MBEC հետազոտության արձանագրություն՝ UIP400MTP 96-հորանոց պլանշետների ուլտրաձայնային սարքի կիրառմամբ

MBEC հետազոտությունն օգտագործվում է ցցիկավոր կափարիչների վրա ձևավորված կենսաթաղանթները վերացնելու համար անհրաժեշտ հակամանրէային միջոցների կոնցենտրացիան որոշելու նպատակով։ Կենսաթաղանթների կենսունակությունը գնահատելու համար դրանք նախ պետք է անջատել 96-հորանոց պլանշետի ցցիկավոր կափարիչներից։ Ուլտրաձայնային մշակումը նման անջատման ամենահուսալի և արդյունավետ մեթոդն է։ UIP400MTP բազմահորանոց պլանշետների ուլտրաձայնային սարքը հատուկ նախագծված է հետազոտական պլանշետներն առավելագույն արդյունավետությամբ և հարմարավետությամբ մշակելու համար՝ պարզեցնելով և արագացնելով մեծ թվով նմուշներով MBEC հետազոտությունները։

Ուլտրաձայնային մշակում՝ կենսաթաղանթների անջատման համար

Ուլտրաձայնային մշակումը կենսաթաղանթի վերացման նվազագույն կոնցենտրացիայի (MBEC) հետազոտությունների կարևոր փուլ է, որն ապահովում է կենսաթաղանթի բջիջների արդյունավետ անջատումը դրանց ամրացման մակերևույթից։ Կենսաթաղանթներն իրենց բնույթով միկրոօրգանիզմների կառուցվածքային համայնքներ են՝ պարփակված արտաբջջային մատրիքսում, ինչի շնորհիվ դրանք հակամանրէային միջոցների նկատմամբ զգալիորեն ավելի դիմացկուն են, քան պլանկտոնային բջիջները։ MBEC հետազոտությունների ընթացքում ուլտրաձայնային մշակումն ուլտրաձայնային ալիքների միջոցով առաջացնում է վերահսկվող կավիտացիա՝ քայքայելով կենսաթաղանթի մատրիքսը և դրա մեջ պարփակված բջիջներն ազատելով սուսպենզիայի մեջ։ Այս փուլն ապահովում է կենսաթաղանթի բջիջների հավասարաչափ բաշխումը վերականգնման միջավայրում՝ նպաստելով կենսունակության ճշգրիտ գնահատմանը ցանքսի, նոսրացման կամ սպեկտրալուսաչափական մեթոդներով։ Առանց կենսաթաղանթի պատշաճ անջատման՝ մատրիքսի մնացորդային բաղադրիչները կարող են պաշտպանել բջիջները՝ հանգեցնելով հակամանրէային արդյունավետության թերագնահատման։ Հետևաբար, ուլտրաձայնային մշակումն անփոխարինելի է հուսալի և վերարտադրելի MBEC արժեքներ ստանալու համար, որոնք արտացոլում են փորձարկվող միջոցների վերացման իրական ներուժը։ UIP400MTP բազմահորանոց պլանշետների ուլտրաձայնային սարքը հնարավորություն է տալիս հետազոտական պլանշետներում հեշտությամբ նախապատրաստել մեծ թվով նմուշներ։

Կենսաթաղանթի վերացման նվազագույն կոնցենտրացիայի (MBEC) հետազոտության արձանագրություն

Քայլ 1. Կենսաթաղանթի ձևավորում

1. Պատրաստեք բակտերիալ սուսպենզիան.
   Աճեցրեք բակտերիաները համապատասխան սննդային միջավայրերում մինչև աճի լոգարիթմական փուլը։
   Նոսրացրեք բակտերիալ կուլտուրան մինչև սահմանված օպտիկական խտությունը (օրինակ՝ OD600 ~0,1)։
2. Ինոկուլացրեք 96-հորանոց պլանշետը.
   Բակտերիալ սուսպենզիան (օրինակ՝ 150–200 µL) ավելացրեք ստանդարտ 96-հորանոց միկրոտիտրային պլանշետի յուրաքանչյուր հորի մեջ։
3. Ամրացրեք ցցիկավոր կափարիչը.
   Ցցիկավոր կափարիչը տեղադրեք ինոկուլացված պլանշետի վրա, որպեսզի ցցիկների մակերևույթներին կենսաթաղանթ ձևավորվի։
4. Ինկուբացրեք պլանշետը.
   Համակարգը 24–48 ժամ ինկուբացրեք համապատասխան ջերմաստիճանում (օրինակ՝ 37°C)՝ առանց թափահարելու, որպեսզի նպաստեք կենսաթաղանթի աճին։

Քայլ 2. Մշակում հակամանրէային միջոցներով

• Պատրաստեք հակամանրէային լուծույթները.
  Թարմ սննդային միջավայրերում պատրաստեք հակամանրէային միջոցի տարբեր կոնցենտրացիաներով լուծույթներ։
  Կենսաթաղանթները ենթարկեք հակամանրէային միջոցների ազդեցությանը.
  Ցցիկավոր կափարիչը հանեք բակտերիալ կուլտուրայից և ողողեք ստերիլ ֆիզիոլոգիական լուծույթում կամ PBS լուծույթում՝ պլանկտոնային բջիջները հեռացնելու համար։
  Ցցիկավոր կափարիչը տեղադրեք հակամանրէային լուծույթներ պարունակող նոր 96-հորանոց պլանշետի մեջ։
• Ինկուբացրեք պլանշետը.
  Ինկուբացրեք սահմանված ժամանակահատվածով (օրինակ՝ 24 ժամ)՝ հակամանրէային ազդեցությունն ապահովելու համար։

Քայլ 3. Ուլտրաձայնային մշակում UIP400MTP 96-հորանոց պլանշետների ուլտրաձայնային սարքով

Ուլտրաձայնային մշակման փուլը վճռորոշ է կենսունակությունը գնահատելու նպատակով ցցիկավոր կափարիչներից կենսաթաղանթներն անջատելու համար։ UIP400MTP ուլտրաձայնային սարքն օգտագործելիս հետևեք այս քայլերին.

1. Նախապատրաստեք համակարգը.
   Նոր 96-հորանոց պլանշետի յուրաքանչյուր հորի մեջ լցրեք վերականգնման միջավայր (օրինակ՝ չեզոքացնող արգանակ կամ թարմ աճեցման միջավայր)։
2. Տեղափոխեք ցցիկավոր կափարիչը.
   Ցցիկավոր կափարիչը հանեք հակամանրէային մշակման պլանշետից։
   Ցցիկավոր կափարիչը ողողեք ստերիլ ֆիզիոլոգիական լուծույթում կամ PBS լուծույթում՝ հակամանրէային միջոցների մնացորդները հեռացնելու համար։
3. Տեղադրեք պլանշետը և ուլտրաձայնային սարքը.
   Ցցիկավոր կափարիչն ամրացրեք վերականգնման միջավայր պարունակող պլանշետին։
   Վերականգնման միջավայր պարունակող պլանշետը տեղադրեք UIP400MTP ուլտրաձայնային սարքի հարթակի վրա՝ համոզվելով, որ այն կենտրոնացված է և կայուն դիրքում է։
4. Կարգավորեք ուլտրաձայնային մշակման պարամետրերը.
   UIP400MTP սարքի վրա սահմանեք ուլտրաձայնային մշակման պարամետրերը (կարգավորումները կարելի է հարմարեցնել կենսաթաղանթին).
   Տատանման ամպլիտուդ՝ 70–100%։
   Ուլտրաձայնային մշակման տևողություն՝ 1–3 րոպե (կարգավորեք՝ ըստ կենսաթաղանթի ամրության), ցիկլային ռեժիմում։
5. Մշակեք ուլտրաձայնով.
   Սկսեք ուլտրաձայնային մշակման գործընթացը։ Ուլտրաձայնային տատանումները կենսաթաղանթները ցցիկների մակերևույթներից կանջատեն վերականգնման միջավայրի մեջ։
6. Վերահսկեք գործընթացը.
   Հորերում նմուշի ջերմաստիճանը վերահսկելու համար օգտագործեք միացվող ջերմաստիճանի տվիչը։ Սառեցման համար UIP400MTP սարքը կարելի է միացնել լաբորատոր սառեցնող սարքի։
7. Ուլտրաձայնային մշակումից հետո կատարվող գործողություններ.
   Վերականգնման միջավայրը, որն այժմ պարունակում է անջատված կենսաթաղանթները, անմիջապես տեղափոխեք նոր ստերիլ պլանշետի մեջ՝ հետագա վերլուծության համար։

(A) Պլանշետ՝ 2% գլյուկոզա պարունակող TSB միջավայրով, որն օգտագործվել է կենսաթաղանթի ձևավորման, բջիջների վերականգնման և
MIC և MBCB որոշման համար, (B) ցցիկավոր կափարիչ՝ ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթների ձևավորման համար։ MIC և MBCB որոշման համար, (B) ցցիկավոր կափարիչ՝ ստաֆիլոկոկային կենսաթաղանթների ձևավորման համար։
Ցցիկների վրա ձևավորված կենսաթաղանթի բջիջներն անջատվել են 5 min տևողությամբ ուլտրաձայնային մշակմամբ (Hielscher Ultrasound Technology)՝ բջիջների վերականգնման համար թարմ սննդային միջավայր պարունակող 96-հորանոց պլանշետներում։
(Նկար և հետազոտություն՝ ©de Oliveira et al., 2016)

Քայլ 4. Կենսունակության գնահատում

Կատարեք անջատված կենսաթաղանթների ցանքս և աճեցրեք դրանք.

1. Վերականգնման միջավայրը հաջորդաբար նոսրացրեք և ցանեք ագարի վրա՝ գաղութ առաջացնող միավորները (CFU) հաշվելու համար։
   Որպես այլընտրանք՝ օգտագործեք կենսունակության գունաչափական կամ ֆլուորեսցենցիայի վրա հիմնված հետազոտություն։
2. Գրանցեք արդյունքները.
   MBEC արժեքը որոշեք որպես հակամանրէային միջոցի այն նվազագույն կոնցենտրացիան, որը վերացրել է կենսաթաղանթի հայտնաբերելի կենսունակությունը։

Նախագծում, արտադրություն և խորհրդատվություն – Գերմանիայում ստեղծված որակ

Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը հայտնի են իրենց որակի և նախագծման ամենաբարձր չափանիշներով։ Ամրությունն ու շահագործման դյուրինությունը թույլ են տալիս մեր ուլտրաձայնային սարքերն անխափան ինտեգրել արդյունաբերական օբյեկտներում։ Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը հեշտությամբ դիմակայում են ծանր պայմաններին և պահանջկոտ միջավայրերին։

Hielscher Ultrasonics ընկերությունն ունի ISO հավաստագրում և հատուկ ուշադրություն է դարձնում բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային սարքերին, որոնք առանձնանում են նորագույն տեխնոլոգիայով և օգտագործման հարմարավետությամբ։ Իհարկե, Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը համապատասխանում են CE պահանջներին և բավարարում են UL, CSA և RoHs պահանջները։

Կարդացեք այստեղ, թե ինչպես է UIP400MTP սարքն օգտագործվում կենսաթաղանթների անջատման համար՝ որպես նմուշների նախապատրաստման փուլ ASTM E2799 արձանագրության ընթացքում, որով MBEC հետազոտության կիրառմամբ փորձարկվում է ախտահանիչների արդյունավետությունը Pseudomonas aeruginosa կենսաթաղանթի նկատմամբ։