Փոխարինեք բջջային քերծվածքը UIP400MTP բարձր թողունակության Sonicator-ով
Բազմաբխային թիթեղներից կպչուն բջջային գծերի անջատումն ու հանումը բազմաօմիկական վերլուծության համար ամենօրյա խնդիր է լաբորատորիաներում: Բարձր թողունակությամբ բջիջների անջատումը UIP400MTP-ի բազմաբնակարան ափսեի ձայնագրիչի միջոցով փոխարինում է ձեռքով բջիջների քերծումը, ինչը հանգեցնում է ՌՆԹ-ի, ընդհանուր լիպիդների և ընդհանուր բևեռային մետաբոլիտների ավելի բարձր արդյունահանման: Նոր մեթոդը միավորում է Hielscher UIP400MTP sonicator-ը Beckman Coulter i7 հեղուկ բեռնաթափման աշխատակայանի հետ՝ հնարավորություն տալով բջիջների բարձր թողունակության, վերարտադրելի և արդյունավետ մշակումը ՌՆԹ-ի, մետաբոլիտների և լիպիդների արդյունահանման համար: Ներկայացված մեթոդը գերազանցում է բջիջների ձեռքով քերելու ավանդական մեթոդները՝ ձեռք բերելով գերազանց վերարտադրելիություն և բերքատվություն տարբեր բջիջների տեսակների և փորձարարական պայմաններում:
Հեշտացնել բջջային անջատումը Microplate Sonicator UIP400MTP-ով
Բջջային կուլտուրայի համապատասխան համակարգերը կարևոր դեր են խաղում թունաբանական և կենսաբժշկական հետազոտություններում: Այս համատեքստում, Cruchley-Fuge et al. (2024) անդրադարձել է PrecisionTox նախագծի զգալի մարտահրավերին, որը կենտրոնացած է քիմիական վտանգի գնահատման omics տեխնոլոգիաների օգտագործման վրա: Ծրագիրը նպատակ ուներ զանազան քիմիական նյութերով մշակված հազարավոր նմուշների բարձր արդյունավետության վերլուծության համար: Այս պահանջը բավարարելու համար հետազոտողները մշակել են ավտոմատացված աշխատանքային հոսք, որը համատեղում է UIP400MTP sonicator-ը և հաստատված երկֆազային արդյունահանման արձանագրությունները հեղուկ քրոմատագրման զանգվածային սպեկտրոմետրիայի (LC-MS) վերլուծության համար: Նրանց ուսումնասիրությունը գնահատում է UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator-ի արդյունավետությունը կպչուն բջիջները անջատելու հարցում՝ համեմատած ձեռքով քերելու և այլ ավանդական մեթոդների հետ:
Կպչուն բջիջների կուլտուրաների անջատում ցանկացած ստանդարտ միկրոափսեից – բարձր թողունակությամբ UIP400MTP sonicator-ով
Multi-Omics-ի պարզեցում. կպչուն բջիջների ավտոմատ արդյունահանում UIP400MTP-ով
Բիրմինգհեմի համալսարանի Լաուրա Կրաչլի-Ֆուգեի հետազոտողների թիմը օգտագործել է մարդու երեք բջջային գիծ՝ HepG2 (լյարդի քաղցկեղի բջիջներ), HepaRG (տարբերակված հեպատոցիտների նման բջիջներ) և H295R (մակերիկամի քաղցկեղի բջիջներ): Այս բջիջները աճեցվել են 24 ջրհորների և 96 ջրանցքների ափսեներում և ենթարկվել փորձարկման քիմիական նյութերի, ինչպիսիք են աֆլատոքսին B1-ը և ֆորսկոլինը:
Փորձարարական դիզայն.
- Փուլ 1: UIP400MTP sonicator-ի հզորության կարգավորումների օպտիմիզացում և համեմատություն ձեռքով բջիջների քերման և ձայնային ջրային բաղնիքների հետ: HepG2 բջիջները օգտագործվել են ՌՆԹ-ի, մետաբոլիտի և լիպիդների վերականգնումը գնահատելու համար:
- Փուլ 2: UIP400MTP-ի ինտեգրումը երկֆազային արդյունահանման աշխատանքային հոսքի մեջ՝ օգտագործելով Beckman Coulter i7 համակարգը: Վավերացումն իրականացվել է HepaRG և H295R բջիջների միջոցով:
Արդյունահանման աշխատանքային հոսք. Աշխատանքային հոսքը ներառում էր քիմիական ազդեցությունները բազմաբնակարան ափսեներում, բջիջների անջատումը UIP400MTP-ի միջոցով և երկֆազային արդյունահանումը Bligh-ի միջոցով: & Դայեր (Բ&Դ) մեթոդ. LC-MS վերլուծությունը իրականացվել է օգտագործելով Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 լիպոֆիլ և բևեռային միացությունների համար: Բ&D մեթոդը, որը լիպիդների քանակականացման ոսկու ստանդարտ է, ներառում է երկաստիճան արդյունահանում մեթանոլով, քլորոֆորմով և ջրով, որին հաջորդում է լիպիդների քանակականացումը քլորոֆորմի փուլում:
UIP400MTP միկրոափսե ձայնագրիչը հեշտացնում է կպչուն բջջային գծերի անջատումը բազմաբնակարան ափսեներից և Պետրիի ափսեներից
Արդյունքները:
- Փուլ 1: Օպտիմալ ձայնային պայմանները հայտնաբերվել են 60% հզորությամբ:
UIP400MTP-ն ապահովել է ՌՆԹ-ի ամենաբարձր վերականգնումը բացառիկ վերարտադրելիությամբ՝ համեմատած ձեռքով քերելու և ձայնային լոգանքների հետ:
Բևեռային մետաբոլիտների վերականգնումը համահունչ էր բոլոր մեթոդներին, մինչդեռ լիպիդների վերականգնումը զգալիորեն գերազանցում էր UIP400MTP-ին: - Փուլ 2: HepaRG-ի և H295R-ի բջիջների վրա վավերացումը ցույց տվեց բարձր վերարտադրելիություն լիպիդոմիկայի և նյութափոխանակության տվյալների մեջ, ինչպես ցույց է տրված սերտորեն հավաքված PCA գնահատականներով:
Աֆլատոքսին B1-ի և ֆորսկոլինի բուժումները արդյունավետորեն տարբերվում էին վերահսկիչներից՝ ընդգծելով մեթոդի զգայունությունն ու հուսալիությունը:
Microplate sonicator UIP400MTP բարձր թողունակությամբ բջիջների անջատման համար
“Hielscher UIP400MTP sonication սարքը ապահովում է բարձրորակ և վերարտադրվող այլընտրանքային մոտեցում ձեռքով բջիջների քերման «ոսկե ստանդարտին», ինչը հանգեցնում է ՌՆԹ-ի, ընդհանուր լիպիդների և ընդհանուր բևեռային մետաբոլիտների ավելի բարձր ելքի:” (Cruchley-Fuge et al., 2024)
Cruchley-Fuge et al. ընդգծել UIP400MTP sonicator-ի առավելությունները կպչուն բջիջների մշակման համար: Ձեռքով քերելը փոխարինելով՝ այս մեթոդը մեծացնում է վերարտադրելիությունը, թողունակությունը և բերքատվությունը՝ այն դարձնելով անգնահատելի գործիք՝ PrecisionTox-ի նման լայնածավալ ուսումնասիրությունների համար: UIP400MTP-ի ինտեգրումը ավտոմատացված աշխատանքային հոսքերին ոչ միայն նվազեցնում է փոփոխականությունը, այլև հեշտացնում է աշխատատար գործընթացները՝ հնարավորություն տալով բարձրորակ բազմաօմիկական տվյալների հավաքագրում:
Cruchley-Fuge et al. (2024) հեշտացնում և հեշտացնում է կպչուն բջջային մշակույթների մշակումը բազմաօմիկական վերլուծության համար: UIP400MTP sonicator-ի ինտեգրումը ավտոմատացված աշխատանքային հոսքերի հետ ապահովում է նմուշի հետևողական և արդյունավետ պատրաստում, ինչը իդեալականորեն հարմար է բարձր արդյունավետությամբ թունաբանական հետազոտությունների համար:
UIP400MTP-ը ուլտրաձայնային լոգանք չէ: Դա բարձր ինտենսիվության բաժակի եղջյուր է՝ կենտրոնացված ձայնային արտանետման համար: Այս հզոր ոչ կոնտակտային ձայնային սարքը ապահովում է միատեսակ ձայնային արտանետում ձեր ստանդարտ հորատանցքի բոլոր հորերում: Դուք ճշգրիտ վերահսկում եք ամպլիտուդը, ուժը և իմպուլսները: Ներկառուցված ժմչփը և ջերմաստիճանի զոնդն ապահովում են հետևողական արդյունքներ: UIP400MTP ափսեի ձայնային սարքը նմուշները սառեցնում է ջրային բաղնիքով (արտաքին սառեցնող սարք՝ ըստ ցանկության):
Դիզայն, արտադրություն և խորհրդատվություն – Որակյալ Արտադրված է Գերմանիայում
Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը հայտնի են իրենց բարձր որակի և դիզայնի չափանիշներով: Հզորությունը և հեշտ շահագործումը թույլ են տալիս մեր ուլտրաձայնային սարքերի սահուն ինտեգրումը արդյունաբերական օբյեկտներում: Կոպիտ պայմանները և պահանջկոտ միջավայրերը հեշտությամբ կառավարվում են Hielscher ուլտրաձայնային սարքերի կողմից:
Hielscher Ultrasonics-ը ISO սերտիֆիկացված ընկերություն է և հատուկ շեշտադրում է կատարում բարձր արդյունավետության ձայնային սարքերի վրա, որոնք բնութագրվում են ժամանակակից տեխնոլոգիաներով և օգտագործողների համար հարմարավետությամբ: Իհարկե, Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը համապատասխանում են ԵԽ-ին և համապատասխանում են UL, CSA և RoH-ների պահանջներին:
Բարձր թողունակությամբ բջիջների անջատում առանց բջիջների քերման – UIP400MTP sonicator-ը հեշտացնում է լաբորատոր աշխատանքը:
Գրականություն / Հղումներ
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Հաճախակի տրվող հարցեր
Ի՞նչ է բջջային անջատումը:
Հետազոտության մեջ բջիջների անջատումը վերաբերում է կպչուն բջիջները կուլտուրայի անոթի կամ սուբստրատի մակերեսից բաժանելու գործընթացին: Սա սովորաբար արվում է բջիջները հավաքելու համար ներքևի կիրառման համար, ինչպիսիք են վերլուծությունը, ենթամշակույթը կամ կրիոպահպանումը: Անջատումը կարող է հասնել ֆերմենտային մեթոդների (օրինակ՝ տրիպսին), քիմիական նյութերի (օրինակ՝ EDTA), մեխանիկական մեթոդների (օրինակ՝ քերիչ) կամ ֆիզիկական տեխնիկայի միջոցով, ինչպիսին է ձայնային ախտահանումը, կախված բջջի տեսակից և հետազոտության պահանջներից:
Ինչպե՞ս եք անջատում կպչուն բջիջները:
Կպչուն բջիջների անջատումը, օգտագործելով ձայնային ապարատը, ներառում է կենտրոնացված ուլտրաձայնային ալիքների կիրառում` վերահսկվող միջավայրում բջջային մակերեսի կպչունությունը խաթարելու համար: Մասնավորապես, UIP400MTP microplate sonicator-ը հասնում է դրան՝ առաջացնելով տեղայնացված մեխանիկական թրթռումներ, որոնք կոտրում են կապերը բջիջների և մշակույթի մակերեսի միջև: Հիմնական քայլերը ներառում են.
- Պատրաստում: Բջիջները աճեցվում են բազմաբնակարան հորատանցքերում և կարող են ենթարկվել հատուկ քիմիական նյութերի՝ որպես փորձարարական նախագծման մաս:
- Sonication: Sonicator UIP400MTP-ը ծրագրավորված է օպտիմիզացված կարգավորումներով (օրինակ՝ 60% հզորություն)՝ ապահովելու արդյունավետ անջատում առանց բջիջները վնասելու կամ բիոմոլեկուլի ամբողջականությունը խախտելու:
- Ջերմաստիճանի վերահսկում. Սարքը պահպանում է ջերմաստիճանի կայունությունը՝ գործընթացի ընթացքում ջերմային ազդեցությամբ բջիջների կամ մոլեկուլային դեգրադացիան կանխելու համար:
- Հետջոկատ. Անջատված բջիջները ենթարկվում են արդյունահանման արձանագրությունների, ինչպիսին է Bligh-ը & Dyer biphasic մեթոդ, ՌՆԹ-ի, լիպիդների և մետաբոլիտների վերականգնման համար:
Այս մեթոդը գերազանցում է ձեռքով քերելը իր ավտոմատացման, վերարտադրելիության և բարձր թողունակության նմուշները արդյունավետ մշակելու ունակության շնորհիվ:
Ի՞նչ է անվնաս բջիջների ջոկատը:
Բջիջների չվնասող ջոկատը վերաբերում է կպչուն բջիջներն իրենց ենթաշերտից առանձնացնելու գործընթացին՝ առանց բջիջների կենսունակությունը, ամբողջականությունը կամ ֆունկցիոնալությունը վտանգելու: Այն ձեռք է բերվում մեղմ մեթոդների կիրառմամբ, ինչպիսիք են վերահսկվող sonication կամ enzyme-free լուծույթները:
Բջիջների ոչնչացումից խուսափելը կարևոր է բջիջների պահպանման համար’ կառուցվածքային և մոլեկուլային բնութագրերը, որոնք էական են ճշգրիտ կիրառությունների համար, ինչպիսիք են բազմաօմիկական վերլուծությունը, ֆունկցիոնալ վերլուծությունները կամ թերապևտիկ օգտագործումը: Վնասված բջիջները կարող են ազատել ներբջջային պարունակությունը՝ պոտենցիալ շփոթեցնելով փորձարարական արդյունքները կամ վտանգելով նմուշի որակը:
Ո՞րն է առանց ֆերմենտային բջիջների անջատման առավելությունը:
Ֆերմենտներից զերծ բջիջների անջատումն առաջարկում է մի քանի առավելություններ, այդ թվում՝ պահպանելով բջջային մակերեսի սպիտակուցները և ընկալիչները, պահպանել բջիջների կենսունակությունը և խուսափել բիոմոլեկուլներին հնարավոր ֆերմենտային վնասից: Այս մոտեցումը հատկապես օգտակար է ներքևում գտնվող զգայուն կիրառությունների համար, ինչպիսիք են հոսքի ցիտոմետրիան, պրոտեոմիկան կամ ֆունկցիոնալ վերլուծությունները, որտեղ ֆերմենտային փոփոխությունները կարող են վտանգել տվյալների որակը կամ փորձարարական արդյունքները: Բացի այդ, ֆերմենտներից զերծ մեթոդները հաճախ ավելի վերարտադրելի են և կարող են հարմարեցվել բարձր թողունակության աշխատանքային հոսքերի համար:
Hielscher Ultrasonics-ը արտադրում է բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ լաբորատորիա դեպի արդյունաբերական չափս.