Staphylococcus Biofilm-ի մշակման և անջատման արձանագրություն
Ստանդարտացված մեթոդները կարևոր են հետազոտության հուսալի արդյունքների համար: Այստեղ դուք կարող եք գտնել ստաֆիլոկոկային բիոֆիլմերի աճեցման և անջատման արձանագրություն: Այս արձանագրությունը կենտրոնանում է արդիականացված բարձր թողունակության նմուշի պատրաստման վրա՝ օգտագործելով UIP400MTP բազմաբնակարան ափսեի sonicator՝ արդյունավետ, բարձր թողունակությամբ բիոֆիլմը 96-հորանոց թիթեղներում անջատելու համար: Արձանագրությունը պարունակում է նաև կենսաթաղանթի մշակման, լվացման և վիզուալացման հիմնական քայլերը՝ շեշտը դնելով փոփոխականությունը նվազագույնի հասցնելու և վերարտադրելիության ապահովման վրա:
Staphylococcus Biofilm և հակաբիոտիկների հետազոտություն
Ստաֆիլոկոկի բիոֆիլմերը վճռորոշ դեր են խաղում կայուն վարակների դեպքում՝ շնորհիվ հակաբիոտիկների նկատմամբ նրանց դիմադրության և իմունային պատասխանների: Բիոֆիլմի ձևավորումը պաշտպանիչ միջավայր է ապահովում բակտերիաների համար, ինչը դժվարացնում է վարակների բուժումը: Կենսաֆիլմերի հետազոտությունները հաճախ կենտրոնանում են դրանց ձևավորման, վարքագծի և հակամանրէային նյութերի նկատմամբ զգայունության ըմբռնման վրա՝ շեշտը դնելով փորձարարական աշխատանքային հոսքերը պարզեցնելու բարձր արդյունավետության մեթոդների վրա:
UIP400MTP բազմաբնակարան ափսեի ձայնագրիչն զգալի առավելություն է տալիս բիոֆիլմի հետազոտության մեջ՝ հնարավորություն տալով կենսաթաղանթների արագ և արդյունավետ անջատումը 96 հորանի թիթեղներից: Այս սարքը ապահովում է միատեսակ ուլտրաձայնային էներգիա բոլոր հորերին՝ ապահովելով հետևողական արդյունքներ՝ նվազագույնի հասցնելով փոփոխականությունը:
Ստաֆիլոկոկի կենսաֆիլմի մշակման և անջատման արձանագրություն
Ստորև մենք ձեզ քայլ առ քայլ ցուցում ենք տալիս ստաֆիլոկոկի բիոֆիլմի մշակման և անջատման գործընթացի միջոցով: Որպես օրինակելի վերլուծական քայլ՝ մենք ձեզ ցույց ենք տալիս, թե ինչպես կարելի է քանակականացնել մշակված կենսազանգվածը սպեկտրոֆոտոմետրիկ կերպով՝ բյուրեղյա մանուշակագույն ներկման միջոցով:
Staphylococcus Biofilm-ի մշակում
Պահանջվող նյութեր.
- Ստերիլ հարթ հատակով 96 հորատանցք պոլիստիրոլի հյուսվածքային կուլտուրայով մշակված միկրոտիտրային թիթեղներ՝ կափարիչներով
- Տրիպտիկ սոյայի արգանակ (TSB) 0,25% գլյուկոզայով
- Կենսաբանական անվտանգության պահարան
Քայլեր:
- Պատրաստեք ստերիլ աշխատանքային միջավայր կենսաբանական անվտանգության կաբինետում՝ աղտոտվածությունը նվազագույնի հասցնելու համար:
- Ավելացրեք 0,25% գլյուկոզա պարունակող TSB միկրոտիտրային ափսեի հորերին: Առանց գլյուկոզայի TSB-ն, ընդհանուր առմամբ, չի ապահովում բիոֆիլմի ձևավորումը և պետք է օգտագործվի միայն որպես հսկիչ, եթե դա անհրաժեշտ է:
- Հորերը պատվաստել բակտերիալ շտամներով, որոնք պատրաստված են ստորև նկարագրված ձևով.
- Պատրաստեք բակտերիալ կախոցներ՝ ապահովելով, որ չկան բջիջների կլաստերներ՝ միատարրացնելով կախոցները՝ օգտագործելով ձայնային ապարատը կամ բաժանելով կլաստերները 23 չափիչ ասեղով և կարճ պտտեցնելով:
- Փակեք թիթեղն իր կափարիչով և ինկուբացրեք կենսաթաղանթի ձևավորման համար օպտիմալ պայմաններում (օրինակ՝ 37°C 24 ժամվա ընթացքում):
- Կատարեք փորձը եռակի յուրաքանչյուր բակտերիաների շտամի համար (երեք ջրհոր յուրաքանչյուր շտամում) հուսալիությունն ապահովելու համար:
- Բացասական հսկողության համար մեկ ափսեի համար հատկացրեք վեց հորեր: Մինչև 30 շտամներ կարող են փորձարկվել 96 ջրհորի ափսեի համար:
Կենսաֆիլմի վիզուալիզացիա և լվացում
- Ինկուբացիայից հետո զգուշորեն դեն նետեք միջավայրը՝ բիոֆիլմը չխանգարելու համար:
- Լվացեք յուրաքանչյուր ջրհոր չորս անգամ ֆիզիոլոգիական ֆիզիոլոգիական լուծույթով, պլանկտոնային բակտերիաները հեռացնելու համար:
- Ստուգեք հորերի հատակը սպիտակ բծերի համար, որոնք վկայում են բիոֆիլմի առկայության մասին:
Կենսաթաղանթի ջոկատը, օգտագործելով Multi-Well Plate Sonicator UIP400MTP
Սարքի կարգավորում և պարամետրեր.
- UIP400MTP բազմաբնակարան ափսեի ձայնավորիչ
- Գործառնական կարգավորումներ՝ 60% ամպլիտուդ, ցիկլային ռեժիմ՝ 60 վայրկյան միացված / 30 վայրկյան անջատված
Քայլեր:
- Տեղադրեք լվացված միկրոտիտրային ափսեը UIP400MTP հարթակի վրա:
- Փորձարկեք նմուշները առաջարկվող պարամետրերով (60% ամպլիտուդ, 60 վայրկյան միացված, 30 վայրկյան անջատված): Կարգավորեք կարգավորումները բակտերիաների լարվածության համար:
- Սկսեք ձայնագրման գործընթացը բիոֆիլմը անջատելու համար: Ուլտրաձայնային ալիքները խաթարում են բիոֆիլմի մատրիցը՝ ազատելով կպչուն բակտերիաները:
- UIP400MTP-ն ապահովում է միատեսակ բացահայտում բոլոր հորերում՝ հետևողական անջատման արդյունքների համար:
Վերլուծական քայլ. տարանջատված ստաֆիլոկոկի բիոֆիլմի կենսազանգվածի քանակականացում՝ օգտագործելով բյուրեղյա մանուշակագույն (CV)
Պահանջվող նյութեր.
- 0.1% բյուրեղյա մանուշակագույն (CV) լուծույթ
- 95% էթանոլ կամ 30% քացախաթթու (լուծվելու համար)
- Microplate reader, որը կարող է կարդալ 570 նմ
- Ստերիլ միկրոտիտրային թիթեղներ ներկման համար
Քայլեր:
- Ներկման ափսեի պատրաստում. 100 µL տարանջատված բիոֆիլմի կախույթը փոխանցեք ախտահանված ափսեի յուրաքանչյուր հորից մաքուր, ստերիլ 96 հորատանցքի միկրոտիտրային ափսեի համապատասխան հորեր: Սա ապահովում է հստակ և միասնական միջավայր ներկելու համար:
- Անջատված բիոֆիլմի ներկում. անջատված կենսաթաղանթի կասեցում պարունակող յուրաքանչյուր հորին ավելացրեք 150 µL 0,1% բյուրեղյա մանուշակագույն լուծույթ: Նրբորեն պիպետտացրեք բիոֆիլմի կախոցի և բյուրեղյա մանուշակագույնի համաչափ խառնուրդ ապահովելու համար:
- Ինկուբացիա. Թույլ տվեք ափսեին 15 րոպե ինկուբացնել սենյակային ջերմաստիճանում, որպեսզի բյուրեղյա մանուշակը արդյունավետ կերպով ներկի կենսազանգվածը:
- Լվացում․ Լվացեք յուրաքանչյուր ջրհոր երեք անգամ ստերիլ ֆիզիոլոգիական ֆիզիոլոգիական լուծույթով` չկապված բիծը հեռացնելու համար:
- Չորացում. Թողեք, որ ափսեը օդով չորանա սենյակային ջերմաստիճանում կամ ստերիլ օդափոխիչի տակ: Խուսափեք տաքացումից, քանի որ դա կարող է փոխել արդյունքները:
- Լուծում. Յուրաքանչյուր հորին ավելացրեք 200 µL 95% էթանոլ (կամ 30% քացախաթթու՝ կախված ստանդարտ լաբորատոր պրակտիկայից)՝ կապված բյուրեղյա մանուշակագույնը լուծելու համար: Նրբորեն խառնեք՝ ափսեը 10 րոպե թափահարելով սենյակային ջերմաստիճանում:
- Չափում. Չափել լուծվող բյուրեղյա մանուշակագույն լուծույթի օպտիկական խտությունը (OD) 570 նմ-ում՝ օգտագործելով միկրոափսե ընթերցող:
- Տվյալների վերլուծություն. Փորձարարական հորերից հանեք բացասական հսկիչների միջին OD570 արժեքը (հորատանցքեր TSB-ով, բայց ոչ բակտերիալ պատվաստում)՝ հաշվի առնելով ֆոնային ներկումը: Գրանցեք և վերլուծեք տվյալները:
Նշում. Կատարեք փորձը եռակի յուրաքանչյուր պայմանի համար՝ վերարտադրելիություն ապահովելու համար: Ապահովել բյուրեղյա մանուշակագույնի և էթանոլի պատշաճ մշակումը` պահպանելով անվտանգության և հեռացման արձանագրությունները:
UIP400MTP-ի հիմնական առավելությունները մի հայացքով.
- Բարձր թողունակության մշակում. Նախագծված է հատուկ բազմահոր ափսեների համար, որը թույլ է տալիս միաժամանակ մշակել բազմաթիվ նմուշներ:
- Ուլտրաձայնային միասնական բաշխում. Ապահովում է ուլտրաձայնային հավասար ինտենսիվություն հորերի միջով, ապահովելով հետևողական արդյունքներ բոլոր նմուշներում:
- Օգտագործեք ցանկացած ստանդարտ ափսե. UIP400MTP-ը կարող է աշխատել ցանկացած ստանդարտ բազմաբնակարան ափսեների, Petri սպասքի և խողովակի դարակների հետ: Թանկարժեք սեփական ափսեներ չեն պահանջվում:
- Օգտագործողի համար հարմար ինտերֆեյս. Հեշտ է կարգավորվում և վերահսկվում՝ այն դարձնելով հիանալի գործիք լաբորատորիայի արտադրողականությունը բարձրացնելու համար: Ծրագրավորվող կարգավորումները և ավտոմատացումը հեշտացնում են գործընթացի ստանդարտացումը:

Բարձր թողունակությամբ բիոֆիլմի ջոկատ UIP400MTP 96 ջրհորի ափսեի ձայնային սարքով
Գրականություն / Հղումներ
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
Հաճախակի տրվող հարցեր
Որոնք են արտաբջջային պոլիմերային նյութերը (EPS):
Արտաբջջային պոլիմերային նյութերը (EPS) բիոպոլիմերների բարդ խառնուրդ են, որոնք հիմնականում կազմված են պոլիսաքարիդներից, սպիտակուցներից, նուկլեինաթթուներից և լիպիդներից, որոնք արտազատվում են բիոֆիլմերում միկրոօրգանիզմների կողմից: EPS-ը ձևավորում է պաշտպանիչ մատրիցա, որը ներառում է մանրէաբանական համայնքը՝ ապահովելով կառուցվածքային ամբողջականություն, միջնորդելով կպչունությունը մակերեսներին և պաշտպանելով բջիջները շրջակա միջավայրի սթրեսներից, ներառյալ հակաբիոտիկները և իմունային պատասխանները:
Ի՞նչ է նշանակում պլանկտոնային բակտերիա ասելով:
Պլանկտոնային բակտերիաները ազատ լողացող, միաբջիջ միկրոօրգանիզմներ են, որոնք գոյություն ունեն կասեցված վիճակում, օրինակ՝ հեղուկ կուլտուրաներում կամ մարմնական հեղուկներում, այլ ոչ թե կցվում են մակերեսներին կամ ձևավորում կառուցվածքային համայնքներ, ինչպիսիք են կենսաֆիլմերը:
Ո՞րն է տարբերությունը Biofilm-ի և Planktonic բակտերիաների միջև:
Բիոֆիլմի և պլանկտոնային բակտերիաների հիմնական տարբերությունը կայանում է նրանց կազմակերպման մեջ: Կենսաթաղանթները մանրէների կառուցվածքային, մակերեսին կցված համայնքներ են, որոնք ներկառուցված են արտաբջջային պոլիմերային նյութի (EPS) մատրիցայում, մինչդեռ պլանկտոնային բակտերիաները ազատ լողացող են և չունեն նման կառուցվածքային կազմակերպություն:
Արդյո՞ք բիոֆիլմերում առկա բակտերիաները ավելի դժվար են բուժել հակաբիոտիկներով, քան պլանկտոնային բակտերիաները:
Կենսաթաղանթներում պարունակվող բակտերիաները զգալիորեն ավելի դժվար են բուժել հակաբիոտիկներով, քան պլանկտոնային բակտերիաները: Կենսաթաղանթի մատրիցը գործում է որպես ֆիզիկական խոչընդոտ, և բակտերիաները ցուցադրում են փոփոխված նյութափոխանակության վիճակներ և ուժեղացված սթրեսային դիմադրություն, ինչը նպաստում է հակաբիոտիկների արդյունավետության նվազմանը:
Հնարավո՞ր է բիոֆիլմերը սպանվել հակաբիոտիկներով:
Բիոֆիլմերը երբեմն կարող են վերացվել հակաբիոտիկների միջոցով, բայց դա դժվար է: Արդյունավետ բուժումը հաճախ պահանջում է հակաբիոտիկների բարձր կոնցենտրացիաներ, հատուկ համակցություններ կամ օժանդակ թերապիաներ, քանի որ EPS մատրիցը և բակտերիաների դիմադրության մեխանիզմները պաշտպանում են բիոֆիլմը:
Արդյո՞ք ստաֆիլոկոկը հարակից բակտերիաներ է:
Ստաֆիլոկոկ բակտերիաները հայտնի են իրենց կպչուն կարողություններով: Նրանք հեշտությամբ կցվում են մակերեսներին՝ ձևավորելով կենսաթաղանթներ, հատկապես բժշկական սարքերի կամ հյուրընկալող հյուսվածքների վրա, ինչը նրանց դարձնում է մշտական վարակների հիմնական ներդրումը:
Ստաֆիլոկոկի բակտերիաների ի՞նչ տեսակներ կան:
Ստաֆիլոկոկ բակտերիաները ներառում են մի քանի տեսակներ, որոնցից առավել նշանավոր են ոսկեգույն ստաֆիլոկոկը և էպիդերմիդի ստաֆիլոկոկը: S. aureus-ը պաթոգեն է և կարող է առաջացնել ծանր վարակներ, մինչդեռ S. epidermidis-ը սովորաբար կապված է բիոֆիլմի հետ կապված սարքի վարակների հետ:
Ի՞նչ է Crystal Violet-ը:
Բյուրեղյա մանուշակագույնը հիմնական ներկ է, որը սովորաբար օգտագործվում է կենսաբանական նյութերը ներկելու համար: Մանրէաբանության մեջ այն օգտագործվում է կենսազանգվածի ներկման միջոցով կենսաթաղանթի ձևավորումը գնահատելու համար, որը կարող է այնուհետև քանակականացվել սպեկտրոֆոտոմետրիկ եղանակով:

Hielscher Ultrasonics-ը արտադրում է բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ լաբորատորիա դեպի արդյունաբերական չափս.