთ ულტრაბგერითი FFPE ქსოვილის მომზადებით – ნიმუშების დიდი რაოდენობის დამუშავება მრავალსაჭიან ფირფიტებში! მიიღეთ მაღალი ხარისხის ნიმუშები და მიიღეთ მაღალი ნიმუშების ნომრები საიმედო კვლევის შედეგებისთვის! და ბოლოს, მაგრამ არანაკლებ დაზოგეთ დრო და ფული!

FFPE ნიმუშის მომზადება გაადვილებულია მაღალი გამტარუნარიანობის გაჟღერებით

ფორმალინის ფიქსაცია და პარაფინის ჩანერგვა (FFPE) არის ყველაზე გავრცელებული მეთოდი მყარი ქსოვილების შენარჩუნებისა და არქივისთვის. FFPE ქსოვილის ნიმუშებიდან ბიომოლეკულების მოპოვება ხშირად წარმოადგენს მნიშვნელოვან გამოწვევებს შენახული ნიმუშების ხარისხის გამო. ეს ნიმუშები, რომლებიც ფასდაუდებელი აქტივია მოლეკულურ ბიოლოგიასა და კლინიკურ კვლევებში, წარმოადგენს ბიოლოგიური ინფორმაციის მდიდარ წყაროს რეტროსპექტული კვლევებისთვის და დიაგნოსტიკური ბიომარკერების დადასტურებისთვის. თუმცა, ფორმალინის ფიქსაციისა და პარაფინის ჩანერგვის პროცესი, ქსოვილების არქიტექტურისა და მორფოლოგიის შენარჩუნებით, ართულებს მაღალი ხარისხის ნუკლეინის მჟავებისა და ცილების ექსტრაქციას. ფორმალინი იწვევს ნუკლეინის მჟავებისა და ცილების ჯვარედინი კავშირს, რაც იწვევს მოლეკულურ ფრაგმენტაციას და ქიმიურ მოდიფიკაციას. შეიტყვეთ, თუ როგორ გადალახავს მაღალი გამტარუნარიანობის ულტრაბგერითი აპარატი UIP400MTP FFPE ნიმუშის მომზადების გამოწვევებს!

ულტრაბგერითი ეფექტური FFPE ნიმუშის მომზადებისთვის

  • ადვილად გამოსაყენებელი სამუშაო პროცესი: გამარტივებული პროცესები, რომლებიც მოსახერხებელია მომხმარებლისთვის.
  • დეპარაფინიზაცია, პროტეინის ექსტრაქცია, დნმ/რნმ-ის დაშლა
  • სწრაფი მაღალი გამტარუნარიანობის დამუშავება: ეფექტური დამუშავება მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტებთან.
  • ეფექტური დეპარაფინიზაცია: ცილების გაუმჯობესებული ხსნადი.
  • არატოქსიკური გამხსნელები: თავს არიდებს მავნე ორგანული გამხსნელების გამოყენებას, როგორიცაა ქსილენი.

 

UIP400MTP მრავალსაფეხურიანი ფირფიტის ულტრაბგერითი აპარატს შეუძლია FFPE ნიმუშების მაღალი გამტარუნარიანობის დამუშავება ცილების ექსტრაქციისა და დნმ-ისა და რნმ-ის განაწილებისთვის.

UIP400MTP მაღალი გამტარიანობის sonicator მაღალი გამტარუნარიანობის FFPE ნიმუშის დამუშავებისთვის მულტიჭის ფირფიტებში

ინფორმაციის მოთხოვნა




გაითვალისწინეთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


 
FFPE ნიმუშის მომზადება ულტრაბგერითი გამოსხივების გამოყენებით - UIP400MTP მრავალჯერადი ფირფიტის სონიკატორი Hielscher-ისგან
 

მიღწევები პროტეინის ექსტრაქციის ტექნიკაში FFPE ქსოვილიდან

Hielscher Ultrasonics მიმართავს გამოწვევებს მაღალი გამტარუნარიანობის FFPE ნიმუშის მომზადებაში. Sonication იყენებს ულტრაბგერითი ტალღებს მექანიკური ვიბრაციებისა და ფოკუსირებული კავიტაციის შესაქმნელად, რაც ეფექტურად არღვევს უჯრედულ სტრუქტურებს და აძლიერებს ბიომოლეკულების ხსნადიზაციას. ამ ტექნიკამ პოპულარობა მოიპოვა მისი უნარით გაზარდოს ნუკლეინის მჟავისა და ცილების ექსტრაქციის ეფექტურობა და ეფექტურობა FFPE ქსოვილებიდან, ასევე დნმ-ისა და რნმ-ის შეკუმშვა ბიბლიოთეკის მომზადებისთვის. ძალზე მნიშვნელოვანია ხაზგასმით აღვნიშნოთ, რომ ულტრაბგერითი გამომუშავება UIP400MTP მრავალბელიანი ფირფიტის სონიკატორის გამოყენებით ინარჩუნებს ამ ბიომოლეკულების მთლიანობას ქვედა დინების აპლიკაციებისთვის.

 

ვიდეო გვიჩვენებს ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადების სისტემა UIP400MTP, რომელიც საშუალებას იძლევა საიმედო ნიმუშის მომზადება ნებისმიერი სტანდარტული მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტაზე მაღალი ინტენსივობის ულტრაბგერის გამოყენებით. UIP400MTP-ის ტიპიური აპლიკაციები მოიცავს უჯრედების ლიზას, დნმ-ს, რნმ-ს და ქრომატინის ცვლას, ასევე ცილების ექსტრაქციას.

ულტრაბგერითი UIP400MTP მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტის გამაჯანსაღებისთვის

ვიდეოს მინიატურა

 

ნუკლეინის მჟავის ცვლა მაღალი გამტარიანობის ულტრაბგერითი გამოყენებით

96 ჭაბურღილიანი ფირფიტები და სხვა მულტიბელური ფირფიტები საუკეთესოდ დამუშავდება sonicator UIP400MTP-ის გამოყენებით. ეს ულტრაბგერითი სისტემა იდეალურია ლიზისის, დნმ-ის ფრაგმენტაციისა და უჯრედების ხსნადიზაციის ნიმუშების მაღალი გამტარუნარიანობის დასამუშავებლად.მრავალ ჭაბურღილის ულტრაბგერითი UIP400MTP მაღალი გამტარუნარიანობის პარამეტრებში გამოსაყენებლად FFPE ნიმუშების მომზადებას ახალ დონეზე მოაქვს. ეს მრავალსაფეხურიანი სონიკაციის მეთოდი უზრუნველყოფს ეფექტურ და საიმედო გადაწყვეტას მრავალი ნიმუშის ერთდროული დამუშავებისთვის. ეს ხელს უწყობს დნმ-ის, რნმ-ისა და ცილების სწრაფ და გამეორებად ექსტრაქციას, რომლებიც კრიტიკულია სხვადასხვა ანალიტიკური ტექნიკისთვის, მათ შორის შემდეგი თაობის თანმიმდევრობის (NGS), რაოდენობრივი PCR და პროტეომიური ანალიზებისთვის. სონიკაციის პარამეტრების ოპტიმიზაცია, როგორიცაა ამპლიტუდა, ხანგრძლივობა და ტემპერატურა, კიდევ უფრო აძლიერებს მოპოვებული ბიომოლეკულების ხარისხსა და რაოდენობას.

UIP400MTP sonicator მულტიბელური ფირფიტებისთვის გთავაზობთ მნიშვნელოვან უპირატესობებს FFPE ქსოვილისგან დნმ-ისა და რნმ-ის ფრაგმენტაციისა და განაწილებისთვის. ამ სისტემის ერთ-ერთი გამორჩეული მახასიათებელია მისი უნარი მიაღწიოს დნმ-ისა და რნმ-ის ვიწრო ფრაგმენტების ზომას, რაც უზრუნველყოფს ბგერითი ინტენსივობის ზუსტ რეგულირებას 150-200 ბაზის წყვილის (bp) მოკლე ფრაგმენტების ან 15-20 კილობაზის წყვილის უფრო გრძელი ფრაგმენტების მისაღებად. კბპ). ეს მრავალფეროვნება ხდის UIP400MTP-ს შეუცვლელს როგორც მოკლე წაკითხვის, ისე ხანგრძლივად წაკითხული თანმიმდევრობის აპლიკაციებისთვის, რაც უზრუნველყოფს მაღალი ხარისხის შედეგებს შემდეგი თაობის თანმიმდევრობის (NGS) და მთელი გენომის თანმიმდევრობის (WGS). მისი ზუსტი კონტროლი ფრაგმენტების ზომაზე გადამწყვეტია გენომიკის ყველა დარგის მკვლევრებისთვის, რადგან ის იძლევა ნიმუშების მომზადების საშუალებას სპეციფიკაციების მიხედვით.

დაგვიკავშირდით FFPE ქსოვილის მოწინავე გადაწყვეტილებებისთვის

აღმოაჩინეთ UIP400MTP მულტიბელური ფირფიტის სონიკატორი FFPE ნიმუშებიდან ბიომოლეკულების ეფექტური აღდგენისთვის, მოპოვებული ნუკლეინის მჟავების და ცილების მთლიანობის შესანარჩუნებლად და შედეგების გამეორებადობის უზრუნველსაყოფად. ეს ტექნოლოგია შეუფერხებლად აერთიანებს სხვა მოსამზადებელ და ანალიტიკურ სამუშაო პროცესებს, აუმჯობესებს და აძლიერებს მოლეკულურ გამოკვლევებს FFPE ქსოვილის არქივების გამოყენებით.

ინფორმაციის მოთხოვნა




გაითვალისწინეთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


ფიქსატორები და მათი ეფექტები

ფიქსაცია არის გადამწყვეტი ნაბიჯი ნიმუშის მომზადებაში, რომელიც ინარჩუნებს უჯრედულ სტრუქტურებს, აჩერებს ბიოქიმიურ რეაქციებს და ხელს უშლის დეგრადაციას. სპეციფიკური ექსპერიმენტული მოთხოვნებიდან გამომდინარე გამოიყენება სხვადასხვა ფიქსატორები. ორი ყველაზე გავრცელებული ფიქსატორია ფორმალდეჰიდი და პარაფორმალდეჰიდი, რომლებიც აკავშირებენ ცილებს და ნუკლეინის მჟავებს, ინარჩუნებენ უჯრედებისა და ქსოვილების მორფოლოგიასა და ანტიგენურობას. სხვა ფიქსატორები, როგორიცაა ეთანოლი, მეთანოლი და გლუტარალდეჰიდი, გამოიყენება სპეციფიკური გამოყენებისთვის.

ფორმალდეჰიდის და პარაფორმალდეჰიდის ფიქსატორები ქმნიან მეთილენის ხიდებს ამინოჯგუფებს შორის, რის შედეგადაც ხდება ცილების ჯვარედინი კავშირი. ეს პროცესი ეფექტურად ახდენს უჯრედულ კომპონენტებს იმობილიზაციას, ინარჩუნებს მათ მთლიანობას შემდგომი ანალიზის ეტაპების დროს. ამ ფიქსატორების ეფექტზე შეიძლება გავლენა იქონიოს ფაქტორებმა, როგორიცაა კონცენტრაცია, pH და ტემპერატურა, და ამ პარამეტრების ოპტიმიზაცია გადამწყვეტია უჯრედული სტრუქტურების ოპტიმალური შენარჩუნების უზრუნველსაყოფად.

 
ულტრაბგერითი FFPE მომზადების უპირატესობები
 

ულტრაბგერითი არის ძლიერი ტექნიკა ფიქსირებული უჯრედებისა და ქსოვილების დასაშლელად, რომელიც აღემატება ჩვეულებრივ ტექნიკას. მას აქვს რამდენიმე მნიშვნელოვანი უპირატესობა ტრადიციულ ლიზის მეთოდებთან შედარებით:

  • სიჩქარე და ეფექტურობა: ულტრაბგერითი ლიზისი უზრუნველყოფს უჯრედებისა და ქსოვილების სწრაფ დარღვევას, რაც მნიშვნელოვნად ამცირებს დამუშავების დროს მექანიკურ ან ქიმიურ ლიზის მეთოდებთან შედარებით. ულტრაბგერითი ზონდის მიერ წარმოქმნილი მაღალი სიხშირის ხმის ტალღები ქმნის მექანიკურ ათვლის ძალებს, რაც იწვევს ფიქსირებული ფიჭური სტრუქტურების დარღვევას. ეს სწრაფი და ეფექტური შეფერხება მკვლევარებს საშუალებას აძლევს დაამუშავონ დიდი ნიმუშის მოცულობა მოკლე დროში.
  • ნაზი და რეგულირებადი: ულტრაბგერითი ლიზისი გთავაზობთ ნაზი დარღვევის მექანიზმს, რომელიც ამცირებს მგრძნობიარე ბიომოლეკულების დაზიანებას, როგორიცაა ცილები, ნუკლეინის მჟავები და ფერმენტები. მექანიკური მეთოდებისგან განსხვავებით, რომლებიც წარმოქმნიან ზედმეტ სითბოს ან ათვლის ძალებს, ულტრაბგერითი ლიზისი იყენებს კონტროლირებად კავიტაციას უჯრედების დასარღვევად, უჯრედშიდა კომპონენტების მთლიანობისა და ფუნქციონირების შენარჩუნებისას.
  • მრავალმხრივობა: ულტრაბგერითი ლიზისი შეიძლება გამოყენებულ იქნას სხვადასხვა ფიქსატორებზე, რაც მკვლევარებს საშუალებას აძლევს იმუშაონ ფიქსირებული ნიმუშების ფართო სპექტრთან. ფორმალდეჰიდის, პარაფორმალდეჰიდის ან ალტერნატიული ფიქსატორების გამოყენებით, ულტრაბგერითი ლიზისი თანმიმდევრულად იძლევა ეფექტურ დარღვევას, რაც უზრუნველყოფს უჯრედული კომპონენტების ოპტიმალურ აღდგენას.
  • მაღალი მოსავლიანობა და ხარისხი: ულტრაბგერითი ლიზისი ხელს უწყობს ხელუხლებელი უჯრედული კომპონენტების მაღალ მოსავალს, მისი უნარის გამო, დაარღვიოს ფიქსირებული უჯრედები და ქსოვილები ერთნაირად. ეს საშუალებას აძლევს ქვემოთ მოყვანილ აპლიკაციებს, როგორიცაა ცილების ანალიზი, ნუკლეინის მჟავის ექსტრაქცია და ფერმენტული ანალიზები, გამოიღოს საიმედო და გამეორებადი შედეგები.
  • ავტომატიზაციის თავსებადობა: ულტრაბგერითი ლიზისი ადვილად შეიძლება იყოს ინტეგრირებული ავტომატიზებულ სისტემებში, რაც საშუალებას იძლევა მაღალი გამტარუნარიანობის ნიმუშის დამუშავება. ეს თავსებადობა მკვლევარებს საშუალებას აძლევს გაამარტივონ სამუშაო ნაკადი და გაზარდონ პროდუქტიულობა, განსაკუთრებით ფართომასშტაბიანი კვლევების დროს.
96-Well Plate Sonicator UIP400MTP უჯრედების ლიზისის, დნმ-ის ექსტრაქციის, დნმ-ის ფრაგმენტაციის, უჯრედების ხსნადიზაციისა და ცილების გამწმენდისთვის.

96 ჭაბურღილის ფირფიტა Sonicator UIP400MTP მიკროტიტრული და მულტიბელური ფირფიტების გახმოვანებისთვის

ულტრაბგერითი ლიზისმა მოახდინა რევოლუცია ფიქსირებული უჯრედებისა და ქსოვილების მოშლაში, რაც უამრავ უპირატესობას გვთავაზობს ლიზისის ტრადიციულ მეთოდებთან შედარებით. მისი სიჩქარე, ეფექტურობა, სელექციურობა, მრავალფეროვნება, მაღალი მოსავლიანობა და ავტომატიზაციის თავსებადობა მას შეუცვლელ ინსტრუმენტად აქცევს მოლეკულურ ბიოლოგიასა და ბიოტექნოლოგიურ კვლევებში. გთავაზობთ უკონტაქტო სონიკატორებს, ასევე ზონდის ტიპის სონიკატორს, Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ ყველაზე შესაფერისი ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორი თქვენი ცხოვრების მეცნიერების გამოყენებისთვის. მიუხედავად იმისა, გსურთ დამუშავება ერთჯერადი ნიმუშები, მრავალი ნიმუში ან ძალიან მაღალი ნიმუშის რაოდენობა ერთდროულად, ჩვენ შემოგთავაზებთ საუკეთესო სონიკატორს, რომელიც შეესაბამება თქვენს კვლევისა და დიაგნოსტიკური მოთხოვნებს.
წაიკითხეთ მეტი Hielscher-ის უკონტაქტო სონიკატორების შესახებ მრავალნიმუშიანი და მაღალი გამტარუნარიანობის ნიმუშის მოსამზადებლად!

FFPE ნიმუშის მომზადება UIP400MTP Multiwell-Plate Sonicator-ით

  • ერთჯერადი ინვესტიცია
  • გამოიყენეთ საკუთარი სახარჯო მასალები
  • არ განმეორდება საკუთრების აქსესუარები და სახარჯო მასალები
  • მაღალი გამტარუნარიანობა
  • სიზუსტის კონტროლი
  • უახლესი ტექნოლოგია
  • საიმედოობა & სიმტკიცე
  • რეგულირებადი, ზუსტი პროცესის კონტროლი
  • სამრეწველო კლასი: შეიძლება უწყვეტი მუშაობა 24/7
  • მარტივი და უსაფრთხო ფუნქციონირება
  • დაბალი მოვლა

 
წაიკითხეთ მეტი სონიკატორების გამოყენების შესახებ ცხოვრების მეცნიერებაში!

Sonicator მაღალი გამტარუნარიანობის ნიმუშის მომზადებისთვის! UIP400MTP ფირფიტის სონიკატორი ხელს უწყობს ბიოლოგიური ნიმუშების ლიზას, ცილების ექსტრაქციას, დნმ-ის ფრაგმენტაციას და უჯრედების ხსნადობას 96 ჭაბურღილიან ფირფიტებში.

ფირფიტის სონიკატორი UIP400MTP ნებისმიერი 96 ჭაბურღილის ფირფიტებისთვის, მიკროტიტრული ფირფიტებისთვის და მრავალ ჭაბურღილების ფირფიტებისთვის.

დიზაინი, წარმოება და კონსულტაცია – ხარისხი დამზადებულია გერმანიაში

Hielscher ულტრაბგერითები ცნობილია მათი უმაღლესი ხარისხისა და დიზაინის სტანდარტებით. გამძლეობა და მარტივი ოპერაცია საშუალებას იძლევა ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატების გლუვი ინტეგრაცია სამრეწველო ობიექტებში. უხეში პირობები და მომთხოვნი გარემო ადვილად უმკლავდება Hielscher ულტრაბგერითებს.

Hielscher Ultrasonics არის ISO სერთიფიცირებული კომპანია და განსაკუთრებული აქცენტი კეთდება მაღალი ხარისხის ულტრაბგერაზე, რომელიც აღჭურვილია უახლესი ტექნოლოგიით და მომხმარებლის კეთილგანწყობით. რა თქმა უნდა, Hielscher ულტრაბგერითები შეესაბამება CE და აკმაყოფილებს UL, CSA და RoHs მოთხოვნებს.

დაგვიკავშირდით! / გვკითხე ჩვენ!

სთხოვეთ დამატებითი ინფორმაციის მისაღებად

გთხოვთ, გამოიყენოთ ქვემოთ მოცემული ფორმა, რათა მოითხოვოთ დამატებითი ინფორმაცია UIP400MTP მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტის ულტრაბგერითი აპარატის, მისი აპლიკაციების FFPE ნიმუშის მომზადებაში და ფასების შესახებ. მოხარული ვიქნებით განვიხილოთ თქვენი განაცხადი გენომიკასა და პროტეომიკაში თქვენთან ერთად!









გთხოვთ გაითვალისწინოთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


მაღალი გამტარუნარიანობის რნმ-თანმიმდევრობა მრავალ ჭაბურღილში

UIP400MTP ულტრაბგერითი: მაღალი გამტარუნარიანობის FFPE ნიმუშის მომზადება Multi-Well-Plate-ში



FAQ
ქვემოთ ჩვენ ვპასუხობთ ხშირად დასმულ კითხვებს, რომლებიც ეხება FFPE ქსოვილის მომზადებას და FFPE ნიმუშების ულტრაბგერითი დამუშავებას.

როგორ მზადდება FFPE ქსოვილი?

FFPE ქსოვილის მომზადების ეტაპები: ახალი ქსოვილის ზედმიწევნითი დამუშავება და დამუშავება გადამწყვეტია მაღალი ხარისხის FFPE ნიმუშების შესაქმნელად. უჯრედული არქიტექტურის, ნუკლეინის მჟავების და ცილების შენარჩუნების უზრუნველყოფა აუცილებელია ზუსტი ქვედა დინების ანალიზისთვის. თითოეული ნაბიჯი - შეგროვებიდან ჩაშენებამდე - მოითხოვს სიზუსტეს ნიმუშის მთლიანობის შესანარჩუნებლად სხვადასხვა ანალიზისთვის, ჰისტოლოგიური გამოკვლევის, იმუნოჰისტოქიმიისა და მოლეკულური კვლევების ჩათვლით. სწორად შესრულებული, ეს ფიქსაცია და ჩანერგვის პროცესი უზრუნველყოფს, რომ შენახული ქსოვილი ზუსტად ასახავს in vivo მდგომარეობას, რაც საშუალებას იძლევა საიმედო დიაგნოსტიკური და კვლევის შედეგები.
ჩვენ გაგაცნობთ FFPE ქსოვილის ნიმუშების ჩანერგვის პროცესის 6 ძირითად საფეხურს.

  • ქსოვილების კოლექცია
    ცოცხალი ძუძუმწოვრებისა და ქსოვილის კულტურების ბიოფსიები ორივე სიცოცხლისუნარიანი წყაროა ახალი ქსოვილის მისაღებად FFPE ნიმუშის მოსამზადებლად.
    მნიშვნელოვანია ასეპტიკური ტექნიკის გამოყენება: გამოიყენეთ სტერილური ხელსაწყოები და ხელთათმანები დაბინძურების თავიდან ასაცილებლად. იდეალურ შემთხვევაში, შეაგროვეთ ქსოვილები სტერილურ გარემოში, როგორიცაა ქირურგიული კომპლექტი ან ლამინირებული გამწოვი.
    ვინაიდან ნიმუში ძალიან მყიფეა, მისი მგრძნობიარე დამუშავება აუცილებელია: მინიმუმამდე დაიყვანოთ დამუშავების შეფერხებები და დაუყოვნებლივ დაიწყოთ შემდგომი ქსოვილის დამუშავება ამოკვეთის შემდეგ. ეს გადამწყვეტია აუტოლიზისა და დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად. შეინახეთ ქსოვილი ოთახის ტემპერატურაზე; მოერიდეთ გაყინვას, რადგან ამან შეიძლება გამოიწვიოს ყინულის კრისტალების წარმოქმნა და ქსოვილის დაზიანება.
  • ქსოვილის ფიქსაცია
    პირველ რიგში, ქსოვილს ამუშავებენ ფიქსაციული ხსნარით: გამოიყენეთ 10% ნეიტრალური ბუფერული ფორმალინი (NBF), რომელიც უდრის 4% ფორმალდეჰიდს წყალში, ბუფერული ნეიტრალურ pH-მდე.
    ჩაყარეთ ქსოვილი მთლიანად ფორმალინში. დარწმუნდით, რომ ფიქსატორის და ქსოვილის მოცულობის თანაფარდობა უნდა იყოს მინიმუმ 10:1. ფიქსაციის დრო ჩვეულებრივ მერყეობს 6-დან 24 საათამდე, რაც დამოკიდებულია ქსოვილის ტიპსა და ზომაზე. მნიშვნელოვანია, რომ ფიქსატორმა შეძლოს ქსოვილში საფუძვლიანად შეღწევა. თუმცა, ზედმეტმა ფიქსაციამ შეიძლება გამოიწვიოს ჯვარედინი კავშირი, რაც ართულებს ანტიგენის მიღებას, ხოლო არასაკმარისი ფიქსაცია შეიძლება გამოიწვიოს ქსოვილის ცუდი შენარჩუნება.
  • ქსოვილის მოჭრა
    მეორეც, მოაჭრეთ ქსოვილი დაახლოებით 3-5 მმ სისქეზე, რათა მოხდეს ფიქსატორის ადექვატური შეღწევა. უზრუნველყოს ქსოვილის სწორი ორიენტაცია შესაბამისი ჰისტოლოგიური სტრუქტურების დასაჭერად. ეს აადვილებს ექსტრაქციის პროცესს, როდესაც ქსოვილი მოგვიანებით გამოიყენება ანალიზისთვის.
  • ფიქსირებული ნიმუშის დამუშავება
    ახლა, ფიქსირებული ქსოვილი უნდა იყოს გაუწყლოებული: ფიქსაციის შემდეგ საჭიროა ქსოვილის დეჰიდრატაცია, რათა უზრუნველყოს პარაფინის ცვილის საფუძვლიანი შეღწევა. გადაიტანეთ ქსოვილი ეთანოლის ხარისხობრივ სერიაში (70%, 80%, 90% და 100%) წყლის მოსაშორებლად.
    კლირინგი ქსილენით: პარაფინის ცვილი წყალში უხსნადია, მაგრამ ხსნადი ქსილენში. ამიტომ ქსოვილში წყალი უნდა შეიცვალოს ქსილენით. თუმცა, თავად ქსილენი წყალში უხსნადია, მაგრამ ალკოჰოლში ხსნადი, რაც საჭიროებს შუალედურ საფეხურს, სადაც წყალი პირველად შეიცვლება სპირტით. ჩაყარეთ ქსოვილი ქსილენში ან ქსილენის შემცვლელში ეთანოლის მოსაშორებლად და ქსოვილის მომზადება პარაფინის ინფილტრაციისთვის.
    ინფილტრაცია პარაფინის გამოყენებით: ჩაყარეთ ქსოვილი გამდნარ პარაფინის ცვილში, რაც უზრუნველყოფს სრულ ინფილტრაციას. ეს ნაბიჯი ჩვეულებრივ მოიცავს პარაფინის რამდენიმე ცვლილებას საფუძვლიანი გაჟღენთის უზრუნველსაყოფად.
  • ქსოვილის ჩანერგვა
    ამ ეტაპზე ქსოვილის ჩამოსხმა ხდება ქსოვილის ბლოკად: მოათავსეთ ქსოვილი სასურველი ორიენტაციის ფორმაში და დაასხით მას გამდნარი პარაფინი. ნება დართეთ პარაფინი გამაგრდეს ოთახის ტემპერატურაზე ან ცივ თეფშზე გაგრილებით.
  • განყოფილება და მონტაჟი
    მიკროტომია: ჩაშენებული ქსოვილის დასაჭრელად გამოიყენეთ მიკროტომი, რათა მოჭრათ თხელი სექციები (ჩვეულებრივ, 4-5 მიკრომეტრი) პარაფინის ბლოკიდან. შემდეგ ნიმუში დამონტაჟებულია, სექციები მინის სლაიდებზე შემდგომი შეღებვისა და მიკროსკოპული ანალიზისთვის.
    და ბოლოს, შეამოწმეთ ჰისტოლოგიის ხარისხი: შეაფასეთ პირველი სექციები მიკროსკოპის ქვეშ, რათა უზრუნველყოთ სათანადო ფიქსაცია და დამუშავება. საჭიროებისამებრ დაარეგულირეთ პროტოკოლები ქსოვილის ტიპისა და დაკვირვების ხარისხის მიხედვით.

 
FFPE ქსოვილები შეიძლება გამოყენებულ იქნას რნმ-ის, დნმ-ის და ცილების აღსადგენად, ასევე კიბოს ან სხვა დაავადების ნიშნების აღმოსაჩენად. მათი შენახვა შესაძლებელია წლების განმავლობაში და არის მნიშვნელოვანი ნაწილი იმისა, თუ როგორ იყენებენ მკვლევარები და ექიმები ქსოვილის ნიმუშებს დიაგნოსტიკისა და კვლევისთვის.

რა არის საერთო პრობლემები და გამოწვევები FFPE ქსოვილთან დაკავშირებით?

ფორმალინში ფიქსირებული, პარაფინით ჩაშენებული (FFPE) ქსოვილის ნიმუშები ფართოდ გამოიყენება კვლევასა და დიაგნოსტიკაში, მაგრამ ისინი წარმოადგენენ რამდენიმე გამოწვევას და საერთო პრობლემას:

  • ბიომოლეკულების დეგრადაცია: გახანგრძლივებულმა ფიქსაციამ შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის, რნმ-ის და ცილების დეგრადაცია, რაც ართულებს მაღალი ხარისხის ნუკლეინის მჟავების ან ცილების ამოღებას ქვედა დინებაში გამოყენებისთვის. სწორი ფიქსაცია (დაბალი და ზედმეტად ფიქსაციის თავიდან აცილება) აუცილებელია ქსოვილის შენარჩუნებისთვის.
  • ჯვარედინი კავშირი: ფორმალინის ფიქსაცია იწვევს ცილების და ნუკლეინის მჟავების ჯვარედინი კავშირს, რამაც შეიძლება შეაფერხოს მოლეკულური ანალიზი და გავლენა მოახდინოს იმუნოჰისტოქიმიის და სხვა ანალიზის სიზუსტეზე.

  • ანტიგენის ნიღაბი: ფიქსაციის პროცესს შეუძლია ანტიგენური ადგილების შენიღბვა, რაც ამცირებს ანტისხეულების შეკავშირების ეფექტურობას იმუნოჰისტოქიმიაში და სხვა იმუნოლოგიურ გამოკვლევებში. ეს ხშირად მოითხოვს ანტიგენის მოძიებას, პროცედურებს, რომლითაც ხდება ეპიტოპის შენიღბვის შეცვლა და ეპიტოპ-ანტისხეულის შეკავშირების აღდგენა. თუმცა, სრული ანტიგენურობა ყოველთვის არ შეიძლება აღდგეს.
  • ცვლადი ფიქსაციის ხარისხი: ფიქსაციის დროსა და პირობებში განსხვავებამ შეიძლება გამოიწვიოს ნიმუშის არათანმიმდევრული ხარისხი, რაც გავლენას მოახდენს შედეგების განმეორებადობაზე და შედარებადობაზე. გამოიყენეთ საიმედო ფიქსაციის პროტოკოლები და თავიდან აიცილეთ ზედმეტად და ნაკლებ ფიქსაცია.
  • დნმ-ის დაზიანება და ფრაგმენტაცია: FFPE ნიმუშების ფორმალინის ფიქსაციამ შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის სხვადასხვა სახის დაზიანება, მათ შორის ციტოზინის დეამინაცია (C-დან T-მდე მუტაციები), ოქსიდაციური დაზიანება (მაგ. ხარვეზები და აბაზიური ადგილები, რომლებიც აფერხებენ დნმ პოლიმერაზას აქტივობას. ფორმალინის ფიქსაციის პროცესმა შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის ფრაგმენტაცია, რაც ართულებს გენეტიკურ და გენომიურ ანალიზებს, როგორიცაა PCR და თანმიმდევრობა.
  • რნმ-ის ხარისხი: FFPE ქსოვილებიდან ამოღებული რნმ ხშირად ფრაგმენტირებული და ქიმიურად მოდიფიცირებულია, რაც რთულს ხდის მაღალი ხარისხის ტრანსკრიპტომიური ანალიზების ჩატარებას.
  • ცილის ცვლილებები: ფორმალინს შეუძლია გამოიწვიოს ცილების ქიმიური ცვლილებები, რაც გავლენას მოახდენს მათ სტრუქტურასა და ფუნქციაზე, რამაც შეიძლება ხელი შეუშალოს პროტეომიურ ანალიზს.
  • ნიმუშების დამუშავების არტეფაქტები: ჩანერგვისა და კვეთის პროცესის დროს, მექანიკურმა სტრესმა და სიცხემ შეიძლება გამოიწვიოს არტეფაქტები და გამოიწვიოს ქსოვილის შემდგომი დაზიანება.
  • Batch-to-Batch ცვალებადობა: სხვადასხვა პარტიებს შორის ფიქსაციისა და ჩაშენების პროტოკოლების ცვალებადობამ შეიძლება გამოიწვიოს შედეგების მნიშვნელოვანი ცვალებადობა, რაც ართულებს შედარებებს კვლევებს შორის.
  • შენახვის პრობლემები: FFPE ბლოკების ხანგრძლივმა შენახვამ შეიძლება გამოიწვიოს დამატებითი დეგრადაცია და ნუკლეინის მჟავის მთლიანობის დაკარგვა დროთა განმავლობაში, რაც გავლენას მოახდენს საარქივო ნიმუშების სიცოცხლისუნარიანობაზე რეტროსპექტული კვლევებისთვის.

ოპტიმიზებული პროტოკოლების გამოყენება, ნიმუშების ფრთხილად დამუშავება და მოწინავე ტექნიკის გამოყენება ხელს უწყობს FFPE ქსოვილებიდან მიღებული მონაცემების ხარისხისა და სანდოობის გაუმჯობესებას.

რა განსხვავებაა FFPE-სა და გაყინულ ქსოვილს შორის?

FFPE (ფორმალინით ფიქსირებული, პარაფინით ჩაშენებული) ქსოვილი ინახება ფორმალინის გამოყენებით ქსოვილის დასაფიქსირებლად და შემდეგ ჩასმული პარაფინის ცვილში, რაც შესაძლებელს ხდის ოთახის ტემპერატურაზე ხანგრძლივ შენახვას ქსოვილის მორფოლოგიის შენარჩუნებისას. ამის საპირისპიროდ, გაყინული ქსოვილი სწრაფად ინახება გაყინვით, რაც უკეთ ინარჩუნებს ნუკლეინის მჟავების და ცილების მთლიანობას, მაგრამ საჭიროებს შენახვას ძალიან დაბალ ტემპერატურაზე.

რა ქიმიკატები გამოიყენება FFPE ჩაშენებისთვის?

FFPE ჩაშენებისთვის გამოყენებული ქიმიკატები ჩვეულებრივ მოიცავს ფორმალინს ფიქსაციისთვის და პარაფინის ცვილს ჩაშენებისთვის. FFPE ჩაშენებისთვის ქსოვილები, როგორც წესი, ფიქსირდება 10% (ვ/ვ) ნეიტრალური ბუფერული ფორმალინის (FA) ან ახლად მომზადებული 4% (ვ/ვ) ფორმალდეჰიდის ხსნარის (PFA) გამოყენებით, რომელიც დამზადებულია პარაფორმალდეჰიდის ფხვნილისაგან. ფორმალინი, რომელიც არის ფორმალდეჰიდის ხსნარი წყალში, ბუფერდება ნეიტრალურ pH-მდე, რათა შეინარჩუნოს ქსოვილის მორფოლოგია და თავიდან აიცილოს ზედმეტი ჯვარედინი კავშირი. პარაფორმალდეჰიდზე დაფუძნებული ხსნარი ასევე უზრუნველყოფს ეფექტურ ფიქსაციას ცილების ჯვარედინი დაკავშირების გზით, რითაც სტაბილიზებს ქსოვილის სტრუქტურას შემდგომში პარაფინის ცვილში ჩასართავად. ეს ქიმიკატები აუცილებელია ქსოვილის მთლიანობისა და მორფოლოგიის შესანარჩუნებლად ფიქსაციისა და ჩანერგვის პროცესში.

როგორ ხდება პარაფინის ამოღება FFPE ნიმუშებიდან?

FFPE ნიმუშებიდან პარაფინის მოსაშორებლად, ქსოვილის სექციები, როგორც წესი, ექვემდებარება ქსილენის რეცხვის სერიას, რასაც მოჰყვება რეჰიდრატაცია სპირტების კლასიფიცირებული სერიის და ბოლოს წყლის მეშვეობით. ვინაიდან ქსილენი ძალზე ტოქსიკურია და ჯანმრთელობის რისკებს უქმნის, როგორიცაა რესპირატორული პრობლემები, კანის გაღიზიანება და პოტენციური გრძელვადიანი ეფექტები განმეორებითი ზემოქმედებით, პარაფინის ულტრაბგერითი მოცილება ბევრ ლაბორატორიაში პერსპექტიული ალტერნატივაა. ეს მეთოდი იყენებს ინტენსიურ ულტრაბგერით ტალღებს პარაფინის ეფექტურად და უსაფრთხოდ მოსაშორებლად ტოქსიკური გამხსნელების გარეშე, როგორიცაა ქსილენი, რითაც ამცირებს რისკს ლაბორატორიის პერსონალისთვის და ქმნის უსაფრთხო სამუშაო გარემოს.

რამდენ ხანს უნდა დავაფიქსირო ჩემი ქსოვილები FFPE ნიმუშის კარგი ხარისხისთვის?

ფიქსაციის ხანგრძლივობის ზოგადი რეკომენდაციები, როგორც წესი, გვთავაზობს ქსოვილის ნიმუშების დაფიქსირებას ფორმალინში 24-დან 48 საათამდე. ეს ხანგრძლივობა ზოგადად საკმარისია ქსოვილის მორფოლოგიისა და უჯრედული სტრუქტურების შესანარჩუნებლად, ზედმეტად ფიქსაციის შესამცირებლად, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს ნუკლეინის მჟავების და ცილების გადაჭარბებული ჯვარედინი კავშირი და დეგრადაცია. თუმცა, ფიქსაციის ოპტიმალური დრო შეიძლება განსხვავდებოდეს ქსოვილის ზომისა და ტიპის მიხედვით, უფრო მცირე ან უფრო დელიკატური ნიმუშები საჭიროებს ფიქსაციის ხანმოკლე პერიოდებს. გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს ადეკვატური ფიქსაციის დაბალანსებას ქსოვილის აუტოლიზისა და დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად, გახანგრძლივებული ფიქსაციის თავიდან აცილებისას, რამაც შეიძლება გაართულოს ქვედა მოლეკულური ანალიზები.

მოხარული ვიქნებით განვიხილოთ თქვენი პროცესი.

მოდით დავუკავშირდეთ.