Ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթի կուլտիվացման և անջատման արձանագրություն

Ստանդարտացված եղանակները անփոխարինելի են հուսալի հետազոտական արդյունքների համար։ Այստեղ կարող եք գտնել ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթների կուլտիվացման և անջատման արձանագրություն։ Արձանագրությունը կենտրոնանում է նմուշների պարզեցված բարձր թողունակությամբ պատրաստման վրա՝ կիրառելով UIP400MTP բազմահորիկ թիթեղների ուլտրաձայնային սարքը 96-հորանի թիթեղներում արդյունավետ, բարձր թողունակությամբ կենսաթաղանթի անջատման համար։ Արձանագրությունը նաև ընդգրկում է կենսաթաղանթի կուլտիվացման, լվացման և տեսողականացման կարևոր քայլերը՝ նվազագույնի հասցնելով տատանումները և ապահովելով վերարտադրելիությունը։

Ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթ և հակաբիոտիկ հետազոտություն

Ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթները քննադատական դեր են խաղում կայուն վարակներում՝ հակաբիոտիկների և իմունային արձագանքների նկատմամբ իրենց դիմադրության շնորհիվ։ Կենսաթաղանթի ձևավորումը բակտերիաներին ապահովում է պաշտպանիչ միջավայր՝ վարակները դարձնելով դժվարաբուժելի։ Կենսաթաղանթների վերաբերյալ հետազոտությունները հաճախ կենտրոնանում են դրանց ձևավորման, վարքագծի և հակամանրէային նյութերի նկատմամբ զգայունության ըմբռնման վրա՝ ընդգծելով փորձարարական աշխատանքներն արագացնող բարձր թողունակությամբ եղանակները։
UIP400MTP բազմահորիկ թիթեղների սոնիկատորը զգալի առավելություն է տալիս կենսաթաղանթային հետազոտություններում՝ 96-հորանի թիթեղներից կենսաթաղանթները արագ և արդյունավետ անջատելու հնարավորությամբ։ Սարքը բոլոր հորաններին է փոխանցում միատեսակ ուլտրաձայնային էներգիա՝ կայուն արդյունքներ ապահովելով տատանումների նվազեցմանը զուգընթաց։

Ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթի կուլտիվացման և անջատման արձանագրություն

Ստորև՝ քայլ առ քայլ ցուցումներով առաջնորդում ենք ձեզ ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթի կուլտիվացման և անջատման գործընթացով։ Որպես օրինակելի վերլուծական քայլ ցույց ենք տալիս, թե ինչպես սպեկտրոֆոտոմետրիկ եղանակով որոշել կուլտիվացված կենսազանգվածի քանակը՝ բյուրեղային մանուշակագույնով ներկման միջոցով։

Ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթի կուլտիվացում

Անհրաժեշտ նյութեր՝

• Ստերիլ 96-հորանի հարթ հատակով պոլիստիրոլային միկրոտիտրային թիթեղներ՝ կենսաբանական մշակումների համար նախապատրաստված մակերևույթով, կափարիչներով
• Տրիպտիկ սոյայի արգանակ (TSB)՝ 0,25% գլյուկոզայով
• Կենսաբանական անվտանգության կաբինետ

Քայլեր՝

1. Պատրաստեք ստերիլ աշխատանքային միջավայր՝ կենսաբանական անվտանգության կաբինետում՝ աղտոտումը նվազագույնի հասցնելու համար։
2. Ավելացրեք 0,25% գլյուկոզա պարունակող TSB-ն միկրոտիտրային թիթեղի հորաններին։ Գլյուկոզա չպարունակող TSB-ն ընդհանրապես չի նպաստում կենսաթաղանթի ձևավորմանը և պետք է կիրառվի միայն որպես հսկիչ նմուշ՝ անհրաժեշտության դեպքում։
3. Ապահովեք հորանները ստորև նկարագրված եղանակով պատրաստված բակտերիալ շտամներով՝
4. Պատրաստեք բակտերիալ կախույթներ և ապահովեք նախապես ձևավորված բջջային կլաստերների բացակայությունը՝ կախույթները ուլտրաձայնով հոմոգենացնելով կամ կլաստերները մասնատելով 23 չափի ասեղով և կարճատև վորտեքսավորմամբ։
5. Խցկեք թիթեղը կափարիչով և ինկուբացրեք կենսաթաղանթի ձևավորման համար օպտիմալ պայմաններում (օրինակ՝ 37°C-ում 24 ժամ)։
6. Փորձը կատարեք եռակի կրկնությամբ յուրաքանչյուր բակտերիալ շտամի համար (երեք հորան յուրաքանչյուր շտամի համար)՝ հուսալիությունն ապահովելու նպատակով։
7. Յուրաքանչյուր թիթեղում հատկացրեք վեց հորան բացասական հսկողության համար։ Մինչև 30 շտամ կարելի է ստուգել 96-հորանի մեկ թիթեղում։

Կենսաթաղանթի տեսողականացում և լվացում

1. Ինկուբացիայից հետո զգուշորեն հեռացրեք միջավայրը՝ կենսաթաղանթը չխանգարելու համար։
2. Յուրաքանչյուր հորան չորս անգամ լվացեք ֆիզիոլոգիական աղային լուծույթով՝ պլանկտոնային բակտերիաները հեռացնելու համար։
3. Զննեք հորանների հատակը սպիտակ բծերի առկայության համար, որոնք վկայում են կենսաթաղանթի առկայության մասին։

Կենսաթաղանթի անջատում՝ օգտագործելով UIP400MTP բազմահորանոց պլանշետների ուլտրաձայնային սարքը

Սարքի տեղադրում և պարամետրեր՝

• UIP400MTP բազմափոսիկ թիթեղների սոնիկատոր
• Աշխատանքային կարգավորումներ՝ 60% ամպլիտուդ, ցիկլային ռեժիմ՝ 60 վայրկյան միացված / 30 վայրկյան անջատված

Քայլեր՝

1. Տեղադրեք լվացված միկրոտիտրային թիթեղը UIP400MTP սարքի հարթակի վրա։
2. Ուլտրաձայնով մշակեք նմուշները խորհուրդ տրվող կարգավորումներով (60% ամպլիտուդ, 60 վայրկյան միացված, 30 վայրկյան անջատված)։ Կարգավորումները հարմարեցրեք բակտերիալ շտամին։
3. Սկսեք ուլտրաձայնային մշակումը՝ կենսաթաղանթն անջատելու համար։ Ուլտրաձայնային ալիքները քայքայում են կենսաթաղանթի մատրիքսը՝ ազատելով կպած բակտերիաներին։
4. UIP400MTP-ն ապահովում է բոլոր հորանների միատեսակ ենթարկումը՝ կայուն անջատման արդյունքների համար։

Վերլուծական քայլ. անջատված ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթային կենսազանգվածի քանակի որոշում՝ բյուրեղային մանուշակագույնով (CV)

Անհրաժեշտ նյութեր՝

• 0,1% բյուրեղային մանուշակագույնի (CV) լուծույթ
• 95% էթանոլ կամ 30% ացետիկ թթու (լուծարման համար)
• Միկրոթիթեղային սպեկտրոֆոտոմետր՝ կարող 570 nm-ում կարդալու
• Ստերիլ միկրոտիտրային թիթեղներ ներկման համար

Քայլեր՝

1. Ներկող թիթեղի պատրաստում. փոխադրեք 100 µL անջատված կենսաթաղանթային կախույթից ուլտրաձայնով մշակված թիթեղի յուրաքանչյուր հորանից մաքուր, ստերիլ 96-հորանի միկրոտիտրային թիթեղի համապատասխան հորաններին։ Սա ապահովում է ներկման համար մաքուր ու միատեսակ միջավայր։
2. Անջատված կենսաթաղանթի ներկում. ավելացրեք 150 µL 0,1% բյուրեղային մանուշակագույնի լուծույթ անջատված կենսաթաղանթային կախույթ պարունակող յուրաքանչյուր հորանին։ Մեղմորեն պիպետավորեք՝ կախույթի ու բյուրեղային մանուշակագույնի միատեսակ խառնման համար։
3. Ինկուբացիա. թողեք թիթեղն ինկուբացվի սենյակային ջերմաստիճանում 15 րոպե՝ բյուրեղային մանուշակագույնի կենսազանգվածն արդյունավետ ներկելու համար։
4. Լվացում. ինկուբացիայից հետո հորաններից զգուշորեն հեռացրեք բյուրեղային մանուշակագույնի լուծույթը՝ կենսազանգվածը չխանգարելու համար։ Յուրաքանչյուր հորան երեք անգամ լվացեք ստերիլ ֆիզիոլոգիական աղային լուծույթով՝ չմիացված ներկը հեռացնելու համար։
5. Չորացում. թողեք թիթեղը չորանա սենյակային ջերմաստիճանում կամ ստերիլ օդահոսքով ծածկոցի տակ։ Խուսափեք տաքացումից, քանի որ դա կարող է փոխել արդյունքները։
6. Լուծարում. ավելացրեք 200 µL 95% էթանոլ (կամ 30% ացետիկ թթու՝ համաձայն ստանդարտ լաբորատոր պրակտիկաների) յուրաքանչյուր հորանին՝ կապված բյուրեղային մանուշակագույնը լուծելու համար։ Խառնեք մեղմորեն՝ պիպետավորելով կամ թիթեղը ցնցելով 10 րոպե սենյակային ջերմաստիճանում։
7. Չափում. միկրոթիթեղային սպեկտրոֆոտոմետրով չափեք լուծված բյուրեղային մանուշակագույնի լուծույթի օպտիկական խտությունը (OD) 570 nm-ում։
8. Տվյալների մշակում. փորձարարական հորանների արժեքներից հանեք բացասական հսկողության հորանների (TSB պարունակող՝ բայց բակտերիալ ապահովում չունեցող) OD570 միջին արժեքը՝ ֆոնային ներկումը հաշվի առնելու համար։ Գրանցեք և վերլուծեք տվյալները։

Նշում. փորձը կատարեք եռակի կրկնությամբ յուրաքանչյուր պայմանի համար՝ վերարտադրելիությունն ապահովելու համար։ Բյուրեղային մանուշակագույնին և էթանոլին վարվեք պատշաճ՝ հետևելով անվտանգության և թափոնների վերացման արձանագրություններին։

UIP400MTP-ի հիմնական առավելությունները մի հայացքով.

• Մեծ թվով նմուշների մշակում. Հատուկ նախագծված բազմահոր թիթեղների համար՝ թույլ է տալիս միաժամանակ մշակել մի քանի նմուշ։
• Ուլտրաձայնի հավասարաչափ բաշխում. Ապահովում է հորաններում ուլտրաձայնային ինտենսիվության հավասարություն՝ բոլոր նմուշներում կայուն արդյունքներ տալով։
• Կիրառեք ցանկացած ստանդարտ թիթեղ. UIP400MTP-ն կարող է աշխատել ցանկացած ստանդարտ բազմահոր թիթեղներով, Պետրի ամաններով և փորձանոթամաններով։ Թանկարժեք հատուկ թիթեղներ պետք չեն։
• Օգտագործման համար հարմար միջերես. Հեշտ է կարգավորել և կառավարել՝ լաբորատորիայի արտադրողականությունը բարձրացնելու գերազանց գործիք է։ Ծրագրավորելի կարգավորումներն ու ավտոմատացումը հեշտացնում են պրոցեսի ստանդարտացումը։