Նվազագույն արգելակման կոնցենտրացիայի (MIC) փորձարկման արձանագրություն

The Biofilm-Based Minimum Inhibitory Concentration (MIC) assay is an essential method for evaluating the effectiveness of antimicrobial agents against biofilm-associated microorganisms, which exhibit heightened resistance due to their protective extracellular matrix. A crucial step in this assay is the detachment of biofilm structures to release embedded cells for accurate viability assessment. The UIP400MTP multi-well plate sonicator facilitates this process by employing focused ultrasound to generate controlled cavitation, efficiently dislodging biofilm cells and dispersing them into a uniform suspension. This precise and reproducible biofilm disruption enhances the reliability and throughput of MIC assays, making the UIP400MTP an essential tool in advancing biofilm research.

Փաստորեն ինչու՞ պետք է օգտագործեմ sonication MIC թեստերի ընթացքում?

• Ճշգրիտ, վերարտադրելի տվյալներ: Ստացեք միատեսակ բջջային сусպենսիաներ, որոնք վերացնում են մատրիցայի պաշտպանությունը, ապահովելով, որ ձեր գաղութի հաշվարկներն ու օպտիկական խտության ընթերցումները իսկապես արտացոլեն հակաբակտերիալ արդյունավետությունը:
• Բարձր արդյունավետություն. Նախապատրաստեք ամբողջ 96-խորանափայտը միանգամից ընդամենը 1–3 րոպեում՝ փոխարինելով դանդաղ, անհամապատասխան ձեռքի քերծումը հոսքի հարմարաչափ աշխատանքով:
• Պահպանված բջջային կենսունակություն: Նրբորեն դուրս բերեք ներծծված բջիջները առանց ֆիզիկական վնասի, որը տեղի է ունենում քերծելու ընթացքում, ապահովելով ավելի բարձր կենդանիացման մակարդակներ վավեր MIC/MBEC հաշվարկների համար:
• Բազմակի խեղաթյուրումների ռիսկի բացակայություն: Օգտվեք անկապ սենդվիչային ձևավորմամբ, որը միատեսակ է վերամշակում բոլոր խորշերը առանց նմուշների կամ խորշերի առանձին փորձարկման:
• Համապատասխան է ստանդարտներին: Ընկղմեք ձեր մեթոդաբանությունը հաստատված արդյունաբերական պրոտոկոլների հետ, ինչպիսիք են ASTM E2799-22, ինչը դարձնում է ձեր տվյալներն ավելի լայնապաշտպանելի կարգավորիչ կամ հրապարակման նպատակների համար.
• Մտերմացված Դեղամիջոց & Բուժման Սկրինինգ: Հավատացեք ձեր զգայունության արդյունքներին՝ ընդունելու հարմարեցված որոշումներ հակամանրէային արդյունավետության, դիմադրության պրոֆիլավորման կամ թերապևտիկ զարգացման վերաբերյալ.

Sonication բիոֆիլմի ջոկատի համար

Biofilm-ի վրա հիմնված MIC վերլուծությունը սովորաբար չափում է բակտերիաների կենսունակությունը կամ աճի արգելակումը, օգտագործելով այնպիսի մեթոդներ, ինչպիսիք են ծածկումը, գաղութների հաշվարկը կամ օպտիկական խտության չափումները: Sonication-ը բիոֆիլմի վրա հիմնված MIC վերլուծության կարևոր քայլ է, երբ գնահատվում է բիոֆիլմի հետ կապված միկրոօրգանիզմների հակամանրէային զգայունությունը: Դրա հիմնական գործառույթն է բիոֆիլմի մատրիցի մեջ ներկառուցված բջիջները անջատել և ցրել ճշգրիտ վերլուծության համար միասնական կախույթի մեջ:
Կենսաթաղանթները զգալիորեն ավելի դիմացկուն են հակամանրէային նյութերի նկատմամբ՝ համեմատած պլանկտոնային բջիջների հետ, ինչը ճշգրիտ վերլուծության համար կարևոր է դարձնում պատշաճ անջատումը: Այս գործընթացի ընթացքում ուլտրաձայնային ալիքները առաջացնում են վերահսկվող կավիտացիա՝ կոտրելով բիոֆիլմի մատրիցը և ազատելով ներկառուցված բջիջները վերականգնման միջավայրում միասնական կախոցի մեջ: Այս քայլը հնարավորություն է տալիս ճշգրիտ գնահատել կենսաթաղանթով ցրված բջիջների կենսունակությունը այնպիսի մեթոդների միջոցով, ինչպիսիք են թաղումը, նոսրացումը և գաղութների հաշվումը: Բիոֆիլմի պատշաճ խախտումը ձայնային ազդեցությամբ թույլ չի տալիս մնացորդային մատրիցային բաղադրիչները պաշտպանել բջիջները, ինչը հակառակ դեպքում կարող է հանգեցնել հակամանրէային ակտիվության թերագնահատման: Հատկապես այս նպատակի համար հարմարեցված է բազմաբնակարան ափսեի ձայնագրիչ UIP400MTP-ը, որն առաջարկում է ճշգրիտ և վերարտադրվող ձայնային ձայնագրման պայմաններ՝ ապահովելու համար փորձարկման թիթեղների հուսալի և բարձր թողունակության պատրաստումը:

Ինչու է Sonication-ը անհրաժեշտ կենսաֆիլմի վրա հիմնված նվազագույն արգելակող կոնցենտրացիայի վերլուծություններում

Կենսունակության չափումների և բջիջների հաշվման համար անհրաժեշտ է միայնակ բջիջների ամբողջական և հուսալի անջատում և ցրում: UIP400MTP-ն նպաստում է կենսաթաղանթի միատեսակ, չվնասող ջոկատին և բջիջների ցրմանը` վերլուծության կայուն արդյունքների համար:

• Կենսաֆիլմի բարդություն. Կենսաթաղանթները կառուցվածքային մանրէաբանական համայնքներ են, որոնք պարփակված են արտաբջջային պոլիմերային նյութի (EPS) մատրիցով, որը պաշտպանում է միկրոօրգանիզմներին և դարձնում նրանց ավելի դիմացկուն հակամանրէային նյութերի նկատմամբ:
• Միատեսակ ցրում. Կենսաթաղանթում ներկառուցված բջիջների կենսունակությունը կամ հակամանրէային նյութերի նկատմամբ նրանց ընկալունակությունը ճշգրիտ չափելու համար բիոֆիլմը նախ պետք է տեղահանվի և տրոհվի միատարր կասեցման:

Բիոֆիլմի վրա հիմնված նվազագույն արգելակման կոնցենտրացիայի փորձարկման արձանագրություն

Նվազագույն արգելակման կոնցենտրացիայի (MIC) վերլուծությունը որոշում է հակամանրէային նյութի նվազագույն կոնցենտրացիան, որն անհրաժեշտ է միկրոօրգանիզմների տեսանելի աճը արգելակելու համար: Այս արձանագրությունը նախատեսված է բիոֆիլմի հետ կապված միկրոօրգանիզմների համար՝ օգտագործելով UIP400MTP բազմաբնակարան ափսեի ձայնային սարք՝ կենսաթաղանթի խանգարման համար:

Քայլ 1. Բակտերիալ պատվաստանյութի պատրաստում

1. Պատրաստել բակտերիալ կախոցը.
   Աճեցրեք բակտերիաները համապատասխան միջավայրերում մինչև միջին լոգարիթմական փուլ:
   Նոսրացրեք մշակույթը՝ հասնելու ստանդարտացված բջիջների խտության (օրինակ՝ 0,5 McFarland ստանդարտ կամ OD600 ~ 0,1):
2. Պատրաստել հակամանրէային լուծույթներ.
   Հակամանրէային նյութը նոսրացրեք համապատասխան միջավայրում՝ կոնցենտրացիաների մի շարք ստեղծելու համար (օրինակ՝ կրկնակի սերիական նոսրացումներ):
3. Բաշխել 96 ջրհորի ափսեի մեջ.
   Ավելացրեք հակամանրէային լուծույթները ստանդարտ 96 հորատանցքի ափսեի հորերի մեջ, որի վերջնական ծավալը ~150–200 μL է:
   Ներառեք աճի վերահսկման միջոցներ (առանց հակամանրէային) և ստերիլության վերահսկման միջոցներ (առանց բակտերիալ պատվաստման):

Քայլ 2. Կենսաթաղանթի ձևավորում կցորդի կափարիչի վրա

• Կցեք կափարիչի կափարիչը.
  Տեղադրեք մասնագիտացված կցորդի կափարիչը պատվաստված հորերի վրա՝ համոզվելով, որ կցորդները ամբողջությամբ ընկղմված են բակտերիալ կախոցի մեջ:
• Ինկուբացնել ափսեը.
  Ինկուբացնել համապատասխան ջերմաստիճանում (օրինակ՝ 37°C) որոշակի տևողությամբ (օրինակ՝ 24 ժամ) ստատիկ պայմաններում, որպեսզի ցցերի վրա կենսաթաղանթ ձևավորվի:

Քայլ 3. Հակամանրէային ազդեցություն

• Լվացեք ցցերը.
  Հեռացրեք կցորդի կափարիչը բակտերիալ կախոցից և նրբորեն լվացեք ստերիլ ֆիզիոլոգիական լուծույթով կամ PBS-ով, որպեսզի հեռացնեք թույլ կցված պլանկտոնային բջիջները:
• Հակամանրէային ազդեցություն ունենալ.
  Կցիչի կափարիչը տեղափոխեք նոր 96 հորանի ափսեի մեջ, որը պարունակում է ավելի վաղ պատրաստված հակամանրէային նոսրացումներ:
  Ինկուբացնել որոշակի ժամանակահատվածով (օրինակ՝ 24 ժամ) ստատիկ պայմաններում, որպեսզի հակամանրէային նյութը կարողանա գործել կենսաթաղանթների վրա:

Քայլ 4. Sonication Microplate Sonicator UIP400MTP-ով

Sonication քայլը կարևոր է բիոֆիլմերը կցորդների կափարիչներից անջատելու համար՝ կենսունակությունը գնահատելու համար: Հետևեք հետևյալ քայլերին UIP400MTP sonicator-ի համար.

1. Պատրաստել կարգավորումը.
   Յուրաքանչյուր ջրհորի մեջ լցրեք թարմ 96 հորանանոց ափսեը վերականգնող միջավայրով (օրինակ՝ չեզոքացնող արգանակ կամ ստերիլ աճող միջավայր):
2. Տեղափոխեք կափարիչի կափարիչը.
   Հեռացրեք կցորդի կափարիչը հակամանրէային բուժման ափսեից:
   Լվացեք կցորդի կափարիչը ստերիլ ֆիզիոլոգիական լուծույթով կամ PBS-ով, որպեսզի հեռացնեք մնացորդային հակամանրէային նյութերը:
3. Տեղադրեք ափսեը sonicator-ում.
   Կցեք կափարիչը վերականգնման միջին ափսեին:
   Տեղադրեք վերականգնման միջավայրի ափսեը UIP400MTP ձայնային սարքի մեջ՝ ապահովելով, որ ափսեը գտնվում է կենտրոնում և կայուն, ինչպես նկարագրված ձեռնարկում:
4. Կարգավորել sonication պարամետրերը:
   Սահմանեք ձայնային ազդանշանի պարամետրերը UIP400MTP-ում (կարգավորումները կարող են ճշգրտվել բիոֆիլմի վրա).
   Լայնություն՝ 70–100%։
   Ձայնավորման ժամանակը. 1–3 րոպե (կարգավորվում է բիոֆիլմի կառուցվածքի հիման վրա) ցիկլային ռեժիմում:
5. Sonicate:
   Սկսեք ձայնագրման գործընթացը: Ուլտրաձայնային ալիքները կխախտեն բիոֆիլմի մատրիցը և բջիջները կտեղափոխեն վերականգնման միջավայր:
6. Հետևեք գործընթացին.
   Օգտագործեք խցանվող ջերմաստիճանի տվիչը՝ հորերում նմուշի ջերմաստիճանը վերահսկելու համար: UIP400MTP-ը կարելի է միացնել լաբորատոր սառեցման սառեցման համար:
7. Post-Sonication բեռնաթափում:
   Անմիջապես տարանջատված բիոֆիլմեր պարունակող վերականգնման միջավայրը տեղափոխեք թարմ ստերիլ ափսեի մեջ՝ հետագա վերլուծության համար:

(A) 2% գլյուկոզա պարունակող TSB ափսե, որն օգտագործվում է կենսաթաղանթի ձևավորման, բջիջների վերականգնման և MIC-ի և MBEC-ի որոշման համար. (B) Կափարիչով կափարիչով ստաֆիլոկոկային բիոֆիլմերի ձևավորման համար:
Բջիջների վրա ձևավորված բիոֆիլմի բջիջները տեղահանվել են ձայնային ախտահանման միջոցով (Hielscher Ultrasound Technology) 5 րոպեի ընթացքում 96 ջրհորի ափսեներում, որոնք պարունակում են թարմ կուլտուրայի միջավայր՝ բջիջները վերականգնելու համար:
(Նկար և ուսումնասիրություն՝ ©de Oliveira et al., 2016)

Քայլ 4. Կենսունակության գնահատում

Ափսե և կուլտուրայի անջատված բիոֆիլմեր.

1. Կատարեք վերականգնման միջավայրի և ափսեի սերիական նոսրացում ագարի վրա՝ գաղութներ ձևավորող միավորները (CFU) թվարկելու համար:
2. Գնահատել MIC:
   Որոշեք MIC-ը որպես ամենացածր հակամանրէային կոնցենտրացիան, որն ամբողջությամբ արգելակում է տեսանելի մանրէների աճը վերականգնման միջավայրում:

MIC Նվազագույն արգելակող կոնցենտրացիան. միկրոտիտրային ափսեի օրինակ և միկրոնոսրացման արդյունքների մեկնաբանում:
(Ուսումնասիրություն և պատկեր՝ ©Jaskiewicz et al. 2019)

Ով է օգտվում սոնիկացիայից MIC թեստերի ընթացքում?

• Բուժական սարքավորումների արտադրողներ: Մակերեսային ծածկույթների արդյունավետությունը փորձելու և բիոֆիլմների ձևավորման հակված սարքերի մաքրման պրոտոկոլները հաստատելու համար։
• Կլինիկական միկրոբիոլոգներ: Մարդկային խողովակաշարային վարակների (օրինակ՝ PJI) ճշգրիտ ախտորոշման համար՝ վերականգնելով բակտերիաները բժշկական սարքավորումներից:
• Ֆարմաթևական ծրագրավորողներ: Նոր հակասնկային միջոցների արդյունավետությունը գնահատելու համար միկրոբների մեջ բիոֆիլմերի դիմադրություն ունեցնող վիրուսների նկատմամբ:
• Ակադեմիական հետազոտողներ: Բիոֆիլմի կենսաբանության և հակասնկային դիմադրության մեխանիզմների վրա բարձր անցողունակ, կրկնելի հետազոտություններ կատարելու համար:
• Արդյունաբերական որակի վերահսկման թիմեր: Արդյունաբերական միջավայրում բիոֆաուլինգի և դիսինֆեկցիայի արդյունավետությունը գնահատելու համար (օրինակ՝ օգտագործելով ASTM E2799-22 ստանդարտները):

Դիզայն, արտադրություն և խորհրդատվություն – Որակյալ Արտադրված է Գերմանիայում

Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը հայտնի են իրենց ամենաբարձր որակի և դիզայնի չափանիշներով: Հզորությունը և հեշտ շահագործումը թույլ են տալիս մեր ուլտրաձայնային սարքերի սահուն ինտեգրումը արդյունաբերական օբյեկտներում: Ծանր պայմանները և պահանջկոտ միջավայրերը հեշտությամբ կառավարվում են Hielscher-ի ձայնագրիչներով:

Hielscher Ultrasonics-ը ISO սերտիֆիկացված ընկերություն է և հատուկ շեշտադրում է կատարում բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային սարքերի վրա, որոնք բնութագրվում են ժամանակակից տեխնոլոգիաներով և օգտագործողների համար հարմարավետությամբ: Իհարկե, Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը համապատասխանում են ԵԽ-ին և համապատասխանում են UL, CSA և RoH-ների պահանջներին:

Կարդացեք այստեղ, թե ինչպես է UIP400MTP-ն օգտագործվում բիոֆիլմի անջատման համար ASTM E2799 արձանագրությունում – Ախտահանիչ արդյունավետության փորձարկում Pseudomonas aeruginosa բիոֆիլմի դեմ՝ օգտագործելով MBEC վերլուծությունը: